一種從植物果實(shí)組織中提取質(zhì)外體汁液的裝置的制造方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型涉及植物果實(shí)組織質(zhì)外體汁液提取領(lǐng)域，特別是涉及一種從植物果實(shí)組織中提取質(zhì)外體汁液的裝置。
【背景技術(shù)】
[0002]植物質(zhì)外體是由細(xì)胞膜外的細(xì)胞內(nèi)空間、細(xì)胞壁、細(xì)胞間隙和分化成熟的木質(zhì)部所組成。植物質(zhì)外體是一個(gè)動(dòng)態(tài)的組分，其組分參與礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)和水分運(yùn)輸、組織形態(tài)的維持、細(xì)胞內(nèi)外環(huán)境的動(dòng)態(tài)平衡、細(xì)胞生長(zhǎng)和發(fā)育調(diào)控、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)以及脅迫應(yīng)答等重要的生理生化過程。
[0003]目前普遍采用的植物質(zhì)外體汁液提取方法為淋洗法和離心法。1969年，Bernstein利用該方法成功獲得葉片質(zhì)外體汁液，該方法在真空下用去離子水淋洗葉片的一面，使水分穿過另一面的氣孔并采用真空抽濾的方式將水分抽出，用試管連續(xù)收集濾液。1990年，Long等利用該方法成功獲得蠶豆葉片質(zhì)外體中K+的含量，該方法將葉片的表皮去除后，質(zhì)外體中的離子擴(kuò)散到淋洗液中，根據(jù)離子擴(kuò)散量和擴(kuò)散時(shí)間的相關(guān)性計(jì)算出Κ+的含量。淋洗法提出植物質(zhì)外體操作簡(jiǎn)單，不需要精密儀器，可以連續(xù)獲得較多的濾液，但是該方法在抽濾時(shí)對(duì)細(xì)胞膜破壞，濾液被細(xì)胞液污染并被稀釋。1980年，Terry等利用該方法成功提取豌豆質(zhì)外體，該方法用酸性溶液淋洗豌豆幼苗的莖段切口后，將植物材料置于特定容器內(nèi)，通過離心將質(zhì)外體分離出來。通過測(cè)定蘋果酸脫氫酶或磷酸己糖異構(gòu)酶的活性來選取最佳離心時(shí)間和最佳離心力，以減少切口胞漿造成的污染。1995年，Dannel等利用該方法成功收集了向日葵葉片質(zhì)外體，該方法先將植物材料用去離子水沖洗凈，準(zhǔn)確稱取一定的質(zhì)量，真空狀態(tài)下向植物材料滲入一定濃度的山梨醇溶液后再離心。離心法可以直接收取比較純凈的質(zhì)外體汁液，但是對(duì)離心時(shí)間和離心力要求嚴(yán)格，容易造成細(xì)胞溶液污染。
[0004]通過前人研究看出，分離不同植物質(zhì)外體的方法均有各自的優(yōu)缺點(diǎn)且主要集中在植物葉片和莖組織。迄今為止，仍沒有出現(xiàn)植物果實(shí)質(zhì)外體汁液提取方法的報(bào)道。而植物果實(shí)質(zhì)外體汁液的組分對(duì)于調(diào)控果實(shí)生長(zhǎng)、發(fā)育和應(yīng)對(duì)各種生理脅迫具有重要意義。
【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0005]基于上述現(xiàn)有技術(shù)所存在的問題，本實(shí)用新型提供一種從植物果實(shí)組織中提取質(zhì)外體汁液的裝置，能從植物果實(shí)組織中提取質(zhì)外體汁液，方便研究植物果實(shí)質(zhì)外體汁液的組分。
[0006]為解決上述技術(shù)問題，本實(shí)用新型提供一種從植物果實(shí)組織中提取質(zhì)外體汁液的裝置，包括:
[0007]離心瓶、離心篩和活動(dòng)篩板；其中，
[0008]所述離心瓶為圓柱形結(jié)構(gòu)；
[0009]所述離心篩為圓柱形結(jié)構(gòu)，設(shè)在所述離心瓶?jī)?nèi)，所述離心篩內(nèi)卡裝設(shè)置布滿通孔的活動(dòng)篩板，將所述離心篩分為兩層，處于上層的所述離心篩的外壁上設(shè)有若干通孔，所述離心篩的底部設(shè)有若干通孔。
[0010]上述裝置中，活動(dòng)篩板在所述離心篩上分隔出的上層高度大于下層高度。
[0011]上述裝置中，處于上層的所述離心篩的外壁上設(shè)有若干通孔均為直徑1mm的通孔；
[0012]所述離心篩的底部設(shè)有的若干通孔均為直徑1cm的通孔；
[0013]所述活動(dòng)篩板上的通孔均為直徑1mm的通孔。
[0014]上述裝置中，離心瓶采用鋼制離心瓶；
[0015]所述離心篩采用鋼制離心篩；
[0016]所述活動(dòng)篩板采用鋼制篩板。
[0017]本實(shí)用新型的有益效果為:通過將離心篩設(shè)在離心瓶?jī)?nèi)，并由布滿通孔的活動(dòng)篩板將離心篩分層，在上層的離心篩壁上設(shè)置若干通孔，以及在離心篩底部設(shè)置若干通孔形成了一種特定結(jié)構(gòu)的分離裝置，能方便以離心方式從植物果實(shí)組織中分離質(zhì)外體汁液，并可保證分離的質(zhì)外體汁液順利分離，可以防止組織和與離心出來的質(zhì)外體汁液再次接觸，方便有效的回收離心產(chǎn)物。該裝置既能保證盡可能將質(zhì)外體汁液分離出來，又能避免細(xì)胞損傷造成的污染，提出汁液的純度最高，效率最高。
