本發(fā)明涉及色譜技術(shù)與紫外檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種紫外光源、一種紫外檢測(cè)設(shè)備和一種用于色譜分離的系統(tǒng)。

背景技術(shù)：

色譜分離技術(shù)又稱層析分離技術(shù)或色層分離技術(shù)，是一種將復(fù)雜混合物中的各個(gè)組分進(jìn)行分離的有效方法。其原理為，利用不同物質(zhì)在由固定相和流動(dòng)相構(gòu)成的體系中具有不同的分配系數(shù)，當(dāng)流動(dòng)相通過(guò)固定相作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，各種組分在兩相間進(jìn)行不同的反復(fù)分配，使得各組分得到分離。色譜有多種多樣的類型，可分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、親和色譜、大孔吸附樹(shù)脂、凝膠色譜、聚焦色譜等。其中吸附色譜分離技術(shù)最為常用，主要包括吸附柱色譜，薄層色譜，聚酰胺薄膜色譜，親和色譜等。但是，無(wú)論怎樣的色譜都需要通過(guò)呈現(xiàn)分離的物質(zhì)，記錄分離的情況，并根據(jù)分離的情況針對(duì)不同組分進(jìn)行收集。

紫外光是指波長(zhǎng)為100～400nm的電磁輻射，其中180～280nm為深紫外，280～315nm為中紫外，315～400nm為近紫外。對(duì)于人工紫外輻射源，人們首先研制成功氣體放電燈，比如早期常用的汞燈和氘燈，以及之后的氙燈和氪燈等。20世紀(jì)60年代，隨著激光的發(fā)明，各種紫外激光器也很快的發(fā)明出來(lái)；此外高溫黑體也是一種不錯(cuò)的紫外源。紫外發(fā)光二極管是一種新型的紫外光源，特點(diǎn)是電功率小，光電轉(zhuǎn)換效率高，波段單色性好，工作與控制方式簡(jiǎn)單實(shí)用，具有極大的發(fā)展與應(yīng)用空間。

但是，借助紫外線吸收檢測(cè)蛋白和核酸等物質(zhì)的檢測(cè)儀器具有一定的局限性，主要是蛋白質(zhì)和核酸類的最大吸收波長(zhǎng)分別為260nm和280nm，目前用于分光光度計(jì)的紫外光源主要有紫外光區(qū)常用的光源為汞燈、氫燈或氘燈(其中氘燈的輻射強(qiáng)度大，穩(wěn)定性好，壽命長(zhǎng)，因此近年生產(chǎn)的儀 器多使用氘燈)，它們發(fā)射的連續(xù)波長(zhǎng)范圍為180～360nm，由于耗能高，產(chǎn)熱多，不適合特定波長(zhǎng)的紫外吸收的連續(xù)長(zhǎng)時(shí)間檢測(cè)。

概言之，現(xiàn)有的紫外分光光度計(jì)主要有以下缺陷：

1一般的汞燈等光源的高能耗和壽命較短，不適合連續(xù)檢測(cè)；

2光源波長(zhǎng)偏離核酸等物質(zhì)的吸收峰，導(dǎo)致檢測(cè)靈敏度較低，能耗較大；

3光源的光波基線不穩(wěn)定，使得檢測(cè)峰不穩(wěn)定，影響檢測(cè)的精度；

4沒(méi)有連續(xù)顯示與記錄色譜分離物質(zhì)對(duì)應(yīng)的波峰的技術(shù)，不能和自動(dòng)收集系統(tǒng)聯(lián)合應(yīng)用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是解決當(dāng)前色譜分離蛋白和核酸等物質(zhì)監(jiān)測(cè)示蹤難題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，根據(jù)本發(fā)明的一方面，提供了一種紫外光源，所述紫外光源為無(wú)極放電燈，并包括燈管和燈座，所述燈管安裝于所述燈座上，以及在所述燈管內(nèi)容納有混有金屬元素的惰性氣體，從而所述紫外光源能夠發(fā)出一種或多種波長(zhǎng)的紫外光。

