專利名稱：“禾韻”藍(lán)莓組培種苗快速生根繁育的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藍(lán)莓種苗良種快速生根繁育的方法，屬于植物的無性繁殖技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
藍(lán)莓學(xué)名越橘，屬于杜鵑花科(Ericaceae)越橘屬(Vaccinium spp.)植物，果實(shí) 甜酸香爽，風(fēng)味獨(dú)特，具有豐富的營養(yǎng)價(jià)值和多重保健功效，被譽(yù)為“黃金漿果”，是聯(lián)合國 糧農(nóng)組織(FAO)重點(diǎn)推薦的人類五大健康食品之一。藍(lán)莓不僅用于鮮食，而且也開發(fā)出多 種產(chǎn)品，使其營養(yǎng)價(jià)值能夠給消費(fèi)者帶來更大的效用。人工栽培藍(lán)莓最早始于美國，至今已有百年歷史。上世紀(jì)八十年代起，我國從國外 引進(jìn)了大量的栽培品種，并開始了相關(guān)推廣工作。但因發(fā)展迅速，藍(lán)莓苗木供應(yīng)極度緊張已 成為吉林省乃至全國發(fā)展藍(lán)莓產(chǎn)業(yè)的技術(shù)瓶頸。藍(lán)莓具有耐酸性土壤環(huán)境、耐低溫、耐瘠 薄、較強(qiáng)的抗旱能力和抗病蟲害能力；不耐化肥(嫌鈣、嫌氯、嫌鈉)、除草劑等生物學(xué)特征， 具備優(yōu)先發(fā)展的獨(dú)有優(yōu)勢。同時(shí)，隨著生活和消費(fèi)水平的提高，人們對食品的安全和品質(zhì)要 求越來越高，藍(lán)莓苗木的市場前景更為廣闊。吉林吉康公司認(rèn)證的“禾韻1號(藍(lán)豐)”藍(lán) 莓種苗屬高叢、大果型、中晚熟越橘品種；“禾韻2號(埃利奧特)”藍(lán)莓種苗屬半高叢、中果 型、極晚熟越橘品種，二者抗逆性均很強(qiáng)，適合在我國北方適宜區(qū)域進(jìn)行大面積栽培推廣。當(dāng)前，利用植物組織培養(yǎng)方法可以在短期內(nèi)快速繁殖多種植物，不僅繁殖率高，且 因?yàn)槠涫菬o性繁殖，可以保持原繁殖母株的優(yōu)良性狀，近年來在生產(chǎn)上應(yīng)用越來越廣。同 時(shí)，扦插作為苗木繁育的重要手段，因經(jīng)濟(jì)、方便也得到廣泛重視。綠枝扦插由于存在插條 取材與結(jié)果用枝相互競爭的矛盾而不宜在商品果栽培園中推廣。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種藍(lán)莓組培種苗快繁的方法，為藍(lán)莓種苗提供一種操作 簡單、節(jié)省時(shí)間、成本低廉、穩(wěn)定高效的快速繁育方法。本發(fā)明提供的藍(lán)莓組培種苗快繁的方法，其特征在于，包括如下步驟將藍(lán)莓的組 培苗蘸生根劑后進(jìn)行扦插生根培養(yǎng)，得到生根苗。上述生根劑是如下a)或b)a)萘乙酸與吲哚乙酸組成的溶液1L所述生根劑的配制方法如下將IOOOmg萘 乙酸與IOOOmg吲哚乙酸溶于水中，定容至IL ；b)生根粉ABT配制的溶液1L所述生根劑的配制方法如下生根粉ABT 0. 05g加 5ml酒精溶解后，再加水定溶至1L。該酒精可以是70% (體積百分比)的乙醇水溶液。上述組培苗蘸生根劑的時(shí)間可為3-10秒，優(yōu)選是5秒。上述扦插生根培養(yǎng)時(shí)組培苗的株距為2-5cm，優(yōu)選是3cm ；行距為3-8cm，優(yōu)選為 5cm ；扦插深度為1-1. 5cm。上述扦插生根培養(yǎng)的條件為溫度25_35°C，相對濕度為50-60%，遮陰透光率為 45% -65%。
