專利名稱：：具有多層檢驗區(qū)的診斷檢查載體和將它用于測定被分析物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及使用包含在所述檢查載體內(nèi)的試劑體系來測定全血中被分析物的診斷檢查載體，該檢查載體包括顯色劑及由供加入血樣的點樣面和檢測面組成的試驗區(qū)，在檢測面上發(fā)生由所述分析物與所述試劑體系反應導致的光學上可檢測的變化，其設(shè)計形式應使得樣品中的紅血球不擴展到該檢測面。另外，本發(fā)明涉及借助根據(jù)本發(fā)明的診斷檢查載體來測定全血中被分析物的方法。所謂結(jié)合載體試驗經(jīng)常用于體液成分，尤其是血液成分的定性或定量分析。其中，所述試劑保存在與樣品接觸的檢查載體的適當層中。所述液體樣品與試劑的反應產(chǎn)生可檢測的變化，尤其是色澤變化，該變化為肉眼可見的或用儀器(常用反射光度計)可檢測得到的。上述檢查載體通常為條狀檢查載體，它是主要由塑料制成的細長支承層和粘貼在其上的包括一個或多個檢測層的試驗區(qū)所組成。但是，也已知形狀為小的方形或長方形薄片的檢查載體。結(jié)合載體試驗尤其顯示其易操作的特點。但是，非常令人遺憾，在大多數(shù)公知的檢查載體中，液體血液樣品不能直接使用全血形式。從另一觀點來說，需要分離紅細胞(紅血球)以便得到無色血漿即血清。這通常要用離心過程來完成。但是，這增加了處理步驟，需較大量的血液和復雜的儀器。所以，已做了許多償試以便提供能直接分析全血的檢查載體。人們能區(qū)分這兩種根本不同的方法。在第一種方法中，在放所述試樣的試驗區(qū)的同一面上，目視或用儀器來檢測色澤變化。在該情況下，所述試驗區(qū)的結(jié)構(gòu)可以保證所述試樣中的被分析物與透過該試驗區(qū)表面的試劑接觸，而紅血球被除去。一定時間后，擦或洗去試驗區(qū)表面的血液樣品，觀察色澤變化。這類檢查載體的實施例公開于美國專利US-A-3630957和歐洲專利EP-A-0217246中。在第二種方法中，試樣放在所述試驗區(qū)的一個面(點樣面)上，而從另一面(檢測面)測量色澤變化。該法的主要優(yōu)點是不必擦或洗去血樣。所以，這類檢查載體也稱作免擦檢查載體。省去擦洗，不僅去掉一個冗長的處理步驟，而且也杜絕可能的失誤來源，即當應該擦去血樣時，它卻不是正好粘附著，而出現(xiàn)失誤。另一方面，本方法做起來非常困難。一方面要求紅血球過濾器能可靠地濾除血液中深色成分，而另一方面又能使被分析物盡可能全部和迅速地濾過。已證實尋找能滿足以上要求的試驗區(qū)結(jié)構(gòu)是極為困難的。從EP-A-0045476中得知，玻璃纖維用于檢查載體中分離血清或血漿。該方法可以普遍使用，但是需要用適當方式將所述玻璃纖維層固定到檢查載體上。這使所述檢查載體的結(jié)構(gòu)變得更復雜，而且其制備方法也困難。此外，玻璃纖維層吸收液體，吸收的這部分液體不能為檢測層所利用。這意味著需要較多樣品量。在EP-A-0302287號中介紹的試驗區(qū)具有層狀結(jié)構(gòu)，它是通過使含顯色劑的檢測層在面向點樣面的基層上液體成層(liquidlayering)而得。所述基層包含聚合膜形成劑、硅藻土和顏料。所述檢測層包含聚合膜形成劑，它在該液體涂布過程中部分滲入所述基層中，形成過渡區(qū)，使紅血球留在過渡區(qū)中。正如從其實施例中可見的，該含顏料層仍比所述檢測層厚多達十倍。這對該試驗區(qū)的體積要求有相當大的影響。因為只有在所述含顏料層和所述檢測層之間的過渡區(qū)域用作紅血球保留區(qū)，在所述檢測層用液體填充前，所述包含顏料層的較大體積不得不用液體填充。因為目前還沒有一種包括紅血球分離過程的NW檢查載體裝置具有各方面令人滿意的性質(zhì)，所以，在市售的這類檢查載體裝置中完全省去分離紅血球過程，由其顯深紅色作用引起的干擾可以通過在兩個不同波長下的測定技術(shù)來抵消。這使儀器測定變得相當復雜，色澤變化不能靠目測來判斷。