一種檢測(cè)美白成分安全性和有效性的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種檢測(cè)美白分成安全性和有效性的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]在現(xiàn)有技術(shù)中，檢測(cè)一款美白產(chǎn)品的美白效果的主要方法額:酪氨酸酶抑制法、哺乳動(dòng)物模型試驗(yàn)法和黑素細(xì)胞實(shí)驗(yàn)法，并且在2011年剛出現(xiàn)一種新的檢測(cè)美白產(chǎn)品的美白效果的方法，該方法為:將產(chǎn)品與胚胎培養(yǎng)液混合，并直接將混合液用于胚胎或幼體培養(yǎng)，通過判斷胚胎或幼體表面黑色素的數(shù)量來評(píng)價(jià)產(chǎn)品的美白效果，體表的黑色素越少，則說明該產(chǎn)品的美白活性越好?？梢姡F(xiàn)有的檢測(cè)方法存在以下幾方面不足:
[0003]1、在上述檢測(cè)方法中直接采用配制的美白成分溶液進(jìn)行試驗(yàn)，沒有考慮到美白成分在實(shí)際使用時(shí)必需要先經(jīng)過皮膚層的吸收后才能起作用，而現(xiàn)有的檢測(cè)方法所得出的美白成分的美白效果要高于實(shí)際的效果，使檢測(cè)得到的結(jié)論不具備參照性，可能出現(xiàn)檢測(cè)時(shí)效果明顯，而實(shí)際使用效果卻很差，原因在于美白成分可能不分透過皮膚層；
[0004]2、現(xiàn)有的檢測(cè)方法中只提供對(duì)美白成分有效性的檢測(cè)，而沒有對(duì)美白成分的安全性進(jìn)彳T評(píng)價(jià)；
[0005]3、現(xiàn)有的檢測(cè)方法中只對(duì)單一美白成分進(jìn)行測(cè)試，并沒有考慮到復(fù)配的美白成分對(duì)美白效果的影響。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種檢測(cè)美白分成安全性和有效性的方法，用于提高現(xiàn)有美白成分檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果的可靠性。
[0007]本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的:一種檢測(cè)美白成分安全性和有效性的方法，該檢測(cè)方法包括以下步驟:
[0008]步驟一、稱取熊果苷，用蒸餾水配制成熊果苷水溶液；
[0009]步驟二、配制含0.2PPM亞甲基藍(lán)和60 μ g/ml海鹽的胚胎培養(yǎng)液作為陰性對(duì)照液，配制含0.25mmol/L苯硫脲的胚胎培養(yǎng)液作為陽性對(duì)照液；
[0010]步驟三、用馬蹄夾將皮膚模型夾在Franz透皮擴(kuò)散池的給藥池與接收池之間，在接收池內(nèi)注入斑馬魚胚胎培養(yǎng)液，并向給藥池中加入200ul所述熊果苷水溶液，將Franz透皮擴(kuò)散池置于透皮擴(kuò)散儀中，以37°C的溫度擴(kuò)散8小時(shí)后得到擴(kuò)散后的透皮液；
[0011]步驟四、獲取斑馬魚受精卵，將斑馬魚受精卵置于胚胎培養(yǎng)液中J L孵化得到斑馬魚胚胎，將斑馬魚胚胎隨機(jī)分配到24孔板中的3個(gè)孔內(nèi)，將所述3個(gè)裝有斑馬魚的孔依次記為一號(hào)孔、二號(hào)孔和三號(hào)孔，在一號(hào)孔內(nèi)加入所述透皮液，在二號(hào)孔內(nèi)加入所述陽性對(duì)照液，在三號(hào)孔內(nèi)加入所述陰性對(duì)照液，將所述24孔板置于溫度為28.5°C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，得到斑馬魚幼魚；
[0012]步驟五、統(tǒng)計(jì)一號(hào)孔、二號(hào)孔和三號(hào)孔內(nèi)斑馬魚胚胎的死亡率，以及將一號(hào)孔、二號(hào)孔和三號(hào)孔內(nèi)斑馬魚幼魚置于顯微鏡下拍攝圖像，根據(jù)所拍攝的圖像統(tǒng)計(jì)出不同孔內(nèi)斑馬魚幼魚體表黑色素的總面積。
