藍(lán)莓組培快繁的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及的是一種藍(lán)莓繁殖方法，具體涉及的是藍(lán)莓組培瓶?jī)?nèi)增殖加瓶外生根的快繁育苗方法。
【背景技術(shù)】
[0002]藍(lán)莓為杜鵑花科(Edeaceae)越橘屬(Vaccinium)多年生灌木樹種，藍(lán)莓具有較高的保健功能，在防止視網(wǎng)膜退貨、腦神經(jīng)衰老、增強(qiáng)心臟功能、抗氧化、抗?jié)?、抗炎及抗癌等方面有著?dú)特功效，被國(guó)際糧農(nóng)組織列為人類五大健康食品之一，被譽(yù)為“21世紀(jì)功能性保健漿果”和“水果中的皇后”。因此開發(fā)前景十分廣闊。藍(lán)莓種植，種苗是關(guān)鍵。采用常規(guī)扦插育苗方法因受取材及繁育時(shí)節(jié)的限制，繁殖速度較慢而難以滿足生產(chǎn)需求，更為重要的是，常規(guī)繁育的種苗在生長(zhǎng)勢(shì)、抗逆性及果實(shí)品質(zhì)等諸方面均不如組培苗。而采用瓶外生根技術(shù)，可大大降低生產(chǎn)成本，提高繁苗速率，建立穩(wěn)定高效的組培快繁體系具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
[0003]經(jīng)過對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的檢索發(fā)現(xiàn)，廉家盛等在“培養(yǎng)基種類、玉米素濃度及pH值對(duì)藍(lán)莓“美登”組培增殖生長(zhǎng)的影響”中記載了以藍(lán)莓〃美登〃品種莖段為外植體，研宄基本培養(yǎng)基種類、ZT濃度和培養(yǎng)基pH值對(duì)其組培苗增殖的影響，結(jié)果表明，B5培養(yǎng)基比MS、White和改良WPM更適于〃美登〃不定芽增殖培養(yǎng)，當(dāng)B5培養(yǎng)基中加入2.0mg/L ZT時(shí)，每株可分化出6.8個(gè)不定芽，ZT濃度低于或高于2.0mg/L時(shí)，分化芽數(shù)降低，〃美登〃組培苗生長(zhǎng)受到抑制.PH值對(duì)美登組培苗增殖生長(zhǎng)也有影響，pH值為5.4時(shí)分化的芽數(shù)最多(11.5個(gè)/株)，且生長(zhǎng)良好。但該技術(shù)采用的玉米素使用濃度偏高，造成不定芽叢生，再生苗長(zhǎng)勢(shì)弱，不利于芽的持續(xù)增殖，同時(shí)本專利技術(shù)下得到的再生苗可不經(jīng)煉苗直接進(jìn)行瓶外生根，繁殖快、操作簡(jiǎn)單、效率高、成本低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的上述不足，提出一種藍(lán)莓組培快繁的方法，該方法能夠有效提高苗木繁殖速度。
[0005]本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
[0006]本發(fā)明包括以下步驟:
[0007]I)以藍(lán)莓半木質(zhì)化新梢為外植體制備成莖段
[0008]所述的藍(lán)莓新梢經(jīng)消毒處理且優(yōu)選為當(dāng)年生長(zhǎng)初期的藍(lán)莓新梢。
[0009]所述的莖段具有至少兩個(gè)腋芽，且莖段底部預(yù)先剪除2 - 3毫米。
[0010]2)將莖段接種到含有改良READ培養(yǎng)基、萘乙酸、蔗糖和瓊脂的混合培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)，然后轉(zhuǎn)入含有改良READ培養(yǎng)基、玉米素、蔗糖和瓊脂的增殖培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng)。
[0011]所述的混合培養(yǎng)基的組分(每升)為:改良READ培養(yǎng)基、ZT 2.0mg/L,NAA 0.1mg/L、蔗糖20g/L以及瓊脂6.5g/L，該混合培養(yǎng)基的pH為5.4?5.6。
