艾考糊精原料藥分子量及其分布測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及艾考糊精原料藥分子量及其分布測定方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 腹膜透析液是保證腹膜透析順利進(jìn)行的重要元素之一。迄今為止，葡萄糖透析液 仍是使用最多的腹膜透析液，在我國目前是唯一的透析液。
[0003] 隨著透析技術(shù)的提高，臨床上不斷出現(xiàn)新型透析液，W多聚葡萄糖為滲透劑的艾 考糊精（icodextrin)透析液就是其中的一種。對(duì)水解產(chǎn)物進(jìn)行分子量和分子量分布測定 是艾考糊精原料藥分析的重要工作之一。目前常用GPC法測定聚合物的分子量和分子量分 布。該法所給出的是分子量相對(duì)值，且一般需采用標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品校準(zhǔn)。對(duì)照品的結(jié)構(gòu)與待測 樣品結(jié)構(gòu)的近似程度直接關(guān)系到分子量測定的準(zhǔn)確與否。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種艾考糊精原料藥分子量及其分布測定方 法，不需要用對(duì)照品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，而實(shí)現(xiàn)對(duì)艾考糊精絕對(duì)分子量的準(zhǔn)確測定。
[0005] 本發(fā)明的技術(shù)方案是：
[0006] -種艾考糊精原料藥分子量及其分布測定方法，采用凝膠滲透色譜GPC-激光光 散射LS-示差檢測RI聯(lián)用的方法進(jìn)行檢測，具體的步驟如下：
[0007] 測定時(shí)將樣品制備成lOmg/ml的溶液，取100 μ 1進(jìn)樣測定，采用凝膠柱SB-G為保 護(hù)柱，色譜柱SB-802冊和色譜柱SB-803冊串聯(lián)，W 0. 2%。Nar^醋酸鹽緩沖液為流動(dòng)相，流 速為0. 5ml/min，柱溫3(TC，檢測溫度35°C ;記錄分子量及分子量分布。
[000引優(yōu)選的，所述0. 2%0 Nar^醋酸鹽緩沖液的配制方法為；18. 7g醋酸鋼、34. 5血冰醋 酸和Ig疊氮化鋼，加注射水使溶解定并稀釋至化。
[0009] 其中，色譜柱為SB-803冊，用多居基甲基丙帰酸甲醋填充材料排阻分子量為 100000( W普魯蘭多糖計(jì)）的色譜柱；
[0010] 色譜柱為SB-802冊，用多居基甲基丙帰酸甲醋填充材料排阻分子量為4000( W普 魯蘭多糖計(jì)）的色譜柱；
[0011] 本發(fā)明的有益效果是：
[0012] GPC-激光光散射聯(lián)用技術(shù)兼具了 GPC法和光散射法的特點(diǎn)，能快速、準(zhǔn)確地測定 出高分子的重均、數(shù)均分子量，且測出的重均分子量為絕對(duì)分子量，不需要對(duì)照品校準(zhǔn)，而 實(shí)現(xiàn)對(duì)艾考糊精絕對(duì)分子量及其分布的準(zhǔn)確測定。
【附圖說明】
[0013] 附圖1為本發(fā)明的測定方法測定艾考糊精原料藥分子量及其分布的圖譜；
[0014] 附圖2為0. 2%。Nar^溶液作為流動(dòng)相的分離圖譜；
[0015] 附圖3為醋酸鹽緩沖液作流動(dòng)相的分離圖譜；
[0016] 附圖4為0. 2%。Nar^醋酸鹽緩沖液作流動(dòng)相的分離圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】如下：
[001引 實(shí)施例1 :
[0019] 一種艾考糊精原料藥分子量及其分布測定方法，采用凝膠滲透色譜GPC-激光光 散射LS-示差檢測RI聯(lián)用的方法進(jìn)行檢測，具體的步驟如下：
