高效液相色譜?串聯(lián)四級桿質(zhì)譜聯(lián)用同步測定氣溶膠中左旋葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖 ...的制作方法
【專利摘要】一種高效液相色譜?串聯(lián)四級桿質(zhì)譜聯(lián)用同步測定氣溶膠中左旋葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖的方法，包括：用超純水對氣溶膠樣品中的左旋葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖進行超聲萃取，用高效液相色譜?串聯(lián)四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀進行檢測：采用氨水作為流動相；質(zhì)譜部分的離子源采用適宜極性分子分析的電噴霧電離方式，質(zhì)譜方法采用多次優(yōu)化后的離子源參數(shù)和化合物參數(shù)，在負離子和多反應(yīng)監(jiān)測模式下進行定性和定量分析。通過外標曲線法，L、M、G在0.01?1μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)超過0.99，其中L的檢出限小于0.005μg/ml，M和G均小于0.01μg/ml，實驗重復(fù)性很好，L、M、G的重復(fù)性實驗的相對標準偏差分別為1.31％，4.48％和1.31％，其加標回收率均達到97％以上。
【專利說明】
高效液相色譜-串聯(lián)四級桿質(zhì)譜聯(lián)用同步測定氣溶膠中左旋 葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種高效液相色譜-串聯(lián)四級桿質(zhì)譜聯(lián)用同步測定氣溶膠中左旋葡聚 糖、甘露聚糖和半乳聚糖的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 生物質(zhì)燃燒例如森林大火、秸桿燃燒等會排放多環(huán)芳烴、鹵代有機污染物等有毒 物質(zhì)影響人體健康，同時也會排放溫室氣體和大氣顆粒物等影響大氣環(huán)境和氣候變化，其 排放的污染物成分及其復(fù)雜，因此用分子示蹤物來研究生物質(zhì)燃燒對區(qū)域或局部地區(qū)大氣 環(huán)境的影響十分重要。
[0003]左旋葡聚糖（1，6-anhydr〇-0-d_glucose，或稱 Levoglucosan、L)學(xué)名 1,6-脫水-β-D-葡萄糖，是纖維素在高于300°C下熱解的產(chǎn)物，沒有其他來源。由于它的釋放量較大，且在 大氣環(huán)境中有足夠的穩(wěn)定性，被廣泛用作生物質(zhì)燃燒的示蹤物。左旋葡聚糖的同分異構(gòu)體 甘露聚糖（1，6-anhydr〇-0-d_mannopyranose，或稱 Mannosan、M)學(xué)名 1，6-脫水-β-D-吡喃型 甘露糖以及半乳聚糖（1，6_anhydr〇-0-d-galactopyranose，或稱 Galactosan、G)學(xué)名 1，6_ 脫水-β-D-吡喃型半乳糖是半纖維素高溫裂解的產(chǎn)物，它們在大氣環(huán)境中同樣性質(zhì)穩(wěn)定且 具有源特殊性，因而與左旋葡聚糖一并被公認為理想的生物質(zhì)燃燒示蹤物。左旋葡聚糖、甘 露聚糖和半乳聚糖互為同分異構(gòu)體，分子量均為162.0,其對應(yīng)的分子結(jié)構(gòu)式如下：
[0005]對于大氣氣溶膠中生物質(zhì)燃燒示蹤物左旋葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖這三種單 糖類的測定，早前廣泛采用的是先用有機溶劑萃取氣溶膠中的目標物質(zhì)，接著經(jīng)衍生化后 用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的方法進行檢測，該方法需用有機溶劑進行萃取，溶劑消耗量大，檢 測成本較高，而且樣品準備耗時較長，衍生化還會造成待分析物的損失。近年來，新出現(xiàn)的 無需進行衍生化的檢測方法包括離子色譜-脈沖安培檢測，其左旋葡聚糖檢測限僅為60yg/ 1(200ng/m 3)(SchkoInik,G. ,Rudich,Y.,Detection and quantification of levoglucosan in atmospheric aerosols:A review.Analytical and Bioanalytical Chemistry，2006，385: 26-33);用高效液相色譜-脈沖安培檢測方法，其三種單糖類的檢測 限在2〇-50iig/l(Caseiro，A.