本發(fā)明的目的是提供能容易地制備并用來容易和快速地測定全血中被分析物的檢查載體。該測定過程只要求盡可能最小量的血樣，此外不依靠分血器。一種簡單的測定方法應該包括用目測能估計被分析物濃度。該目的是通過在權(quán)利要求書中詳細表述了特征的本發(fā)明而實現(xiàn)。本發(fā)明的內(nèi)容包括利用包含在檢查載體中的試劑體系(包括顯色劑)測定全血中的被分析物的診斷檢查載體。該檢查載體包含一個試驗區(qū)，所述試驗區(qū)有一個供加血樣的點樣面，此外，在點樣面上有檢測面，從檢測面上觀測到由于被分析物與所述試劑體系的反應導致的光學上的變化。血液中的紅血球不擴展到上述檢測面。根據(jù)本發(fā)明，所述試驗區(qū)包括一個透明薄片，其上分別為第一薄膜層和第二薄膜層。所述在透明薄片上的第一層散射光作用要比覆蓋在它上面的第二層散射光作用弱得多。該透明薄片的無涂層面稱作檢測面而第二層與第一層接觸面的相反面稱作點樣面。此外，本發(fā)明涉及利用根據(jù)本發(fā)明的診斷檢查載體，測定全血中被分析物的方法。因為所術(shù)血樣是加到上述試驗區(qū)的點樣面上并從檢測面觀察色澤變化的，所以，產(chǎn)生的色強度反映出所測試血樣中被分析物含量。所述根據(jù)本發(fā)明的診斷檢查載體的薄膜層是由分散相或乳化相聚合物成膜劑制備的。分散相成膜劑包含不溶于載體液體(通常為水)并高度分散于載體液體中的顯微聚合物粒子。如果在形成薄膜過程中蒸發(fā)去掉上述液體，所述粒子越靠越近，最終彼此接觸。存在于該過程中大的作用力和伴隨膜形成過程表面能的增加使所述粒子成長成為非常密實的薄膜層。另外，也可能使用溶于溶劑中乳化相的成膜劑。所述溶解的聚合物在與上述溶劑不混溶的載體液體中被乳化。聚乙烯酯、聚乙酸乙烯酯、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸、聚乙烯酰胺、聚酰胺和聚苯乙烯特別適合作為上述成膜劑聚合物。除均聚物外，還包括混合聚合產(chǎn)物，例如丁二烯、苯乙烯或馬來酸酯的混合聚合產(chǎn)物。在本發(fā)明診斷檢查載體的試驗區(qū)中，使上述兩個薄膜層置于透明薄片上。因而，考慮使慮用不透過液體的塑料薄片。已證實聚碳酸酯薄片特別適合。上述兩種薄膜層可以由含相同聚合物成膜劑涂層化合物制備或由含不同聚合膜形成劑的涂層化合物制備。盡管第一層包含溶脹劑和可選的弱光散射填料，但是第二層要求溶脹劑和總之至少一種能強散射光的顏料。此外，第二層也可以包含少量不滲透紅血球的無孔填料以及多孔填料，例如硅藻土。顏料與硅藻土的重量比應該至少為2∶1。通過加入溶脹良好的溶脹劑(即當吸收水分后使體積增加的物質(zhì))，不僅可以得到能相對迅速地滲透試樣液體的上述薄膜層，而且，盡管所述溶脹劑具有成孔的作用，仍具有使紅血球，也包括血色素很好分離的性能。所述溶脹性能如此優(yōu)越，以致對于顯色速度主要決定于試樣液體通過薄膜層滲透性的試驗(例如像葡萄糖顯色反應)而言，最多一分鐘后，就可以觀測到反應的色澤變化。已證實特別合適的溶脹劑包括甲基乙烯基醚馬來酸酐共聚物、合成生物聚合膠和甲基乙烯基醚馬來酸共聚物。Kieselguhr也代表硅藻土。它們是從各地開采的，由不同硅藻類型的硅酸為主要成分形成的沉淀物。優(yōu)選使用的硅藻土(Kieselguhr)的平均粒徑為5-15μm，該值是用715型激光粒度計測定的(購自PabischCompany，Munich，Germany)。在第二層中強散射光顏料的含量為相對所述試驗區(qū)干燥的即時可用雙層重量的至少25％(重量)。因為弱散射光填料和強散射光顏料對于所述薄膜層的視覺性而言都是必需的，所以，第一薄膜層和第二薄膜層包含不同的填料和顏料。第一薄膜層應該不包含填料或者包含折光率與水的折光率接近的填料。二氧化硅、硅酸鹽和硅酸鋁已證明是特別合適的此類填料。特別優(yōu)選商品名Traspafill的硅酸鋁鈉。其平均組成為66％(重量)SiO2、26％(重量)Al2O3、7％(重量)Na2O和1％(重量)SO3。優(yōu)選初級粒子的平均粒徑約為0.06μm。