較佳地，所述金屬元素選自鋅、鎘、汞和錳中的一種或多種。

較佳地，所述無(wú)極放電燈發(fā)射的紫外光的波長(zhǎng)為214nm、230nm、260nm、280nm和/或350nm。

較佳地，還包括高頻振蕩電源板和電容金屬環(huán)，所述高頻振蕩電源板和所述電容金屬環(huán)相互電連接從而形成振蕩回路。

較佳地，所述高頻振蕩電源板包括共振線圈，所述電容金屬環(huán)通過(guò)導(dǎo)線與所述共振線圈連接。

較佳地，所述電容金屬環(huán)環(huán)套于所述燈管周圍。

根據(jù)本發(fā)明的另一方面，還提供了一種紫外檢測(cè)設(shè)備，包括殼體、電源、集光裝置和樣品池，所述電源、激光裝置和樣品池設(shè)置于所述殼體內(nèi)，還包括如上所述的紫外光源。

較佳地，在所述殼體內(nèi)還設(shè)有恒溫裝置和用于安裝所述紫外光源的燈室，所述恒溫裝置用于控制所述燈室內(nèi)的溫度。

較佳地，所述恒溫裝置環(huán)繞所述燈座設(shè)置。

較佳地，所述紫外檢測(cè)設(shè)備還包括光電轉(zhuǎn)換器、參考放大器和對(duì)數(shù)放大器，所述參考放大器與所述電源、光電轉(zhuǎn)換器以及對(duì)數(shù)放大器電連接，其中所述集光裝置設(shè)置成能夠發(fā)出兩束光束，一束光束流向所述光電轉(zhuǎn)換器，另一束光束流向所述樣品池。

較佳地，所述樣品池的橫截面為矩形。

較佳地，所述光電轉(zhuǎn)換器為光敏二級(jí)管。

較佳地，所述紫外檢測(cè)設(shè)備還包括濾光片，所述濾光片可拆卸地安裝于所述殼體內(nèi)。

較佳地，所述紫外檢測(cè)設(shè)備內(nèi)置USB接口。

根據(jù)本發(fā)明的另一方面，還提供了一種用于色譜分離的系統(tǒng)，包括色譜柱、流分驅(qū)動(dòng)蠕動(dòng)泵、控制單元以及顯示器，還包括如上所述的紫外檢測(cè)設(shè)備。

本發(fā)明的具有如下有益效果：

1.采用高頻激發(fā)導(dǎo)致發(fā)光，功耗小，功率可小于3W。

2.一方面，電源的功率因數(shù)高達(dá)0.95以上；另一方面，高頻發(fā)生器始終以高頻恒電壓點(diǎn)燈。

3.燈管無(wú)電極，可以密閉而不易漏氣，也就使得光源燈的使用壽命得到大幅度的延長(zhǎng)，壽命長(zhǎng)達(dá)20000小時(shí)，理論上大于100000小時(shí)。

4.無(wú)極燈管中通過(guò)引入獨(dú)特的金屬元素，包括鋅、鎘、汞、錳四種金屬作為受激物，充入氖等惰性氣體，在外部電磁感應(yīng)高頻磁場(chǎng)的作用下，產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的紫外光，如波長(zhǎng)為214nm，230nm，260nm，280nm和350nm。

5.通過(guò)組合受激發(fā)的金屬組成，可以產(chǎn)生一種后多種波長(zhǎng)的的紫外光。

6.無(wú)極放電燈發(fā)射光波長(zhǎng)精度較高，各波長(zhǎng)光能量水平分布均勻，彼此干擾較少，保證不同物質(zhì)的光密度吸收值測(cè)定的準(zhǔn)確性。

7.無(wú)極放電燈的電源線路板尺寸可以小至50×70×20mm，安裝方便。

8.燈管外安裝銅環(huán)電容，而不是常規(guī)的線圈，與電路板中的線圈共同構(gòu)成感應(yīng)電路，除了增加電磁感應(yīng)效率以外，安裝維護(hù)便利。

9.用光敏二極管取代光電倍增管作為光電轉(zhuǎn)換器，不僅省去高壓電源， 而且暗電流小，穩(wěn)定可靠。

10.儀器采用同一無(wú)極放電燈發(fā)出的兩束光束，一束光束用于樣品檢測(cè)；另一束光束是作為參考，反饋調(diào)節(jié)光源電路以保持光源強(qiáng)度恒定，當(dāng)溫度偏高，影響檢測(cè)光強(qiáng)度時(shí)，反饋調(diào)節(jié)光路會(huì)相應(yīng)下調(diào)激發(fā)光源的電壓，保證檢測(cè)光束波長(zhǎng)和強(qiáng)度維持恒定。