，Marr，I ·L.，Claeys，M.，Kasper-Giebl，A.，Puxbaum，H.，Pio， C.A.determination of saccharides in atmospheric aerosol using anion-exchange high-performance liquid chromatography and pulsed-amperometric detection. Journal of Chromatography A，2007,1171:37-45);同樣用高效液相色譜-串 聯(lián)四級桿質(zhì)譜聯(lián)用的方法對左旋葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖進行檢測，Piot et al采用 NaOH溶液作為流動相可能會對質(zhì)譜造成不可逆轉(zhuǎn)的影響，例如會使流動相NaOH溶液經(jīng)過離 子源時于高溫下析出晶體，堵塞離子源接口等，且該方法對三種目標物的檢測限為30yg/l， 定量限為lOOug/KPiot，。·，Jaffrezo，J.L.，Cozic，J.，Pissot，N.，E1 Haddad，I.， Marchand,N.,Besombes,J.L.Quantification of levoglucosan and its isomers by High Performance Liquid Chromatography-Electrospray Ionization tandem Mass Spectrometry and its applications to atmospheric and soil samples.Atmospheric Measurement Techniques ,2012,5:141-148)。以上檢測限對于檢測受氣溶膠污染較少的地 區(qū)或氣溶膠濃度較低天氣的氣溶膠樣品具有局限性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種檢出限低，檢測效果好，無需使用有機 溶劑，無需衍生化，檢測成本低、安全的高效液相色譜-串聯(lián)四級桿質(zhì)譜聯(lián)用測定氣溶膠中 左旋葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖的方法。
[0007] 為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:一種高效液相色譜-串聯(lián)四級 桿質(zhì)譜聯(lián)用測定氣溶膠中左旋葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖的方法，步驟包括：
[0008] (1)用超純水對氣溶膠樣品中的三種單糖左旋葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖進行 超聲萃取，所得萃取液過濾后完成樣品的前處理；
[0009] (2)用高效液相色譜-串聯(lián)四級桿質(zhì)譜聯(lián)用測定樣品中的左旋葡聚糖、甘露聚糖和 半乳聚糖:色譜柱選擇適合單糖類分離的陰離子交換柱，流動相選擇為氨水(質(zhì)量分數(shù)ω: 約0.001 % )-超純水，采用恒流速洗脫，流速范圍設(shè)定為0.2-0.5ml mirT1;
[0010] (3)將步驟（1)所得的經(jīng)過萃取的樣品經(jīng)由自動進樣器進樣后，通過步驟(2)中流 動相的帶動下進入柱溫箱中的色譜柱中，柱溫箱溫度設(shè)定不超過柱子最高耐溫度(最高耐 溫度為50°C);三種單糖在流動相的帶動下于色譜柱內(nèi)洗脫分離后，各組分通過接口進入質(zhì) 譜檢測；質(zhì)譜的離子源采用適宜極性分子分析的電噴霧電離(ESI)方式(在負離子條件下， 各組分在噴霧電壓和霧化氣的共同作用下霧化形成噴霧狀的帶電液滴后，接著在 TurboHeater提供的霧化溫度和輔助加熱氣的共同作用下，溶劑蒸發(fā)，小液滴碎裂，離子從 液滴中脫落，產(chǎn)生氣相離子，在接口處聚焦，在氣簾氣的帶動下，進入質(zhì)量分析器)獲得的氣 相離子進入質(zhì)量分析器；
