專利名稱：一種用于檢測(cè)人abo血型的反定型用紅細(xì)胞試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物化學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及鑒定血型的試劑，特別是一種用
于檢測(cè)人ABO血型的反定型用紅細(xì)胞試劑盒。
背景技術(shù)：
由于ABO血型系統(tǒng)是臨床輸血、器官移植中最重要的血型系統(tǒng)，因此 對(duì)獻(xiàn)血者和受血者ABO血型的預(yù)先確認(rèn)也是輸血工作中最為重要的實(shí)驗(yàn)， 錯(cuò)誤的ABO血型定型導(dǎo)致的輸血反應(yīng)將給受血者帶來(lái)十分嚴(yán)重的后果，因 此ABO血型的鑒定必須以正、反定型試驗(yàn)結(jié)果相互參照來(lái)確定。所述的正 定型檢測(cè)是用已知的抗A和抗B血型定型試劑來(lái)測(cè)定紅細(xì)胞上有無(wú)相應(yīng)的A 抗原或/B抗原。反定型檢測(cè)是用己知的ABO血型來(lái)測(cè)定血清中有無(wú)相應(yīng)的 抗A抗體/或B抗體。
ABO試劑紅細(xì)胞是體外診斷試劑，用于ABO血型鑒定的反定型檢測(cè)，是 血型定型的常規(guī)試劑，在臨床上有著極為廣泛的使用，過(guò)去由于存在體外 長(zhǎng)期保存時(shí)間短、運(yùn)輸不方便等許多問(wèn)題，使得試劑的難以商品化生產(chǎn)和 銷售。基本是由各使用單位自行配制，基本上是現(xiàn)用現(xiàn)配。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種用于檢測(cè)人ABO血型的反定型用紅細(xì)胞試劑 盒，所述的用于檢測(cè)人ABO血型的反定型用紅細(xì)胞試試劑盒要解決現(xiàn)有技 術(shù)中試劑盒體外保存時(shí)間短、運(yùn)輸不方便的技術(shù)問(wèn)題。
本發(fā)明的一種用于檢測(cè)人ABO血型的反定型用紅細(xì)胞試劑盒，由盒體
和試劑組成，試劑設(shè)置在盒體中，試劑由A型試劑、B型試劑和O型試劑 組成，所述的A型試劑由紅細(xì)胞保存液和A型壓積紅細(xì)胞組成、所述的B 型試劑由紅細(xì)胞保存液和B型壓積紅細(xì)胞組成，所述的O型試劑由紅細(xì)胞 保存液和O型壓積紅細(xì)胞組成，所述的紅細(xì)胞保存液由葡萄糖、枸櫞酸三鈉、枸櫞酸、磷酸二氫鈉、乙二胺四乙酸二鈉、核苷酸和抗生素組成，其
中，所述的葡萄糖占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為1.7—2.1%，所述 的枸櫞酸三鈉占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為2.0—2.2%，所述的枸 櫞酸占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為0.030—0.040%，所述的磷酸二 氫鈉占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為0.20—0.30%,所述的乙二胺四 乙酸二鈉占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為0.08—0.12%，所述的核苷 酸占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為0.040—0.045%，所述的抗生素占 所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為0.001—0.002%，余量為蒸餾水；所述 的抗生素可以采用氯霉素、西力欣等醫(yī)用的其它抗生素。
所述的A型壓積紅細(xì)胞通過(guò)如下方法制備,首先將至少三人份的A型血 液去血漿，然后混合，然后用適量的生理氯化鈉溶液洗滌紅細(xì)胞至少兩次， 再分別用適量紅細(xì)胞保存液洗滌紅細(xì)胞至少一次，在3 — 5'C洗滌離心，3000 一4000轉(zhuǎn)/分10—20分鐘，最后一次離心后，3000—4000轉(zhuǎn)/分15—25分