根據(jù)本發(fā)明，第二層應該非常強地散射光。在第二薄膜層中顏料的理想的折光率應該至少為2.5。因此，優(yōu)選使用二氧化鈦。已證實平均直徑約為0.2-0.8μm的粒子為佳。在分析物改進設(shè)備中優(yōu)選易加工的二氧化鈦類型。通過顯色來檢測特定分析物的試劑體系對于技術(shù)熟練人員來說是公知的。所述試劑體系的所有成分可能存在于一個薄膜層中。但是，溶劑體系的成分也可能分配在兩個薄膜層中。所述顯色試劑體系優(yōu)選至少部分存在于第一薄膜層中。本發(fā)明范圍內(nèi)顏色的產(chǎn)生不僅理解為由無色轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩?，而且可以理解為在色澤上的任何變化，特別是指與最大吸收波長(λmax)下最大位移有關(guān)的顏色變化過程。為了選擇根據(jù)本發(fā)明診斷檢查載體中試驗區(qū)的最佳條件，已證實兩薄膜層都包含不引起血細胞溶解的潤濕劑。特別優(yōu)選的這類潤濕劑是中性的即不帶電荷的潤濕劑。最優(yōu)選N-辛基-N-甲基葡糖酰胺。為了制備根據(jù)本發(fā)明診斷檢查載體的試驗區(qū)，利用均勻分散相的所述成分逐次制備每個相應的薄膜層。如此，使用所述透明薄片作為基底以便形成作為第一薄膜層的涂層化合物。在使作為第一薄膜層的涂層化合物按特定層厚度涂布后，干燥該涂層。此后，使作為第二層的涂層化合物也按照薄層厚度涂布到第一薄膜層上并干燥。干燥后，第一薄膜層和第二薄膜層加到一起的厚度不超過0.20mm，優(yōu)選不超過0.12mm，特別優(yōu)選不超過0.08mm。所述干燥的第二薄膜層優(yōu)選比第一層厚約2-5倍。按上述方法制備的試驗區(qū)可以固定在支承層以便于加工，那些不吸收待測液體的材料可以考慮用作該支承層。所謂不吸收材料包括例如由聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚酯、聚碳酸酯或優(yōu)選聚酰胺制成的塑料薄片。但是，也可能用防水劑浸透吸收材料例如木材、紙張、或紙板或用防水膜涂層，在這種情況下，硅氧烷或硬化脂可以用作疏水劑而硝基纖維素或纖維素乙酸酯可以用作成膜劑。金屬薄片或玻璃也適合作為支承材料。為了測定試樣液體中待分析物(盡管在本發(fā)明中首先指全血，來自血液的其它樣品例如血漿或血清，也包括其它水溶性液體當然也可以檢測)，需要在根據(jù)本發(fā)明檢查載體中，用于觀測色澤形成過程的所述試驗區(qū)的檢測面應該是透過所述支承層可見的。但是，也可能在所述支承層上留有鉆孔，并用試驗區(qū)檢測面覆蓋。透過鉆孔檢測面是可見的。在根據(jù)本發(fā)明診斷檢查載體的優(yōu)選實施例中，在所述試驗區(qū)檢測面下面的支承層中有一個孔，通過該孔，可以觀察到試驗區(qū)的檢測面。所述小孔的直徑比實驗區(qū)最小的線尺度還要略小，因而，小孔外試驗區(qū)放在所述支承層上并能吸附在上面。由于試驗區(qū)的結(jié)構(gòu)，尤其是兩個薄膜層不允許紅血球透過到檢測面，因而只需要非常少量樣品來檢測被分析物。當試驗區(qū)大小為5×6mm時，例如3μl全血便中以檢測出其中的葡萄糖。為了在使用約15-20μl的更大樣品量情況下仍能正常工作及為了避免樣品液體滲漏，已證實把所述試驗區(qū)加入根據(jù)本發(fā)明診斷檢查載體中特別合適，其中該檢查載體包含一個可以在其上配置試驗區(qū)的支承層，所述試驗區(qū)用比其更大的網(wǎng)格覆蓋，該網(wǎng)格附著在除試驗區(qū)以外的支承層上。這樣一種根據(jù)本發(fā)明特別優(yōu)選的診斷檢查載體的網(wǎng)格是疏水的，而且單獨不具有表面活性。使由不滲透樣品液體的材料制成的一種惰性覆蓋物安置在超出試驗區(qū)的那部分網(wǎng)格面積(即不在試驗區(qū)上的網(wǎng)格面積)上，因而在位于試驗區(qū)上方的網(wǎng)格區(qū)中留出供點樣的區(qū)域。