[0011] (4)進入質(zhì)量分析器(QqQ)后，采用質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)分析方法，采用質(zhì)譜多反 應(yīng)監(jiān)測(MRM)分析方法可以選擇多個母、子離子對同時進行檢測，設(shè)定只有質(zhì)荷比為160.9 的母離子能通過一級質(zhì)譜(MS1/Q1)進入碰撞室(q2)，設(shè)定在碰撞室被打碎的碎片子離子中 101.0,113.0和129.0能通過二級質(zhì)譜(MS2/Q3)并被最后的檢測器檢測(設(shè)定好之后儀器將 自動選擇該類離子進入二級質(zhì)譜或檢測器）；相同的母、子離子對的化合物參數(shù)相同，每個 離子對的化合物參數(shù)經(jīng)多次優(yōu)化后取最佳值以使其靈敏度最高，各母、子離子對的化合物 參數(shù)如表1:
[0012] 表1左旋葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖的特征母、子離子及對應(yīng)化合物參數(shù)
[0014] (MRM方法具有靈敏度高、重現(xiàn)性好和準確度高的特點，適合已知分析物反應(yīng)離子 的檢測。通過單標測試后發(fā)現(xiàn)，互為同分異構(gòu)體的左旋葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖經(jīng)離子 化后具有相同的母離子即160.9，母離子經(jīng)碰撞室碰撞擊碎后，左旋葡聚糖豐度最高的兩個 子離子為101.0和113.0,甘露聚糖擁有同樣的子離子即101.0和113.0,半乳聚糖豐度最高 的兩個子離子為101 .〇和129.0)
[0015] (5)結(jié)合目標物的保留時間和特征子離子對左旋葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖進 行定性，用豐度最高的160.9-101.0離子對對三種目標物進行定量，定量方法采用外標曲線 法。
[0016] 本發(fā)明上述的高效液相色譜-串聯(lián)四級桿質(zhì)譜聯(lián)用測定氣溶膠中左旋葡聚糖、甘 露聚糖和半乳聚糖的方法，為了保證柱效和避免待測物在柱內(nèi)的殘留，還需要采用如下步 驟:每兩周用200mM的NaOH溶液沖洗柱子24小時，沖洗流速設(shè)定為0.4ml min-1，沖洗液不進 入質(zhì)譜，沖洗完后接著用質(zhì)量分數(shù)為0.001 %的氨水以0.4ml mirT1的流速沖洗2小時以去除 柱內(nèi)殘留的NaOH溶液，沖洗液不進入質(zhì)譜；
[0017] 上述步驟（1)中，用超純水對樣品中的三種單糖（左旋葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚 糖)分別進行了 5、15、30、45、60、75、90分鐘的超聲萃取，最后確定最佳的萃取時間為45分鐘 (時間為45分鐘時，萃取出來的三種單糖濃度最高，超過45分鐘后，三種單糖濃度變化不大 且有所減低），溫度為室溫。
[0018] 上述步驟(1)中，超聲儀的功率為150W，使用頻率為40kHz。
[0019] 上述步驟（2)中的色譜柱選擇為Dionex(戴安）4mm(內(nèi)徑）X 250mm(長度）的 CarboPac MA1分析柱以及4mm(內(nèi)徑）X50mm(長度）的CarboPac MA1保護柱。流動相選擇為 適合該色譜柱的堿性溶液，易揮發(fā)，不會對質(zhì)譜造成影響的氨水。氨水選擇為高效液相 (HPLC)級別，購自西格瑪奧德里奇(Sigma-Aldrich)公司，原質(zhì)量分數(shù)為彡25%，上述質(zhì)量 分數(shù)為〇. 001 % (約〇. 528mM)的氨水配制步驟為:取800ml超純水，經(jīng)超聲脫氣后，加入160μ1 的5%的氨水（由質(zhì)量分數(shù)為25%的原氨水稀釋5倍得到），搖勻、靜置。
[0020]本發(fā)明涉及的所有流動相都需經(jīng)超聲脫氣處理，超聲儀的功率為150W，使用頻率 為40kHz，時間為5-10分鐘，以排除02和他等保證流量準確，提高色譜圖重現(xiàn)性，同時避免流 動相與空氣中C0 2的接觸形成碳酸鹽，吸附在柱子上而影響柱效。
[0021 ]經(jīng)多次實驗證明流速的改變對目標物靈敏度及分離度影響較小，優(yōu)化結(jié)果設(shè)定為 0.4ml min-、