鐘，棄血清，沉淀即為A壓積紅細(xì)胞；
所述的B型壓積紅細(xì)胞的制備方法同所述的A型壓積紅細(xì)胞的制備方
法；
所述的O型壓積紅細(xì)胞的制備方法同所述的A型壓積紅細(xì)胞的制備方
法；
在所述的A型試劑中，所述的A型壓積紅細(xì)胞占所述的A型試劑的濃 度為2 —5%，余量為所述的紅細(xì)胞保存液；
在所述的B型試劑中，所述的B型壓積紅細(xì)胞占所述的A型試劑的濃 度為2 — 5%，余量為所述的紅細(xì)胞保存液；
在所述的O型試劑中，所述的O型壓積紅細(xì)胞占所述的A型試劑的濃 度為2 —5%，余量為所述的紅細(xì)胞保存液。
進(jìn)一步的，所述的一種用于檢測(cè)人ABO血型的反定型用紅細(xì)胞試劑盒， 所述的葡萄糖占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為1.9%，所述的枸櫞酸
三鈉占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為2.1 % ，所述的枸櫞酸占所述的 紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為0.035%,所述的磷酸二氫鈉占所述的紅細(xì)胞 保存液的質(zhì)量百分比為0.25%，所述的乙二胺四乙酸二鈉占所述的紅細(xì)胞 保存液的質(zhì)量百分比為0.1%，所述的核苷酸占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量 百分比為0.043%,所述的抗生素占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為 0.0015%，余量為蒸t留水。
進(jìn)一步的，所述的A型壓積紅細(xì)胞通過(guò)如下方法制備,首先將至少三 人份的A型血液去血漿，然后混合，然后用適量的生理氯化鈉溶液洗滌紅 細(xì)胞三次，再分別用適量紅細(xì)胞保存液洗滌紅細(xì)胞一次，在4。C洗滌離心， 3500轉(zhuǎn)/分15分鐘，最后一次離心后，3500轉(zhuǎn)/分20分鐘，棄血清，沉淀 即為壓積紅細(xì)胞。
進(jìn)一步的，所述的B型壓積紅細(xì)胞通過(guò)如下方法制備,首先將至少三人 份的B型血液去血漿，然后混合，然后用適量的生理氯化鈉溶液洗滌紅細(xì) 胞三次，再分別用適量紅細(xì)胞保存液洗滌紅細(xì)胞一次，在4t:洗滌離心，3500 轉(zhuǎn)/分15分鐘，最后一次離心后，3500轉(zhuǎn)/分20分鐘，棄血清，沉淀即為 壓積紅細(xì)胞。
進(jìn)一步的，所述的0型壓積紅細(xì)胞通過(guò)如下方法制備，首先將至少三 人份的0型血液去血漿，然后混合，然后用適量的生理氯化鈉溶液洗滌紅 細(xì)胞三次，再分別用適量紅細(xì)胞保存液洗滌紅細(xì)胞一次，在4。C洗滌離心， 3500轉(zhuǎn)/分15分鐘，最后一次離心后，3500轉(zhuǎn)/分20分鐘，棄血清，沉 淀即為壓積紅細(xì)胞。
本發(fā)明的工作原理是AB O血型系統(tǒng)是以人體紅細(xì)胞上的抗原與血 清中抗體而定型的。凡紅細(xì)胞上含有A抗原，而血清中含有抗B抗體的稱 為A型；紅細(xì)胞上含有B抗原，而血清中含有抗A抗體的稱為B型；紅細(xì) 胞上含有A和B抗原，而血清中無(wú)抗A、抗B抗體的稱為AB型；紅細(xì)胞 上不含有A、 B抗原，而血清中含有抗A和抗B抗體稱為O型。反定型檢
測(cè)是用已知的ABO血型來(lái)測(cè)定血清中有無(wú)相應(yīng)的抗A抗體/或B抗體。具體^ 可見(jiàn)下表
正定型 抗A 抗B
受檢者血型
A B 0
反定型
A細(xì)胞 B細(xì)胞 O細(xì)胞
A B
