試樣分析用設(shè)備及外泌體的捕捉方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及用于分析各種細(xì)胞所分泌的外泌體的試樣分析用設(shè)備及外泌體的捕捉方法。
【背景技術(shù)】
[0002]通過(guò)將與疾病相關(guān)聯(lián)的特定的抗原(或抗體)作為生物標(biāo)記進(jìn)行檢測(cè)分析，從而對(duì)疾病的發(fā)現(xiàn)、治療的效果等進(jìn)行定量分析的方法已被廣泛應(yīng)用。近年來(lái)，被稱(chēng)為外泌體(exosome)的微小膜囊泡作為新的生物標(biāo)記而受到期待。
[0003]外泌體在血液、淋巴液、唾液、尿液、母乳、精液等中含有。外泌體在液體中呈大致球形，以直徑lOOnm左右為中心分布。外泌體被脂雙層膜覆蓋，脂雙層膜上有各種物質(zhì)例如膜蛋白質(zhì)。此外，外泌體有時(shí)也被稱(chēng)為微泡、細(xì)胞外小泡，有多種稱(chēng)呼。
[0004]現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
[0005]專(zhuān)利文獻(xiàn)1國(guó)際公開(kāi)第2009/092386號(hào)
[0006]專(zhuān)利文獻(xiàn)2國(guó)際公開(kāi)第2006/016617號(hào)
[0007]專(zhuān)利文獻(xiàn)1中記載了使用免疫學(xué)測(cè)定法(免疫測(cè)定法)來(lái)檢測(cè)分析外泌體。使用專(zhuān)利文獻(xiàn)1記載的免疫學(xué)測(cè)定法時(shí)，通過(guò)識(shí)別以外泌體的脂雙層膜上存在的膜蛋白質(zhì)作為抗原的抗體，從而能夠檢測(cè)外泌體。但是，由于膜蛋白質(zhì)的數(shù)量在外泌體的個(gè)體上并不固定，所以不能夠精度良好地檢測(cè)外泌體的數(shù)量。
[0008]因此，需要能夠高精度地檢測(cè)外泌體的試樣分析用設(shè)備及外泌體的捕捉方法。如果能夠高精度地檢測(cè)出外泌體，就可能高精度地定量測(cè)定外泌體。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明為了應(yīng)對(duì)這種需求，以提供能夠高精度地檢測(cè)外泌體的試樣分析用設(shè)備及外泌體的捕捉方法為目的。
[0010]根據(jù)本發(fā)明的第1方式，為了解決上述以往的技術(shù)問(wèn)題，提供試樣分析用設(shè)備，其特征在于，具備:基部；以及凹部，所述凹部形成于所述基部上，并通過(guò)使與檢測(cè)對(duì)象的外泌體中存在的抗原結(jié)合的抗體固定，使所述外泌體與所述抗體結(jié)合，從而使所述外泌體固定。
[0011]根據(jù)本發(fā)明的第2方式，為了解決上述以往的技術(shù)問(wèn)題，提供外泌體的捕捉方法，其特征在于，包括外泌體固定工序，該外泌體固定工序?yàn)槿缦碌墓ば?在具有固定有與檢測(cè)對(duì)象的外泌體中存在的抗原結(jié)合的抗體的凹部的注入部?jī)?nèi)，注入含有所述外泌體的試樣液，使所述外泌體中存在的抗原與固定在所述凹部的抗體結(jié)合，使所述外泌體固定于所述凹部。
[0012]根據(jù)本發(fā)明的試樣分析用設(shè)備及外泌體的捕捉方法，能夠高精度地檢測(cè)外泌體?！靖綀D說(shuō)明】
[0013]圖1是表示試樣分析用設(shè)備的第1實(shí)施方式的立體圖。
[0014]圖2是表示圖1中沿A — A線(xiàn)剖切的局部放大立體圖。
[0015]圖3是表示試樣分析用設(shè)備的第1?第3實(shí)施方式中凹凸結(jié)構(gòu)的尺寸形狀的放大剖面圖。
[0016]圖4是表示試樣分析用設(shè)備的第2實(shí)施方式的立體圖。
[0017]圖5是表示沿圖4中A — A線(xiàn)剖切的局部放大立體圖。
[0018]圖6是外泌體的模式化剖面圖。
[0019]圖7是表示用于修飾外泌體的納米粒子的剖面圖。
[0020]圖8是表示外泌體的捕捉方法的一個(gè)實(shí)施方式的流程圖。
[0021]圖9是表示用于說(shuō)明在外泌體的捕捉方法的一個(gè)實(shí)施方式中執(zhí)行的工序的局部放大剖面圖。
[0022]圖10是模式化表示通過(guò)在外泌體的捕捉方法的一個(gè)實(shí)施方式中執(zhí)行的工序而在凹凸結(jié)構(gòu)上產(chǎn)生的狀態(tài)的局部放大剖面圖。
[0023]圖11是表示試樣分析用設(shè)備的第3實(shí)施方式的俯視圖。
[0024]圖12是表示試樣分析用設(shè)備的第3實(shí)施方式中凹凸結(jié)構(gòu)的局部放大剖面圖。
[0025]圖13是表示試樣分析用設(shè)備的第3實(shí)施方式的局部剖面圖。
【具體實(shí)施方式】
[0026]以下，對(duì)于各實(shí)施方式的試樣分析用設(shè)備以及外泌體的捕捉方法，參照附圖進(jìn)行說(shuō)明。