11.樣品流動(dòng)池橫截面為矩形，相比于現(xiàn)有技術(shù)的圓形，使得穿透色譜分離液流動(dòng)柱的光密度吸收值讀數(shù)更為準(zhǔn)確。

12.根據(jù)檢測(cè)物質(zhì)的不同，選擇不同的濾光片。濾光片設(shè)計(jì)成插片式，不用打開(kāi)機(jī)器即可調(diào)換，方便簡(jiǎn)單。長(zhǎng)假期不用時(shí)，可將濾光片取下放入干燥缸內(nèi)，防止因潮濕而發(fā)霉，從而延長(zhǎng)其使用壽命。

13.儀器設(shè)有恒溫裝置來(lái)控制燈室，使放電燈壽命更長(zhǎng)，光源更穩(wěn)定，并可在冷室中長(zhǎng)期使用。

14.紫外檢測(cè)設(shè)備內(nèi)置USB接口，只需一根數(shù)據(jù)線便可與計(jì)算機(jī)聯(lián)用。通過(guò)配置的操作軟件，可以通過(guò)計(jì)算機(jī)連續(xù)顯示和記錄光密度吸收曲線，自動(dòng)控制樣品的收集。

附圖說(shuō)明

圖1是本發(fā)明的紫外光源的示意圖；

圖2是本發(fā)明的紫外檢測(cè)設(shè)備的組成示意圖；

圖3是本發(fā)明的樣品池的示意圖；

圖4是本發(fā)明的光敏二極管的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖5是用本發(fā)明的紫外檢測(cè)設(shè)備檢測(cè)甲狀腺球蛋白的圖譜；

圖6是用本發(fā)明的紫外檢測(cè)設(shè)備檢測(cè)雙肽衍生物的圖譜；

圖7是用本發(fā)明的紫外檢測(cè)設(shè)備檢測(cè)硫鏈絲菌肽的圖譜；

圖8是氨基酸衍生物的監(jiān)測(cè)對(duì)照?qǐng)D譜；以及

圖9是本發(fā)明的用于色譜分離的系統(tǒng)的連接示意圖。

具體實(shí)施方式

以下將結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的較佳實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，以便更清楚理解本 發(fā)明的目的、特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)。應(yīng)理解的是，附圖所示的實(shí)施例并不是對(duì)本發(fā)明范圍的限制，而只是為了說(shuō)明本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)精神。

術(shù)語(yǔ)說(shuō)明

A/D轉(zhuǎn)膜：A是模擬，D是數(shù)字；

T/A顯示器：T表示透光率；A表示吸光度。

本發(fā)明的主要目的在于解決當(dāng)前色譜分離蛋白和核酸等物質(zhì)監(jiān)測(cè)示蹤難題，為有效調(diào)控對(duì)分離樣品的收集，提供一種連續(xù)長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)測(cè)示蹤被分離成分的應(yīng)用技術(shù)。借助目前對(duì)于人工紫外光源的科技進(jìn)步，在目前無(wú)極放電燈的工作原理的基礎(chǔ)上，通過(guò)改進(jìn)放電氣體組成，達(dá)到合理改變釋放的紫外線波長(zhǎng)組成，以適合核酸和蛋白類物質(zhì)的監(jiān)測(cè)。

