)，置于25°C恒溫培養(yǎng)箱中，暗處培養(yǎng)。
[003引每日采用稱重法加水W保持濾紙濕潤。試驗處理2d后，進(jìn)行根系長度的測定，計 算相同濃度的培養(yǎng)皿中根系長度的平均值。
[0039] 試驗結(jié)果如圖1、圖2和圖3所示；經(jīng)抗生素處理2d后，低濃度的四環(huán)素和±霉素 刺激了白菜種子根的伸長，而高濃度的四環(huán)素和±霉素則是抑制了根的伸長，可見，抗生素 影響了根長的生長，根長對四環(huán)素類抗生素的作用較為敏感。
[0040] 當(dāng)抗生素濃度為40mg ?。時根伸長受到抑制的程度為金霉素〉±霉素〉四環(huán)素， 說明白菜根長對于金霉素和±霉素的污染更為敏感。
[0041] 2、抗生素濃度與植物種子根系長度的相關(guān)性和回歸分析
[0042] 基于上述的根長試驗，對處理抗生素濃度與根長進(jìn)行相關(guān)性和回歸分析，結(jié)果如 表1所示；在四環(huán)素、±霉素和金霉素的濃度在0. 25mg ?。~40mg ? L^i范圍內(nèi)，添加的 抗生素濃度和根長有較高的線性回歸關(guān)系，其線性回歸的相關(guān)系數(shù)最高可達(dá)93%，說明在 0. 25mg ?。~40mg ? 1^1的濃度范圍內(nèi)，根系長度可W作為診斷指示抗生素的污染的指標(biāo) 之一。
[0043] 表1外源添加抗生素濃度和白菜種苗根長的回歸分析
[0044]
[0045] 注；T代表四環(huán)素處理，0代表±霉素處理，C代表金霉素處理
[0046] 二、±壤中四環(huán)素類抗生素對種子發(fā)芽根伸長的毒性檢測方法建立
[0047]1、±壤中白菜種子發(fā)芽后主根長度的測定
[0048] 供試±壤類型為青紫泥（屬于水稻±±類）。青紫泥分別采自浙江省嘉興農(nóng)科 院試驗田的表層±壤（0~30cm)。有效P為23. 7mg ? kg-i，有效K為265mg ? kg-i，堿解氮 146. Omg.kg-i，抑為6.21?！罉釉谠囼炃敖?jīng)風(fēng)干、混勻、過5mm ±篩。供試白菜品種早熟8 號（浙江省農(nóng)科院蔬菜研究所）。試驗前種子用0. 3%高猛酸鐘消毒30min，然后用去離子 沖洗3次待用。
[0049] ±壤試驗方法采用保濕培養(yǎng)進(jìn)行試驗，在潔凈烘干的直徑9cm培養(yǎng)皿中平鋪一層 濾紙，加入約0. 5cm厚、過5mm±篩的±壤（每皿約60g)，加入16mL含一定含量抗生素的去 離子水（預(yù)備試驗表明，加入16mL去離子水使±壤含水量比較適宜種子萌發(fā)），使±壤抗生 素濃度分別為0,1，2, 3,4, 5mg?kg人平衡化后，用綴子將預(yù)處理后的種子均勻放入培養(yǎng) 皿，保持種子胚根末端與生長方向呈垂直，每皿放置25顆種子。重復(fù)3次。蓋好培養(yǎng)皿，將 其放置在25°C培養(yǎng)箱，避光培養(yǎng)，期間必要時添加去離子水，保持±壤濕潤。培養(yǎng)3d后，觀 察根長。
[0化0] 試驗結(jié)果如圖4、圖5、圖6所示；在±壤抗生素濃度為0~5mg'kg4范圍內(nèi)，不同 濃度四環(huán)素沒有導(dǎo)致白菜種子根生長受到了抑制，而上霉素和金霉素則顯著地抑制了白菜 種子根的伸長，都隨著抗生素濃度的增加而抑制程度增加，且抑制程度為金霉素〉上霉素。 說明青紫泥±壤中的白菜根長對抗生素的敏感性與±壤溶液中的一致。
[0化1] 2、±壤中抗生素濃度與白菜根長的相關(guān)性和回歸分析
[0化2] 基于上述的±壤白菜種子發(fā)芽試驗，對處理抗生素濃度與根長指標(biāo)進(jìn)行回歸分 析，結(jié)果如表2所示；在±壤抗生素濃度為0~5mg，kg4范圍內(nèi)，上壤中四環(huán)素的濃度和種 子根長沒有顯著的線性關(guān)系，而±壤中的±霉素和金霉素濃度和白菜種子根長指標(biāo)有較高 的線性回歸關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)最高可達(dá)到98%，說明在較低的濃度0~5mg?kg-i范圍內(nèi)， 白菜種子根長指標(biāo)可W作為診斷±霉素和金霉素的污染的指標(biāo)之一，而對于四環(huán)素可能只 能進(jìn)行更高濃度的診斷。
