基于膜結(jié)構(gòu)的人abo血型反定型檢測方法
【技術(shù)領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種血型判定檢測技術(shù)，特別是一種基于膜結(jié)構(gòu)的人ABO血型反定型檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]血型檢驗已廣泛應用于各級醫(yī)療機構(gòu)，其中ABO血型系統(tǒng)和抗Rh(D)的檢測已經(jīng)作為常規(guī)檢測。而血型檢測的原理是基于抗原-抗體之間的特異性反應，進而產(chǎn)生細胞凝集效應。為了確保臨床輸血的安全，避免因為血型不相容導致的繼發(fā)性溶血性輸血反應，有必要對紅細胞表面抗原以及血清或血漿中的抗體進行檢測。而使用血型定型試劑檢測紅細胞表面抗原稱為正定型檢測；反之，使用紅細胞表面抗原檢測血清中相應的抗體稱之為反定型檢測?！吨腥A人民共和國藥典2010版》公布的健康獻血員血型檢測標準中明確指出，須使用國家藥品監(jiān)督管理當局批準的抗A、抗B血型定型試劑進行檢測。而且，ABO血型檢測結(jié)果，應以正、反定型法鑒定均合格為準。
[0003]而目前血型反定型臨床檢測中用試管法、平板法和柱凝集技術(shù)等。而試管法、平板法缺乏客觀判斷的依據(jù)，有時容易造成錯誤判斷。柱凝集法的結(jié)果客觀，易于標準化，目前在逐漸替代前者。但是，柱凝集法需輔助設備，耗時長，限制了在緊急狀況下的應用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是為了解決上述問題，設計了一種基于膜結(jié)構(gòu)的人ABO血型反定型檢測方法。
[0005]實現(xiàn)上述目的本發(fā)明的技術(shù)方案為，一種基于膜結(jié)構(gòu)的人ABO血型反定型檢測方法，該方法選用能夠允許單個紅細胞通過的濾膜作為核心材料，將血型抗原結(jié)合到濾膜上，濾膜的周邊包圍有吸水材料，檢測時將待檢血清或血漿滴加在濾膜表面，再用沖洗液沖洗后，再將特定的反定型指示劑細胞滴加到與之對應濾膜表面，最后使用沖洗液沖洗。如果血清或者血漿中含有與濾膜上抗原發(fā)生特異性反應的抗體，則血清或血漿中抗體將被結(jié)合到濾膜上，進而與對應的反定型指示劑細胞發(fā)生抗原抗體結(jié)合，指示紅細胞則會留在膜表面形成肉眼可見的紅色團塊；如果血清或者血漿中不含與濾膜上抗原發(fā)生特異性反應的抗體，則對應的反定型指示劑細胞則不會發(fā)生抗原抗體結(jié)合，指示劑紅細胞將會隨沖洗液液體滲出。操作人員可依據(jù)紅細胞是否在濾膜形成肉眼可見的紅色團塊來判斷結(jié)果，確定待測血清或者血漿的抗體，從而確定血型。
[0006]所述該方法選用能夠允許單個紅細胞通過的濾膜作為核心材料，而濾膜材質(zhì)可以是玻璃纖維膜或硝酸纖維膜或硅酸鹽顆粒等能夠形成特定連續(xù)液流通道的固體，且濾膜的內(nèi)徑在2 — 20微米之間。
[0007]所述濾膜的周邊包圍有吸水材料，濾膜的形狀為方形或者圓形，吸水材料包圍濾膜的方式為全部包圍或者部分包圍。
[0008]所述血型抗體結(jié)合到濾膜上，血型抗原結(jié)合到濾膜上的方法為物理吸附法或者化學交聯(lián)法。
[0009]所述檢測時將待檢血清或血漿滴加在濾膜表面，其中待檢血清或血漿為體積約10—200 μ L的新鮮的人血清或者血漿。
[0010]所述檢測時將特定的反定型指示劑紅細胞滴加在與之對應的濾膜表面，其中特定的反定型指示劑紅細胞可以是一組A紅細胞懸液、B紅細胞懸液、O紅細胞懸液，也可以是一組AB型紅細胞懸液、O紅細胞懸液；指示劑細胞的濃度可以在0.5% -20%范圍內(nèi)；注意在滴加時，具有相同抗原的反定指示劑細胞和濾膜相對應。
[0011]該檢測方法還包括檢測試劑盒，檢測試劑盒是由檢測卡以及反定型指示劑細胞組成。其中檢測卡內(nèi)設有能夠允許單個紅細胞通過的濾膜，將人ABO血型抗原結(jié)合到濾膜上，濾膜周邊墊有吸水墊，吸水墊的面積要大于濾膜，且濾膜和吸水墊都通過檢測試劑盒內(nèi)的塑料固體結(jié)構(gòu)來做固定和支撐。而反定型指示劑細胞則是具有ABO血型抗原的一組紅細胞。