本發(fā)明參照目前高頻無(wú)極燈的基本形式，燈管內(nèi)沒(méi)有一般照明燈必須具有的燈絲或電極，僅由一個(gè)空心放電燈管和一個(gè)耦合器組成。通過(guò)電磁感應(yīng)原理將電能耦合到燈內(nèi)，使燈管內(nèi)的混合惰性氣體受激勵(lì)，發(fā)生雪崩電離，形成等離子，等離子體受激原子返回基態(tài)時(shí)，輻射出紫外線。其發(fā)光原理是：在輸入一定范圍的電源電壓后，高頻發(fā)生器產(chǎn)生100MHZ高頻恒電壓送給功率耦合器，由功率耦合器在玻殼的放電空間內(nèi)建立靜電強(qiáng)磁場(chǎng)，對(duì)放電空間內(nèi)的氣體進(jìn)行電離，并生產(chǎn)強(qiáng)紫外光。在電源設(shè)計(jì)上，由于采用光反饋調(diào)節(jié)電源震蕩頻率，控制技術(shù)使得電磁效應(yīng)耦合器的頻率得到調(diào)節(jié)，使得發(fā)光強(qiáng)度得到反饋調(diào)節(jié)，光源發(fā)射紫外線強(qiáng)度維持恒定。一方面，電源的功率因數(shù)高達(dá)0.95以上；另一方面，高頻發(fā)生器始終以高頻恒電壓點(diǎn)燈。所以，輸入的電源電壓在一定范圍內(nèi)波動(dòng)時(shí)，其發(fā)光亮度均不變。高頻無(wú)極燈主要是由高頻發(fā)生器、功率耦合器和玻璃泡殼三部分組成。

因此，在本文中未描述的部分，參照普通高頻無(wú)極燈。

圖1是本發(fā)明的無(wú)極放電燈的結(jié)構(gòu)示意圖。如圖1所示，本發(fā)明的無(wú)極發(fā)電燈10包括燈管11、燈座12、金屬環(huán)13、高頻振蕩電源板14和恒溫裝置15，其中，燈管11安裝于燈座12上，恒溫裝置15設(shè)置于燈座12外，以防止燈管溫度過(guò)高，金屬環(huán)13環(huán)繞燈管11設(shè)置，燈管11通過(guò)金屬環(huán)13構(gòu)成的電容，連接高頻振蕩電源板上的線圈，形成振蕩電路。在燈管11內(nèi)沖有惰性氣體(圖未示)。

在本發(fā)明中，燈管內(nèi)通過(guò)引入獨(dú)特的金屬元素，再?zèng)_入惰性氣體，在外部電磁感應(yīng)高頻磁場(chǎng)的作用下，產(chǎn)生紫外線譜。金屬元素選自鋅、鎘、汞和錳中的一種或多種，通過(guò)組合受激發(fā)的金屬組成，可以產(chǎn)生單一或組合的紫外譜線。

由于在燈管內(nèi)引入鋅、鎘、汞、錳四種金屬，因此無(wú)極放電燈11發(fā)射的光的波長(zhǎng)精度較高，譜線波長(zhǎng)為214nm，230nm，260nm，280nm和350nm。其中，加入鋅的譜線波長(zhǎng)為214nm，加入鎘的譜線波長(zhǎng)為230nm，加入汞的譜線波長(zhǎng)為260nm，加入錳的譜線波長(zhǎng)為350nm。如果將該四種金屬一起加入，則可得到波長(zhǎng)為214nm，230nm，260nm，280nm和350nm的譜線，這些譜線分布均勻，彼此干擾較少，保證不同物質(zhì)的光密度吸收值測(cè)定的準(zhǔn)確性。

目前廣泛應(yīng)用的汞燈的特征譜線波長(zhǎng)為253.7nm，其它波長(zhǎng)強(qiáng)度很弱，比如280nm(蛋白測(cè)定適用)波長(zhǎng)光強(qiáng)度很弱，同時(shí)缺少適宜于測(cè)定多肽的230nm波長(zhǎng)。當(dāng)利用280nm波長(zhǎng)測(cè)定蛋白濃度時(shí)，253.7nm波長(zhǎng)的強(qiáng)光會(huì)強(qiáng)行透過(guò)濾光片，干擾蛋白的測(cè)定。然而，本發(fā)明的無(wú)極放電燈確可以滿足不同的需求。

由于在燈管11外安裝金屬環(huán)13，而不是常規(guī)的線圈，與高頻振蕩電源板14中的線圈共同構(gòu)成感應(yīng)電路，除了增加電磁感應(yīng)效率以外，安裝維護(hù)更為便利。

圖2是本發(fā)明的紫外檢測(cè)設(shè)備的原理示意圖。如圖2所示，紫外檢測(cè)設(shè)備20包括電源21、無(wú)極放電燈10、集光裝置23、樣品池24、透鏡25、光敏檢測(cè)器26、電信號(hào)放大器27、光電轉(zhuǎn)換器22、參考放大器29、對(duì)數(shù)放大器30、T/A顯示器28、A/D轉(zhuǎn)膜31、量程放大器32、吸光度數(shù)字輸出33、吸光度模擬輸出34以及量程開(kāi)關(guān)35。