[0012]所述的繼代培養(yǎng)重復(fù)2 - 3次。
[0013]所述的增殖培養(yǎng)基的組分(每升)為:改良READ培養(yǎng)基、玉米素0.05 - 0.3mg/L、蔗糖20g/L、瓊脂6.5g/L，該增殖培養(yǎng)基的pH為5.4?5.6。
[0014]所述的增殖培養(yǎng)每60天繼代一次，繁殖系數(shù)為4?6。
[0015]所述的改良READ 培養(yǎng)基的組分為:KN03202mg/L、NH4N0340 0mg/L、MgSO4.7H20370mg/L、KH2P04170mg/L、CaCl2.2H20 440mg/L、MnSO4.4H20 22.3mg/L、ZnSO4.7H20 8.6mg/L、H3BO36.2mg/L、Na2MoO4.2H20 0.25mg/L、CuSO4.7H20 0.025mg/L、CoCl2.2H20 0.025mg/UVBJmg/L、肌醇 100mg/L、FeSO4.7H20 27.8mg/L、Na2 - EDTA 37.3mg/L。
[0016]3)對(duì)增殖后的瓶苗可不經(jīng)煉苗直接剪成小段扦插于復(fù)合基質(zhì)上，實(shí)現(xiàn)瓶外生根。
[0017]所述的小段是指:將得到的再生苗剪成1.5 - 2厘米的小段，每段浸泡生根液。
[0018]所述的生根液的組分為:IBA(吲哚丁酸)100mg/L、VB1 (鹽酸硫胺素)0.lg/L。
[0019]所述的浸泡時(shí)間優(yōu)選為3分鐘。
[0020]所述的復(fù)合基質(zhì)為經(jīng)800倍多菌靈消毒后的草炭與蛭石(體積比為3:1)的混合基質(zhì)上。
[0021]所述的小段扦插于復(fù)合基質(zhì)后置于小棚，14天可見明顯生根，I月可見新芽生出，成活率超過90%。
[0022]所述的小棚內(nèi)空氣相對(duì)濕度為85%以上，溫度在15 - 30°C。
技術(shù)效果
[0023]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明在組培瓶?jī)?nèi)階段，包括初代誘導(dǎo)及繼代增殖中以玉米素為植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，它具有促進(jìn)細(xì)胞分裂，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)等作用，用量較低，增殖系數(shù)高，植株強(qiáng)壯，可不經(jīng)煉苗直接進(jìn)入瓶外生根程序；同時(shí)采用瓶外生根技術(shù)，相對(duì)瓶?jī)?nèi)生根速度快，效率高、成本低，進(jìn)一步加快了繁殖速度。
【具體實(shí)施方式】
[0024]下面對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例作詳細(xì)說明，本實(shí)施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進(jìn)行實(shí)施，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和具體的操作過程，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于下述的實(shí)施例。
實(shí)施例1
[0025]本實(shí)施例包括以下操作步驟:
[0026]I) 4月初于上海青浦地區(qū)采集當(dāng)年生長(zhǎng)初期藍(lán)莓半木質(zhì)化新梢(藍(lán)莓品種為V3)，經(jīng)消毒處理后(75%的乙醇消毒30秒后，無菌水沖洗2次，再用0.1%的升汞消毒處理6分鐘，后有無菌水處理4次)，剪切成帶2個(gè)腋芽的莖段，接種前剪除底端2 - 3毫米；
