卡培他濱的測定及其應用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種卡培他濱的測定及其應用，選擇直接進樣法，以常壓下沸點低于70℃的有機溶劑為溶劑，進樣口溫度為60～75℃，對卡培他濱的降解進行了有效的控制，解決了卡培他濱樣品因高溫降解對正戊醇含量測定的干擾問題。本發(fā)明驗證試驗重現(xiàn)性好、線性關系良好、平均回收率良好，能準確定量檢出卡培他濱樣品中可能殘留的正戊醇。本發(fā)明對樣品中正戊醇的含量進行了準確的測定，同時確保了卡培他濱的質量及用藥的安全。
【專利說明】
卡培他濱的測定及其應用
技術領域
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥分析技術領域，具體設及一種卡培他濱的測定及其應用。
【背景技術】
[0002] 卡培他濱，英文名為化pecitabine，是一種可W在體內轉變成5-FU的抗代謝氣喀 晚脫氧核巧氨基甲酸醋類藥物，由羅氏公司研制，商品名為希羅達，能夠抑制細胞分裂和干 擾RNA和蛋白質(protein)合成。適用于紫杉醇和包括有蔥環(huán)類抗生素化療方案治療無效的 晚期原發(fā)性或轉移性乳腺癌的進一步治療。主要用于晚期原發(fā)性或轉移性乳腺癌，直腸癌、 結腸癌和胃癌的治療。其結構式如下：
[0003]
[0004] 中國發(fā)明專利〔肥01080032544.6、〔肥01010134093.9和〔肥01110090029.乂在制備 卡培他濱時，都用到正戊醇；另外，經(jīng)對卡培他濱的結構分析，在合成或放置過程中可能降 解為正戊醇，故對成品中正戊醇的殘留量進行研究。在卡培他濱殘留溶劑測定頂空進樣過 程中，樣品色譜圖中有很大的正戊醇峰，推測在汽化室溫度20(TC條件下，卡培他濱樣品已 經(jīng)降解產(chǎn)生正戊醇，影響了卡培他濱樣品中正戊醇含量的測定。
[0005] 當殘留溶劑的殘留高于安全值時，如果不對藥品中溶劑殘留進行限度檢查，將會 使藥品存在極大地安全隱患。
[0006] 目前尚未有報道卡培他濱中正戊醇的含量測定，因此，根據(jù)藥品審評中屯、指導原 則要求，需要建立一種卡培他濱中正戊醇的含量測定方法，并規(guī)定合理的限定，對確?？ㄅ?他濱的安全用藥具有重要的意義。

【發(fā)明內容】

[0007] 本發(fā)明的目的就是提供了一種卡培他濱的測定及其應用。解決了卡培他濱樣品因 高溫降解對正戊醇含量測定的干擾問題。
[000引為了解決上述技術問題，本發(fā)明通過下述技術方案得W解決：
[0009] -種卡培他濱中殘留溶劑的測定方法，包括如下步驟：
[0010] A、供試品溶液制備：取卡培他濱樣品，用常壓下沸點低于70°C的有機溶劑溶解并 稀釋成0.0 lg/ml的溶液，混勻，備用；
[0011] B、對照品溶液制備：取卡培他濱中殘留溶劑樣品，用常壓下沸點低于70°C的有機 溶劑稀釋制成50化g/ml的溶液，混勻，備用；
[0012] C、檢測方法:取供試品溶液和對照品溶液各化1，分別注入氣相色譜儀的氣相色譜 柱中，依次記錄色譜圖；
[0013] D、含量計算:按外標法W峰面積計算殘留溶劑的含量。
[0014] 作為優(yōu)選，所述殘留溶劑為正戊醇。
[0015] 作為優(yōu)選，所述常壓下沸點低于70°C的有機溶劑為叔下基甲基酸、丙酬、正己燒和 二氯甲燒中任一種，更優(yōu)選二氯甲燒。
[0016] 本發(fā)明選擇常壓下沸點低有機溶劑作為溶劑，從而降低了進樣口汽化室的汽化溫 度，最大限度避免了高溫汽化對樣品的降解，從而影響測定結果的準確性。
[0017] 作為優(yōu)選，步驟C中所述檢測方法是直接進樣氣相色譜法。