[0013]進(jìn)一步的，為提高獲取到的斑馬魚受精卵的質(zhì)量，在一實(shí)施方式中，在步驟四中所述“獲取斑馬魚受精卵”的具體方法為:
[0014]在獲取斑馬魚受精卵的前I日將雌雄親魚分開，在第2天光照開始前將雌雄親魚按雌魚與雄魚1:2的比例并池，在光照后獲得受精卵。
[0015]進(jìn)一步的，為提高黑色素總面積統(tǒng)計(jì)的精度和效率，在一實(shí)施方式中，在步驟五中是通過圖像處理軟件統(tǒng)計(jì)出不同孔內(nèi)斑馬魚幼魚體表黑色素的總面積。
[0016]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還可以這樣實(shí)現(xiàn):一種檢測(cè)美白成分安全性和有效性的方法，該檢測(cè)方法包括以下步驟:
[0017]步驟一、稱取熊果苷和抗壞血酸，用蒸餾水配制成熊果苷與抗壞血酸的復(fù)配溶液；
[0018]步驟二、配制含0.2PPM亞甲基藍(lán)和60 μ g/ml海鹽的胚胎培養(yǎng)液作為陰性對(duì)照液，配制含0.25mmol/L苯硫脲的胚胎培養(yǎng)液作為陽性對(duì)照液；
[0019]步驟三、用馬蹄夾將皮膚模型夾在Franz透皮擴(kuò)散池的給藥池與接收池之間，在接收池內(nèi)注入斑馬魚胚胎培養(yǎng)液，并向給藥池中加入200ul所述復(fù)配溶液，將Franz透皮擴(kuò)散池置于透皮擴(kuò)散儀中，以37 °C的溫度擴(kuò)散8小時(shí)后得到擴(kuò)散后的透皮液；
[0020]步驟四、獲取斑馬魚受精卵，將斑馬魚受精卵置于胚胎培養(yǎng)液中J L孵化得到斑馬魚胚胎，將斑馬魚胚胎隨機(jī)分配到24孔板中的3個(gè)孔內(nèi)，將所述3個(gè)裝有斑馬魚的孔依次記為一號(hào)孔、二號(hào)孔和三號(hào)孔，在一號(hào)孔內(nèi)加入所述透皮液，在二號(hào)孔內(nèi)加入所述陽性對(duì)照液，在三號(hào)孔內(nèi)加入所述陰性對(duì)照液，將所述24孔板置于溫度為28.5°C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，得到斑馬魚幼魚；
[0021]步驟五、統(tǒng)計(jì)一號(hào)孔、二號(hào)孔和三號(hào)孔內(nèi)斑馬魚胚胎的死亡率，以及將一號(hào)孔、二號(hào)孔和三號(hào)孔內(nèi)斑馬魚幼魚置于顯微鏡下拍攝圖像，根據(jù)所拍攝的圖像統(tǒng)計(jì)出不同孔內(nèi)斑馬魚幼魚體表黑色素的總面積。
[0022]進(jìn)一步的，為提高獲取到的斑馬魚受精卵的質(zhì)量，在一實(shí)施方式中，在步驟四中所述“獲取斑馬魚受精卵”的具體方法為:
[0023]在獲取斑馬魚受精卵的前I日將雌雄親魚分開，在第2天光照開始前將雌雄親魚按雌魚與雄魚1:2的比例并池，在光照后獲得受精卵。
[0024]進(jìn)一步的，為提高黑色素總面積統(tǒng)計(jì)的精度和效率，在一實(shí)施方式中，在步驟五中是通過圖像處理軟件統(tǒng)計(jì)出不同孔內(nèi)斑馬魚幼魚體表黑色素的總面積。
[0025]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還可以這樣實(shí)現(xiàn):一種檢測(cè)美白成分安全性和有效性的方法，該檢測(cè)方法包括以下步驟:
[0026]步驟一、稱取熊果苷和煙酰胺，用蒸餾水配制成熊果苷和煙酰胺的復(fù)配溶液；
[0027]步驟二、配制含0.2PPM亞甲基藍(lán)和60 μ g/ml海鹽的胚胎培養(yǎng)液作為陰性對(duì)照液，配制含0.25mmol/L苯硫脲的胚胎培養(yǎng)液作為陽性對(duì)照液；
[0028]步驟三、用馬蹄夾將皮膚模型夾在Franz透皮擴(kuò)散池的給藥池與接收池之間，在接收池內(nèi)注入斑馬魚胚胎培養(yǎng)液，并向給藥池中加入200ul所述復(fù)配溶液，將Franz透皮擴(kuò)散池置于透皮擴(kuò)散儀中，以37 °C的溫度擴(kuò)散8小時(shí)后得到擴(kuò)散后的透皮液；
