專利名稱：一種評價乳制品檢測中鏈霉素試紙條有效性的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種評價乳制品檢測中鏈霉素試紙條有效性的方法。
背景技術(shù)：
抗生素的發(fā)現(xiàn)的確在幫助人類戰(zhàn)勝重大疾病方面有巨大的貢獻，但藥物都是雙刃劍，抗生素也不例外，它的大范圍濫用所導(dǎo)致的副作用已成為一個嚴峻的社會問題，是人類健康的一大隱患。因此，乳制品中抗生素殘留一直是令人關(guān)注的焦點，各種檢測乳制品中抗生素殘留的方法隨之出現(xiàn)，其中試紙條法由于檢測時間短、成本低、對實驗人員水平要求低，被廣泛使用。制作生產(chǎn)檢測乳制品抗生素類試紙條的廠家越來越多，產(chǎn)品的水平參差不齊，但是一直沒有一種可以評價試紙條檢測有效性的方法。目前，國內(nèi)沒有評價乳制品檢測中鏈霉素類試紙條有效性的方法，更沒有相關(guān)國家標準。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種評價乳制品檢測中鏈霉素試紙條有效性的方法，幫助乳制品檢測選擇合適的鏈霉素試紙條。本發(fā)明提供了一種評價乳制品檢測中鏈霉素試紙條有效性的方法，包括
a.在經(jīng)過檢測不含有鏈霉素的原料乳中添加不同量的鏈霉素，得到不同鏈霉素濃度的待測乳，使用鏈霉素試紙條檢測各待測乳，根據(jù)鏈霉素試紙條的顯色反應(yīng)得到待測乳中鏈霉素的最低濃度檢測限值；
b.取多份原料乳，分別向原料乳中添加鏈霉素，制備得到鏈霉素濃度為最低濃度檢測限值的多份限度乳，向各限度乳中分別添加干擾物質(zhì)，使用鏈霉素試紙條檢測各添加干擾物質(zhì)后的限度乳，根據(jù)鏈霉素試紙條的顯色反應(yīng)得到限度乳中各干擾物質(zhì)對鏈霉素濃度檢測結(jié)果的影響；
c.取多份原料乳，向各原料乳中分別添加干擾物質(zhì)，使用鏈霉素試紙條檢測各添加干擾物質(zhì)后的原料乳，根據(jù)鏈霉素試紙條的顯色反應(yīng)得到原料乳中各干擾物質(zhì)對鏈霉素濃度檢測結(jié)果的影響；
d.取同一廠商的同一生產(chǎn)批次的不同鏈霉素試紙條檢測限度乳，觀測同一廠商同一生產(chǎn)批次的各鏈霉素試紙條的檢測結(jié)果；
e.取同一廠商的同一生產(chǎn)批次的不同鏈霉素試紙條檢測各待測乳，觀測同一廠商同一生產(chǎn)批次的各鏈霉素試紙條的檢測結(jié)果；
f.取同一廠商的不同生產(chǎn)批次的不同鏈霉素試紙條檢測限度乳，觀察同一廠商不同生產(chǎn)批次的各鏈霉素試紙條的測試結(jié)果；
g.取同一廠商的不同生產(chǎn)批次的不同鏈霉素試紙條檢測各待測乳，觀察同一廠商不同生產(chǎn)批次的各鏈霉素試紙條的測試結(jié)果。在一種評價乳制品檢測中鏈霉素試紙條有效性的方法的再一種示意性的實施方式中，a步驟中，待測乳中鏈霉素的濃度分別為0、100、200、400、1000和2000ug/kg。
在一種評價乳制品檢測中鏈霉素試紙條有效性的方法的另一種示意性的實施方式中，b和c步驟中，干擾物質(zhì)為三聚氰胺、過氧化氫、抗生素、L一輕脯氨酸、尿素、解抗劑和硫氰酸鈉。在一種評價乳制品檢測中鏈霉素試紙條有效性的方法的又一種示意性的實施方式中，d和f步驟中，用鏈霉素試紙條檢測限度乳進行10次重復(fù)測試。在一種評價乳制品檢測中鏈霉素試紙條有效性的方法的又一種示意性的實施方式中，f和g步驟中，生產(chǎn)批次分別為生產(chǎn)日期當天的批次，1/2保質(zhì)期的批次和保質(zhì)期日期當天的批次。該乳制品中鏈霉素快速檢測試紙條具有以下特點 1.構(gòu)思嚴謹。2.檢測時間短，含樣品處理時間，共計25分鐘。3.檢測無需額外儀器設(shè)備，檢測方法簡單。4.結(jié)果判斷容易。