[0027]2)將莖段接種到初代培養(yǎng)基改良READ+ZT 2.0mg/L+NAA 0.lmg/L+蔗糖20g/L+瓊脂6.5g/L上，ρΗ5.4-5.6 ；30天后將新長(zhǎng)出的芽莖接種到改良READ+玉米素1.0mg/L+蔗糖20g/L+瓊脂6.5g/L上，經(jīng)過2 -3次繼代培養(yǎng)，每次玉米素的含量逐漸降低0.1 -0.2mg/L，直至降至0.05mg/L的水平上，可持續(xù)增殖，增殖培養(yǎng)基為改良READ+玉米素0.05mg/L+蔗糖20g/L+瓊脂6.5g/L上，ρΗ5.4 -5.6 ;每60天繼代一次，繁殖系數(shù)在4 -6之間，培養(yǎng)條件:溫度25°C，光照時(shí)間14小時(shí)/天，光強(qiáng)2000 - 30001x ；
[0028]3)當(dāng)瓶苗增殖到一定數(shù)量時(shí)，將再生苗剪成1.5 - 2厘米的小段，莖段浸泡生根液(IBAlOOmg/L+VB^.lg/L) 3分鐘后直接扦插于經(jīng)800倍多菌靈消毒后的復(fù)合基質(zhì)上，遮小棚以保濕(空氣相對(duì)濕度為85%以上，溫度在15 - 300C )，14天可見明顯生根，I月可見新芽生出，成活率超過90%。
實(shí)施例2
[0029]本實(shí)施例包括以下操作步驟:
[0030]1)4月初于上海青浦地區(qū)采集當(dāng)年生長(zhǎng)初期藍(lán)莓半木質(zhì)化新梢(藍(lán)莓品種為奧尼爾)，經(jīng)消毒處理后(75%的乙醇消毒30秒后，無菌水沖洗2次，再用0.1%的升汞消毒處理6分鐘，后有無菌水處理4次)，剪切成帶2個(gè)腋芽的莖段，接種前剪除底端2 - 3毫米；
[0031]2)將莖段接種到初代培養(yǎng)基改良READ+ZT 2.0mg/L+NAA 0.lmg/L+蔗糖20g/L+瓊脂6.5g/L上，ρΗ5.4-5.6 ；30天后將新長(zhǎng)出的芽莖接種到改良READ+玉米素1.0mg/L+蔗糖20g/L+瓊脂6.5g/L上，經(jīng)過2 -3次繼代培養(yǎng)，每次玉米素的含量逐漸降低0.1 -0.2mg/L，直至降至0.2mg/L的水平上，可持續(xù)增殖，增殖培養(yǎng)基為改良READ+玉米素0.2mg/L+蔗糖20g/L+瓊脂6.5g/L上，ρΗ5.4 - 5.6 ;每60天繼代一次，繁殖系數(shù)在4 - 6之間，培養(yǎng)條件:溫度25°C，光照時(shí)間14小時(shí)/天，光強(qiáng)2000 - 30001x ；
[0032]3)當(dāng)瓶苗增殖到一定數(shù)量時(shí)，直接將再生苗剪成1.5 - 2厘米的小段，莖段浸泡生根液(IBAlOOmg/L+VB1.lg/L) 3分鐘后直接扦插于經(jīng)800倍多菌靈消毒后的復(fù)合基質(zhì)上，遮小棚以保濕(空氣相對(duì)濕度為85%以上，溫度在15 - 300C )，14天可見明顯生根，I月可見新芽生出，成活率超過90 %。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種藍(lán)莓組培快繁的方法，其特征在于，包括以下步驟: . 1)以藍(lán)莓半木質(zhì)化新梢為外植體制備成莖段； .2)將莖段接種到含有改良READ培養(yǎng)基、玉米素、萘乙酸、蔗糖和瓊脂的混合培養(yǎng)基中，然后轉(zhuǎn)入含有改良READ培養(yǎng)基、玉米素、蔗糖和瓊脂的增殖培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng)； . 3)增殖后的瓶苗不必經(jīng)過煉苗，直接剪成小段扦插于復(fù)合基質(zhì)上，實(shí)現(xiàn)瓶外生根。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藍(lán)莓組培快繁的方法，其特征是，所述的藍(lán)莓新梢經(jīng)消毒處理且為當(dāng)年生長(zhǎng)初期的藍(lán)莓新梢。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藍(lán)莓組培快繁的方法，其特征是，所述的莖段具有至少兩個(gè)腋芽，且莖段底部預(yù)先剪除2 - 3毫米。