[0化3]表2±壤外源添加抗生素濃度和白菜根長的回歸分析[0054]
[0化5] 注；T代表四環(huán)素處理，0代表±霉素處理，C代表金霉素處理。
【主權(quán)項】
1. 一種土壤四環(huán)素類抗生素污染的診斷方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 將植物種子放置到一組含有抗生素濃度呈梯度分布的土壤中培養(yǎng)，培養(yǎng)3天后檢 測植物種子的根系長度，計算根系長度的平均值； (2) 建立土壤中抗生素濃度與所述平均值之間的關(guān)系曲線； (3) 對含有抗生素的待測土壤進(jìn)行預(yù)處理，將植物種子放置到待測土壤中培養(yǎng)，經(jīng)過與 步驟（1)相同的培養(yǎng)時間后，檢測植物種子的根系長度，根據(jù)所述關(guān)系曲線計算得到待測 土壤中抗生素的濃度。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的四環(huán)素類抗生素污染的診斷方法，其特征在于，所述植物種 子為白菜種子，品種為早熟8號。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的四環(huán)素類抗生素污染的診斷方法，其特征在于，所述抗生素 為土霉素和金霉素。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的四環(huán)素類抗生素污染的診斷方法，其特征在于，采用線性回 歸方程擬合建立關(guān)系曲線。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的四環(huán)素類抗生素污染的診斷方法，其特征在于，植物種子在 所述土壤中培養(yǎng)3天后，所述的關(guān)系曲線為： y4= -0? 162x+3. 16, R2= 0? 831，0 彡 y 4彡 5 ; y5= -0? 251x+3. 29, R2= 0? 975,0 彡 y 5彡 5 ; 式中，74為土壤中土霉素的濃度，單位為mg ? kg、75為土壤中金霉素的濃度，單位為 mg ? kg_1;x為根系長度，單位為cm ? plant '6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的四環(huán)素類抗生素污染的診斷方法，其特征在于，步驟（1)和步 驟（3)中，在培養(yǎng)之前，植物種子需用0. 3%的高錳酸鉀溶液消毒30分鐘。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的四環(huán)素類抗生素污染的診斷方法，其特征在于，所述植物種 子的培養(yǎng)條件為：25 °C的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，置于暗處培養(yǎng)。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的四環(huán)素類抗生素污染的診斷方法，其特征在于，步驟（1)中， 所述土壤的類型為青紫泥。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種土壤四環(huán)素類抗生素污染的診斷方法，包括：將植物種子放置到一組含有抗生素濃度呈梯度分布的土壤中培養(yǎng)，培養(yǎng)3天后檢測植物種子的根系長度，計算根系長度的平均值；建立土壤中抗生素濃度與所述平均值之間的關(guān)系曲線；對含有抗生素的待測土壤進(jìn)行預(yù)處理，將植物種子放置到待測土壤中培養(yǎng)，培養(yǎng)3天后，檢測植物種子的根系長度，根據(jù)所述關(guān)系曲線計算得到待測土壤中抗生素的濃度。所述植物種子為早熟8號，所述土壤為青紫泥，所述抗生素為土霉素和金霉素，所述土壤抗生素濃度梯度范圍為0～5mg·kg-1。本發(fā)明能夠反映待測樣品中抗生素的濃度，其簡單、快速、成本低廉的特點克服了傳統(tǒng)抗生素檢測方法的局限性。
【IPC分類】G01N33/24
【公開號】CN104950094
【申請?zhí)枴緾N201510334184
【發(fā)明人】楊肖娥, 劉娣, 盧玲麗, 田生科
【申請人】浙江大學(xué)
【公開日】2015年9月30日
【申請日】2015年6月16日