進(jìn)一步講，上述方法還包括所述組培苗在蘸生根劑之前的初步煉苗；所述初步煉苗的時(shí)間為7-8天；溫度是25-35°C ；相對濕度為50% -60% ；光照強(qiáng) 度為 2500-3500LX，優(yōu)選是 3000LX。更近一步講，上述方法還包括所述得到生根苗之后的溫室煉苗和大田煉苗；所述 溫室煉苗和大田煉苗包括如下步驟將所述生根苗在溫室大棚煉苗40-60天，溫室大棚煉 苗的條件是度25 35°C之間，相對濕度以50% -60%為宜，遮陰透光率為45% 65% ；然 后進(jìn)行大田煉苗的時(shí)間為150-180天。上述藍(lán)莓的組培苗的獲得步驟如下將藍(lán)莓的外植體置于初代培養(yǎng)基上進(jìn)行誘導(dǎo) 分化培養(yǎng)，得到初代組培苗；所述外植體優(yōu)選是帶腋芽的莖段；所述初代培養(yǎng)基，是在基本培養(yǎng)液中添加如下物質(zhì)得到的固體培養(yǎng)基玉米 素、NAA、碳源和凝膠劑；所述初代培養(yǎng)基中玉米素的終濃度是2-5mg/L，NAA的終濃度是 0. 01-0. 12mg/L ；所述基本培養(yǎng)液的溶劑是水、溶質(zhì)如表1所示；光照強(qiáng)度控制在4000 4500LX之間；每天光照培養(yǎng)時(shí)間為15h，黑暗培養(yǎng)時(shí)間為9h ；光照培養(yǎng)時(shí)溫度控制在 20-24°C，黑暗培養(yǎng)時(shí)溫度控制在16-20°C ；濕度控制在60% -75%之間。上述初代培養(yǎng)基中玉米素和NAA的終濃度為如下1)-3)中任一所述1)玉米素的 終濃度是3-%ig/L，NAA的終濃度是0. 05-0. lmg/L ；2)玉米素的終濃度是3mg/L或％ig/L， NAA的終濃度是0. 05-0. lmg/L ；3)玉米素的終濃度是3-%ig/L，NAA的終濃度是0. 05mg/L 或 0. lmg/L。上述藍(lán)莓的組培苗的獲得步驟還可包括繼代培養(yǎng)，所述繼代培養(yǎng)包括如下步驟 將上述初代組培苗置于繼代培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng)，得到所述藍(lán)莓的組培苗；所述繼代培養(yǎng)基是在基本培養(yǎng)液中添加如下物質(zhì)得到的固體培養(yǎng)基玉米素、 NAA、IBA、碳源和凝膠劑；所述繼代培養(yǎng)基中玉米素的終濃度是1. 5-4mg/L,NAA的終濃度是 0. 04-0. lmg/L, IBA的終濃度是0. 1-0. 5mg/L ；所述基本培養(yǎng)液的溶劑是水、溶質(zhì)如表1所 示。繼代培養(yǎng)條件光照強(qiáng)度為2500-3500LX左右；每天光照培養(yǎng)時(shí)間為15h，黑暗培養(yǎng)時(shí) 間為9h ；繼代光照培養(yǎng)時(shí)溫度控制在20-24°C，黑暗培養(yǎng)時(shí)溫度控制在18-22°C ；濕度控制 在60% -75%之間·所述繼代培養(yǎng)基中玉米素、NAA和IBA的終濃度如1)_3)中任一所述1)玉米素的 終濃度是2-;3mg/L，NAA的終濃度是0. 06-0. 08mg/L, IBA的終濃度是0. 2-0. 3mg/L ；2)玉米 素的終濃度是ang/L，NAA的終濃度是0. 08mg/L, IBA的終濃度是0. 2mg/L ；3)玉米素的終 濃度是3mg/L，NAA的終濃度是0. 06mg/L, IBA的終濃度是0. 3mg/L0上述初代培養(yǎng)基和所述繼代培養(yǎng)基中的凝膠劑均是瓊脂、卡拉膠或Gelrite，優(yōu)選 均是瓊脂；所述碳源均是葡萄糖、麥芽糖或蔗糖，優(yōu)選均為蔗糖；所述瓊脂在所述初代培養(yǎng) 基和所述繼代培養(yǎng)基的強(qiáng)度均是1300mg/cm2 ；所述瓊脂在所述初代培養(yǎng)基和所述繼代培養(yǎng) 基中的終濃度均是4-5g/L，優(yōu)選為4. 5g/L ；所述蔗糖在所述初代培養(yǎng)基和所述繼代培養(yǎng)基 中的終濃度均是25-35g/L，優(yōu)選均為30g/L。