25nm，發(fā)射波長掃描范圍為 435-650nm ;用600 μ L石英比色皿盛放200 μ L樣品；室溫。
[0034] 本發(fā)明實(shí)施例中所用的各種核酸序列（購自上海生物工程技術(shù)有限公司）如表1 所示，其中PS2. M和22AG-1是富G核酸序列，而R-18和R-Il是對(duì)應(yīng)的任意核酸序列。所 用的DNA保存液為50mM Tris-HCl，pH8. 0 ;所用的緩沖溶液為50mM Tris-HCl，ρΗ7. 2。
[0035] 表1寡聚核苷酸堿基組成表
[0036]
[0037] 實(shí)施例1
[0038] 用DNA保存液分別配制濃度為10 μ M的PS2. M溶液和R-18溶液，分別取3 μ L加 入到3 yL濃度為100 μ M的硫黃素T溶液中，室溫下反應(yīng)3min，然后各加入87 yL金納米 顆粒溶液反應(yīng)l〇min，所述金納米顆粒的粒徑為10-20nm，溶液濃度為0. 437nM，再加入7 μ L 濃度為IM的氯化鈉溶液（氯化鈉溶液和之前提及的硫黃素T溶液的溶劑均為超純水），使 總體積為100 μ L，觀察溶液的顏色變化并拍照記錄，然后測定反應(yīng)溶液的吸收光譜，吸收光 譜圖見附圖2。同時(shí)取樣測定兩組溶液的透射電鏡圖，結(jié)果見附圖3和4。測定完成后，在 溶液中加入100 μ L緩沖溶液，進(jìn)行熒光檢測，記錄溶液熒光發(fā)射譜帶及其在490nm處的熒 光強(qiáng)度，熒光光譜圖見附圖5。
[0039] 檢測結(jié)果顯示，PS2. M溶液最后呈藍(lán)色，吸收光譜發(fā)生紅移，熒光增強(qiáng)，490nm處熒 光強(qiáng)度相比于空白組增加大于150% ;而R-18溶液呈紅色，吸收光譜未發(fā)生紅移，熒光強(qiáng)度 低，490nm處熒光強(qiáng)度相比于空白組增加小于150%。
[0040] 這是因?yàn)镻S2. M溶液中加入硫黃素T可誘導(dǎo)這段富G核酸序列形成G-四鏈體并 嵌入其中發(fā)光，此時(shí)的G-四鏈體不能吸附在金納米顆粒表面，因而加入氯化鈉時(shí)，金納米 顆粒很容易聚集，此時(shí)溶液呈藍(lán)色；R-18溶液中硫黃素T不能誘導(dǎo)任意核酸序列形成G-四 鏈體，因而硫黃素T以游離狀態(tài)存在，不能發(fā)光，加入金納米顆粒后，由于單鏈核酸序列能 夠吸附在金顆粒表面，使金納米顆粒高度穩(wěn)定，加入氯化鈉時(shí)不會(huì)發(fā)生聚集，故金納米顆粒 呈分散狀態(tài)且顏色不變，此時(shí)溶液呈紅色。
[0041] 實(shí)施例2
[0042] 用DNA保存液分別配制濃度為10 μ M的22AG-1溶液和R-11溶液，分別取3 μ L加 入到4 μ L濃度為100 μ M的硫黃素T溶液中，室溫下反應(yīng)3min，然后各加入86 μ L金納米顆 粒溶液反應(yīng)8min，所述金納米顆粒的粒徑為10-20nm，溶液濃度為0. 437nM，再加入7 μ L濃 度為IM的氯化鈉溶液（氯化鈉溶液和之前提及的硫黃素T溶液的溶劑均為超純水），使總 體積為100 μ L，觀察溶液的顏色變化并拍照記錄，然后測定反應(yīng)溶液的吸收光譜，吸收光譜 圖見附圖6。同時(shí)取樣測定兩組溶液的透射電鏡圖，結(jié)果見附圖7和8。測定完成后，在溶 液中加入100 μ L緩沖溶液，進(jìn)行熒光檢測，記錄溶液熒光發(fā)射譜帶及其在490nm處的熒光 強(qiáng)度，熒光光譜圖見附圖9。