[0012]檢測時，將待檢血清或血漿滴加到檢測卡的濾膜表面，微量沖洗液沖洗后,再將特定的反定型指示劑細胞滴加到與之對應的濾膜表面，最后使用沖洗液沖洗。如果血清或者血漿中含有與濾膜上抗原發(fā)生特異性反應的抗體，血清或血漿中抗體將被結(jié)合到濾膜上，進而與對應的反定型指示劑細胞發(fā)生抗原抗體結(jié)合，指示紅細胞則會留在膜表面形成肉眼可見的紅色團塊；反之，如果血清或者血漿中不含與濾膜上抗原發(fā)生特異性反應的抗體，對應的反定型指示劑細胞不會發(fā)生抗原抗體結(jié)合，指示劑紅細胞將會隨沖洗液液體滲出，則濾膜上不會形成肉眼可見的紅色團塊。
[0013]所述沖洗液為生理鹽水。
[0014]利用本發(fā)明的技術(shù)方案制作的基于膜結(jié)構(gòu)的人ABO血型反定型檢測方法，具有無需特殊設備，檢測時間短，結(jié)果客觀等優(yōu)勢，具有較好的臨床推廣價值。
【附圖說明】
[0015]圖1是本發(fā)明所述基于膜結(jié)構(gòu)的人ABO血型反定型檢測試劑盒的單孔結(jié)構(gòu)示意圖；
[0016]圖中，1、試劑盒底板；2、濾膜；3、吸水墊；4、帶有抗原的濾膜區(qū)域。
[0017]圖2是本發(fā)明所述基于膜結(jié)構(gòu)的人ABO血型反定型檢測試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0018]圖中，1、試劑盒底板；2、濾膜。
[0019]圖3是本發(fā)明所述基于膜結(jié)構(gòu)的人ABO血型反定型檢測試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖的內(nèi)部結(jié)構(gòu)示意圖；
[0020]圖中，1、試劑盒底板；2、帶有抗原的濾膜；3、吸水墊。
【具體實施方式】
[0021]下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的進行具體描述，
[0022]實施例1
[0023]一種基于膜結(jié)構(gòu)的人ABO血型反定型檢測方法，該方法選用能夠允許單個紅細胞通過的濾膜作為核心材料，將血型抗原結(jié)合到濾膜上，濾膜的周邊包圍有吸水材料制。檢測時，將待檢血清或血漿滴加到濾膜表面，沖洗液沖洗后，再將特定的反定型指示劑細胞滴加到與之對應濾膜表面，最后使用沖洗液沖洗。如果血清或者血漿中含有與濾膜上抗原發(fā)生特異性反應的抗體，血清或血漿中抗體將被結(jié)合到濾膜上，進而與對應的反定型指示劑細胞發(fā)生抗原抗體結(jié)合，指示紅細胞則會留在膜表面形成肉眼可見的紅色團塊；如果血清或者血漿中不含與濾膜上抗原發(fā)生特異性反應的抗體，對應的反定型指示劑細胞則不會發(fā)生抗原抗體結(jié)合，指示劑紅細胞將會隨沖洗液液體滲出。操作人員可依據(jù)紅細胞是否在濾膜形成肉眼可見的紅色團塊來判斷結(jié)果，確定待測血清或者血漿的抗體，從而確定血型。根據(jù)所述的檢測方法設計的檢測試劑盒，主要包括檢測卡和反定型指示劑細胞兩部分。其中，檢測卡內(nèi)設有內(nèi)徑在2-20微米之間，能夠允許單個紅細胞通過的濾膜，將人ABO血型抗原結(jié)合到濾膜上，濾膜周邊墊有吸水墊，吸水墊的面積要大于濾膜，且濾膜和吸水墊都通過檢測試劑盒內(nèi)的塑料固體結(jié)構(gòu)來做固定和支撐，單孔結(jié)構(gòu)如圖1所示；而反定型指示劑細胞則是具有ABO血型抗原的一組紅細胞，可以是一組A紅細胞懸液、B紅細胞懸液、O紅細胞懸液，也可以是一組AB型紅細胞懸液、O紅細胞懸液，其濃度范圍在0.5% -20%。而制備紅細胞懸液的液體可以是生理鹽水或其它等滲溶液，也可以是紅細胞保存液。
[0024]實施例2
[0025]ABO血型的反定型檢測試劑盒制備以及檢測步驟(三種反定型指示劑細胞)
[0026]1、人ABO血型抗原的制備
[0027]分別取得I袋新鮮的人A型、B型、O型血液，經(jīng)過處理得到三種血型的紅細胞，使用低滲壓溶液分別破碎三種(A型、B型、O型)紅細胞，離心去上清，再使用相同的低滲壓溶液洗滌沉淀，直至上清無色透明，收集沉淀即為紅細胞膜，作為血型抗原提取物。加入抗原保護劑稀釋抗原提取物。
[0028]2、人ABO血型抗原的固定
[0029]使用化學方法處理活化濾膜，將稀釋后的抗原提取物滴加到1.5cmXl.5cm濾膜的中心，然后37°C烘干處理并密封保存。
[0030]3、人ABO血型反定型檢測卡的組裝
[0031]在一帶有3個孔(孔徑為0.5cm)的長方形的塑料板背部貼上3片帶有不同抗原的1.5cmX 1.5cm濾膜,使聚酯版上的孔與濾膜上的中心對應。然后將2.5cm寬的吸水紙貼在濾膜的兩側(cè)或周邊。濾膜和吸水紙都是使用防水膠黏貼在聚酯版上，防止加樣和沖洗過程濾膜和吸水紙脫落或串位置，最后