[0022] 氨水的濃度可以影響目標物的靈敏度，可通過該變流動相比例實現(xiàn)其濃度的改 變，當(dāng)流動相氨水（ω :約0.001 % )-超純水比例為10:90(v/v)時，目標物的靈敏度最高，因 此，方法中設(shè)定流動相比例為氨水（ω :約0.001 % )-超純水（10 :90，v/v)，即流動相中氨水 的質(zhì)量分數(shù)為0.0001 %。
[0023] 本發(fā)明步驟(3)中離子源各參數(shù)經(jīng)多次實驗優(yōu)化設(shè)定如下:離子噴霧電壓設(shè)定為_ 3800V，霧化氣設(shè)定為38psi，霧化溫度設(shè)定為650°C，輔助加熱氣設(shè)定為80psi，氣簾氣設(shè)定 為46psi;
[0024] 上述步驟（3)中柱溫箱溫度經(jīng)多次實驗后證明與樣品的分離度和靈敏度呈正相 關(guān)，柱溫箱溫度越高，樣品分離度越好，靈敏度越高，實驗發(fā)現(xiàn)，當(dāng)溫度<35°C時，分離效果 偏差，柱溫箱內(nèi)使用的上述色譜柱的溫度限值為50°C，長時間使用該柱子以不超過其最高 溫度的90%為宜，因此最佳溫度設(shè)定為45°C。負離子模式適合酸性及中性樣品，或含有多個 羥基時。三種單糖偏中性且含數(shù)個羥基，因而選擇負離子模式。
[0025]上述步驟(4)采用質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)分析方法，其分析檢測時間為70分鐘，同 步化模式為"LC sync"即液相同步模式。
[0026] 本發(fā)明的優(yōu)點和有益效果為：
[0027] 1.采用本發(fā)明的高效液相色譜-串聯(lián)四級桿質(zhì)譜聯(lián)用測定樣品中的左旋葡聚糖、 甘露聚糖和半乳聚糖的方法，由于三種單糖既溶于水也溶于有機溶劑，此處使用的液相色 譜雙重質(zhì)譜聯(lián)用儀中選擇了"適合單糖類分離的陰離子交換柱"，該類柱子只能使用堿性的 水相流動相，故而也只能使用水對目標物進行萃取，因此無需使用有機溶劑，樣品也無需進 行衍生化，能減少有機溶劑的使用，節(jié)約科研成本且有益于環(huán)保;而且能準確地定性、定量 不同氣溶膠樣品中的左旋葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖，檢出限低(L的檢出限小于5ng/ml (0.47ng/m3)，定量限（信噪比為10:1)小于10ng/ml，M和G的檢出限小于10ng/ml(0.93ng/ m3)，定量限在20-50ng/ml之間），檢測效果好。
[0028] 2.本發(fā)明通過選擇合適的色譜柱、流動相，優(yōu)化流動相濃度、流速、柱溫箱溫度以 及質(zhì)譜中的離子源參數(shù)和目標物的化合物等參數(shù)，能使目標物得到很好的分離，在質(zhì)譜離 子源發(fā)生裂解，并使其對應(yīng)的母、子離子在質(zhì)譜得到最優(yōu)化的分析檢測。
【附圖說明】
[0029] 圖1為本發(fā)明實施例1所檢測的標準液中的左旋葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖的色 譜圖，該色譜圖中的縱坐標代表峰的強度，橫坐標代表保留時間，單位為分鐘。
[0030] 圖2為本發(fā)明實施例2所檢測的氣溶膠樣品萃取液中的左旋葡聚糖、甘露聚糖和半 乳聚糖的色譜圖，該色譜圖中的縱坐標代表峰的強度，橫坐標代表保留時間，單位為分鐘。 [0031 ]圖3為本發(fā)明實施例1所檢測的標準液中的左旋葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖的標 準曲線圖，該曲線圖中的縱坐標代表液相色譜峰面積的響應(yīng)值，橫坐標代表左旋葡聚糖、甘 露聚糖和半乳聚糖的濃度。
【具體實施方式】