本發(fā)明與已有技術(shù)相對(duì)照，其效果是積極和明顯的。本發(fā)明因?yàn)閷⑵?萄糖、枸櫞酸三鈉、枸櫞酸、磷酸二氫鈉、乙二胺四乙酸二鈉、核苷酸和 抗生素按一定的配比制成紅細(xì)胞保存液，由該紅細(xì)胞保存液保存的壓積紅 細(xì)胞，可以更好的保存壓積紅細(xì)胞，使得壓積紅細(xì)胞能夠較長(zhǎng)時(shí)間的保持 穩(wěn)定，增加長(zhǎng)距離運(yùn)輸?shù)目尚行?，使得本發(fā)明可以進(jìn)行商品化的生產(chǎn)和銷 售。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1
本發(fā)明的一種用于檢測(cè)人ABO血型的反定型用紅細(xì)胞試劑盒，由盒體 和試劑組成，試劑設(shè)置在盒體中，試劑由A型試劑、B型試劑和O型試劑
組成，所述的A型試劑由紅細(xì)胞保存液和A型壓積紅細(xì)胞組成、所述的B 型試劑由紅細(xì)胞保存液和B型壓積紅細(xì)胞組成，所述的O型試劑由紅細(xì)胞 保存液和O型壓積紅細(xì)胞組成，所述的紅細(xì)胞保存液由葡萄糖、枸櫞酸三 鈉、枸櫞酸、磷酸二氫鈉、乙二胺四乙酸二鈉、核苷酸和抗生素組成，其 中，所述的葡萄糖占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為1.9%，所述的枸 櫞酸三鈉占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為2.1%,所述的枸櫞酸占所 述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為0.035%，所述的磷酸二氫鈉占所述的紅
細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為0.25%，所述的乙二胺四乙酸二鈉占所述的紅 細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為0.1%，所述的核苷酸占所述的紅細(xì)胞保存液的 質(zhì)量百分比為0.043%，所述的抗生素占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比 為0.0015%，余量為蒸餾水；所述的抗生素可以采用氯霉素、西力欣等醫(yī) 用的其它抗生素。
所述的A型壓積紅細(xì)胞通過(guò)如下方法制備,首先將至少三人份的A型 血液去血漿，然后混合，然后用適量的生理氯化鈉溶液洗滌紅細(xì)胞三次， 再分別用適量紅細(xì)胞保存液洗滌紅細(xì)胞一次，在4'C洗滌離心，3500轉(zhuǎn)/分 15分鐘，最后一次離心后，3500轉(zhuǎn)/分20分鐘，棄血清，沉淀即為壓積紅 細(xì)胞；
所述的B型壓積紅細(xì)胞通過(guò)如下方法制備，首先將至少三人份的B型 血液去血漿，然后混合，然后用適量的生理氯化鈉溶液洗滌紅細(xì)胞三次， 再分別用適量紅細(xì)胞保存液洗滌紅細(xì)胞一次，在4t:洗滌離心，3500轉(zhuǎn)/分 15分鐘，最后一次離心后，3500轉(zhuǎn)/分20分鐘，棄血清，沉淀即為壓積紅 細(xì)胞；
所述的0型壓積紅細(xì)胞通過(guò)如下方法制備，首先將至少三人份的0型血 液去血漿，然后混合，然后用適量的生理氯化鈉溶液洗滌紅細(xì)胞三次，再 分別用適量紅細(xì)胞保存液洗滌紅細(xì)胞一次，在4t:洗滌離心，3500轉(zhuǎn)/分15 分鐘，最后一次離心后，3500轉(zhuǎn)/分20分鐘，棄血清，沉淀即為壓積紅細(xì) 胞；
在所述的A型試劑中，所述的A型壓積紅細(xì)胞占所述的A型試劑的濃 度為2—5%，余量為所述的紅細(xì)胞保存液；
在所述的B型試劑中，所述的B型壓積紅細(xì)胞占所述的A型試劑的濃 度為2_5%，余量為所述的紅細(xì)胞保存液；
在所述的O型試劑中，所述的O型壓積紅細(xì)胞占所述的A型試劑的濃 度為2—5%,余量為所述的紅細(xì)胞保存液。
實(shí)施例2
采用試管法檢測(cè)血型
1. 取被檢者血清(或血漿)各一滴分別加于標(biāo)記好的小試管中；
2. 分別各加1滴A型、B型、O型試劑；
3. 搖動(dòng)試管，離心，速度和時(shí)間可選擇以下任意一種