具體實施例方式一種評價乳制品檢測中鏈霉素試紙條有效性的方法，包括
a.在經(jīng)過檢測不含有鏈霉素的原料乳中添加不同量的鏈霉素，得到不同鏈霉素濃度的待測乳，使用鏈霉素試紙條檢測各待測乳，根據(jù)鏈霉素試紙條的顯色反應(yīng)得到待測乳中鏈霉素的最低濃度檢測限值；
b.取多份原料乳，分別向原料乳中添加鏈霉素，制備得到鏈霉素濃度為最低濃度檢測限值的多份限度乳，向各限度乳中分別添加干擾物質(zhì)，使用鏈霉素試紙條檢測各添加干擾物質(zhì)后的限度乳，根據(jù)鏈霉素試紙條的顯色反應(yīng)得到限度乳中各干擾物質(zhì)對鏈霉素濃度檢測結(jié)果的影響；
c.取多份原料乳，向各原料乳中分別添加干擾物質(zhì)，使用鏈霉素試紙條檢測各添加干擾物質(zhì)后的原料乳，根據(jù)鏈霉素試紙條的顯色反應(yīng)得到原料乳中各干擾物質(zhì)對鏈霉素濃度檢測結(jié)果的影響；
d.取同一廠商的同一生產(chǎn)批次的不同鏈霉素試紙條檢測限度乳，觀測同一廠商同一生產(chǎn)批次的各鏈霉素試紙條的檢測結(jié)果；
e.取同一廠商的同一生產(chǎn)批次的不同鏈霉素試紙條檢測各待測乳，觀測同一廠商同一生產(chǎn)批次的各鏈霉素試紙條的檢測結(jié)果；
f.取同一廠商的不同生產(chǎn)批次的不同鏈霉素試紙條檢測限度乳，觀察同一廠商不同生產(chǎn)批次的各鏈霉素試紙條的測試結(jié)果；
g.取同一廠商的不同生產(chǎn)批次的不同鏈霉素試紙條檢測各待測乳，觀察同一廠商不同生產(chǎn)批次的各鏈霉素試紙條的測試結(jié)果。
步驟a靈敏度(檢測限度)測試
通過酶聯(lián)免疫法檢測篩選出不含有鏈霉素的原料乳。根據(jù)中國農(nóng)業(yè)部第235號公告 《動物性食品中獸藥最高殘留限量》中對于奶制品中鏈霉素的最高含量要求為200ug/kg，向原料乳中添加不同量的鏈霉素，得到鏈霉素濃度分別為0、100、200、400、1000和2000ug/kg的待測乳。檢測步驟
1.吸取Iml待測乳于2ml離心管中，2000G離心10分鐘，去除上層脂肪，得到處理乳；
2.吸取處理乳IOOul于2ml離心管中，再加入IOOul樣品稀釋液(PBS緩沖液，具體配方如下磷酸二氫鉀(KH2P04) 0. 24克，磷酸氫二鈉(Na2HP04) 3. 63克，氯化鈉(NaCl) 8克， 氯化鉀(KCl) 0. 2克，加水定容到1L)于離心管中，混勻得到稀釋乳；
3.吸取IOOul稀釋乳加入試紙條加樣孔中，10-15分鐘判讀結(jié)果。結(jié)果判斷
讀取結(jié)果時，請勿從試紙條側(cè)面或倒置試紙條進行結(jié)果觀察。檢測結(jié)果分為 陰性τ線(檢測線，靠近滴入樣品溶液的一端)比C線(對照線)深或一樣深，判斷為陰性，表示樣品中鏈霉素藥物濃度低于試紙最低檢測限。陽性Τ線比C線淺，或T線無顯色，判斷為陽性，表示樣品中鏈霉素濃度高于試紙最低檢測限；
無效c線未顯色，表明不正確的操作過程或檢測條已失效。在此情況下，應(yīng)用新的檢測條重新測試。檢測結(jié)果