[0032]下面結(jié)合附圖對本發(fā)明作進一步詳細說明，但本發(fā)明不僅僅局限于以下實施例。 [0033]實驗條件:應(yīng)用島津公司的高效液相色譜(Shimadzu 30A)和愛博才思公司的串聯(lián) 四級桿質(zhì)譜(ABsciex 3200Qtrap)聯(lián)用儀進行檢測，所用試劑均為高效色譜純，色譜柱選用 戴安公司生產(chǎn)的4mm(內(nèi)徑）X 250mm(長度）的CarboPac MA1分析柱以及4mm(內(nèi)徑）X 50mm (長度）的CarboPac MA1保護柱。流動相選擇為氨水和超純水，流速經(jīng)優(yōu)化設(shè)定為0.4ml mirT1。柱溫箱溫度設(shè)定為45°C。最佳離子噴霧電壓設(shè)定為一3800V，霧化氣設(shè)定為38psi，霧 化溫度設(shè)定為650°C，輔助加熱氣設(shè)定為80psi，氣簾氣設(shè)定為46psi。選擇的各個單糖的代 表性母、子離子對及對應(yīng)的化合物參數(shù)如表1所示。進樣量為10微升。計算機系統(tǒng)記錄色譜 和質(zhì)譜圖形，以離子對對應(yīng)的峰面積作為目標物的響應(yīng)值，結(jié)合左旋葡聚糖、甘露聚糖和半 乳聚糖各自的保留時間和特征子離子對三種目標物進行定性，用豐度最高的160.9-101.0 對三種目標物進行定量，定量方法采用外標曲線法。應(yīng)用上述試驗條件所作的具體實施例 如下：
[0034] 實施例1
[0035]精密稱取左旋葡聚糖、半乳聚糖、甘露聚糖各l.Omg，用適量超純水溶解后，轉(zhuǎn)移至 100ml的容量瓶中，并用超純水定容至刻度。搖勻，靜置得10μg/ml的L、M、G混合標準溶液。L、 M、G的測試工作曲線所用溶液由以上lOμg/ml的標準溶液逐級稀釋，分別配制成0.005， 0.01，0.02,0.05,0.1，0.2,0.5, lμg/ml的系列溶液，接著按上述實驗條件進行高效液相色 譜-串聯(lián)四級桿質(zhì)譜儀HPLC-MSMS分析檢測，流動相選擇為質(zhì)量分數(shù)0.001 %的氨水和超純 水（10:90，v/v)，恒流速設(shè)定為0.4ml min-1，柱溫箱溫度為45°C。最佳離子噴霧電壓設(shè)定為-3800V，霧化氣設(shè)定為38psi，霧化溫度設(shè)定為650°C，輔助加熱氣設(shè)定為80psi，氣簾氣設(shè)定 為46psi。選擇的各個單糖的代表性母、子離子對及對應(yīng)的化合物參數(shù)如表1所示。進樣量為 10微升。
[0036] 實施例2
[0037]剪取大流量空氣顆粒物采樣濾膜3cm X 3cm，剪碎后加入3ml超純水，進行45分鐘超 聲萃取。萃取液經(jīng)〇.45μπι的疏水性PTFE針式濾器過濾后，將過濾后的提取液用高效液相-串 聯(lián)四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀進行測試分析，高效液相-串聯(lián)四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀的測試分析實驗條 件同實施例1，外標法定量。對空氣氣溶膠樣品作了3個平行樣品，試驗編號為A、B、C，分析結(jié) 果見表2,并對第一個平行樣品(試驗編號A)重復(fù)測定5次，分析結(jié)果見表3。由表2可知，平行 樣中L的相對標準偏差(RSD)為8.98 %，Μ的相對標準偏差為12.43 %，G的相對標準偏差為 6.98% ;由表3可知，重復(fù)性測試中，L的相對標準偏差為1 .31%，Μ的相對標準偏差為 4.48 %，G的相對標準偏差為1.31 %。
[0038]表2該氣溶膠樣品中左旋葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖的測試含量
[0041] 表3該氣溶膠樣品中測試重復(fù)性
[0042]
[0043] 實施例3
[0044] 將實施例1中的標準溶液加入到準備好的已知陰性結(jié)果(經(jīng)測試不含有目標化合 物）的測試液中，按照實施例1中儀器分析檢測方法進行實驗。對該樣品做10次平行測量取 平均值，根據(jù)實際加入量和實測結(jié)果，計算該樣品的加標回收率，試驗結(jié)果見表4,由表4可 知，樣品中左旋葡聚糖的加標回收率達到9 7 -101 %之間，平行測量的相對標準偏差為 0.95 % ;樣品中甘露聚糖的加標回收率達到99-101 %之間，平行測量的相對標準偏差為 0.61 % ;樣品中半乳聚糖的加標回收率達到9 9 -10 0 %之間，平行測量的相對標準偏差為 0.47% ；
[0045] 表4該樣品的加標回收率