該根據(jù)本發(fā)明特別優(yōu)選的診斷檢查載體的網(wǎng)格本身應該不具有表面活性或吸水性，因而，樣品液體應盡可能全部為試驗區(qū)所得到。已證實合適的網(wǎng)格為當使其垂直浸入水中時，能使水在網(wǎng)格中升高2mm的網(wǎng)格。疏水的粗孔單絲織物優(yōu)選用作所述網(wǎng)格。該單絲織物本身可以是疏水性的或通過例如潤濕劑處理變成疏水性的。特別優(yōu)選使用聚酯作為網(wǎng)狀材料，一般先用該材料制成網(wǎng)格，然后潤濕劑處理后使用。所述網(wǎng)格厚度必須根據(jù)下列原則來控制，即其上的覆蓋物和其下層之間距離應保持在使剩余液體能在毛細力作用下，通過飽和試驗區(qū)和網(wǎng)格的填充網(wǎng)眼吸入所述覆蓋物下區(qū)域并從點樣面導出。一般來說，該網(wǎng)格厚度最好為50-400μm。所述網(wǎng)格必須具有足夠大的網(wǎng)眼寬度以便液體能通過該網(wǎng)格到達試驗區(qū)。網(wǎng)格的性能為不使網(wǎng)格內(nèi)液體在網(wǎng)格表面水平擴散而足使其垂直流過網(wǎng)格到達試驗區(qū)。在前述根據(jù)本發(fā)明特別優(yōu)選的診斷檢查載體中，覆蓋試驗區(qū)的網(wǎng)格比在下面的試驗區(qū)更大。網(wǎng)格超出試驗區(qū)部分被固定在支承層上。該附著過程可以使用對于檢查載體
技術(shù)領(lǐng)域：
的技術(shù)熟練人員公知的方法來完成。例如，使用熱固性粘合劑或硬化冷固性粘合劑來完成。也已證實雙面粘合膠條非常好。但是，在上述所有情況下，重要的是使網(wǎng)格粘附到支承層上可使表面活性液體能從試驗區(qū)轉(zhuǎn)移到粘接支承層的網(wǎng)格部分。尤其當所述試驗區(qū)對液體飽和時，該表面活性液體必須能被轉(zhuǎn)移。已證實由天然或合成橡膠制成的粘合膠帶非常適合所述工藝過程。起粘合網(wǎng)格與支承層作用的粘合膠帶最好具有與試驗區(qū)大約相同的厚度。然后，它大約作為墊片以便使網(wǎng)格整體保持在一個平面上(除試驗區(qū)面積)。使不滲透樣品，一般不滲透水和不吸收的材料制成的惰性覆蓋物按照覆蓋除試驗區(qū)外的網(wǎng)格區(qū)域方式，置于本發(fā)明特別優(yōu)選的診斷檢查載體的網(wǎng)格上。理想情況下，覆蓋物也突出所述試驗區(qū)外一點。但是，在任何情況下，覆蓋所述試驗區(qū)網(wǎng)格的相當大部分是不加覆蓋物的。該網(wǎng)格不加覆蓋物部分代表點樣區(qū)。已證實塑料薄片特別適合作為覆蓋物。如果所述覆蓋物和網(wǎng)格具有不同顏色例如白色和黃色或白色和紅色，用該方法能非常清楚地標記出待測樣品液體的加樣區(qū)。例如借助所述覆蓋物上的一個或幾個印刷箭頭，按照箭頭方向，很清楚根據(jù)本發(fā)明的診斷檢查載體的哪一端應該放入或插入檢測儀器中?？梢苑浅：唵蔚厥褂脙蓷l帶狀塑料片覆蓋物(留出試驗區(qū)上方網(wǎng)格帶狀區(qū)域)形成點樣區(qū)。使用作覆蓋物的薄片粘附在所述網(wǎng)格上并可選地粘附在支承層上。如果所述薄片本身不具粘合性的話，熱融粘合劑或粘合膠帶適用于上述粘附過程。但是，在任何情況下，必須小心在所述覆蓋物下方仍然存在由網(wǎng)格形成的毛細間隙，其中，可吸收來自用液體飽和試驗區(qū)的多余的樣品液體。所述點樣區(qū)優(yōu)選位于支承層孔眼上方，通過該孔眼可以觀測到試驗區(qū)中色澤形成和變化。為了實施借助本發(fā)明的診斷檢查載體測定全血中被分析物的方法，將血樣加到所述試驗區(qū)的點樣面上，并從檢測面觀察顯色過程。在糖尿病監(jiān)測過程當中(即定期控制糖尿病患者血中葡萄糖含量過程中)出現(xiàn)錯誤測量值的常見原因至今為止仍是樣品量太少。對于包含大小約為5×6mm試驗區(qū)的本發(fā)明診斷檢查載體而言，3μl全血已足夠完成目測檢驗結(jié)果過程。