[001引本發(fā)明采用直接進樣法，操作簡單，對氣相相關設備要求低，規(guī)避了頂空進樣方式 原料藥和溶劑消耗量大的缺點。同時避免頂空測定法對樣品長時間的高溫加熱頂空而引起 樣品的降解，從而影響測定結果的準確性。
[0019] 作為優(yōu)選，所述氣相色譜儀的色譜柱型號為:6%氯丙基苯基-94%二甲基聚娃氧 燒為固定液的毛細管柱，該石英毛細管柱的柱長30m、內徑0.32mm、液膜厚度3μπι。
[0020] 作為優(yōu)選，直接進樣法的氣相色譜柱條件為：
[0021] 柱溫:程序升溫；
[0022] 進樣口溫度:60~75°C;
[0023] 火焰離子化檢測器溫度：180~250°C ;
[0024] 載氣:氮氣；
[0025] 載氣流速:2.2 ~3.2ml/min;
[0026] 分流比：5:1 ~15:1。
[0027] 進一步的，氣相色譜柱條件為：
[0028] 柱溫:程序升溫方法是初始溫度6(TC保持2分鐘，然后W每分鐘15Γ的速率升溫至 200°C，保持5分鐘；
[0029] 進樣口溫度:70。。
[0030] 火焰離子化檢測器溫度:250°C ;
[00川載氣:氮氣；
[0032] 載氣流速:2.7ml/min;
[0033] 分流比：10:1。
[0034] 本發(fā)明另一個目的是提供了采用本發(fā)明第一個目的任一測定方法在檢測卡培他 濱成品中正戊醇含量中的應用。
[0035] 本發(fā)明第Ξ個目的是提供了采用本發(fā)明第一個目的任一測定方法的驗證線性試 驗，包括如下步驟：
[0036] 1)取正戊醇適量，精密稱定，稀釋制成含正戊醇0.5mg/ml的二氯甲燒溶液；
[0037] 2)分別精密移取0.2ml、0.5ml、1ml、1.2ml、1.5ml于10ml容量瓶中，用二氯甲燒稀 釋定容，搖勻，備用；
[0038] 3)分別精密量取步驟2)中樣品各化1進樣，直接進樣，記錄色譜圖；
[0039] 4) W濃度為X軸，峰面積為y軸，作線性回歸。
[0040] 本發(fā)明采用上述驗證線性試驗，線性關系良好。
[0041] 本發(fā)明第四個目的是提供了采用本發(fā)明第一個目的任一測定方法的驗證回收試 驗，包括如下步驟：
[0042] 1)取正戊醇適量，精密稱定，稀釋制成含正戊醇0.5mg/ml的二氯甲燒溶液作為膽 備溶液；
[0043] 2)取本品約0.1 g，精密稱定，置10ml容量瓶中，加適量二氯甲燒使溶解，分別精密 量取0.8ml，1ml，1.2ml對照溶液于10ml容量瓶中，加二氯甲燒稀釋定容。直接進樣，記錄色 譜圖；
[0044] 3)另精密量取1ml膽備溶液至10ml的容量瓶中，加二氯甲燒稀釋至刻度，搖勻，同 法測定，計算其回收率。
[0045] 本發(fā)明采用上述驗證回收試驗，結果表明試驗回收率都在80%~120%之間，結果 符合要求，方法回收率良好。
[0046] 與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明帶來的有益技術效果如下：
[0047] 本發(fā)明提供一種操作簡單、精密度高的檢測方法，該方法精密度相對標準偏差僅 為3.1%，重現(xiàn)性更好，精密度試驗驗證良好；同時對卡培他濱樣品的降解進行了有效的控 審IJ，對樣品中正戊醇的含量進行了準確的測定，實現(xiàn)了有效的質量控制，從而保證了卡培他 濱的質量。
【附圖說明】
[0048] 圖1為實施例1中卡培他濱中的正戊醇的檢測譜圖。
[0049 ]圖2為實施例1中正戊醇對照品溶液色譜圖。
[0050]圖3為實施例1中空白溶劑色譜圖。
[0051 ]圖4為實施例1中正戊醇檢測限色譜圖。
[0052] 圖5為實施例1中正戊醇的線性關系圖。
【具體實施方式】
[0053] 1、儀器：
[0化4]分析天平，型號:METTL邸 TOLEDO ABS135-S。