【附圖說明】
[0018]為了更清楚地說明本實(shí)用新型實(shí)施例的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本實(shí)用新型的一些實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他附圖。
[0019]圖1為本實(shí)用新型實(shí)施例提供的裝置結(jié)構(gòu)示意圖；
[0020]圖2為本實(shí)用新型實(shí)施例提供的不同離心力下獲得的離心液中樣品酶活力的分析鑒定結(jié)果曲線圖；
[0021]圖3為本實(shí)用新型實(shí)施例提供的不同離心力下獲得的離心液中樣品純度的分析鑒定結(jié)果曲線圖。
【具體實(shí)施方式】
[0022]下面對(duì)本實(shí)用新型實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本實(shí)用新型一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒緦?shí)用新型的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本實(shí)用新型的保護(hù)范圍。
[0023]本實(shí)用新型的果實(shí)質(zhì)外體汁液提取用裝置結(jié)構(gòu)如圖1所示，分為兩部分，第一部分是500ml的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格的鋼制離心瓶，瓶口和瓶底直徑相同，第二部分是圓柱形的離心篩，外直徑略小于離心瓶?jī)?nèi)直徑，保證可放進(jìn)離心瓶，離心篩分兩層，用打滿孔的活動(dòng)鋼板(即活動(dòng)篩板)隔開，上層的離心篩壁上打滿小孔，保證質(zhì)外體汁液在離心力作用下有效進(jìn)入離心瓶，下層為一底部帶小孔的空間，離心下的質(zhì)外體汁液可通過底部小孔進(jìn)入離心瓶；離心處理后獲得分離液即為從待提取植物果實(shí)組織中分離得到的質(zhì)外體汁液，該裝置的離心篩外直徑為6cm，上層離心篩壁上小孔直徑為1mm，下層底部小孔直徑為1cm。
[0024]利用上述提取裝置從植物果實(shí)組織中提取質(zhì)外體汁液的方法，具體可包括如下步驟:
[0025]步驟(1)，用干凈的刀片將待提取的植物果實(shí)樣品切成0.1cm3左右小塊，去離子水沖洗三遍；這樣的尺寸，可避免尺寸太大不容易將質(zhì)外體汁液離心出來，太小了細(xì)胞損傷嚴(yán)重容易污染。
[0026]步驟(2)，將沖洗干凈的植物果實(shí)樣品放入小燒杯，用去離子水浸沒，在0.8個(gè)大氣壓的真空狀態(tài)下向果實(shí)滲入去離子水，時(shí)間不超過5min，壓力太大將破壞細(xì)胞膜，造成質(zhì)外體汁液的污染；
[0027]步驟(3)，取出植物果實(shí)樣品并迅速用吸水紙吸干，放入本實(shí)用新型的果實(shí)質(zhì)外體汁液提取用裝置進(jìn)行離心處理，分離處理中，為清除植物果實(shí)樣品上的雜質(zhì)和污染物，先用低速的第一離心力L去掉植物果實(shí)樣品表面吸附的雜志和污染物，然后再用最適的第二離心力Η收集保存。最適的第二離心力不能太高，否則會(huì)將細(xì)胞膜破壞，第一離心力L低于第二離心力Η。
[0028]為確定最適離心力Η，可采用梯度加速方法:
[0029]按照500g為一個(gè)梯度，從1500g開始收集離心液，分別測(cè)定提取的果實(shí)質(zhì)外體和勻漿中蘋果酸脫氫酶的活性。當(dāng)在某一個(gè)離心力下，蘋果酸脫氫酶活性突然升高，并且隨著離心力增大而增加，即可確定這個(gè)離心力前的離心力為最適的第二離心力H，這樣的離心力既能保證有大量的質(zhì)外體汁液，又能確保分離的質(zhì)外體汁液沒有污染。
[0030]本實(shí)用新型所提供的方法特別適合于仍沒有成熟的植物果實(shí)組織。優(yōu)選的，本實(shí)用新型采用的植物果實(shí)樣品為草莓果實(shí)，更進(jìn)一步，為花后25天的草莓果實(shí)。
[0031]通過上述方法最終確定分離草莓果實(shí)組織中的質(zhì)外體汁液的最適離心力(即第二離心力L)為2500g。
[0032]上述方法中，每次離心的時(shí)間均可為5-8min(如6min)。
[0033]在本實(shí)用新型的一個(gè)實(shí)施例中，從草莓果實(shí)組織中分離質(zhì)外體汁液時(shí)，采用的裝置的離心瓶為500ml，離心篩外直徑為6cm，上層壁上小孔直徑為1mm，下層底部小孔直徑為lcm0
[0034]為了防止質(zhì)外體液成分的改變，上述方法的所有操作可在4°C條件下進(jìn)行。
[0035]本實(shí)用新型從植物果實(shí)組織中提取質(zhì)外體汁液的方法以草莓為研究對(duì)象，對(duì)于研究果實(shí)質(zhì)外體物質(zhì)參與的生