注入孔31注入試樣，若使試樣分析用設(shè)備103旋轉(zhuǎn)，則試樣通過流路32到達(dá)檢測(cè)區(qū)域34。因此，檢測(cè)區(qū)域34是各種液體經(jīng)過注入孔31及流路32注入的注入部。
[0121]在試樣分析用設(shè)備103的外周端部，如圖12中(a)所示，形成有包括螺旋狀或同心圓狀的凹部20a和凸部20b的凹凸結(jié)構(gòu)20。檢測(cè)區(qū)域34設(shè)置在凹凸結(jié)構(gòu)20內(nèi)。
[0122]代替圖12中(a)表示的凹凸結(jié)構(gòu)20，如圖12中(b)所示，也可以形成多個(gè)凹狀的凹痕20c以螺旋狀或同心圓狀排列的凹痕結(jié)構(gòu)20P。沒有設(shè)置凹痕20c的部分，相對(duì)于凹痕20c是凸部，所以凹痕結(jié)構(gòu)20P也是凹凸結(jié)構(gòu)。
[0123]在試樣分析用設(shè)備103中，透明保護(hù)層36的相反一側(cè)的用合成樹脂等形成的圓盤部分成為形成凹凸結(jié)構(gòu)20 (包括凹痕結(jié)構(gòu)20P)的基部。
[0124]如圖11所示，在凹凸結(jié)構(gòu)20的檢測(cè)區(qū)域34以外的部分成為軌道域35。通過在軌道域35設(shè)置地址信息，能夠特定試樣分析用設(shè)備103的半徑方向及圓周方向的位置。可以在凹痕、凸起設(shè)置地址信息，也可以通過凹部20a或凸部20b的側(cè)面的移動(dòng)來表示地址信息。
[0125]圖13為試樣分析用設(shè)備103的局部剖面圖。填充在納米粒子填充部33的納米粒子70上，與圖7中(b)相同，預(yù)先固定有抗體80。實(shí)際上，與凹凸結(jié)構(gòu)20鄰接設(shè)置有反射激光的反射層，在圖12及圖13中省略了圖示。
[0126]首先，若從注入孔31注入含有抗體60的緩沖溶液F60而使試樣分析用設(shè)備103旋轉(zhuǎn)，則與圖10中(a)相同，在凹凸結(jié)構(gòu)20的表面固定抗體60。根據(jù)需要，對(duì)凹凸結(jié)構(gòu)20的表面進(jìn)行封閉處理即可。
[0127]若從注入孔31注入含有檢測(cè)對(duì)象的外泌體50的試樣液F50而使試樣分析用設(shè)備103旋轉(zhuǎn)，則外泌體50通過納米粒子填充部33時(shí)被納米粒子70修飾。被納米粒子70修飾的外泌體50，與圖10中(d)相同，被凹部20a固定。在圖13中，為了方便圖示，省略外泌體50的圖示，僅圖示了納米粒子70。
[0128]在檢測(cè)區(qū)域34，從沒有圖示的光拾波器的激光光源發(fā)出并通過物鏡40收集的激光通過透明保護(hù)層36照射進(jìn)來。在凹部20a固定的納米粒子70，通過分析照射的激光的反射光而能夠檢測(cè)出來。
[0129]第3實(shí)施方式的試樣分析用設(shè)備103的凹凸結(jié)構(gòu)20的尺寸形狀和檢測(cè)對(duì)象的外泌體50、作為標(biāo)記使用的納米粒子70的大小關(guān)系，與第1、第2實(shí)施方式相同。
[0130]外泌體的檢測(cè)及試樣分析方法
[0131]接著，對(duì)于檢測(cè)通過第1?第3實(shí)施方式的試樣分析用設(shè)備101?103如圖10中(d)所示的捕捉的外泌體50的檢測(cè)方法進(jìn)行說明。
[0132]作為第1檢測(cè)方法，使用光學(xué)顯微鏡檢測(cè)納米粒子70，通過圖像處理能夠?qū){米粒子70進(jìn)行計(jì)數(shù)。其結(jié)果，可定量檢測(cè)外泌體50。第1檢測(cè)方法適合檢測(cè)通過第1、第2實(shí)施方式的試樣分析用設(shè)備101、102捕捉到的外泌體50。
[0133]使搭載試樣分析用設(shè)備101、102的平臺(tái)移動(dòng)，在大面積對(duì)納米粒子70進(jìn)行計(jì)數(shù)，能夠提高計(jì)測(cè)的精度。使用激光顯微鏡代替光學(xué)顯微鏡，可以提高檢測(cè)的分辨率，也可以提尚 S/No
[0134]作為第2檢測(cè)方法，在納米粒子70內(nèi)包含照射特定波長(zhǎng)的光時(shí)產(chǎn)生熒光的熒光物質(zhì)，通過檢測(cè)熒光能夠?qū){米粒子70進(jìn)行計(jì)數(shù)。可以使用光學(xué)顯微鏡計(jì)測(cè)產(chǎn)生熒光的納米粒子70，也可以用光傳感器檢測(cè)熒光總量。第2檢測(cè)方法適合檢測(cè)通過第1、第2實(shí)施方式的試樣分析用設(shè)備101、102捕捉到的外泌體50。
[0135]使用第1及第2檢測(cè)方法的情況下，如果從沒有設(shè)置孔10的試樣分析用設(shè)備101、102的背面一側(cè)檢測(cè)納米粒子70，能夠防止檢測(cè)裝置和試樣分析用設(shè)備101、102之間的機(jī)械性干涉。此外，也可以將孔10的形狀形成避開顯微鏡物鏡等的干涉的形狀。
[0136]在第2實(shí)施方式的試樣分析用設(shè)備102的情況下，能夠剝離硅聚合物薄片122。如果將硅聚合物薄片122剝離僅在基板112上檢測(cè)納米粒子70，則能夠回避與檢測(cè)裝置之間的機(jī)械性干涉。