分別對由鏈霉素濃度分別為0、100、200、400、1000和2000ug/kg的待測乳制得的稀釋乳測試，發(fā)現(xiàn)對應(yīng)于鏈霉素在待測乳中的含量為200ug/kg時(在稀釋乳中含量為IOOug/ kg)為轉(zhuǎn)折點，即為鏈霉素的最低濃度檢測限值，大于此濃度時，鏈霉素試紙條上的T線均比C線淺或無色，由此得到待測乳中鏈霉素的最低濃度檢測限值為200ug/kg，滿足中國農(nóng)業(yè)部第235號公告《動物性食品中獸藥最高殘留限量》對鏈霉素含量測試靈敏度的要求。如果鏈霉素試紙條在鏈霉素含量為200ug/kg仍然現(xiàn)實為陰性，說明此種類型的鏈霉素試紙條靈敏度不足。如下的步驟b和步驟c涉及鏈霉素試紙條有效性中的特異性測試。步驟b
取原料乳，向原料乳中添加鏈霉素，制備得到鏈霉素濃度為200ug/kg的多份限度乳， 向多份限度乳中分別添加干擾物質(zhì)，這些干擾物質(zhì)是三聚氰胺、過氧化氫、抗生素、L-羥脯氨酸、尿素、解抗劑和硫氰酸鈉，其中，各限度乳中這些干擾物質(zhì)的濃度分別為 過氧化氫30mg/kg ；
抗生素青霉素如g/kg+四環(huán)素100ug/kg+磺胺二甲基嘧啶100ug/kg +卡那霉素 150ug/kg +氯霉素0. 3ug/kg+慶大霉素200ug/kg (以上抗生素含量均達到或超過國家標準規(guī)定的限量)；
L-羥脯氨酸10 mg/kg ； 尿素500 mg/kg ； 三聚氰胺0. 5 mg/kg ； 解抗劑4U/ml ； 硫氰酸鈉0. 5 mg/kg。以上干擾物質(zhì)濃度的選取都參考了相關(guān)國家標準對與這些干擾物質(zhì)在乳制品中濃度含量限值的規(guī)定。
結(jié)果判斷同上述步驟a中的結(jié)果判斷過程。檢測結(jié)果
分別含有三聚氰胺、過氧化氫、抗生素、L-羥脯氨酸、尿素、解抗劑和硫氰酸鈉的限度乳中，鏈霉素試紙條的顯示結(jié)果均為陽性，說明限度乳中干擾物質(zhì)并未與鏈霉素試紙條發(fā)生干涉反應(yīng)而改變測試結(jié)果，此種鏈霉素試紙條可靠；如果鏈霉素試紙條的現(xiàn)實結(jié)果出現(xiàn)陰性，說明干擾乳中干擾物質(zhì)并與鏈霉素試紙條發(fā)生干涉反應(yīng)而改變測試結(jié)果，此種鏈霉素試紙條不可靠。步驟c
取多份原料乳，向各份原料乳中分別添加干擾物質(zhì)，這些干擾物質(zhì)是三聚氰胺、過氧化氫、抗生素、L-羥脯氨酸、尿素、解抗劑和硫氰酸鈉(這些干擾物質(zhì)是目前乳制品中最常見的添加物質(zhì))，制備得到干擾乳(每個干擾乳中只含有一種干擾物質(zhì))，其中，各干擾乳中上述干擾物質(zhì)的濃度為 過氧化氫30mg/kg ；
抗生素青霉素如g/kg+四環(huán)素100ug/kg+磺胺二甲基嘧啶100ug/kg +卡那霉素 150ug/kg +氯霉素0. ;3ug/kg+慶大霉素200ug/kg (以上抗生素含量均達到或超過國家標準規(guī)定的限量)；
L-羥脯氨酸10 mg/kg ； 尿素500 mg/kg ； 三聚氰胺0. 5 mg/kg ； 解抗劑4U/ml ； 硫氰酸鈉0. 5 mg/kg。以上干擾物質(zhì)濃度的選取都參考了相關(guān)國家標準對與這些干擾物質(zhì)在乳制品中濃度含量限值的規(guī)定。結(jié)果判斷同上述步驟a中的結(jié)果判斷過程。檢測結(jié)果