在圖2中，實(shí)線表示連接各元件的導(dǎo)線，箭頭表示光線。如圖2所示，一方I面電源21通過(guò)導(dǎo)線連接到參考放大器29和無(wú)極放電燈10，光電轉(zhuǎn)換器22通過(guò)導(dǎo)線連接到參考放大器29，參考放大器29連接到對(duì)數(shù)放大器30。

另一方面，光敏檢測(cè)器26通過(guò)導(dǎo)線連接到電信號(hào)放大器27，電信號(hào)放大器27通過(guò)導(dǎo)線連接到對(duì)數(shù)放大器30，對(duì)數(shù)放大器30同時(shí)連接到A/D轉(zhuǎn)膜31、量程放大器32和T/A顯示器28，其中，在對(duì)數(shù)放大器30和量程放大器32之間設(shè)置量程開(kāi)關(guān)35。

運(yùn)行時(shí)，電源21為無(wú)極放電燈10和參考放大器29提供電源，從而無(wú)極 放電燈10發(fā)出特定波長(zhǎng)的紫外光譜，例如為214nm，230nm，260nm，280nm或350nm的紫外光譜，這些特定波長(zhǎng)的紫外光譜通過(guò)集光裝置23后，分成兩束光束，其中一束光束進(jìn)入樣品池24，另一束光束進(jìn)入光電轉(zhuǎn)換器22。

進(jìn)入樣品池24的光束從樣品池24出來(lái)以后，進(jìn)入透鏡25，通過(guò)透鏡25聚焦后，進(jìn)入光敏檢測(cè)器26，在光敏檢測(cè)器26內(nèi)轉(zhuǎn)換為電信號(hào)，并在電信號(hào)放大器27內(nèi)進(jìn)一步放大后，流向?qū)?shù)放大器30。

進(jìn)入光電轉(zhuǎn)換器22的光束經(jīng)過(guò)光電轉(zhuǎn)換器22轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)后，參考放大器29接收從光電轉(zhuǎn)換器22發(fā)出的電信號(hào)并將其放大，然后再將放大后的電信號(hào)傳輸給對(duì)數(shù)放大器30，從而監(jiān)控光源的穩(wěn)定性。

對(duì)數(shù)放大器30接收分別由兩束光束轉(zhuǎn)換成的電信號(hào)后，對(duì)其進(jìn)行放大，并傳輸給A/D轉(zhuǎn)膜31、量程放大器32和T/A顯示器28，最后變成吸光度數(shù)字輸出33和吸光度模擬輸出34。

本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以理解，如果從集光裝置23中出來(lái)的光線不分成兩束光束，則可以不必設(shè)置參考放大器29。

如圖3所示，在本發(fā)明中，樣品池24由石英玻璃制成，其橫截面為矩形，從而減少了穿透光束由于圓柱形導(dǎo)致的散射和衍射等，使得光吸收的檢測(cè)更為靈敏與準(zhǔn)確。

如圖4所示，本發(fā)明中，光電轉(zhuǎn)換器35為光敏二極管，而不是通常的光電倍增管，從而不僅省去高壓電源，而且暗電流小，穩(wěn)定可靠。

根據(jù)本發(fā)明的另一方面，還提供了一種用于色譜分離的系統(tǒng)。如圖9所示，用于色譜分離的系統(tǒng)200包括樣杯201、流分驅(qū)動(dòng)蠕動(dòng)泵202、色譜柱203、紫外檢測(cè)設(shè)備20、收集杯205、連接線206、管路207以及控制單元和顯示器204。樣杯201、流分驅(qū)動(dòng)蠕動(dòng)泵202、色譜柱203、紫外檢測(cè)設(shè)備20以及收集杯205通過(guò)管路207連接，紫外檢測(cè)設(shè)備20與控制單元和顯示器204通過(guò)連接線206連接。