[0化日]氣相色譜儀型號為Agilent 7890A、色譜柱型號為HP-I順0WAX: W聚乙二醇為固定 液的石英毛細管柱，該石英毛細管柱的柱長30m、內徑0.32mm、液膜厚度3皿。
[0化6] 2、卡培他濱樣品：批號:KP0901、ΚΡ0902、ΚΡ0903。
[0057]下面結合實施例對本發(fā)明作進一步闡述，但運些實施例不對本發(fā)明構成任何限 制。
[0化引實施例1
[0059] 直接進樣法的色譜條件：
[0060] 柱溫:程序升溫:初始溫度60°C保持2分鐘，然后W每分鐘15°C的速率升溫至200 °C，保持5分鐘。
[0061] 進樣 口溫度:70°C;
[0062] 火焰離子化檢測器溫度:250°C ;
[0063] 載氣:氮氣；
[0064]載氣流速:2.7ml/min;
[00化]分流比：10:1。
[0066] 1、檢測
[0067] A、供試品溶液制備:取卡培他濱樣品，用二氯甲燒溶解并稀釋成O.Olg/ml的溶液， 混勻，備用；
[0068] B、對照品溶液制備:取卡培他濱中殘留溶劑樣品，用二氯甲燒溶液稀釋制成50化 g/ml的溶液，混勻，備用；
[0069] C、檢測方法:取供試品溶液和對照品溶液各化1，分別注入氣相色譜儀的氣相色譜 柱中，依次記錄色譜圖；見圖1和圖2。
[0070] D、含量計算:按外標法W峰面積計算殘留溶劑的含量。
[0071] 2、計算公式：
[0072] 溶劑殘留量（％ ) = (Ai X V/W)/(As/Cs) X 100% ;
[0073] 其中Ai:供試品溶液中待測溶劑峰面積；
[0074] As :正戊醇對照品溶液主峰面積；
[0075] Cs:正戊醇對照品溶液濃度(mg/ml);
[0076] W:供試品溶液配制時樣品的取樣量(mg);
[0077] V:供試品溶液配制體積(ml);
[007引 3、測定結果
[0079] 按照上述測定方法對Ξ批供試品進行檢測，結果見表1。
[0080] 表1 批供試品檢測結果
[0081]
[0082] ~3、方法學驗證 '
' ' '
[0083] 3.1空白試驗
[0084] 精密量取二氯甲燒5ml置頂空進樣瓶中，在上述色譜條件下進樣，與對照品的圖譜 比較表明，溶劑不干擾樣品的測定，二氯甲燒溶劑出峰時間見圖3。
[00化]3.2精密度試驗
[0086] 精密稱取卡培他濱樣品6份，每份O.lg，分別置10ml容量瓶中，加二氯甲燒稀釋至 刻度，搖勻，測定，結果見表2。
[0087] 表2:精密度試驗結果 [008引
[0089]結論:6份樣品正戊醇含量的相對標準偏差RSD為3.1%，結果表明，該方法樣品精 密度良好。
[0090] 3.3檢出限
[0091] 方法:精密稱取正戊醇50mg，用二氯甲燒稀釋成7個不同濃度的溶液，見表3。
[0092] 按上述色譜條件試驗，精密量取各濃度下溶液化1，分別注入氣相色譜儀的氣相色 譜柱，記錄色譜圖。
[0093] 表3:
[0094]
[0095] ~實驗結果: '
'
[0096] 通過逐級降低濃度法測定，按照S/N=3計算，測得正戊醇的檢出限為0.5024yg/ ml,相當樣品中0.005%的量;檢測限圖譜見圖4。
[0097] 3.4線性試驗
[0098] 取正戊醇適量，精密稱定，稀釋制成含正戊醇0.5mg/ml的二氯甲燒溶液。
[0099] 分別精密移取0.2ml、0.5ml、1ml、1.2ml、1.5ml于10ml容量瓶中，用二氯甲燒稀釋 定容，搖勻。直接進樣，記錄色譜圖。
[0100] 并W濃度為X軸，峰面積為y軸，作線性回歸，結果見表4。
[0101] 表4:正戊醇線性范圍測定結果
[0102]
[0103] 濃度與峰面積回歸方程為：
[0104] y = 1.2401x-0.9425 R2 = 0.9995