由于所述試驗區(qū)的第二薄膜層強散射光，相反第一層弱散射光，所以，從檢測面可以觀察到所形成色彩帶有較高亮度和色度。不管在少量樣品中只存在少量分析物，都可以保證準確測量結(jié)果。當然也能用儀器借助診斷試驗載體測定全血中被分析物。為了得到盡可能準確的定量結(jié)果，該方法也是可行的。為此，優(yōu)選在色澤變化過程中邊疆或間隔觀測檢測位置上的反射率。所述試驗區(qū)檢測面的反射率測量結(jié)果以連續(xù)測量的形式完成。當連續(xù)測量數(shù)值之間差一次或幾次低于某一值時，可選再增加一定反應時間后，終止該測量。所述連續(xù)測量結(jié)果中最后的反射率用來計算被分析物濃度。因為該法使用終止所述連續(xù)測量的準確標準而且不需要確定點樣的準確時間，所以，也可以在檢測儀器外加樣。因而，在點樣后，最長允許時間內(nèi)的任何需要時刻將所述檢查載體條插入儀器中便可。在上述情況下，在血球容量由20％高于60％范圍內(nèi)，所述測量方法不受影響，所以，當使用根據(jù)上述過程的儀器完成該測量時，其測量方法就指與血球容量不相關(guān)的方法。在能讀出與血球容量不相關(guān)的測量值之前，人們必須等待2-3分鐘以便目測其結(jié)果。在圖1-9中，用圖解方式解釋本發(fā)明。圖1表示經(jīng)過本發(fā)明診斷檢查載體試驗區(qū)的橫截面圖。圖2表示根據(jù)本發(fā)明特別優(yōu)選的診斷檢查載體的透視圖。圖3表示根據(jù)本明診斷檢查載體下面的俯視圖。圖4表示按照圖2，沿A-A線經(jīng)過本發(fā)明診斷檢查載體的橫截面圖。圖5表示圖4橫截面的放大部分。圖6-9表示校準曲線1-4，在實施例2中做進一步解釋。用在所述圖中的標號具有下列含義。1試驗區(qū)2透明薄片3第一層4第二層5點樣面6檢測面7診斷檢查載體8支承層9網(wǎng)格10覆蓋物11所述網(wǎng)格超出試驗區(qū)部分12點樣部位13孔眼14試驗區(qū)膠粘帶15墊片16毛細活性間隙17樣品液體18定位孔在圖1中表示的經(jīng)過本發(fā)明診斷檢查載體試驗區(qū)(1)的橫截面圖顯示在透明薄片(2)上加上第一薄膜層(3)。用第二薄膜層(4)覆蓋第一薄膜層(3)。制備根據(jù)本發(fā)明檢查載體的試驗區(qū)(1)即使用作為第一薄膜層(3)的濕涂層化合物涂布透明薄片(2)，接著使用作為第二薄膜層(4)的濕涂層化合物涂布干燥后的第一薄膜層(3)產(chǎn)生各層相互粘結(jié)的，第一薄膜層(3)在透明薄片(2)上的完整平面。將待測定含量的血樣加到根據(jù)本發(fā)明檢查載體試驗區(qū)(1)的點樣面(5)上。當被分析物含在該樣品中時，從根據(jù)本發(fā)明檢查載體試驗區(qū)(1)的檢測面(6)可以觀測到顯色過程，其色度決定于該樣中被分析物含量。在圖2(透視)和圖4(橫截面)中所顯示的根據(jù)本發(fā)明特別優(yōu)選的診斷檢查載體(7)采用試驗條形狀。在支承層(8)上，設(shè)置試驗區(qū)(1)，它用比其更大的網(wǎng)格(9)覆蓋。利用墊片(15)使網(wǎng)格(9)粘結(jié)到試驗區(qū)(1)旁邊的支承層(8)上。該墊片(15)可以是使網(wǎng)格(9)固定在支承層(8)上的加熱熔化粘合劑區(qū)域或是雙面粘合膠帶。理想情況下，墊片(15)具有大約與試驗區(qū)(1)相同厚度。使作為覆蓋物(10)的薄膜層粘結(jié)到支承層(8)和網(wǎng)格(9)上。以便它們能覆蓋網(wǎng)格(9)超出試驗區(qū)(1)部分的方式布置所述覆蓋物。所述覆蓋物(10)也稍微超出試驗區(qū)(1)。但是，它們留下覆蓋試驗區(qū)(1)的網(wǎng)格(9)部分中大部分不被覆蓋。這部分區(qū)域代表點樣區(qū)(12)。將待測樣品液體(17)加到這里。當使用儀器(例如反射光度計)測定時，定位孔(18)可以使所述試驗條能保持在該儀器的準確的預測定位置上。例如可以使用圖釘伸入定位孔(18)中，因而使檢查載體(7)保持在預定位置上。