一種超高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀同時檢測白酒中6種甜味劑的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種白酒中甜味劑的檢測方法，具體地說是一種超高效液相色譜-三 重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀同時檢測白酒中6種甜味劑的方法，屬于酒類分析技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 白酒是中國傳統(tǒng)產(chǎn)品，有著上千年的歷史，散發(fā)的醇甜感深受消費者的喜愛。但 是，不少酒類企業(yè)從自身利益出發(fā)，在酒中添加甜味劑以改善口感，也有部分企業(yè)因原材料 進貨把關(guān)不嚴，使用含有甜味劑的酒用香精香料，造成白酒產(chǎn)品中甜味劑超標。媒體中關(guān)于 此現(xiàn)象的報道頻出，引起市場上消費者的恐慌。研宄表明，攝入高劑量的甜味劑會對人體的 肝臟和神經(jīng)系統(tǒng)造成傷害，甚至引發(fā)癌癥，因此甜味劑的分析檢測不僅關(guān)系到產(chǎn)品的質(zhì)量， 更與廣大消費者的健康、安全密不可分。
[0003] 在現(xiàn)代食品工業(yè)中廣泛使用的人工合成甜味劑主要包括安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素、 阿斯巴甜、三氯蔗糖、紐甜、阿力甜、苯甲酸、山梨酸等。其在日常食品中應(yīng)用范圍越來越廣， 使用量越來越大，同時，人工合成甜味劑的安全性問題一直是各國爭論和相關(guān)科研機構(gòu)所 關(guān)注的熱點。為保護我國傳統(tǒng)產(chǎn)品，國家出臺了食品添加劑使用標準（GB2760-2011)，明確 規(guī)定，酒類產(chǎn)品中除配制酒種可限量添加外，其他酒種不得使用甜味劑。然而由于適用于白 酒中甜味劑的檢測方法較少，給相關(guān)檢驗部門造成檢驗困難。因此針對白酒中甜味劑建立 合理、有效的分析方法迫在眉睫。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種超高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀同時檢測 白酒中6種甜味劑的方法。本發(fā)明不但可以同時定性、定量的檢測安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素、 阿斯巴甜、三氯蔗糖和紐甜6種甜味劑，而且快速、簡便、靈敏度高。
[0005] 本發(fā)明解決技術(shù)問題，采用如下技術(shù)方案：
[0006] 本發(fā)明超高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀同時檢測白酒中6種甜味劑的方 法，其特點在于：
[0007] 所用儀器為超高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀UPLC-MS/MS，包括超高效液 相色譜儀UPLC和三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀MS/MS ;
[0008] 所述方法是按如下步驟進行：
[0009] (1)待測白酒的前處理
[0010] 移取5mL待測白酒于比色管中，用氮吹儀進行處理，去除待測白酒中的醇類物質(zhì)， 直至待測白酒剩余1~2mL，用超純水定容至5mL，經(jīng)0. 22 μ m水系濾膜過濾后獲得待測樣 品；
[0011] (2)所用儀器的條件設(shè)定
[0012] 設(shè)定所述超高效液相色譜儀UPLC的條件為：
[0013] 色譜柱為BEH C18色譜柱；
[0014] 色譜柱溫為30~40 °C ;
[0015] 流動相：A相為甲醇；B相為0. 5~2mM乙酸銨水溶液，在所述乙酸銨水溶液中含體 積濃度為〇. 1 %~〇. 3 %的乙酸；
[0016] 流速為 0· 2 ~0· 3mL/min ；
[0017] 洗脫方式為梯度洗脫：初始至4min時流動相A體積占0~10 %，流動相B的體 積占90~100 % ;4min~6min時流動相A的體積為30~40 %，流動相B的體積為60~ 70% ;6min~8min時流動相A的體積為90~100%，流動相B的體積為0~10% ;8min~ 8. Imin時流動相A的體積為80~100%，流動相B的體積為0~20% ;8. Imin以后流動相 A的體積為0~10%，流動相B的體積為90~100%。
[0018] 進樣量為2yL;
[0019] 檢測所用時間為IOmin ;
[0020] 設(shè)定所述三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀MS/MS的條件為：
[0021] 離子化模式為電噴霧離子源；
[0022] 掃描方式為負離子模式；
[0023] 脫溶劑氣溫度為400~500 °C ;
[0024] 錐孔氣流量為40~50L/H ;
[0025] 脫溶劑氣流量為500~1000L/H ;
[0026] 毛細管電壓為I. 0~3. OkV ;
[0027] 錐孔電壓為3~5V;
[0028] (3)各甜味劑保留時間和監(jiān)測離子的確定
[0029] 分別取安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素、阿斯巴甜、三氯鹿糖和紐甜配制濃度為300ng/mL 的單標工作溶液，將各單標工作溶液通過三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀進行母離子的掃描，確定 各甜味劑的監(jiān)測離子和定量離子對，然后將各單標工作溶液進行UPLC-MS/MS檢測，確定各 甜味劑的保留時間；
[0030] (4) 6種甜味劑標準曲線的繪制