[0020] 所使用的儀器為1、液相為Waters2695-2414
[0021] 2、激光光散射儀為Wyatt DAWN肥LE0S- II
[0022] 凝膠柱SB-G、色譜柱SB-802冊和色譜柱SB-803冊均為日本昭和電工株式會(huì)社所 生產(chǎn)。
[0023] 測定時(shí)將樣品制備成lOmg/ml的溶液，取100 μ 1進(jìn)樣測定，采用凝膠柱SB-G為保 護(hù)柱，色譜柱SB-802冊和色譜柱SB-803冊串聯(lián)，W 0. 2%。Nar^醋酸鹽緩沖液為流動(dòng)相，流 速為0. 5ml/min，柱溫3(TC，檢測溫度35°C ;所述0. 2%。Nar^醋酸鹽緩沖液的配制方法為： 18. 7g醋酸鋼、34. 5mL冰醋酸和Ig疊氮化鋼，加注射水使溶解定并稀釋至化；記錄分子量 及分子量分布。
[0024] W上方法檢測的圖譜為圖1所示，檢測結(jié)果如下表所示。
[00 巧]
[0026] 從上表可W看出W上各段的分子量分布情況，其中：分段1的重均分子量為1244， 分為為1. 2%;分段2的重均分子量為3243,分為為23. 2%;分段3的重均分子量為10860， 分為為50. 2 % ;分段4的重均分子量為29270,分為為19. 0 % ;分段5的重均分子量為 13750,分為為 92. 4%。
[0027] 實(shí)驗(yàn)例：實(shí)驗(yàn)針對(duì)流動(dòng)相、流速、色譜柱的變換W及色譜柱的柱溫等條件進(jìn)行了一 系列的條件對(duì)比實(shí)驗(yàn)。
[002引 實(shí)驗(yàn)例1 ;
[0029] 首先分別將0. 2%。Nar^溶液、醋酸鹽緩沖液W及含0. 2%。Nar^醋酸鹽緩沖液作流 動(dòng)相，如圖2-4所示，發(fā)現(xiàn)含0. 2%。NaN3醋酸鹽緩沖液作流動(dòng)相分離效果有較好；而后又將 柱溫在原有3(TC的條件下分別升高和降低frc，結(jié)果發(fā)現(xiàn)分離柱柱溫在3(TC時(shí)，分離效果 較佳。
[0030] 實(shí)驗(yàn)例2 :
[0031] 實(shí)驗(yàn)中對(duì)色譜柱選擇進(jìn)行的對(duì)比實(shí)驗(yàn)。使用多居基甲基丙帰酸甲醋填充材料排阻 分子量為100000( W普魯蘭多糖計(jì)）的色譜柱SB-804冊(1)、用多居基甲基丙帰酸甲醋填充 材料排阻分子量為100000( W普魯蘭多糖計(jì)）的色譜柱SB-803冊(2) W及（1)和（2)串聯(lián) 使用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)色譜柱（2)能實(shí)現(xiàn)樣品峰和溶劑峰（小分子量峰）的較好分離，但不能達(dá)到 理想的分離條件。使用多居基甲基丙帰酸甲醋填充材料排阻分子量為4000( W普魯蘭多糖 計(jì)）的色譜柱SB-802冊(3)和色譜柱（2)串聯(lián)達(dá)到了樣品峰和溶劑峰（小分子量峰）理想 的分離條件，故此色譜柱條件較佳。
[003引 實(shí)驗(yàn)例3 :
[0033] 實(shí)驗(yàn)中也對(duì)流動(dòng)相的流速進(jìn)行了對(duì)比，嘗試了 0. 3ml/min、0. 5ml/min和0. 7ml/ min3個(gè)流速，通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，3個(gè)不同的流速對(duì)同一個(gè)樣品重均分子量影響較?。◣缀鯚o影 響），0. 7ml/mi的流速對(duì)小分子量段的分子量分布影響較大，0. 3ml/min和0. 5ml/min的流 速對(duì)分子量分布影響較小，但0. . 3ml/min的流速分析時(shí)間較長，0. 5ml/min的流速分析效 果較佳。
[0034] 實(shí)驗(yàn)例4 :
[0035] 實(shí)驗(yàn)也進(jìn)行了分子量及分子量分布測定方法的驗(yàn)證。