左邊覆蓋物(10)上有印刷箭頭，它們提示使用者檢查載體(7)哪一端應該放入或插入檢測儀器中。圖5顯示如圖2和圖4所示經(jīng)過根據(jù)本發(fā)明特別優(yōu)選的診斷檢查載體的放大的橫截面圖。該圖意欲解釋測定液體樣品被分析物，例如測定全血中葡萄糖的方法是如何進行的。為此，將檢測血樣加入網(wǎng)格(9)的點樣區(qū)(12)中。該液體垂直穿過網(wǎng)格(9)到達試驗區(qū)(1)。就作為樣品液體的血液而言，紅血球留在那里，而血漿和血清到達試驗區(qū)(1)各層(3，4)。如果加了足夠量的全血形式樣品液體的話，血漿或血清在包括第一和第二薄膜層(3，4)的試驗區(qū)(1)中擴散整個試驗區(qū)(1)。如果所述液體量非常小的話，試驗區(qū)(1)甚至可以吸干下面的網(wǎng)格(9)，因為網(wǎng)格(9)本身不具有毛細活性。對于大量液體的介質(zhì)而言，首先填充整個試驗區(qū)(1)網(wǎng)格(9)的空隙，然后填充所述覆蓋物(10)下的毛細空隙。對于該毛細空隙的合適功能而言，所述覆蓋物(10)至少覆蓋網(wǎng)格(9)下試驗區(qū)(1)的很少一部分。通過孔眼(13)能觀測到試驗區(qū)(1)的檢測表面。從這方面考慮，圖3中顯示根據(jù)圖2、4和5診斷檢查載體下面的俯視圖。如果所加樣品液體中包含有被分析物的話，所述試驗區(qū)(1)檢測表(6)的顏色將改變。所產(chǎn)生的顏色強度(色度)反映出樣品液體中被分析物含量。通過下列實施例進一步詳細解釋本發(fā)明。實施例1根據(jù)本發(fā)明的診斷檢查截體的制備通過下列步驟制備根據(jù)圖2的試驗載體將5mm寬雙面粘合膠帶(由聚酯支承層和合成橡膠粘合劑組成)固定在包含二氧化鈦的聚酯支承層上。在該組合體上整體鉆孔，孔眼間距為6mm，以便產(chǎn)生測量孔。此后，除去所述雙面粘合膠帶上的保護紙。由兩個薄膜層組成的試驗區(qū)按下列過程制備A.將下列組成中各成分以純物質(zhì)或儲備液形式一起加入燒杯中并攪拌混均水20.0g一水合檸檬酸2.5g二水合氯化鈣0.5g氫氧化鈉1.4g合成生物聚合膠3.4g氯化四乙基銨2.0gN-辛酰基-N-甲基-葡糖酰胺2.1g聚乙烯吡咯烷酮(MW25000)3.5gTrawspafill(硅酸鋁鈉)62.19g聚丙酸乙烯酯分散液(50％(重量)水)60.8g氯化雙-(2-羥乙基)-(4-肟基亞環(huán)己-2，5-二烯基)銨1.2g2，18-磷鉬酸六鈉鹽16.1g吡咯并喹啉一苯醌32mg葡糖脫氫酶(rec.fromAcinetobacter1.7MUcalcoaceticus，EC1，1，99，17)(2.4g)1-己醇1.6g1-甲氧基-2-丙醇20.4g其總?cè)芤河肗aOH調(diào)節(jié)pH約為6，按89g/gm(面積重量)涂布在125μm厚的聚碳酯酯薄片上并干燥。B.將下列組成中各成分以純物質(zhì)或儲備液形式一起加入燒杯中并攪拌混均水579.7g氫氧化鈉3.4gGantrez(甲基乙烯基醚馬來酸共聚物)13.8gN-辛?；?N-甲基-葡糖酰胺3.6g氯化四乙基銨9.7g聚乙烯吡咯烷酮(MW25000)20.2g二氧化鈦177.1gKieselguhr(硅藻土)55.3g聚丙酸乙烯酸分散液(50％(重量)水)70.6g2，18-磷鉬酸六鈉鹽44.3g六氰基高鐵酸(III)鉀0.3g1-己醇1.6g1-甲氧基-2-丙醇20.4g其總?cè)芤河肗aOH調(diào)節(jié)pH至約為6，按104g/qm(面積重量)涂布在如A中所述帶涂層的聚碳酸酯薄片上并干燥。按該法制備的檢測層的5mm寬條正相配并粘貼到支承層上，其薄片面上鉆孔的雙面粘合膠帶上。使用為墊片(由PVC支承層和天然橡膠粘合劑組成)的雙面粘合膠帶粘合在所述支承薄片的兩面并直接鄰接檢測層。在本實施例中，一個墊片為6mm寬，另一個墊片為9mm寬。然后，除去所述雙面粘合膠帶的保護薄片。