本發(fā)明建立了一種藍(lán)莓種苗快速生根繁育“組培——扦插——煉苗一體化”方法， 包括外植體組織培養(yǎng)、組培苗溫室扦插煉苗、溫室新苗移栽大田煉苗等方法步驟，與常規(guī)組 培育苗方法相比，可以使藍(lán)莓種苗“禾韻1號和2號”新苗成活率由50%上升到90%以上， 育苗周期由12個月縮短到6個月，同時(shí)新苗質(zhì)量也有了顯著提高。便于大規(guī)模工廠化繁育藍(lán)莓種苗。本技術(shù)方案的優(yōu)點(diǎn)是“組培——扦插——煉苗一體化“方法在組培過程中不進(jìn) 行生根培育，直接將組培苗蘸生根劑扦插入土進(jìn)行煉苗，這樣平均可節(jié)省20 30天時(shí)間， 縮短了育苗周期，此外，組培苗生根率可達(dá)85%以上，生根新苗成活率可達(dá)90%以上，而且 新苗質(zhì)量也有了顯著提高。本方法具有快速，經(jīng)濟(jì)，簡潔，高效的優(yōu)點(diǎn)，大幅度提高了藍(lán)莓種 苗的繁殖速度和質(zhì)量，從而為大規(guī)模商品化繁育藍(lán)莓種苗提供保障。本發(fā)明提出的組培苗 扦插，不僅可以節(jié)省育苗時(shí)間，而且也避免了綠枝扦插的不足，具有更為突出的優(yōu)勢，便于 大規(guī)模工廠化繁育藍(lán)莓種苗。


圖1為組培瓶開蓋煉苗照片。圖2為溫室苗床鋪設(shè)照片。圖3為溫室扦插組培苗照片。圖4為溫室大棚煉苗初期照片。圖5為溫室大棚煉苗后期照片。圖6為大田煉苗照片。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明并不限于以下實(shí)施例。下述實(shí)施例中，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。實(shí)施例1、一、禾韻藍(lán)莓種苗的組培繁育針對“禾韻1號和2號”藍(lán)莓種苗，采用組織培養(yǎng)方法進(jìn)行快速繁育，本過程只進(jìn) 行外植體的繁育，省去了生根過程。藍(lán)莓組織培養(yǎng)采取腋芽增殖方式。初代接種操作采用 試管培養(yǎng)，一個試管接種1個帶腋芽的莖段。繼代接種操作采用組培瓶培養(yǎng)，每個組培瓶接 種15棵。具體組培培養(yǎng)基混合物及操作方法參見專利禾韻藍(lán)莓種苗組培培養(yǎng)基及其組培 方法。具體步驟如下(一 )、“禾韻1號和2號”初代組培苗的制備及統(tǒng)計(jì)觀察1、外植體的獲得及其預(yù)處理1)外植體的選取本實(shí)施例中藍(lán)莓組織培養(yǎng)采取腋芽增殖的方式。每年的6至9月份，在“禾韻1 號”、“禾韻2號”藍(lán)莓(購自吉林吉康公司)種子資源圃中，挑選無病蟲害，樹形好，座果性 狀好，且豐產(chǎn)的藍(lán)莓苗木取外植體。外植體選取當(dāng)年新發(fā)的嫩枝，一個枝條上有6-10個芽。2)外植體的預(yù)處理將上述步驟1中采剪下來的2個品種的外植體放入盛滿清水的燒杯里，滴入4-6 滴洗潔劑，用軟毛刷輕柔刷洗枝條的腋芽、莖條，然后將外植體的葉片朝下掰掉并放入另一 燒杯，用清水沖洗15min，將沖洗干凈的外植體及其他接種所需工具放入事先紫外殺菌的超 凈工作臺內(nèi)，用鑷子將外植體夾入已滅菌的廣口瓶中進(jìn)行滅菌處理。滅菌處理的具體步驟為向上述裝入外植體的廣口瓶中迅速倒入75% (體積百分 比)的酒精，晃洗30秒，再用無菌水晃洗4遍，每遍2min，將殺菌完的外植體用無菌鑷子夾入飯盒中，進(jìn)行剪切操作，將外植體底部發(fā)黑莖段剪除，按一芽一段(即帶腋芽的莖段)，且 芽距下切口較長，距離上切口較短(視外植體葉間距而定)，頂芽可2-3個芽。即得到滅菌 處理好的外植體。2、初代組培苗的獲得及統(tǒng)計(jì)觀察1)獲得初代組培苗按接種操作規(guī)程，將上述步驟一的步驟2中得到滅菌處理好的外植體的外植體接 入裝有初代培養(yǎng)基的無菌試管內(nèi)，一個試管接種一個帶腋芽的莖段，用雙層封口膜封閉，進(jìn) 行誘導(dǎo)分化培養(yǎng)。