[0048]圖1為本發(fā)明實施例1所檢測的L、M、G的色譜圖，該色譜圖中的縱坐標代表峰的強 度，橫坐標代表保留時間，單位為分鐘；圖2為本發(fā)明實施例2所檢測的氣溶膠樣品中的L、M、 G的色譜圖，該色譜圖中的縱坐標代表峰的強度，橫坐標代表保留時間，單位為分鐘;根據(jù)L、 M、G的單標所得色譜圖的保留時間及特征離子進行定性，以峰度最強離子對160.9-101.0進 行定量，以對應(yīng)保留時間出現(xiàn)的160.9-101.0的峰面積作為目標物的響應(yīng)值，對樣品進行定 性和定量分析。因?qū)嶋H氣溶膠樣品中Μ和G的含量很少，在色譜圖中峰形不明顯，因此，圖2中 Μ和G的峰形放大了 10倍，L的峰形不變。圖3為實施例1中對系列標準溶液檢測所得的L、M、G 的標準曲線圖，該曲線圖中的縱坐標代表液相色譜峰面積的響應(yīng)值，橫坐標代表L、M、G的濃 度；由圖3可知，L所得標準曲線的函數(shù)關(guān)系為y = 2E+06x+3364.8,其線性相關(guān)系數(shù)為R2 = 0.9997; 11所得標準曲線的函數(shù)關(guān)系為y = 3E+06X+104354，其線性相關(guān)系數(shù)為R2 = 0.9976; G所得標準曲線的函數(shù)關(guān)系為y = 2E+06x+8626.5，其線性相關(guān)系數(shù)為R2 = 0.9996;其中y代 表對應(yīng)的L、M、G的濃度，X代表液相色譜峰面積的響應(yīng)值，表明該標準曲線具有較好的線性 相關(guān)性。對于利用高效液相-串聯(lián)四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測的儀器檢出限(信噪比為3:1)，L的 檢出限小于5即/1111(0.471^/111 3)，定量限（信噪比為10:1)小于1〇1^/1111，]\1和6的檢出限小于 10ng/ml(0.93ng/m 3)，定量限在20_50ng/ml之間。
【主權(quán)項】
1. 一種高效液相色譜-串聯(lián)四級桿質(zhì)譜聯(lián)用同步測定氣溶膠中左旋葡聚糖、甘露聚糖 和半乳聚糖的方法，其特征在于:步驟包括： (1) 用超純水對氣溶膠樣品中的Ξ種單糖左旋葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖進行超聲 萃取，所得萃取液過濾后完成樣品的前處理； (2) 用高效液相色譜-串聯(lián)四級桿質(zhì)譜聯(lián)用測定樣品中的左旋葡聚糖、甘露聚糖和半乳 聚糖:色譜柱為陰離子交換柱，流動相為氨水-超純水，采用恒流速洗脫，流速為0.2-0.5ml/ mi打； (3) 將步驟（1)所得的經(jīng)過萃取的樣品進樣后，在步驟(2)中流動相的帶動下進入柱溫 箱中的色譜柱中，柱溫箱溫度設(shè)定不超過柱子最高耐溫度;Ξ種單糖在流動相的帶動下于 色譜柱內(nèi)洗脫分離后，各組分通過接口進入質(zhì)譜檢測；質(zhì)譜的離子源采用電噴霧電離方式 獲得的氣相離子進入質(zhì)量分析器； (4) 進入質(zhì)量分析器后，采用質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測分析方法，即選擇多個母、子離子對同時 進行檢測，設(shè)定只有質(zhì)荷比為160.9的母離子能通過一級質(zhì)譜進入碰撞室，設(shè)定在碰撞室被 打碎的碎片子離子中101.0,113.0和129.0能通過二級質(zhì)譜并被最后的檢測器檢測;相同的 母、子離子對的化合物參數(shù)相同； (5) 結(jié)合目標物的保留時間和特征子離子對左旋葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖進行定 性，用豐度最高的160.9-101.0離子對對Ξ種目標物進行定量，定量方法采用外標曲線法。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效液相色譜-串聯(lián)四級桿質(zhì)譜聯(lián)用同步測定氣溶膠中左旋 葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖的方法，其特征在于:步驟還包括:每兩周用200mM的化0田容液 沖洗柱子24小時，沖洗流速設(shè)定為0.4ml mirfi，沖洗液不進入質(zhì)譜，沖洗完后接著用質(zhì)量分 數(shù)為0.001 %的氨水W0.4ml min-i的流速沖洗2小時W去除柱內(nèi)殘留的NaO田容液，沖洗液不 進入質(zhì)譜。