基清除實驗；圖4B為還原能力測定（FRAP值）；圖4C為ABTS自由基清除實驗；圖4D為 陽性對照維生素C的抗氧化活性；
[0041]圖5為從大薊和小薊中提取得到的揮發(fā)油的緩慢清除ABTS自由基的動力學(xué)圖；其 中，圖5A為采用標準方法從大薊中提取得到的揮發(fā)油的ABTS自由基清除活性；圖5B為采 用優(yōu)化方法從大薊中提取得到的揮發(fā)油的ABTS自由基清除活性；圖5C為采用標準方法從 小薊中提取得到的揮發(fā)油的ABTS自由基清除活性；圖?為采用優(yōu)化方法從小薊中提取得 到的揮發(fā)油的ABTS自由基清除活性。
【具體實施方式】
[0042] 下面結(jié)合實施例以及附圖對本發(fā)明作進一步詳細的描述，但本發(fā)明的實施方式不 限于此。
[0043] 實施例1 :優(yōu)化方法
[0044] 一種大薊/小薊中揮發(fā)油的提取與檢測方法，具體包括以下步驟：
[0045] (1)將大薊或小薊干燥的地上部分粉碎過篩，置于蒸餾瓶中，加入蒸餾水，浸泡，連 接水蒸氣蒸餾蒸餾裝置（采用改進裝置），加熱浸提，收集上層揮發(fā)油；
[0046] (2)利用DesignExpert8.0?5軟件根據(jù)Box-Benhnken試驗設(shè)計原理，以浸泡時 間、提取溫度、提取時間和液固比為考察變量，總揮發(fā)油得率為響應(yīng)值，進行響應(yīng)面優(yōu)化；測 試結(jié)果如表1所示，方差分析如表2所示；
[0047] (3)采用氣相色譜_質(zhì)譜聯(lián)用對優(yōu)化后提取的揮發(fā)油進行檢測分析；其中色譜條 件：載氣為He，進樣量為lyL，進口溫度為220°C，傳輸線溫度設(shè)為250°C，分流比為1:10 ; 升溫程序設(shè)定如下：初始溫度為40°C保留2min，然后以5°C/min升至250°C，保留5min，， 流速設(shè)為1.OmL/min;質(zhì)譜條件為EI電離源，電子轟擊離子化電壓為70eV，質(zhì)譜掃描范圍設(shè) 為33. 0-500.Oamu，離子源溫度為230°C;采用優(yōu)化工藝所提取的揮發(fā)油各成分含量檢測分 析結(jié)果如表3-1、表3-2所示；
[0048] (4)對大薊或小薊中的揮發(fā)油進行輔助檢測分析：
[0049] 取1.Og大薊或小薊粉末放入20ml頂空樣品瓶中，加入1. 5g氯化鈉以及4ml蒸餾 水，旋緊蓋子，搖勻，得到混懸液；將混懸液進行于50°C平衡20min，然后將75ymCAR/PDMS 萃取頭插入頂空瓶中進行萃取，萃取的溫度為50°C，萃取的時間為40min;萃取結(jié)束后，取 出萃取頭插入GC-MS裝置中的氣相色譜進樣口，于250°C解吸3min，樣品通過毛細管柱進行 分離，分離后的樣品用質(zhì)譜鑒定；所提取的揮發(fā)油各成分含量輔助檢測分析結(jié)果如表4所 示；
[0050] 其中所述色譜條件：載氣為He，進樣量為1UL，進口溫度為250°C，傳輸線溫度設(shè) 為280°C，分流比為1:10,升溫程序設(shè)定如下：初始溫度為40°C保留2min，然后以5°C/min 升至250°C，保留5min,，流速設(shè)為1.OmL/min;
[0051] 所述質(zhì)譜條件為EI電離源，電子轟擊離子化電壓為70eV，傳輸線溫度280°C，離子 源溫度為250°C，質(zhì)譜掃描范圍設(shè)為33. 0-500.Oamu。
[0052] 響應(yīng)面優(yōu)化測試結(jié)果：
[0053] 優(yōu)化行為可由以下二次方程進行解釋：
[0054]
【主權(quán)項】