使浸透潤濕劑的黃色單絲粗孔聚酯織物ScrynelPF280HC(“ZurcherBeuteltuchfabrik，Ruschlikon，Switzerland)放在上述復合物結(jié)構(gòu)上并加壓粘合。使兩條單面粘合膠帶(由PVC支承層和天然橡膠粘合劑組成)作為覆蓋物粘合在所述黃色網(wǎng)格上，要求完全覆蓋所述墊片和與所述反應區(qū)至少仍有一點重疊。這就制成所述帶狀材料。按照使測量孔位于檢查載體中間方式，將所述帶狀材料切成6mm寬的檢查載體。實施例2與血球容量不相關(guān)的根據(jù)本發(fā)明的檢查載體使用反射光度計可以測量實施例1的檢查載體。當有校準曲線時，代表顯色強度的反射率可以轉(zhuǎn)化成葡萄糖濃度。如果使用“相對反射率”一詞，那么它們指以干燥檢查載體計的反射率。A.校準曲線是通過測定大量包含不同葡萄糖濃度的靜脈血樣后做出的。使用參比方法測定的這些靜脈血樣的反射率和葡萄糖濃度可以用來建立標準曲線。在校準變量1中，將10μl靜脈血樣加到根據(jù)實施例1的檢查載體上并在21秒鐘后測定反射率。通過對10個檢查載體的平均反射率和所述血樣參比值的回歸分析，確定校準曲線1(圖6)。在校準變量2中，將10μl靜脈血樣也加到根據(jù)實施例1的檢查載體上并在30秒鐘后測定反射率。通過對10個檢查載體的平均反射率和所述血樣的參比值做回歸分析，確定校準曲線2(圖7)。在校準變量3中，將10μl靜脈血樣也加到根據(jù)實施例1的檢查載體上并每間隔3秒鐘測定其反射率。一旦反射率差值連續(xù)兩次小于0.3就終止測量并使用該反射率值進行評價。通過對10個檢查載體的平均反射率和血樣參比值的回歸分析，確定校準曲線4(圖9)。B.在測定變量1的情況下，將10μl靜脈血樣加到根據(jù)實施例1的檢查載體中并在21秒鐘后測定反射率。使用根據(jù)圖6相應校準曲線，使各個反射率值換算成葡萄糖濃度。從10個檢查載體的平均濃度和所述血樣的參比值確定偏差并列于表1中。在測定變量2的情況下，將10μl靜脈血加到根據(jù)實施例1的檢查載體中并于30秒鐘后測定反射率。使用根據(jù)圖7的相應校準曲線，使各個反射率值換算成葡萄糖濃度。從10個檢查載體的平均濃度和所述血樣的參比值確定偏差并列于表2中。在測量根據(jù)本發(fā)明變量3的情況下，將10μl靜脈血也加到實施例1的檢查載體中并每間隔3秒鐘測定反射率。一旦反射率差值連續(xù)兩次小于0.3便終止該測量過程并使用該反射率值進行評價。使用根據(jù)圖8的相應校準曲線，使各個反射率值換算成葡萄糖濃度。從10個檢查載體的平均濃度和所述血樣的參比值確定偏差并列于表3中。在測定根據(jù)本發(fā)明變量4的情況下，將10μl靜脈血也加到實施例1的檢查載體中并每間隔3秒鐘測定反射率。一旦反射率差值連續(xù)兩次小于0.9，便終止該測量并使用該反射率值進行評價。使用根據(jù)圖9相應校準曲線，使各個反射率值換算成葡萄糖濃度。從10個檢查載體的平均濃度和所述血樣的參比值確定偏差并列于表4中。表1與血球容量相關(guān)的測量變量1血球容量占30％的血液血球容量占57％的血液測定相對反射率(％)根據(jù)校準曲線1的計算濃度與參比值的偏差％測定相對反射率(％)根據(jù)校準曲線1的計算濃度與參比值的偏差％51.188.57.361.656.3-31.544.2111.04.954.375.3-17.137.8143.23.945.8104.4-20.430.1197.42.936.6150.6-20.721.1294.74.628.3213.8-20.5</table></tables>表2與血球容量相關(guān)的測量變量2表3通過測定根據(jù)本發(fā)明變量3補償血球容量的相關(guān)性表4通過測定根據(jù)本發(fā)明變量4補償血球容量的相關(guān)性</tables>在20％血球容量下測定變量3和4產(chǎn)生類似30％血球容量的小的偏差。權(quán)利要求1.