[01化]結果，正戊醇在10.05~75.3化g/ml濃度范圍內線性良好。線性關系曲線圖見圖6。
[0106] 3.5回收試驗
[0107] 取正戊醇適量，精密稱定，稀釋制成含正戊醇0.5mg/ml的二氯甲燒溶液作為膽備 溶液。取本品O.lg，精密稱定，置10ml容量瓶中，加適量二氯甲燒使溶解，分別精密量取 0.8ml，1ml，1.2ml對照溶液于10ml量瓶中，加二氯甲燒稀釋定容。直接進樣，記錄色譜圖。另 精密量取1ml膽備溶液至10ml的容量瓶中，加二氯甲燒稀釋至刻度，搖勻，同法測定，計算其 回收率，結果見表5。
[0108] 表5:正戊醇回收率
[0109]
[0110] 結果表明試驗回收率都在80 %~120 %之間，結果符合要求，方法回收率良好。
[01川實施例2
[0112] W與實施例1相同的方法，調整供試品溶液和對照品溶液的溶劑為丙酬；
[011引進樣口溫度:60°C;
[0114] 火焰離子化檢測器溫度:180°C;
[0115] 載氣流速:2.2ml/min;
[0116] 分流比：5:1。
[0117] 按照上述測定方法對Ξ批供試品進行檢測，結果見表6。
[011引表6: Ξ批供試品檢測結果
[0119]
[0120] 實施例3
[0121] W與實施例1相同的方法，調整供試品溶液和對照品溶液的溶劑為正己燒；
[0122] 進樣 口溫度:75°C;
[0123] 火焰離子化檢測器溫度:250°C ;
[0124] 載氣流速:3.2ml/min;
[0125] 分流比：15:1。
[0126] 按照上述測定方法對Ξ批供試品進行檢測，結果見表7。
[0127] 表7 : Ξ批供試品檢測結果 [012 引
[0129] 實施例4
[0130] W與實施例1相同的方法，調整供試品溶液和對照品溶液的溶劑為叔下基甲基酸；
[0131] 進樣 口溫度:70°C;
[0132] 火焰離子化檢測器溫度:250°C ;
[0133] 載氣:氮氣；
[0134] 載氣流速:2.7ml/min;
[0135] 分流比：10:1。
[0136] 按照上述測定方法對Ξ批供試品進行檢測，結果見表8。
[0137] 表8: Ξ批供試品檢測結果 [013 引
[0139] 對比實施例5
[0140] W與實施例1相同的方法，僅改變進樣口溫度，檢測KP0901樣品中正戊醇含量結果 見表9:
[0141] 表9:不同進樣口溫度對樣品中正戊醇含量的影響
[0142]
'[0143]~結果表明，進樣口溫度為55°C時，正戊醇的含量比70°C時稍微偏低，但樣品在70°C 更易快速完全汽化;進樣口溫度為80°C時，正戊醇的含量比70°C時偏高，說明在80°C的條件 下，卡培他濱在檢測的過程中有部分降解為正戊醇;進樣口溫度為100 °C時正戊醇的含量比 70°C時明顯偏高，無法準確檢測樣品中正戊醇的含量;故進樣口溫度在60~75°C能快速準 確的檢測樣品中正戊醇的含量。
[0144] 對比實施例6
[0145] 參照本發(fā)明實施例1的實驗條件，僅改變溶劑，卡培他濱樣品中正戊醇含量結果如 下：
[0146] 溶劑1為甲醇，常壓下沸點65°C，卡培他濱樣品在該溶劑中存在甲醇與正戊醇交 換，影響測定準確度，且甲醇在70°C下難W快速汽化完全。
[0147] 溶劑2為乙醇，常壓下沸點78°C，卡培他濱樣品在該溶劑中存在乙醇與正戊醇交 換，影響測定準確度，且乙醇在70°C下不能汽化。
[014引溶劑3:因溶劑沸點較高，如乙臘(常壓下沸點SrC)、乙酸乙醋(常壓下沸點77°C)、 二甲基亞諷、N，N-二甲基甲酯胺，而本實驗采用的汽化室溫度為70°C，不能用于直接進樣檢 測，無法準確檢測卡培他濱樣品中正戊醇含量。
[0149] 結論:盡管上述溶劑極性相近，但是因卡培他濱樣品結構的特殊性，采用沸點較低 的溶劑能準確檢測卡培他濱樣品中正戊醇的含量。