1. 一種薊屬植物中揮發(fā)油的提取與檢測方法，其特征在于：具體包括以下步驟： (1) 采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油： 將干燥的薊屬植物地上部分粉碎，過篩，置于反應(yīng)器中，加入蒸餾水，浸泡，連接水蒸氣 蒸餾裝置，加熱浸提，收集上層揮發(fā)油；所述薊屬植物為大薊或小薊； (2) 響應(yīng)面優(yōu)化： 在單因素試驗基礎(chǔ)上，選取考察變量和響應(yīng)值，利用Design Expert 8.0. 5軟件根據(jù) Box-Benhnken試驗設(shè)計原理，對考察變量和響應(yīng)值進行響應(yīng)面優(yōu)化，得到優(yōu)化工藝參數(shù)； 其中大薊以浸泡時間、提取溫度和液固比為考察變量，總揮發(fā)油得率為響應(yīng)值；小薊以浸泡 時間、提取時間和液固比為考察變量，總揮發(fā)油得率為響應(yīng)值； (3) 采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用對水蒸氣蒸餾法提取的揮發(fā)油進行檢測分析； (4) 對薊屬植物中的揮發(fā)油進行輔助檢測分析： 通過頂空固相微萃取法提取薊屬植物中的揮發(fā)油，再采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用進行檢 測分析；所述薊屬植物為大薊或小薊。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述薊屬植物中揮發(fā)油的提取與檢測方法，其特征在于： 所述水蒸氣蒸餾裝置包括蒸餾瓶、冷凝器以及揮發(fā)油收集裝置，所述揮發(fā)油收集裝置 的一接口與蒸餾瓶連接，一接口與冷凝器連接，另一接口與儲存裝置連接，所述揮發(fā)油收集 裝置外表面設(shè)置帶有進水口和出水口的二次冷凝套，揮發(fā)油經(jīng)過加熱浸提，隨著水蒸氣揮 發(fā)通過揮發(fā)油收集裝置進入冷凝器中，經(jīng)過冷凝器的冷凝，揮發(fā)油落入收集裝置中，再經(jīng)過 冷凝套的第二次冷凝。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述薊屬植物中揮發(fā)油的提取與檢測方法，其特征在于：步驟（1) 中所述浸泡溫度為20-30°C，浸泡時間為l_12h;步驟（1)中所述提取溫度為80-160°C，提 取時間為I-IOh ;步驟（1)中所述液固比為（10-30)mL:lg。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述薊屬植物中揮發(fā)油的提取與檢測方法，其特征在于：步驟（3) 中所述氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用為美國Agilent公司的GC6890-MSD5975 ;所述色譜條件：載氣 為He，進樣量為IyL，進口溫度為220°C，傳輸線溫度設(shè)為250°C，分流比為1:10,升溫程序 設(shè)定如下：初始溫度為40°C保留2min，然后以5°C/min升至250°C，保留5min，，流速設(shè)為 I.OmT,/min； 所述質(zhì)譜條件為EI電離源，電子轟擊離子化電壓為70eV，質(zhì)譜掃描范圍設(shè)為 33. 0-500.Oamu，離子源溫度為 230°C。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述薊屬植物中揮發(fā)油的提取與檢測方法，其特征在于：步驟（4) 中所述對薊屬植物中的揮發(fā)油進行輔助檢測分析，具體包括以下步驟：（1-1)將大薊或小 薊進行粉碎，過篩；取〇. 5-1.Og大薊或小薊粉末放入20ml頂空樣品瓶中，加入0. 75-1. 5g 氯化鈉以及2-4ml蒸餾水，旋緊蓋子，搖勻，得到混懸液；（1-2)將混懸液進行平衡，然后將 萃取頭插入頂空瓶中進行萃??；（1-3)萃取結(jié)束后，取出萃取頭插入GC-MS裝置中的氣相色 譜進樣口，解吸，樣品通過毛細管柱進行分離，分離后的樣品用質(zhì)譜鑒定。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述薊屬植物中揮發(fā)油的提取與檢測方法，其特征在于：步驟（1-2) 中所述平衡的條件為于35-50°C平衡10_50min;所述萃取的溫度為30-50°C，萃取的時間為 30-60min;步驟（1-3)中所述解吸的溫度為220-250°C，解吸的時間為2-6min。