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藍(lán)莓組培快繁的方法，其特征是，所述的混合培養(yǎng)基的組分為:改良READ培養(yǎng)基、ZT 2.0mg/L、NAA 0.lmg/L、蔗糖20g/L以及瓊脂6.5g/L，該混合培養(yǎng)基的pH為5.4?5.6。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藍(lán)莓組培快繁的方法，其特征是，所述的增殖培養(yǎng)基的組分為:改良READ培養(yǎng)基、玉米素0.05 -0.3mg/L、蔗糖20g/L、瓊脂6.5g/L，該增殖培養(yǎng)基的pH為 5.4 ?5.6。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藍(lán)莓組培快繁的方法，其特征是，所述的小段是指:再生苗剪成1.5 - 2厘米的小段，每段浸泡生根液。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的藍(lán)莓組培快繁的方法，其特征是，所述的生根液的組分為:IBA 100mg/L、VB10.lg/L。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藍(lán)莓組培快繁的方法，其特征是，所述的小段扦插于基質(zhì)后置于小棚，14天可見明顯生根，I月可見新芽生出，成活率超過90%。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的藍(lán)莓組培快繁的方法，其特征是，所述的小棚內(nèi)空氣相對(duì)濕度為85%以上，溫度在15 - 30°C。
10.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的藍(lán)莓組培快繁的方法，其特征是，所述的改良READ培養(yǎng)基的組分為:KN03202mg/L、NH4N03400mg/L、MgS04.7Η20 370mg/L、KH2P04170mg/L、CaCl2.2Η20440mg/L、MnS04.4Η20 22.3mg/L、ZnS04.7Η20 8.6mg/L、H3B036.2mg/L、Na2Mo04.2Η20 .0.25mg/L、CuSO4.7H20 0.025mg/L、CoCl2.2H20 0.025mg/L、VBJmg/L、肌醇 .100mg/L、FeSO4.7H2027.8mg/L、Na2 - EDTA 37.3mg/L。
【專利摘要】一種藍(lán)莓組培快繁方法，以藍(lán)莓半木質(zhì)化莖段為外植體，接種到含有改良READ培養(yǎng)基、玉米素、萘乙酸、蔗糖和瓊脂的培養(yǎng)基中連接培養(yǎng)，新梢轉(zhuǎn)入含有改良READ培養(yǎng)基、玉米素、蔗糖和瓊脂的培養(yǎng)基中進(jìn)行連續(xù)增殖培養(yǎng)；將再生苗剪成小段后扦插于復(fù)合基質(zhì)上，實(shí)現(xiàn)瓶外生根。本發(fā)明在組培瓶?jī)?nèi)階段，包括初代誘導(dǎo)及繼代增殖中以玉米素為植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，它具有促進(jìn)細(xì)胞分裂，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)等作用，用量較低，增殖系數(shù)高，植株強(qiáng)壯，可不經(jīng)壯苗直接進(jìn)用瓶外生根程序；同時(shí)采用瓶外生根技術(shù)，相對(duì)瓶?jī)?nèi)生根速度快，效率高、成本低，進(jìn)一步加快了繁殖速度。
【IPC分類】A01H4-00
【公開號(hào)】CN104585039
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510064922
【發(fā)明人】趙子剛, 丁國(guó)平, 薛建德, 王華君, 于紹鳳, 史蘇湘, 朱凱承, 姚潔
【申請(qǐng)人】上海青浦現(xiàn)代農(nóng)業(yè)園區(qū)發(fā)展有限公司
【公開日】2015年5月6日
【申請(qǐng)日】2015年2月9日