轉(zhuǎn)速1000RPM,時(shí)間1分鐘； 轉(zhuǎn)速3400RPM，時(shí)間15秒；
4. 先觀察是否溶血(溶血可能是陽(yáng)性結(jié)果，或者是細(xì)菌污染)，然 后輕輕搖晃，使細(xì)胞再懸浮起來(lái)；
5. 觀察凝集狀況，并立即記錄結(jié)果。參照表1可知血型。
實(shí)施例3
微量板法檢測(cè)血型
1. 在U型板三個(gè)孔內(nèi)分別加入25 — 35ul的被檢者血清(血清)；
2. 每孔內(nèi)分別加入與血清等量的A、 B、 0型試劑；
3. 混勻；
4. 離心，轉(zhuǎn)速2000RPM，時(shí)間30秒；
5. 檢測(cè)溶血情況(溶血可能是陽(yáng)性結(jié)果，或者是細(xì)菌污染)；
6. 用振蕩儀振動(dòng)微量板，振動(dòng)能使陽(yáng)性反應(yīng)出現(xiàn)凝集的細(xì)胞扣，若 是陰性反應(yīng)，細(xì)胞扣很快消除；
7. 記錄結(jié)果，參照表l可知血型。
權(quán)利要求
1.一種用于檢測(cè)人ABO血型的反定型用紅細(xì)胞試劑盒，由盒體和試劑組成，試劑設(shè)置在盒體中，試劑由A型試劑、B型試劑和O型試劑組成，所述的A型試劑由紅細(xì)胞保存液和A型壓積紅細(xì)胞組成、所述的B型試劑由紅細(xì)胞保存液和B型壓積紅細(xì)胞組成，所述的O型試劑由紅細(xì)胞保存液和O型壓積紅細(xì)胞組成，其特征在于所述的紅細(xì)胞保存液由葡萄糖、枸櫞酸三鈉、枸櫞酸、磷酸二氫鈉、乙二胺四乙酸二鈉、核苷酸和抗生素組成，其中，所述的葡萄糖占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為1.7-2.1％，所述的枸櫞酸三鈉占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為2.0-2.2％，所述的枸櫞酸占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為0.030-0.040％，所述的磷酸二氫鈉占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為0.20-0.30％，所述的乙二胺四乙酸二鈉占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為0.08-0.12％，所述的核苷酸占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為0.040-0.045％，所述的抗生素占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為0.001-0.002％，余量為蒸餾水，所述的A型壓積紅細(xì)胞通過(guò)如下方法制備，首先將至少三人份的A型血液去血漿，然后混合，然后用適量的生理氯化鈉溶液洗滌紅細(xì)胞至少兩次，再分別用適量紅細(xì)胞保存液洗滌紅細(xì)胞至少一次，在3-5℃洗滌離心，3000-4000轉(zhuǎn)/分10-20分鐘，最后一次離心后，3000-4000轉(zhuǎn)/分15-25分鐘，棄血清，沉淀即為A壓積紅細(xì)胞，所述的B型壓積紅細(xì)胞的制備方法同所述的A型壓積紅細(xì)胞的制備方法，所述的O型壓積紅細(xì)胞的制備方法同所述的A型壓積紅細(xì)胞的制備方法，在所述的A型試劑中，所述的A型壓積紅細(xì)胞占所述的A型試劑的濃度為2-5％，余量為所述的紅細(xì)胞保存液，在所述的B型試劑中，所述的B型壓積紅細(xì)胞占所述的A型試劑的濃度為2-5％，余量為所述的紅細(xì)胞保存液，在所述的O型試劑中，所述的O型壓積紅細(xì)胞占所述的A型試劑的濃度為2-5％，余量為所述的紅細(xì)胞保存液。