分別含有三聚氰胺、過氧化氫、抗生素、L-羥脯氨酸、尿素、解抗劑和硫氰酸鈉的干擾乳中，鏈霉素試紙條的顯示結(jié)果均為陽性，說明干擾乳中干擾物質(zhì)并未與鏈霉素試紙條發(fā)生干涉反應(yīng)而改變測試結(jié)果，此種鏈霉素試紙條可靠；如果鏈霉素試紙條的現(xiàn)實結(jié)果出現(xiàn)陰性，說明干擾乳中干擾物質(zhì)并與鏈霉素試紙條發(fā)生干涉反應(yīng)而改變測試結(jié)果，此種鏈霉素試紙條不可靠。如下的步驟d、e、f和g涉及鏈霉素試紙條有效性中的穩(wěn)定性測試。其中步驟d和 e確定批內(nèi)穩(wěn)定性；步驟f和g確定批間穩(wěn)定性。步驟d使用同一廠商生產(chǎn)的同一批次的鏈霉素試紙條，對同一鏈霉素濃度為 200ug/kg的限度乳反復(fù)進行10次實驗，即取10張同一廠商生產(chǎn)的同一批次的鏈霉素試紙條，分別檢測同一鏈霉素濃度為200ug/kg的限度乳并觀察試紙條的顏色。步驟e使用同一廠家生產(chǎn)的同一批次的鏈霉素試紙條，對步驟a中的各鏈霉素濃度待測乳做平行實驗，即對同一濃度水平的待測乳使用不同的試紙條多次檢測并觀察其的顏色。結(jié)果判斷同上述步驟a中的結(jié)果判斷過程。
檢測結(jié)果
如果步驟d的10次檢測對限度乳的測試結(jié)果均為陽性，且步驟e中對于不同鏈霉素濃度的待測乳在同一濃度水平上的測試結(jié)果一致，則鏈霉素試紙條的同一生產(chǎn)批次內(nèi)的一致性合格。步驟f使用同一廠家生產(chǎn)的不同批次的鏈霉素試紙條，例如生產(chǎn)日期當天的批次，1/2保質(zhì)期的批次和保質(zhì)期日期當天的批次對同一鏈霉素濃度為200ug/kg的限度乳反復(fù)進行10次實驗，即取10張同一廠商生產(chǎn)的不同批次的鏈霉素試紙條，分別檢測同一鏈霉素濃度為200ug/kg的限度乳并觀察試紙條的顏色。步驟g使用同一廠家生產(chǎn)的不同批次的鏈霉素試紙條，例如生產(chǎn)日期當天的批次，1/2保質(zhì)期的批次和保質(zhì)期日期當天的批次，對步驟a中的各鏈霉素濃度待測乳做平行測試實驗，即使用不同批次的試紙條對同一濃度水平的待測乳分別多次檢測并觀察試紙條的顏色。結(jié)果判斷同上述步驟a中的結(jié)果判斷過程。檢測結(jié)果
如果步驟f的測試結(jié)果均為陽性，且步驟g中對于不同鏈霉素濃度的待測乳在同一濃度水平上的測試結(jié)果一致，則鏈霉素試紙條的生產(chǎn)批次間的一致性合格。該乳制品中鏈霉素快速檢測試紙條具有以下特點 1.構(gòu)思嚴謹。2.檢測時間短，含樣品處理時間，共計25分鐘。3.檢測無需額外儀器設(shè)備，檢測方法簡單。4.結(jié)果判斷容易。因此，該鏈霉素快速檢測試紙條符合乳制品企業(yè)檢測鏈霉素需要，可以進行使用。上文所列出的一系列的詳細說明僅僅是針對本發(fā)明的可行性實施例的具體說明， 它們并非用以限制本發(fā)明的保護范圍，凡未脫離本發(fā)明技藝精神所作的等效實施例或變更均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種評價乳制品檢測中鏈霉素試紙條有效性的方法，包括a.在經(jīng)過檢測不含有鏈霉素的原料乳中添加不同量的鏈霉素，得到不同鏈霉素濃度的待測乳，使用鏈霉素試紙條檢測各所述待測乳，根據(jù)所述鏈霉素試紙條的顯色反應(yīng)得到所述待測乳中鏈霉素的最低濃度檢測限值；b.