專利名稱：血清1,5－脫水葡萄糖醇測定試劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及生化技術及生物化學檢驗技術，特別是用于體外定量測定血清中血清1，5-脫水葡萄糖醇(1，5-AG)含量的檢測技術。
1，5-脫水葡萄糖醇(1，5-AG)可作為糖尿病患者早期診斷靈敏特異性指標，亦可作為糖尿病治療和愈后觀察的評價指標。現(xiàn)行糖尿病診斷指標有明顯不足，空腹血糖測定不靈敏，其決定水平難以定論，尤其對于Ⅱ型糖尿病病人漏診率高；口服糖耐量試驗雖可動態(tài)觀察血糖的變化，但操作麻煩，對于已明確診斷患者，在治療、愈后觀察中采用，危險性大，且易誘發(fā)高血糖危象；糖化Hb雖然是一種早期診斷指標，但它是一項半定量分析，不能滿足臨床需求。
本發(fā)明的目的是提供一種測定血清中1，5-脫水葡萄糖醇(1，5-AG)含量的檢測試劑，使其具有操作簡便、安全，具有特異性高、靈敏度、能消除血樣中多羥醇的干擾、單項測定即可早期診斷Ⅰ、Ⅱ型糖尿病以及觀察治療其預后等特點。
本發(fā)明檢測試劑的檢測原理是吡喃糖氧化酶(PROD)催化1，5-AG生成1，5-脫水果糖和H2O2；氨替比啉(4-ΛΛP)、二氯苯酚(DCP)和H2O2反應，在過氧化物酶(POD)催化下生成醌類化合物(紅色)；利用比色分析原理可以得出1，5-AG水平。
本發(fā)明提供的測定血清中1，5-脫水葡萄糖醇(1，5-AG)含量的檢測試劑包括試劑Ⅰ和試劑Ⅱ兩個部分，試劑Ⅰ是含有丙酮酸激酶、葡萄糖激酶、維生素C氧化酶、三磷酸腺苷、磷酸烯醇丙酮酸、4-氨基安替比林、氯化鎂、氯化鉀和醋酸鹽緩沖液的溶液；試劑Ⅱ是含有吡喃糖氧化酶、辣根過氧化物酶、苯酚、醋酸鹽緩沖液的溶液。試劑Ⅰ、試劑Ⅱ中各組分的含量是
試劑Ⅰ(每升試劑Ⅰ溶液中各組分的含量)丙酮酸激酶(PK) 2-6ku，葡萄糖氧化酶(GK)1-8ku，維生素C氧化酶 1-10ku，三磷酸腺苷 1-2mmol，磷酸烯醇丙酮酸(PEP) 1-10mmol，4-氨基安替比林 2-3mmol氯化鎂 1-10mmol氯化鉀 5-100mol醋酸鹽緩沖液100-300mmol試劑Ⅱ(每升試劑Ⅱ溶液中各組分的含量)比喃糖氧化膦 10-200ku，辣根過氧化物酶(HRP)5-40ku，苯酚 15-30mmol醋酸鹽緩沖液 100-300mmol使用本發(fā)明提供的檢測試劑測定血清中1，5-脫水葡萄糖醇(1，5-AG)含量，具有操作簡便、安全，具有特異性高、靈敏度高等特點，其試劑Ⅰ與待測樣本作用5分鐘后即可消除血樣中多羥醇的干擾，故有效提高了本發(fā)明試劑檢測的特異性和準確度；本發(fā)明試劑的精確度日內(nèi)CV為0．5-0．8％，對糖尿病，尤其潛在型病例的診治提供可靠診斷依據(jù)，是單項測定即可診斷和判斷Ⅰ、Ⅱ型糖尿病預后的檢查方法。
實施例1．制備檢測試劑取丙酮酸激酶 3ku葡萄糖激酶 4ku維生素C氧化酶 5ku