2. 如權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)人ABO血型的反定型用紅細(xì)胞試劑盒，其特 征在于所述的葡萄糖占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為1.9%，所述 的枸櫞酸三鈉占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為2.1%，所述的枸櫞酸 占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為0.035%，所述的磷酸二氫鈉占所述 的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為0.25%，所述的乙二胺四乙酸二鈉占所述 的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為0.1%，所述的核苷酸占所述的紅細(xì)胞保存 液的質(zhì)量百分比為0.043%，所述的抗生素占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百 分比為0.0015%，余量為蒸餾水。
3. 如權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)人AB0血型的反定型用紅細(xì)胞試劑盒，其 特征在于所述的A型壓積紅細(xì)胞通過(guò)如下方法制備，首先將至少三人份的 A型血液去血漿，然后混合，然后用適量的生理氯化鈉溶液洗滌紅細(xì)胞三 次，再分別用適量紅細(xì)胞保存液洗滌紅細(xì)胞一次，在4t:洗滌離心，3500 轉(zhuǎn)/分15分鐘，最后一次離心后，3500轉(zhuǎn)/分20分鐘，棄血清，沉淀即為 壓積紅細(xì)胞。
4. 如權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)人AB0血型的反定型用紅細(xì)胞試劑盒，其 特征在于所述的B型壓積紅細(xì)胞通過(guò)如下方法制備，首先將至少三人份的 B型血液去血漿，然后混合，然后用適量的生理氯化鈉溶液洗滌紅細(xì)胞三 次，再分別用適量紅細(xì)胞保存液洗滌紅細(xì)胞一次，在4。C洗滌離心，3500 轉(zhuǎn)/分15分鐘，最后一次離心后，3500轉(zhuǎn)/分20分鐘，棄血清，沉淀即為 壓積紅細(xì)胞。
5. 如權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)人AB0血型的反定型用紅細(xì)胞試劑盒，其 特征在于所述的O型壓積紅細(xì)胞通過(guò)如下方法制備，首先將至少三人份的 O型血液去血漿，然后混合，然后用適量的生理氯化鈉溶液洗滌紅細(xì)胞三 次，再分別用適量紅細(xì)胞保存液洗滌紅細(xì)胞一次，在4。C洗滌離心，3500 轉(zhuǎn)/分15分鐘，最后一次離心后，3500轉(zhuǎn)/分20分鐘，棄血清，沉淀即為壓積紅細(xì)胞。
全文摘要
本發(fā)明的一種用于檢測(cè)人ABO血型的反定型用紅細(xì)胞試劑盒，試劑盒由A型試劑、B型試劑和O型試劑組成，A型試劑由紅細(xì)胞保存液和A型壓積紅細(xì)胞組成、B型試劑由紅細(xì)胞保存液和B型壓積紅細(xì)胞組成，O型試劑由紅細(xì)胞保存液和O型壓積紅細(xì)胞組成，紅細(xì)胞保存液由葡萄糖、枸櫞酸三鈉、枸櫞酸、磷酸二氫鈉、乙二胺四乙酸二鈉、核苷酸和抗生素組成；本發(fā)明因?yàn)閷⑵咸烟?、枸櫞酸三鈉、枸櫞酸、磷酸二氫鈉、乙二胺四乙酸二鈉、核苷酸和抗生素按一定的配比制成紅細(xì)胞保存液，由該紅細(xì)胞保存液保存的壓積紅細(xì)胞，可以更好的保存壓積紅細(xì)胞，使得壓積紅細(xì)胞能夠較長(zhǎng)時(shí)間的保持穩(wěn)定，增加長(zhǎng)距離運(yùn)輸?shù)目尚行?，使得本發(fā)明可以進(jìn)行商品化的生產(chǎn)和銷售。
文檔編號(hào)G01N33/80GK101178410SQ20061011802
公開(kāi)日2008年5月14日 申請(qǐng)日期2006年11月7日 優(yōu)先權(quán)日2006年11月7日
發(fā)明者丁蘇鄂, 劉劍榮, 包于勤, 沈軼明, 曄 王, 詹申宏, 顧桂玲 申請(qǐng)人:上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司