7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述薊屬植物中揮發(fā)油的提取與檢測方法，其特征在于：步驟（1-2) 和（1-3)中所述萃取頭為75ym CAR/PDMS; 步驟（1-3)中所述GC-MS為配備有毛細管柱的GC-MS，其型號為美國Thermo Fisher Scientific 公司的 Trace DSQ II，所述毛細管柱為 30mX0.25mmX0.25 ym 的 TR-5MS 毛細 管柱； 所述色譜條件：載氣為He，進樣量為IyL，進口溫度為250°C，傳輸線溫度設(shè)為280°C， 分流比為1:10,升溫程序設(shè)定如下：初始溫度為40°C保留2min，然后以5°C/min升至 250°C，保留 5min,，流速設(shè)為I.OmL/min; 所述質(zhì)譜條件為EI電離源，電子轟擊離子化電壓為70eV，離子源溫度為250°C，質(zhì)譜掃 描范圍設(shè)為33. 0-500.0 amu。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述薊屬植物中揮發(fā)油的提取與檢測方法，其特征在于：步驟（2) 中所述大薊經(jīng)過響應(yīng)面優(yōu)化的工藝參數(shù)為浸泡時間6. 19h，提取溫度160°C，液固比15:1 ; 步驟（2)中所述小薊經(jīng)過響應(yīng)面優(yōu)化的工藝參數(shù)為浸泡時間6h，提取時間6. 43h，液固 比 11. 32:1〇
9. 一種由權(quán)利要求1或2或3或9所述提取與檢測方法制備得到薊屬植物揮發(fā)油，其 特征在于：所述薊屬植物揮發(fā)油為大薊揮發(fā)油或小薊揮發(fā)油。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述薊屬植物揮發(fā)油的應(yīng)用，其特征在于：所述薊屬植物揮發(fā)油用 于藥物、保健品、食品以及化妝品領(lǐng)域。
【專利摘要】本發(fā)明屬于提取與分析檢測的技術(shù)領(lǐng)域，公開了薊屬植物中揮發(fā)油的提取與檢測方法及該揮發(fā)油的應(yīng)用。步驟為(1)將干燥的薊屬植物地上部分粉碎，過篩，置于反應(yīng)器中，加入蒸餾水，浸泡，連接水蒸氣蒸餾裝置，加熱浸提，收集上層揮發(fā)油；(2)在單因素試驗基礎(chǔ)上，選取考察變量和響應(yīng)值，利用軟件根據(jù)Box--Benhnken試驗設(shè)計原理，對考察變量和響應(yīng)值進行響應(yīng)面優(yōu)化，得到優(yōu)化工藝參數(shù)；(3)采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用對水蒸氣蒸餾法提取的揮發(fā)油進行檢測分析；(4)對薊屬植物中揮發(fā)油進行輔助檢測分析。本發(fā)明的水蒸氣蒸餾法工藝簡單，環(huán)保無污染，并通過改進和優(yōu)化提高了揮發(fā)油的得率，所制備的揮發(fā)油具有較高的抗氧化活性。
【IPC分類】G01N30-88, G01N30-06
【公開號】CN104820050
【申請?zhí)枴緾N201510200996
【發(fā)明人】姜建國, 曾巧輝, 趙江彬
【申請人】華南理工大學(xué)
【公開日】2015年8月5日
【申請日】2015年4月24日