三磷酸腺苷 1．0mmol磷酸烯醇丙酮酸 4．0mmol4-氨基安替比林 1．5mmol氯化鎂 7．5mmol氯化鉀 5．0mol醋酸鹽緩沖液 200mmol配制成1升溶液制成試劑Ⅰ；取吡喃糖氧化酶 100ku辣根過氧化物酶 10ku苯酚 22mmol醋酸鹽緩沖液 200mmol配制成1升溶液制成試劑Ⅱ。
2．制備1，5-脫水葡萄糖醇標準品稱所需量純品(購于Sigma公司)溶于生理鹽水中，并加1‰疊氮鈉作防腐劑，封密保存?zhèn)溆谩?br> 3．檢測操作
混勻37℃反應10分鐘，以蒸餾水調(diào)零，測定各管的吸光度。4．計算及正常值1，5-脫水葡萄糖醇 正常值 78-250umol／l根據(jù)本實驗室條件，可選用手工測定或全自動生化分析儀，修改實驗參數(shù)使試劑Ⅰ∶試劑Ⅱ∶樣本=20∶10∶3；溶血、黃疸對實驗結果有影響。
以1．5-AG的水平為78umol／l作為臨界值，當1，5-AG的水平低于78umol／l診斷為糖尿病時其靈敏度高、特異性好，與其他實驗方法相比更適合糖尿病的診斷指標。
權利要求
1．一種血清1，5-脫水葡萄糖醇檢測試劑，包括試劑Ⅰ和試劑Ⅱ兩個部分，試劑Ⅰ是含有丙酮酸激酶、葡萄糖激酶、維生素C氧化酶、三磷酸腺苷、磷酸烯醇丙酮酸、4-氨基安替比啉、氯化鎂、氯化鉀和醋酸鹽緩沖液的溶液；試劑Ⅱ是含有吡喃糖氧化酶、辣根過氧化物酶、苯酚、醋酸鹽緩沖液的溶液。
2．根據(jù)權利要求1所述的血清1，5-脫水葡萄糖醇檢測試劑，其特征在于每升試劑Ⅰ溶液中各組分的含量為丙酮酸激酶(PK) 2-6ku，葡萄糖氧化酶(GK)1-8ku，維生素C氧化酶 1-10ku，三磷酸腺苷 1-2mmol，磷酸烯醇丙酮酸(PEP) 1-10mmol，4-氨基安替比啉 2-3mmol氯化鎂 1-10mmol氯化鉀 5100mmol醋酸鹽緩沖液100-300mmol；每升試劑Ⅱ溶液中各組分的含量為吡喃糖氧化酶 10-200ku，辣根過氧化物酶(HRP) 5-40ku，苯酚 15-30mmol醋酸鹽緩沖液 100-300mmol
3．根據(jù)權利要求1、2所述的血清1，5-脫水葡萄糖醇檢測試劑，其特征在于每升試劑Ⅰ溶液中各組分的含量為丙酮酸激酶 3ku葡萄糖激酶 4ku維生素C氧化酶5ku三磷酸腺苷 1．0mmol磷酸烯醇丙酮酸 4．0mmol4-氨基安替比啉 1．5mmol氯化鎂 7．5mmol氯化鉀 5．0mmol醋酸鹽緩沖液 200mmol每升試劑Ⅱ溶液中各組分的含量為吡喃糖氧化酶 100ku辣根過氧化物酶10ku笨酚 22mmol醋酸鹽緩沖液 200mmol
全文摘要
血清1,5－脫水葡萄糖醇檢測試劑,包括試劑Ⅰ和試劑Ⅱ兩個部分,試劑Ⅰ是含有丙酮酸激酶、葡萄糖激酶、維生素C氧化酶、三磷酸腺苷、磷酸烯醇丙酮酸、4－氨基安替比啉、氯化鎂、氯化鉀和醋酸鹽緩沖液的溶液;試劑Ⅱ是含有吡喃糖氧化酶、辣根過氧化物酶、苯酚、醋酸鹽緩沖液的溶液。操作簡便、安全,特異性強、靈敏度高,可快速消除血樣中多羥醇的干擾,能對糖尿病的診治提供可靠依據(jù)。
文檔編號G01N33/52GK1281980SQ9911656
公開日2001年1月31日 申請日期1999年7月26日 優(yōu)先權日1999年7月26日
發(fā)明者艾學蛟, 鄒光楣 申請人:武漢?？爽斏锛夹g有限公司