取多份所述原料乳，分別向所述原料乳中添加鏈霉素，制備得到鏈霉素濃度為所述最低濃度檢測限值的多份限度乳，向各所述限度乳中分別添加干擾物質(zhì)，使用所述鏈霉素試紙條檢測各添加所述干擾物質(zhì)后的所述限度乳，根據(jù)所述鏈霉素試紙條的顯色反應(yīng)得到所述限度乳中各所述干擾物質(zhì)對鏈霉素濃度檢測結(jié)果的影響；c.取多份所述原料乳，向各所述原料乳中分別添加干擾物質(zhì)，使用所述鏈霉素試紙條檢測各添加所述干擾物質(zhì)后的所述原料乳，根據(jù)所述鏈霉素試紙條的顯色反應(yīng)得到所述原料乳中各所述干擾物質(zhì)對鏈霉素濃度檢測結(jié)果的影響；d.取同一廠商的同一生產(chǎn)批次的不同所述鏈霉素試紙條檢測所述限度乳，觀測同一廠商同一生產(chǎn)批次的各所述鏈霉素試紙條的檢測結(jié)果；e.取同一廠商的同一生產(chǎn)批次的不同所述鏈霉素試紙條檢測各所述待測乳，觀測同一廠商同一生產(chǎn)批次的各所述鏈霉素試紙條的檢測結(jié)果；f.取同一廠商的不同生產(chǎn)批次的不同所述鏈霉素試紙條檢測所述限度乳，觀察同一廠商不同生產(chǎn)批次的各所述鏈霉素試紙條的測試結(jié)果；g.取同一廠商的不同生產(chǎn)批次的不同所述鏈霉素試紙條檢測各所述待測乳，觀察同一廠商不同生產(chǎn)批次的各所述鏈霉素試紙條的測試結(jié)果。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述步驟a中，所述待測乳中鏈霉素的濃度分別為 0、100、200、400、1000 和 2000ug/kg。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中b和c步驟中，所述干擾物質(zhì)為三聚氰胺、雙氧水、抗生素、L一輕脯氨酸、尿素、解抗劑和硫氰酸鈉。
4.如權(quán)利要求1所示的方法，其中d和f步驟中，用所述鏈霉素試紙條檢測所述限度乳進行10次重復(fù)測試。
5.如權(quán)利要求1所示的方法，其中f和g步驟中，所述生產(chǎn)批次分別為生產(chǎn)日期當天的批次，1/2保質(zhì)期的批次和保質(zhì)期日期當天的批次。 全文摘要
一種評價乳制品檢測中鏈霉素試紙條有效性的方法，包括a.根據(jù)鏈霉素試紙條的顯色反應(yīng)得到待測乳中鏈霉素的最低濃度檢測限值；b.根據(jù)述鏈霉素試紙條的顯色反應(yīng)得到限度乳中各干擾物質(zhì)對鏈霉素濃度檢測結(jié)果的影響；c.根據(jù)鏈霉素試紙條的顯色反應(yīng)得到原料乳中各干擾物質(zhì)對鏈霉素濃度檢測結(jié)果的影響；d.觀測同一廠商同一生產(chǎn)批次的各所述鏈霉素試紙條的檢測結(jié)果；e.觀測同一廠商同一生產(chǎn)批次的各所述鏈霉素試紙條的檢測結(jié)果；f.觀察同一廠商不同生產(chǎn)批次的各所述鏈霉素試紙條的測試結(jié)果；g.觀察同一廠商不同生產(chǎn)批次的各所述鏈霉素試紙條的測試結(jié)果。
文檔編號G01N33/558GK102478574SQ20101056285
公開日2012年5月30日 申請日期2010年11月29日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月29日
發(fā)明者烏尼爾, 劉衛(wèi)星, 劉志楠, 劉曉川, 喻東威, 李梅, 薛志清, 趙源 申請人:內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)(集團)股份有限公司