誘導(dǎo)分化培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度控制在4000 4500LX之間；每 天光照培養(yǎng)時(shí)間為15h，黑暗培養(yǎng)時(shí)間為9h ；光照培養(yǎng)時(shí)溫度控制在20-24°C，黑暗培養(yǎng)時(shí) 溫度控制在16-20°C ；濕度控制在60% -75%之間。同時(shí)，可一個星期開紫外燈一次，每次 30min,無風(fēng)的雨天將培養(yǎng)室窗戶打開30min換空氣。初代培養(yǎng)的培養(yǎng)周期為60天-70天， 即培養(yǎng)60天-70天便可獲得初代組培苗，得到的初代組培苗可根據(jù)所需的組培苗的數(shù)量進(jìn) 行下一步的擴(kuò)增轉(zhuǎn)接。上述初代培養(yǎng)基是在基本培養(yǎng)液中添加了玉米素(ZT)、NAA、蔗糖和瓊脂得到的固 體培養(yǎng)基。其中玉米素在初代培養(yǎng)基中的終濃度為;3mg/L，NAA的終濃度為0. 05mg/L，蔗糖 的終濃度為30g/L，瓊脂采用強(qiáng)度是1300mg/cm2的瓊脂，其瓊脂的終濃度為4. 5g/L ；基本培 養(yǎng)液的溶劑是水、溶質(zhì)如表1所示，培養(yǎng)基的PH為5. 2。表1.基本培養(yǎng)液的溶質(zhì)
權(quán)利要求
1.一種藍(lán)莓組培種苗快繁的方法，其特征在于，包括如下步驟將藍(lán)莓的組培苗蘸生 根劑后進(jìn)行扦插生根培養(yǎng)，得到生根苗。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述生根劑是如下a)或b)a)萘乙酸與吲哚乙酸組成的溶液1L所述生根劑的配制方法如下將IOOOmg萘乙酸 與IOOOmg吲哚乙酸溶于水中，定容至IL ；b)生根粉ABT配制的溶液IL所述生根劑的配制方法如下生根粉ABT0. 05g加5ml 酒精溶解后，再加水定溶至1L。
3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于所述組培苗蘸生根劑的時(shí)間為3-10秒， 優(yōu)選是5秒。
4.如權(quán)利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于所述扦插生根培養(yǎng)時(shí)組培苗的株 距為2-5cm，優(yōu)選是3cm ；行距為3-8cm，優(yōu)選為5cm ；扦插深度為1-1. 5cm ；所述扦插生根培 養(yǎng)的條件為溫度25-35°C，相對濕度為50-60%，遮陰透光率為45% -65%。
5.如權(quán)利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于所述方法還包括所述組培苗在 蘸生根劑之前的初步煉苗；所述初步煉苗的時(shí)間為7-8天；溫度是25-35°C ；相對濕度為 50% -60% ；光照強(qiáng)度為 2500-3500，優(yōu)選是 3000LX。
6.如權(quán)利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于所述方法還包括所述得到生根苗 之后的溫室煉苗和大田煉苗；所述溫室煉苗和大田煉苗包括如下步驟將所述生根苗在溫 室大棚煉苗40-60天，溫室大棚煉苗的條件是度25 35°C之間，相對濕度為50 % -60 %，遮 陰透光率為45% 65% ；然后進(jìn)行大田煉苗的時(shí)間為150-180天。