[0031] 取安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素、阿斯巴甜、三氯蔗糖和紐甜配制質(zhì)量濃度范圍在50~ 1000ng/mL的混合系列標準工作溶液，然后按照（2)所設(shè)定的儀器的條件取混合系列標準 工作溶液進樣，分別進樣2 μ L，作UPLC-MS/MS檢測，以各甜味劑的峰面積對其所相應(yīng)的質(zhì) 量濃度進行線性回歸，獲得6種甜味劑的線性回歸方程，各線性回歸方程所對應(yīng)的曲線，即 為相應(yīng)甜味劑的標準曲線；
[0032] 所述的6種甜味劑對應(yīng)的線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)r2見表1，方程中Y即為相應(yīng) 甜味劑所對應(yīng)的峰面積，X即為甜味劑的質(zhì)量濃度；
[0033] 表1 :6種甜味劑的線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限、定量限
[0034]
【主權(quán)項】
1. 一種超高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀同時檢測白酒中6種甜味劑的方法， 其特征在于： 所述6種甜味劑為安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素、阿斯巴甜、三氯蔗糖和紐甜； 所用儀器為超高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀UPLC-MS/MS，包括超高效液相色 譜儀UPLC和三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀MS/MS ; 所述方法是按如下步驟進行： (1) 待測白酒的前處理 移取5mL待測白酒于比色管中，用氮吹儀進行處理，去除待測白酒中的醇類物質(zhì)，直至 待測白酒剩余1~2mL，用超純水定容至5mL，經(jīng)0. 22 μ m水系濾膜過濾后獲得待測樣品； (2) 所用儀器的條件設(shè)定 設(shè)定所述超高效液相色譜儀UPLC的條件為： 色譜柱為BEH C18色譜柱； 色譜柱溫為30~40 °C ; 流動相：A相為甲醇；B相為0. 5~2mM乙酸銨水溶液，在所述乙酸銨水溶液中含體積濃 度為0. 1 %~0.3%的乙酸； 流速為 〇· 2 ~0· 3mL/min ； 洗脫方式為梯度洗脫； 進樣量為2μΜ 檢測所用時間為IOmin ; 設(shè)定所述三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀MS/MS的條件為： 離子化模式為電噴霧離子源； 掃描方式為負尚子模式； 脫溶劑氣溫度為400~500 °C ; 錐孔氣流量為40~50L/H ; 脫溶劑氣流量為500~1000L/H ; 毛細管電壓為I. 〇~3. OkV ; 錐孔電壓為3~5V ; (3) 各甜味劑保留時間和監(jiān)測離子的確定 分別取安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素、阿斯巴甜、三氯蔗糖和紐甜配制濃度為300ng/mL的單 標工作溶液，將各單標工作溶液通過三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀進行母離子的掃描，確定各甜 味劑的監(jiān)測離子和定量離子對，然后將各單標工作溶液進行UPLC-MS/MS檢測，確定各甜味 劑的保留時間； (4) 6種甜味劑標準曲線的繪制 取安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素、阿斯巴甜、三氯蔗糖和紐甜配制質(zhì)量濃度范圍在50~ 1000ng/mL的混合系列標準工作溶液，然后按照（2)所設(shè)定的儀器的條件取混合系列標準 工作溶液進樣，分別進樣2 μ L，作UPLC-MS/MS檢測，以各甜味劑的峰面積對其所相應(yīng)的質(zhì) 量濃度進行線性回歸，獲得6種甜味劑的線性回歸方程，各線性回歸方程所對應(yīng)的曲線，即 為相應(yīng)甜味劑的標準曲線； (5) 待測樣品的測試 取待測樣品進樣，進樣體積為2 μ L，作UPLC-MS/MS檢測，獲得待測樣品的質(zhì)譜圖和色 譜圖，根據(jù)保留時間和6種甜味劑的監(jiān)測離子對待測樣品進行定性分析，根據(jù)6種甜味劑的 標準曲線對待測樣品進行定量分析。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于： 梯度洗脫的方法為：初始至4min時流動相A體積為O~10%，流動相B的體積為90~ 100 % ;4min~6min時流動相A的體積為30~40 %，流動相B的體積為60~70 % ;6min~ 8min時流動相A的體積為90~100 %，流動相B的體積為0~10% ;8min~8. Imin時流 動相A的體積為80~100 %，流動相B的體積為0~20% ;8. Imin~IOmin流動相A的體 積為〇~10%，流動相B的體積為90~100%。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種超高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀同時檢測白酒中6種甜味劑(安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素、阿斯巴甜、三氯蔗糖、紐甜)的方法，是將酒樣氮吹除醇，經(jīng)超高效液相色譜儀分離后，采用三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜儀進行多反應(yīng)離子監(jiān)測模式檢測。本發(fā)明6種甜味劑在50～1000ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系好，相關(guān)系數(shù)r2均大于0.993，樣品的平均回收率在90～120％，檢出限在2.69～5.16ng/mL，本發(fā)明方法準確可靠、簡單快捷，可用于同時檢測白酒中6種甜味劑。
【IPC分類】G01N30-02
【公開號】CN104634895
【申請?zhí)枴緾N201510073792
【發(fā)明人】劉國英, 湯有宏, 王銀輝, 李亭亭, 李安軍, 馬雷
【申請人】安徽古井貢酒股份有限公司, 安徽瑞思威爾科技有限公司
【公開日】2015年5月20日
【申請日】2015年2月11日