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效液相色譜-串聯(lián)四級桿質(zhì)譜聯(lián)用同步測定氣溶膠中左旋 葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖的方法，其特征在于:步驟（1)中用超純水對樣品中的左旋葡 聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖進行超聲萃取的時間為45分鐘，溫度為室溫。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效液相色譜-串聯(lián)四級桿質(zhì)譜聯(lián)用同步測定氣溶膠中左旋 葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖的方法，其特征在于:步驟(2)中的色譜柱選擇為Dionex4mmX 250mm的化rboPac MA1分析柱?及4mmX 50mm的化rboPac MA1保護柱；流動相為雙流動相， 即質(zhì)量分數(shù)0.001 %的氨水W及超純水，氨水與超純水的體積比為10:90。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的高效液相色譜-串聯(lián)四級桿質(zhì)譜聯(lián)用同步測定氣溶膠中左旋 葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖的方法，其特征在于:步驟(2)中質(zhì)量分數(shù)0.001%的氨水配制 步驟為:取800ml超純水，經(jīng)超聲脫氣后，加入16化1的5%的氨水，搖勻、靜置。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效液相色譜-串聯(lián)四級桿質(zhì)譜聯(lián)用同步測定氣溶膠中左旋 葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖的方法，其特征在于:步驟(2)中的流速為0.4ml/min。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效液相色譜-串聯(lián)四級桿質(zhì)譜聯(lián)用同步測定氣溶膠中左旋 葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖的方法，其特征在于:所述的流動相均經(jīng)超聲脫氣處理后的流 動相，超聲儀的功率為150W，使用頻率為40曲Z，超聲脫氣處理時間為5-10分鐘。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效液相色譜-串聯(lián)四級桿質(zhì)譜聯(lián)用同步測定氣溶膠中左旋 葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖的方法，其特征在于:步驟(3)中離子源的離子噴霧電壓設(shè)定 為-3800V，霧化氣設(shè)定為38psi，霧化溫度設(shè)定為650°C，輔助加熱氣設(shè)定為80psi，氣簾氣設(shè) 定為46psi ;柱溫箱溫度為45°C。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效液相色譜-串聯(lián)四級桿質(zhì)譜聯(lián)用同步測定氣溶膠中左旋 葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖的方法，其特征在于:步驟(4)中所述的采用質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測 分析方法，其分析檢測時間為70分鐘，同步化模式為"LC sync"即液相同步模式。10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效液相色譜-串聯(lián)四級桿質(zhì)譜聯(lián)用同步測定氣溶膠中左旋 葡聚糖、甘露聚糖和半乳聚糖的方法，其特征在于：步驟(4)各母、子離子對的化合物參數(shù) 為：
【文檔編號】G01N30/02GK106093248SQ201610712702
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年8月23日
【發(fā)明人】何俊, 徐婧莎, 徐宏輝, 姜瑜君
【申請人】何俊