借助包含在載體中的試劑體系來檢測全血中被分析物的診斷檢查載體，該載體包括顯色劑以及由供加入血樣的點樣面和檢測面組成的試驗區(qū)，在檢測面上發(fā)生由被分析物與所述試劑體系反應所導致的光學上可檢測的變化，其設(shè)計形式應使所述樣品中的紅血球不擴展到該檢測面，其中，所述試驗區(qū)包括一個透明薄片，第一和第二薄膜層疊加在上面，其中位于所述透明薄片上的第一層在潮濕狀態(tài)下散射光作用要比上面的第二層弱很多并且其中所述薄片與第一層連接面的面為檢測面，而第二層與第一層連接面的反面為點樣面。2.按照權(quán)利要求1的診斷檢查載體，其中第二層包含折光率至少為2.5、濃度相對于所述干燥雙薄膜層至少為25％(重量)的顏料。3.按照權(quán)利要求1或2的診斷檢查載體，其中兩個薄膜層都是由包含聚合物成膜劑和溶脹劑的均勻分散液的聚合物成膜劑的分散液或乳濁液所形成，其中所述溶脹劑的溶脹能力如此之高以致在最多一分鐘后在檢測面就可以探測到光學上可檢測的變化。4.按照上述權(quán)利要求中任一項所述的診斷檢查載體，其中第一薄膜層包含硅酸鋁鈉而第二薄膜層包含二氧化鈦作為顏料。5.按照上述權(quán)利要求中任一項所述的診斷檢查載體，其中兩個薄膜層都適用于紅血球的分離。6.按照上述權(quán)利要求中任一項所要求的診斷檢查載體，其中在干燥狀態(tài)下，第一和第二薄膜層加在一起的最大厚度為0.20mm，優(yōu)選最大厚度為0.12mm，特別優(yōu)選的最大厚度為0.08mm。7.按照權(quán)利要求6的診斷檢查載體，其中第二薄膜層比第一薄膜層厚2-5倍。8.按照上述權(quán)利要求中任一項所述的診斷檢查載體，其中所述顯色劑位于第一薄膜層中。9.按照上述權(quán)利要求1-7中任一項所述的診斷檢查載體，其中所述試劑體系的成分分布在兩個薄膜層中。10.按照權(quán)利要求中任一項所述的診斷檢查載體，其中所述薄膜層不包含溶血的潤濕劑。11.按照權(quán)利要求10的診斷檢查載體，其中至少一個薄膜層包含N-辛?；?N-甲基-葡糖酰胺作為潤濕劑。12.利用權(quán)利要求1-11中任一項的診斷檢查載體測定全血中分析物的方法，其中將血樣加到所述試驗區(qū)的點樣面上并在檢測面觀測顯色過程，其中顯色強度反映血中被分析物含量。13.權(quán)利要求12所述的方法，其中在顯色過程中，連續(xù)或間隔觀測檢測面。14.按照權(quán)利要求13所述的方法，其中借助儀器，通過以一系列測量值的方式測定顯色過程進行所述觀測并以顯色過程中連續(xù)測定值一旦低于預定的絕對值或差值的時刻，確定為測定時刻。15.按照權(quán)利要求13所述的方法，其中借助儀器，通過以一系列測量值的方式測定顯色過程進行所述觀測并以顯色過程中連續(xù)測定值幾次低于預定的絕對值或差值的時刻，確定為測定時刻。16.按照權(quán)利要求14或15所述的方法，其中在一次或幾次低于差值的絕對值后再反應一段時間。17.按照權(quán)利要求14-16中任一項所述的方法，其中用反射計測量顯色過程并且所述測量值系列中最后一個測量值被用來通過數(shù)學方法計算被分析物濃度。全文摘要本發(fā)明涉及借助包含在載體中的試劑體系來檢測全血中被分析物的診斷檢查載體,該載體包括顯色劑以及由供加入血樣的點樣面和檢測面組成的試驗區(qū),在檢測面上發(fā)生由被分析物與所述試劑體系反應所導致的光學上可檢測的變化,其設(shè)計形式應使所述樣品中的紅血球不擴展到該檢測面,其中,所述試驗區(qū)包括一個透明薄片,第一和第二薄膜層疊加在上面,其中位于所述透明薄片上的第一層在潮濕狀態(tài)下散射光作用要比上面的第二層弱很多并且其中所述薄片與第一層連接面的面為檢測面,而第二層與第一層連接面的反面為點樣面。此外,本發(fā)明涉及利用根據(jù)本發(fā)明的診斷檢查載體測定全血中分析物的方法。文檔編號G01N33/52GK1176389SQ9711536公開日1998年3月18日申請日期1997年7月23日優(yōu)先權(quán)日1996年7月23日發(fā)明者D·蒂姆,W·R·克納珀,R·帕科爾,H·默迪斯,R·羅倫茲申請人:曼海姆泊靈格股份公司