運(yùn)行時(shí)，樣杯201中的樣品通過(guò)管線207流入流分驅(qū)動(dòng)蠕動(dòng)泵202，然后流經(jīng)色譜柱203，經(jīng)過(guò)色譜柱203后流入紫外檢測(cè)設(shè)備20，在紫外檢測(cè)設(shè)備20進(jìn)行檢測(cè)后，檢測(cè)結(jié)果通過(guò)顯示器204顯示。

由于本發(fā)明的無(wú)極放電燈發(fā)射光波長(zhǎng)精度較高，具備的波長(zhǎng)為214nm， 230nm，260nm，和280nm，而且各波長(zhǎng)光能量水平分布均勻，彼此干擾較少，保證不同物質(zhì)的光密度吸收值測(cè)定的準(zhǔn)確性。因此，采用通常的單色器，可獲得適合檢測(cè)蛋白質(zhì)吸收的適宜波長(zhǎng)280nm；適宜多肽檢測(cè)波長(zhǎng)230nm；以及適宜核酸類檢測(cè)的波長(zhǎng)260nm。獲得的特定波長(zhǎng)的光，分為2個(gè)光束，一束用于吸收檢測(cè)，一束用于反饋監(jiān)控光源的穩(wěn)定性。

本發(fā)明的紫外監(jiān)測(cè)設(shè)備可以與多種色譜聯(lián)用，例如色譜分離柱分子篩，離子親和層析，以及免疫親和層析柱等各種實(shí)現(xiàn)蛋白、多肽、糖類和脂類及其衍生物的分離方式。

本發(fā)明的紫外檢測(cè)系統(tǒng)可以長(zhǎng)時(shí)間連續(xù)監(jiān)測(cè)色譜分離成分，形成的電子信號(hào)可以通過(guò)計(jì)算機(jī)定性和定量分析，同時(shí)可以用于控制各流分的自動(dòng)收集。

本發(fā)明的紫外線吸收監(jiān)測(cè)儀可以與不同的色譜系統(tǒng)的聯(lián)用，采用不同波長(zhǎng)的紫外線光源，長(zhǎng)時(shí)間連續(xù)監(jiān)測(cè)不同物質(zhì)的色譜分離。

下面是通過(guò)本發(fā)明的用于色譜分離的系統(tǒng)200檢測(cè)甲狀腺蛋白、雙肽衍生物、硫鏈絲菌肽和氨基酸衍生物的實(shí)施例。

1.甲狀腺蛋白(280nm)的監(jiān)測(cè)

圖5是用本發(fā)明的紫外檢測(cè)設(shè)備檢測(cè)甲狀腺球蛋白的圖譜。

甲狀腺球蛋白(Thyroglobulin，Tg)，是甲狀腺濾泡上皮分泌的糖蛋白，人源Tg的分子量660kDa，每2個(gè)Tg分子結(jié)合2個(gè)甲狀腺素(T4)和1個(gè)三碘甲腺原氨酸(T3)分子，儲(chǔ)存在濾泡腔中。溶酶體水解Tg表面T4、T3并使之釋放入血，同時(shí)少量的Tg也釋放入血，部分Tg經(jīng)甲狀腺淋巴管分泌入血。血循環(huán)中的Tg被肝臟的巨噬細(xì)胞清除。

采購(gòu)分子排阻法層析介質(zhì)，Superdex 200，按照常規(guī)裝柱，柱體積為10ml取豬甲狀腺球蛋白，用PBS配成終濃度為5mg/ml，上樣0.5ml，即包括2.5mg甲狀腺球蛋白。洗脫緩沖液為0.05M磷酸鹽緩沖液，pH 7.0，含0.15M NaCl。洗脫流速為0.5ml/min，紫外線波長(zhǎng)為280nm。如圖5所示，在計(jì)時(shí)至約5min時(shí)，達(dá)到最大吸收峰。

2.雙肽衍生物(N-芐氧羰基-L-甘氨酰-L-苯丙氨酸)(230nm)的監(jiān)測(cè)