7.如權(quán)利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于所述藍(lán)莓的組培苗的獲得步驟如 下將藍(lán)莓的外植體置于初代培養(yǎng)基上進(jìn)行誘導(dǎo)分化培養(yǎng)，得到初代組培苗；所述外植體 優(yōu)選是帶腋芽的莖段；所述初代培養(yǎng)基，是在基本培養(yǎng)液中添加如下物質(zhì)得到的固體培養(yǎng)基玉米素、NAAj^ 源和凝膠劑；所述初代培養(yǎng)基中玉米素的終濃度是2-5mg/L，NAA的終濃度是0.01-0. 12mg/ L ；所述基本培養(yǎng)液的溶劑是水、溶質(zhì)如表1所示。
8.如權(quán)利要求7中所述的方法，其特征在于所述藍(lán)莓的組培苗的獲得步驟還包括繼 代培養(yǎng)，所述繼代培養(yǎng)包括如下步驟將所述初代組培苗置于繼代培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng)， 得到所述藍(lán)莓的組培苗；所述繼代培養(yǎng)基是在基本培養(yǎng)液中添加如下物質(zhì)得到的固體培養(yǎng)基玉米素、NAA、 IBA、碳源和凝膠劑；所述繼代培養(yǎng)基中玉米素的終濃度是1. 5-4mg/L, NAA的終濃度是 0. 04-0. lmg/L, IBA的終濃度是0. 1-0. 5mg/L ；所述基本培養(yǎng)液的溶劑是水、溶質(zhì)如表1所示。
9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于所述初代培養(yǎng)基中玉米素和NAA的終濃度 為如下1)-3)中任一所述1)玉米素的終濃度是3-%ig/L，NAA的終濃度是0. 05-0. lmg/L ； 2)玉米素的終濃度是3mg/L或％ig/L，NAA的終濃度是0. 05-0. lmg/L ；3)玉米素的終濃度 是 3-%ig/L，NAA 的終濃度是 0. 05mg/L 或 0. lmg/L ；所述繼代培養(yǎng)基中玉米素、NAA和IBA的終濃度如1)-3)中任一所述1)玉米素的終濃 度是2-;3mg/L，NAA的終濃度是0. 06-0. 08mg/L, IBA的終濃度是0. 2-0. 3mg/L ；2)玉米素的 終濃度是ang/L，NAA的終濃度是0. 08mg/L, IBA的終濃度是0. 2mg/L ；3)玉米素的終濃度是;3mg/L，NAA的終濃度是0. 06mg/L, IBA的終濃度是0. 3mg/L0
10.如權(quán)利要求8或9所述的方法，其特征在于所述初代培養(yǎng)基和所述繼代培養(yǎng)基中 的凝膠劑均是瓊脂、卡拉膠或Gelrite，優(yōu)選均是瓊脂；所述碳源均是葡萄糖、麥芽糖或蔗 糖，優(yōu)選均為蔗糖；所述瓊脂在所述初代培養(yǎng)基和所述繼代培養(yǎng)基的強(qiáng)度均是1300mg/cm2 ；所述瓊脂在所 述初代培養(yǎng)基和所述繼代培養(yǎng)基中的終濃度均是4-5g/L，優(yōu)選為4. 5g/L ；所述蔗糖在所述初代培養(yǎng)基和所述繼代培養(yǎng)基中的終濃度均是25-35g/L，優(yōu)選均為 30g/L。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種“禾韻”藍(lán)莓組培種苗快速生根繁育的方法。該方法包括如下步驟將藍(lán)莓的組培苗蘸生根劑后進(jìn)行扦插生根培養(yǎng)，得到生根苗。與常規(guī)組培育苗方法相比，可以使藍(lán)莓種苗“禾韻1號和2號”新苗成活率由50％上升到90％以上，育苗周期由12個月縮短到6個月，同時(shí)新苗質(zhì)量也有了顯著提高。
文檔編號A01H4/00GK102138529SQ20111008007
公開日2011年8月3日 申請日期2011年3月31日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月31日
發(fā)明者劉凝, 吳文良, 周華寧, 孟凡喬, 李磊, 殷秀巖, 郭巖彬 申請人:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)