[0137]作為第3方法，能夠使用將與固定在納米粒子70上的抗體80特異性結(jié)合的酶作為標(biāo)記的二級(jí)抗體，對(duì)納米粒子70進(jìn)行檢測(cè)、計(jì)數(shù)。代表性二級(jí)抗體為辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記抗體、堿性磷酸酶(AP)標(biāo)記抗體。
[0138]這些二級(jí)抗體，通過加入與酶對(duì)應(yīng)的發(fā)光底物而產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光。因此，用二級(jí)抗體修飾在外泌體50上固定的納米粒子70，通過檢測(cè)加入發(fā)光底物產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光的光強(qiáng)度能夠?qū){米粒子70進(jìn)行計(jì)數(shù)。
[0139]作為第4方法，在第3實(shí)施方式的試樣分析用設(shè)備103的情況下，如上所述，通過用從光學(xué)拾波器的激光光源發(fā)出的激光掃描試樣分析用設(shè)備103，能夠?qū){米粒子70進(jìn)行計(jì)數(shù)。將凹凸結(jié)構(gòu)20的凹部20a作為軌道，通過使用伺服機(jī)構(gòu)使激光的光斑沿著軌道掃描，能夠快速且高精度地對(duì)納米粒子70進(jìn)行計(jì)數(shù)。
[0140]如上所述，通過對(duì)在外泌體50上作為標(biāo)記固定的納米粒子70進(jìn)行計(jì)數(shù)，能夠高精度地定量測(cè)量外泌體50，從而對(duì)試樣進(jìn)行分析。
[0141]本發(fā)明并不限于以上說明的各實(shí)施方式，在不脫離本發(fā)明的主旨范圍內(nèi)可以進(jìn)行各種變更。
[0142]產(chǎn)業(yè)上的可利用性
[0143]本發(fā)明能夠應(yīng)用于血液、淋巴液、唾液、尿液、母乳、精液等中含有的外泌體的檢i
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【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種試樣分析用設(shè)備，其特征在于，具備: 基部；以及 凹部，所述凹部形成于所述基部上，并通過使與檢測(cè)對(duì)象的外泌體中存在的抗原結(jié)合的抗體固定，使所述外泌體與所述抗體結(jié)合，從而使所述外泌體固定。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試樣分析用設(shè)備，其特征在于， 還具備與所述凹部鄰接的凸部， 所述凹部和所述凸部在所述基部上周期性排列。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的試樣分析用設(shè)備，其特征在于， 所述凹部的寬度大于所述外泌體的平均粒徑，小于修飾所述外泌體的納米粒子的直徑的2倍。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試樣分析用設(shè)備，其特征在于， 所述凹部的寬度小于所述外泌體的平均粒徑的4倍。5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試樣分析用設(shè)備，其特征在于， 所述凸部的寬度小于所述外泌體的平均粒徑。6.根據(jù)權(quán)利要求2或5所述的試樣分析用設(shè)備，其特征在于， 所述凸部的寬度小于修飾所述外泌體的納米粒子的直徑。7.—種外泌體的捕捉方法，其特征在于， 包括外泌體固定工序，該外泌體固定工序?yàn)槿缦碌墓ば?在具有固定有與檢測(cè)對(duì)象的外泌體中存在的抗原結(jié)合的抗體的凹部的注入部?jī)?nèi)，注入含有所述外泌體的試樣液，使所述外泌體中存在的抗原與固定在所述凹部的抗體結(jié)合，使所述外泌體固定于所述凹部。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的外泌體的捕捉方法，其特征在于， 還包括修飾工序，該修飾工序?yàn)槿缦碌墓ば?在所述注入部?jī)?nèi)注入含有納米粒子的緩沖溶液，所述納米粒子的表面固定有與所述外泌體具有的抗原結(jié)合的抗體，通過使所述納米粒子上固定的抗體與所述外泌體具有的抗原結(jié)合，從而用所述納米粒子修飾所述外泌體。
【專利摘要】在由合成樹脂等形成的基部上形成有凹部(20a)和凸部(20b)呈周期性排列的凹凸結(jié)構(gòu)(20)。凹部(20a)使與檢測(cè)對(duì)象的外泌體(50)中存在的抗原(52)結(jié)合的抗體(60)固定，使外泌體(50)與抗體(60)結(jié)合。通過這樣，外泌體(50)被固定于凹部(20a)。
【IPC分類】G01N37/00, G01N33/536, G01N33/543
【公開號(hào)】CN105393120
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201480029913
【發(fā)明人】絲長(zhǎng)誠, 柳生慎悟, 長(zhǎng)谷川佑一, 辻田公二, 小野雅之
【申請(qǐng)人】Jvc建伍株式會(huì)社
【公開日】2016年3月9日
【申請(qǐng)日】2014年3月27日
【公告號(hào)】EP2985604A1, US20160033486, WO2014168020A1