圖6是用本發(fā)明的紫外檢測(cè)設(shè)備檢測(cè)雙肽衍生物的圖譜。

雙肽衍生物(N-芐氧羰基-L-甘氨酰-L-苯丙氨酸，Z-Gly-Phe)。借助色譜 系統(tǒng)，可以監(jiān)測(cè)Z-Gly-Phe樣品中二肽(分子量356)的純度。利用0.1％三氟乙酸水溶液溶解樣品，至終濃度為0.5mg/ml，上樣10ml，及包括二肽5mg。關(guān)于PBS(pH7.4)配方，取0.27g磷酸二氫鉀(KH2PO4)，1.42g磷酸氫二鈉(Na2HPO4)，8g氯化鈉(NaCl)，，0.2g氯化鉀(KCl)，加去離子水約800mL充分?jǐn)嚢枞芙猓缓蠹尤霛恹}酸調(diào)pH至7.4，最后定容到1L混勻即可。

上C18反相柱，C18能檢測(cè)的結(jié)構(gòu)物質(zhì)，流動(dòng)相A：0.1％三氟乙酸水溶液，即每100ml純水中加入100mg三氟乙酸；流動(dòng)相B：0.085％三氟乙酸乙腈溶液，即在100ml乙腈中溶解85mg三氟乙酸。梯度洗脫(min,％B)：(0,5),(8,100),(10,100),(12,5),(15,5)。洗脫速率為1ml/min。

選取紫外監(jiān)測(cè)波長(zhǎng)為230nm，監(jiān)測(cè)紫外吸收曲線。如圖6所示，在約9.5min，紫外線吸收呈現(xiàn)峰值。監(jiān)測(cè)曲線沒(méi)有出現(xiàn)明顯的雜峰，說(shuō)明雙肽具有高的純度。

3.硫鏈絲菌肽(260nm)的監(jiān)測(cè)

圖7是用本發(fā)明的紫外檢測(cè)設(shè)備檢測(cè)硫鏈絲菌肽的圖譜。

硫鏈絲菌肽分子量約1600，亦稱為蘚霉素(Bryamycin)或硫活素(Thiactin)。屬遠(yuǎn)青鏈霉菌(Streptomycesazureus)及夏威夷鏈霉菌(S.hawaiiensis)產(chǎn)生的抗生物質(zhì)。利用0.1％三氟乙酸水溶液溶解樣品，至終濃度為0.5mg/ml，上樣10ml，及包括二肽5mg。

上C18反相柱，C18能檢測(cè)的結(jié)構(gòu)物質(zhì)，流動(dòng)相A：0.1％三氟乙酸水溶液，即每100ml純水中加入100mg三氟乙酸；流動(dòng)相B：乙腈。梯度洗脫(min,％B)：(0,5),(8,100),(10,100),(12,5),(15,5)。洗脫速率為1ml/min。

選取紫外監(jiān)測(cè)波長(zhǎng)為260nm，監(jiān)測(cè)紫外吸收曲線。如圖7所示，在約9.5min，紫外線吸收呈現(xiàn)峰值。監(jiān)測(cè)曲線沒(méi)有出現(xiàn)明顯的雜峰，說(shuō)明雙肽具有高的純度。

4.氨基酸衍生物(280nm)的監(jiān)測(cè)

圖8是氨基酸衍生物(280nm)的監(jiān)測(cè)對(duì)照?qǐng)D譜。

利用氨基酸衍生物，其中混有少量的雜質(zhì)，主要包括色素、糖類和核酸。利用PBS配制成1mg/ml終濃度。

色譜柱利用CM-Sepharose填料，預(yù)制色譜柱，柱體積10ml，上樣量為10ml，即含氨基酸衍生物10mg。參照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)，采用pH梯度洗脫，選擇監(jiān)測(cè)波長(zhǎng)為280nm。

如圖8所示，圖中左側(cè)為用本發(fā)明的紫外檢測(cè)設(shè)備形成的波峰，右側(cè)為對(duì)照儀器形成的波峰。本發(fā)明的紫外檢測(cè)設(shè)備采用紫外線波280nm，而對(duì)照儀器采用汞燈光源，波長(zhǎng)為254nm，即使采用280nm波長(zhǎng)的濾光片，也難以完全去除254nm波長(zhǎng)光的干擾，導(dǎo)致檢測(cè)波峰如右側(cè)曲線圖，呈現(xiàn)多個(gè)波峰，降低了檢測(cè)靈敏度。

以上已詳細(xì)描述了本發(fā)明的較佳實(shí)施例，但應(yīng)理解到，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改。這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書(shū)所限定的范圍。