[0029]步驟四、獲取斑馬魚受精卵，將斑馬魚受精卵置于胚胎培養(yǎng)液中J L孵化得到斑馬魚胚胎，將斑馬魚胚胎隨機(jī)分配到24孔板中的3個(gè)孔內(nèi)，將所述3個(gè)裝有斑馬魚的孔依次記為一號(hào)孔、二號(hào)孔和三號(hào)孔，在一號(hào)孔內(nèi)加入所述透皮液，在二號(hào)孔內(nèi)加入所述陽性對(duì)照液，在三號(hào)孔內(nèi)加入所述陰性對(duì)照液，將所述24孔板置于溫度為28.5°C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，得到斑馬魚幼魚；
[0030]步驟五、統(tǒng)計(jì)一號(hào)孔、二號(hào)孔和三號(hào)孔內(nèi)斑馬魚胚胎的死亡率，以及將一號(hào)孔、二號(hào)孔和三號(hào)孔內(nèi)斑馬魚幼魚置于顯微鏡下拍攝圖像，根據(jù)所拍攝的圖像統(tǒng)計(jì)出不同孔內(nèi)斑馬魚幼魚體表黑色素的總面積。
[0031]進(jìn)一步的，為提高獲取到的斑馬魚受精卵的質(zhì)量，在一實(shí)施方式中，在步驟四中所述“獲取斑馬魚受精卵”的具體方法為:
[0032]在獲取斑馬魚受精卵的前I日將雌雄親魚分開，在第2天光照開始前將雌雄親魚按雌魚與雄魚1:2的比例并池，在光照后獲得受精卵。
[0033]進(jìn)一步的，為提高黑色素總面積統(tǒng)計(jì)的精度和效率，在一實(shí)施方式中，在步驟五中是通過圖像處理軟件統(tǒng)計(jì)出不同孔內(nèi)斑馬魚幼魚體表黑色素的總面積。
[0034]本發(fā)明的有益效果為:本發(fā)明先使用Franz透皮擴(kuò)散池對(duì)檢測(cè)對(duì)象(美白成分)進(jìn)行皮透，再將得到的透皮液用于斑馬魚胚胎培養(yǎng)，因此真實(shí)的模擬實(shí)際使用過程中美白成分透過皮膚產(chǎn)生美白反應(yīng)的過程，避免了美白成分無法透過皮膚而導(dǎo)致的檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確的問題，大大提高了檢測(cè)結(jié)果的可靠性，同時(shí)本發(fā)明還評(píng)價(jià)美白分成的安全性；并且，本發(fā)明還對(duì)兩種以上的美白成分的復(fù)配溶液進(jìn)行檢測(cè)，從而能夠測(cè)試復(fù)配美白分成的效果。
【附圖說明】
[0035]圖1為改良的Franz透皮擴(kuò)散池的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0036]圖2為本發(fā)明實(shí)施方式中熊果苷水溶液與陰性對(duì)照注液、陽對(duì)照液所培養(yǎng)出來的斑馬魚幼魚的圖像；
[0037]圖3為本發(fā)明實(shí)施方式一中熊果苷水溶液與陰性對(duì)照注液、陽對(duì)照液所培養(yǎng)出來的斑馬魚幼魚的體表黑色素總面積比；
[0038]圖4為本發(fā)明實(shí)施方式二所得到的斑馬魚幼魚的圖像；
[0039]圖5為本發(fā)明實(shí)施方式二所得到的斑馬魚幼魚的體表黑色素總面積比；
[0040]圖6為本發(fā)明實(shí)施方式三所得到的斑馬魚幼魚的圖像；
[0041]圖7為本發(fā)明實(shí)施方式三所得到的斑馬魚幼魚的體表黑色素總面積比。
[0042]標(biāo)號(hào)說明:
[0043]1、給藥池；2、皮膚模型；3、取樣口 ；4、接收池；
[0044]5、磁子；6、馬蹄夾。
【具體實(shí)施方式】
[0045]為詳細(xì)說明本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容、構(gòu)造特征、所實(shí)現(xiàn)目的及效果，以下結(jié)合實(shí)施方式并配合附圖詳予說明。
[0046]實(shí)施方式一
[0047]檢測(cè)熊果苷水溶液的安全性和有效性的方法，包括步驟:
[0048](I)稱取一定量的熊果苷，用蒸飽水配制成100mmol