[0036] 首先驗(yàn)證了此方法的準(zhǔn)確度驗(yàn)證，采用分子量標(biāo)示量為10000和20000的對(duì)照品 進(jìn)行驗(yàn)證，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表所示。結(jié)果顯示在10000-20000的分子量范圍內(nèi)，此方法具有很 高的準(zhǔn)確度。
[0037] 準(zhǔn)確度如下所示
[0038]
[0039] 另外用中試一批樣品做了此方法的精密度實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如下表所示，由結(jié)果可知本 發(fā)明方法具有很高的重現(xiàn)性和精密度
[0040] 重復(fù)性如下表所示：
[0041]
[0042] 由上表可知，本專利方法測得的重均分子量的RSD不超過5%，各分子量分布段的 RSD不超過10 %，因此本專利方法具有良好的重復(fù)性。
[0043] 中間精密度如下表所示：
[00441
[0045] 由上表可知，本專利方法測得的重均分子量的RSD不超過5%，各分子量分布段的 RSD不超過10%，因此本專利方法中間精密度良好。
[0046] 重復(fù)性和中間精密度比對(duì)：
[0047]
[0048] 由上表可知，本專利方法測得的重均分子量的RSD不超過5%，各分子量分布段的 RSD不超過10%，因此本專利方法具有良好的精密度。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種艾考糊精原料藥分子量及其分布測定方法，其特征在于，采用凝膠滲透色譜 GPC-激光光散射LS-示差檢測RI聯(lián)用的方法進(jìn)行檢測，具體的步驟如下： 測定時(shí)將樣品制備成l〇mg/ml的溶液，取100μΙ進(jìn)樣測定，采用凝膠柱SB-G為保護(hù)柱， 色譜柱SB-802 HQ和色譜柱SB-803 HQ串聯(lián)，以0. 2%。似隊(duì)醋酸鹽緩沖液為流動(dòng)相，流速 為0. 5ml/min，柱溫30°C，檢測溫度35°C ;記錄分子量及分子量分布。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的艾考糊精原料藥分子量及其分布測定方法，其特征在于，所 述0. 2%。NaN3醋酸鹽緩沖液的配制方法為：18. 7g醋酸鈉、34. 5mL冰醋酸和lg疊氮化鈉， 加注射水使溶解定并稀釋至5L。
【專利摘要】本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及艾考糊精原料藥分子量及其分布測定方法，采用凝膠滲透色譜GPC-激光光散射LS-示差檢測RI聯(lián)用的方法進(jìn)行檢測，具體的步驟如下：測定時(shí)將樣品制備成10mg/ml的溶液，取100μl進(jìn)樣測定，采用凝膠柱SB-G為保護(hù)柱，色譜柱SB-802HQ和色譜柱SB-803HQ串聯(lián)，以0.2‰NaN3醋酸鹽緩沖液為流動(dòng)相，流速為0.5ml/min，柱溫30℃，檢測溫度35℃；記錄分子量及分子量分布。本發(fā)明GPC-激光光散射聯(lián)用技術(shù)兼具了GPC法和光散射法的特點(diǎn)，能快速、準(zhǔn)確地測定出高分子的重均、數(shù)均分子量，且測出的重均分子量為絕對(duì)分子量，不需要對(duì)照品校準(zhǔn)，而實(shí)現(xiàn)對(duì)艾考糊精絕對(duì)分子量及其分布的準(zhǔn)確測定。
【IPC分類】G01N30/02
【公開號(hào)】CN105628797
【申請?zhí)枴緾N201410588286
【發(fā)明人】張旭東, 郭進(jìn), 葉芳, 李繼仁
【申請人】華仁藥業(yè)股份有限公司
【公開日】2016年6月1日
【申請日】2014年10月28日