[0150] W上實施例的說明只是用于幫助理解本發(fā)明的方法及其核屯、思想。應當指出，對 于本領域的普通技術人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可W對本發(fā)明進行若干 改進和修飾，運些改進和修飾也落入本發(fā)明權利要求的保護范圍內。
【主權項】
1. 一種卡培他濱中殘留溶劑的測定方法，包括如下步驟： A、 供試品溶液制備：取卡培他濱樣品，用常壓下沸點低于70°C的有機溶劑溶解并稀釋 成0.01g/ml的溶液，混勾，備用； B、 對照品溶液制備：取卡培他濱中殘留溶劑樣品，用常壓下沸點低于70°C的有機溶劑 稀釋制成500μg/ml的溶液，混勾，備用； C、 檢測方法：取供試品溶液和對照品溶液各?μL，分別注入氣相色譜儀的氣相色譜柱 中，依次記錄色譜圖； D、 含量計算:按外標法以峰面積計算殘留溶劑的含量。2. 根據(jù)權利要求1所述的測定方法，其特征在于，所述殘留溶劑為正戊醇。3. 根據(jù)權利要求1或2所述的測定方法，其特征在于，所述常壓下沸點低于70°C的有機 溶劑為叔丁基甲基醚、丙酮、正己烷和二氯甲烷中任一種，優(yōu)選二氯甲烷。4. 根據(jù)權利要求3所述的測定方法，其特征在于，步驟C中所述檢測方法是直接進樣氣 相色譜法。5. 根據(jù)權利要求1所述的測定方法，其特征在于，所述氣相色譜儀的色譜柱型號為:6% 氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷為固定液的毛細管柱，該石英毛細管柱的柱長30m、內徑 0.3 2mm、液膜厚度3μηι。6. 根據(jù)權利要求4所述的測定方法，其特征在于，直接進樣法的氣相色譜柱條件為： 柱溫:程序升溫； 進樣口溫度:60~75 °C; 火焰離子化檢測器溫度：180~250 °C ; 載氣:氮氣； 載氣流速:2 · 2~3 · 2ml/min; 分流比：5:1~15:1。7. 根據(jù)權利要求6所述的測定方法，其特征在于，氣相色譜柱條件為： 柱溫:程序升溫方法是初始溫度60°C保持2分鐘，然后以每分鐘15°C的速率升溫至200 °C，保持5分鐘； 進樣口溫度:70°C; 火焰離子化檢測器溫度:250°C ; 載氣:氮氣； 載氣流速:2.7ml/min; 分流比：10:1。8. 根據(jù)權利要求1-7中任一項所述的測定方法在檢測卡培他濱成品中正戊醇含量中的 應用。9. 如權利要求1所述測定方法的驗證線性試驗，包括如下步驟： 1) 取正戊醇適量，精密稱定，稀釋制成含正戊醇0.5mg/ml的二氯甲烷溶液； 2) 分別精密移取0.2ml、0.5ml、lml、1.2ml、1.5ml于10ml容量瓶中，用二氯甲烷稀釋定 容，搖勾，備用； 3) 分別精密量取步驟2)中樣品各2μ1進樣，直接進樣，記錄色譜圖； 4) 以濃度為X軸，峰面積為y軸，作線性回歸。10.如權利要求1所述測定方法的驗證回收試驗，包括如下步驟： 1) 取正戊醇適量，精密稱定，稀釋制成含正戊醇〇.5mg/ml的二氯甲烷溶液作為貯備溶 液； 2) 取本品約0 . lg，精密稱定，置10ml容量瓶中，加適量二氯甲烷使溶解，分別精密量取 0.8ml，lml，1.2ml對照溶液于10ml容量瓶中，加二氯甲燒稀釋定容。直接進樣，記錄色譜圖； 3) 另精密量取lml貯備溶液至10ml的容量瓶中，加二氯甲烷稀釋至刻度，搖勻，同法測 定，計算其回收率。
【文檔編號】G01N30/88GK105823845SQ201610308274
【公開日】2016年8月3日
【申請日】2016年5月11日
【發(fā)明人】朱葉芬, 雍春, 胡婷霞
【申請人】杭州華東醫(yī)藥集團新藥研究院有限公司