[0043] 檢測結(jié)果顯示，22AG-1溶液最后呈藍(lán)色，吸收光譜發(fā)生紅移，熒光增強(qiáng)，490nm處 熒光強(qiáng)度相比于空白組增加大于150% ;而R-Il溶液呈紅色，吸收光譜未發(fā)生紅移，熒光強(qiáng) 度低，490nm處熒光強(qiáng)度相比于空白組增加小于150%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種利用金納米顆粒和硫磺素T檢測富G核酸序列的方法，其特征在于，包括以下步 驟： a) 用DNA保存液將待測樣品配制成濃度為10 y M的溶液； b) 取3 y L配制好的核酸溶液加入到1-10 y L濃度為100 y M的硫黃素T溶液中進(jìn)行反 應(yīng)； c) 向上述反應(yīng)液中加入79-95 y L濃度為0. 437nM的金納米顆粒溶液，反應(yīng)5-10min ; d) 再加入1-8 y L濃度為IM的氯化鈉溶液，使總體積為100 y L，觀察溶液的顏色變化 并拍照記錄，然后測定反應(yīng)溶液的吸收光譜； e) 測定完成后，在溶液中加入100 y L緩沖溶液，以425nm為激發(fā)波長進(jìn)行熒光檢測，記 錄溶液熒光發(fā)射譜帶及其在490nm處的熒光強(qiáng)度。 若金納米顆粒溶液變?yōu)樗{(lán)色，吸收光譜較純金納米顆粒溶液出現(xiàn)紅移，且熒光強(qiáng)度增 強(qiáng)，490nm處的熒光強(qiáng)度相比于空白組增加大于150%，則說明所測核酸為富G核酸序列；若 金納米顆粒溶液仍為紅色，吸收光譜沒有發(fā)生紅移，且熒光強(qiáng)度較弱，490nm處的熒光強(qiáng)度 相比于空白組增加小于150%，則說明所測核酸為非富G核酸序列。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用金納米顆粒和硫黃素T檢測富G核酸序列的方法， 其特征在于，步驟a)中所用的DNA保存液為：50mM Tris-HCl，pH 8. 0。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用金納米顆粒和硫黃素T檢測富G核酸序列的方法， 其特征在于，步驟b)中反應(yīng)溫度為室溫，反應(yīng)時(shí)間為3min。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用金納米顆粒和硫黃素T檢測富G核酸序列的方法， 其特征在于，步驟c)中所述的金納米顆粒的粒徑為10-20nm。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用金納米顆粒和硫黃素T檢測富G核酸序列的方法， 其特征在于，步驟b)和c)中所述的硫黃素T溶液和氯化鈉溶液的溶劑均為超純水。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用金納米顆粒和硫黃素T檢測富G核酸序列的方法， 其特征在于，步驟d)中加入的氯化鈉溶液體積為7 y L。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用金納米顆粒和硫黃素T檢測富G核酸序列的方法， 其特征在于，步驟e)中所用的緩沖溶液為：50mM Tris-HCl，pH 7. 2。
【專利摘要】本發(fā)明是一種利用金納米顆粒和有機(jī)小分子硫磺素T檢測富G核酸序列的方法，屬于生物傳感及分析領(lǐng)域。該方法利用硫黃素T能夠誘導(dǎo)富G核酸序列形成G‐四鏈體并嵌入其中發(fā)射較強(qiáng)熒光的特點(diǎn)，以及金納米顆粒在不同聚集狀態(tài)呈現(xiàn)不同顏色的特點(diǎn)，以金納米顆粒顏色變化為比色檢測信號(hào)，以硫黃素T嵌入G‐四鏈體前后熒光強(qiáng)度的變化為熒光檢測信號(hào)，建立了一種檢測富G核酸序列的靈敏、快速、簡便的光學(xué)檢測新方法。
【IPC分類】G01N21/78, G01N21/33
【公開號(hào)】CN105136786
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510472096
【發(fā)明人】劉興奮, 華笑笑, 張磊, 黃艷琴, 黃維
【申請(qǐng)人】南京郵電大學(xué)
【公開日】2015年12月9日
【申請(qǐng)日】2015年8月4日