[0027]第1實(shí)施方式的試樣分析用設(shè)備
[0028]使用圖1?圖3，對(duì)第1實(shí)施方式的試樣分析用設(shè)備的結(jié)構(gòu)進(jìn)行說(shuō)明。在圖1中，第1實(shí)施方式的試樣分析用設(shè)備101例如由合成樹(shù)脂形成矩形。試樣分析用設(shè)備101的外形形狀并不限于矩形，可以為任意形狀。
[0029]也可以使用玻璃、金屬、半導(dǎo)體基板等形成試樣分析用設(shè)備101。
[0030]在試樣分析用設(shè)備101中形成有多個(gè)為圓筒狀凹部的孔10。在圖1中，形成有8個(gè)孔10，但也可以形成更多的孔10，孔10的個(gè)數(shù)是任意的。孔10為下述注入各種液體的注入部。
[0031]在與試樣分析用設(shè)備101的厚度方向垂直的方向切割孔10時(shí)的剖面形狀為正圓形。也可以使孔10的剖面形狀為橢圓形或矩形。但優(yōu)選孔10的剖面形狀為正圓形。
[0032]圖2為放大表示圖1的A — A剖面的圖。如圖2所示，在孔10的底面上形成有使凹部20a和與凹部20a鄰接的凸部20b周期性地多個(gè)排列的凹凸結(jié)構(gòu)20。在試樣分析用設(shè)備101中，由合成樹(shù)脂等形成的試樣分析用設(shè)備101自身成為形成凹凸結(jié)構(gòu)20的基部。
[0033]凹部20a及凸部20b大致呈直線(xiàn)狀。凹部20a及凸部20b的各自的側(cè)面傾斜。也可以形成使凹部20a及凸部20b各自的側(cè)面與試樣分析用設(shè)備101的面大致垂直的凹凸結(jié)構(gòu)20。
[0034]如圖3的放大剖面圖所示，將凹部20a的深度(凸部20b的高度)設(shè)為H，將凹部20a及凸部20b各自的寬度設(shè)為用單點(diǎn)劃線(xiàn)表示的從底面開(kāi)始在H/2位置處的Wa、Wb。凹部20a的寬度Wa和凸部20b的寬度Wb優(yōu)選滿(mǎn)足Wa > ffb的關(guān)系。
[0035]如上述構(gòu)成的試樣分析用設(shè)備101，使用合成樹(shù)脂形成的情況下，通過(guò)整體成形而能夠容易地制作。
[0036]第2實(shí)施方式的試樣分析用設(shè)備
[0037]使用圖4、圖5，對(duì)第2實(shí)施方式的試樣分析用設(shè)備的結(jié)構(gòu)進(jìn)行說(shuō)明。在圖4、圖5中，在與圖1?圖3實(shí)質(zhì)上相同的部分標(biāo)注同一符號(hào)，適當(dāng)省略其說(shuō)明。
[0038]在圖4中，第2實(shí)施方式的試樣分析用設(shè)備102，具有例如由合成樹(shù)脂形成的基板112和由合成樹(shù)脂形成并重疊在基板112上的薄片122。薄片例如為硅聚合物薄片。以下，稱(chēng)為硅聚合物薄片122。試樣分析用設(shè)備102也可以形成矩形形狀，外形形狀為任意形狀。
[0039]在基板112上重疊的薄片的材料并不限定于硅聚合物。薄片的材料也可以為比硅聚合物廉價(jià)的材料，例如聚苯乙稀、ABS、聚碳酸酯等樹(shù)脂。
[0040]與試樣分析用設(shè)備101相同，在試樣分析用設(shè)備102中形成有多個(gè)圓筒狀凹部即孔10。
[0041]圖5是放大表不圖4的A — A剖面的圖。如圖5所不，在基板112的整個(gè)表面上形成有使凹部20a和凸部20b多個(gè)排列的凹凸結(jié)構(gòu)20。在試樣分析用設(shè)備102中，由合成樹(shù)脂等形成的基板112成為形成凹凸結(jié)構(gòu)20的基部。
[0042]在第1實(shí)施方式的試樣分析用設(shè)備101中，僅在孔10的底面形成有凹凸結(jié)構(gòu)20，而與此相對(duì)，在第2實(shí)施方式的試樣分析用設(shè)備102中，在基板112的整個(gè)表面上形成有凹凸結(jié)構(gòu)20。
[0043]在試樣分析用設(shè)備102中，在硅聚合物薄片122上形成有圓筒狀的貫通孔11。通過(guò)將基板112和具有貫通孔11的硅聚合物薄片122相重疊，形成孔10。在使基板112和硅聚合物薄片122相重疊的狀態(tài)下，試樣分析用設(shè)備102實(shí)質(zhì)上與在孔10的底面形成凹凸結(jié)構(gòu)20的試樣分析用設(shè)備101為相同的結(jié)構(gòu)。
[0044]由于硅聚合物薄片122緊貼在基板112上，所以不需要將基板112和硅聚合物薄片122粘接。如果不使基板112和硅聚合物薄片122粘接，則在下述的外泌體的檢測(cè)工序中，能夠根據(jù)需要將硅聚合物薄片122剝離。當(dāng)然，也可以將基板112和硅聚合物薄片122粘接。
[0045]也可以通過(guò)由硅橡膠等形成的密封件使基板112和硅聚合物薄片122粘合。例如密封件可以為配置于與貫通孔11相同的位置的形成有與貫通孔11大致相同直徑的貫通孔的由硅橡膠形成的平板。
[0046]