專利名稱：：親水的金屬絡(luò)合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及新的親水絡(luò)合物和其作為發(fā)光的示蹤基在免疫測定中的應(yīng)用。由發(fā)光的金屬絡(luò)合物現(xiàn)有技術(shù)是已知的。歐洲專利EP-A-O178450公開了釕絡(luò)合物，它是連接在一種免疫活化的物質(zhì)上，在這當(dāng)中，釕絡(luò)合物含有三個相同的或不同的雙環(huán)的或多環(huán)的、具有至少二個含氮雜環(huán)的配位體，同時至少這種配位體之一由至少一個起水溶作用的基如-SO3H或-COOH所取代，并同時這種配位體至少之一由至少一個反應(yīng)基如-COOH直接或經(jīng)一間隔基所取代，并同時配位體經(jīng)氮原子與釕相結(jié)合。歐洲專利EP-A-O580979公開了使用鋨絡(luò)合物或釕絡(luò)合物作為示蹤基用于電化發(fā)光。作為這種絡(luò)合物的配位體提到含氮的雜環(huán)，例如雙吡啶。世界專利WO87/06706公開了另外的金屬絡(luò)合物，這些絡(luò)合物適于作示蹤基用于電化發(fā)光測定。由現(xiàn)有技術(shù)已知的金屬絡(luò)合物的缺點(diǎn)在于，在電化發(fā)光測量時通過氧-猝滅和光致離解量小產(chǎn)率低和/或?qū)Φ鞍踪|(zhì)的非特異性鍵合高。因此本發(fā)明的基本任務(wù)在于，至少部分地去掉現(xiàn)有技術(shù)的一些缺點(diǎn)。出乎意外地發(fā)現(xiàn)；在發(fā)光的金屬絡(luò)合物中引入C2-C3-亞烷基氧-，C2-C3-亞烷基硫-或/和C2-C3-亞烷基氨基-單元、并特別是乙二醇-單元或/和丙二醇-單元時，減少了這種具有免疫反應(yīng)物的金屬絡(luò)合物的共軛吸附，并因此也改善了在免疫測定中的穩(wěn)定性和共軛的重新尋獲。另外可得到一提高的量小產(chǎn)率。此外還發(fā)現(xiàn)金屬絡(luò)合物的性質(zhì)也可通過引入多羥基-單元得到改善。這種多羥基-單元可擴(kuò)充成為具有多次增殖的樹枝狀結(jié)構(gòu)。此外通過引入聚胺一結(jié)構(gòu)，可使電化發(fā)光測量所需的電子供體直接結(jié)合到金屬絡(luò)合物的配位體范圍中。一種按本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)涉及一種籠式的或半籠式的金屬絡(luò)合物，其中配位體是一次或多次、優(yōu)選是經(jīng)親水的間隔基互相連結(jié)的。這種情況也導(dǎo)致光穩(wěn)定性的根本性改善和減少氧-猝滅。因此本發(fā)明的主題是通式(I)的金屬絡(luò)合物〔M(L1L2L3)〕n-XmA(I)式中M是一選自稀土金屬離子或過渡金屬離子的二價的或三價的金屬陽離子，L1，L2和L3是相同的或不同的，并且為具有至少二個含氮雜環(huán)的配體，且L1，L2和L3經(jīng)氮原子連結(jié)在金屬陽離子上，X是一反應(yīng)性的或可活化的功能基，它共價連結(jié)在配位體L1，L2，L3的至少一個上，n是從1至10的一個整數(shù)，m是從1至6的一個整數(shù)至優(yōu)選1至3，A為一個或多個為電荷平衡必需的、帶負(fù)電荷的基團(tuán)，其中絡(luò)合物含有至少一個選自C2-C3亞烷基氧-單元、C2-C3-亞烷基硫-單元、C2-C3-亞烷基氨基-單元和多羥基-單元的親水基。金屬絡(luò)合物主要是發(fā)光的金屬絡(luò)合物，也就是說，一種能生成可證明發(fā)光反應(yīng)的金屬絡(luò)合物。這種發(fā)光反應(yīng)的證明例如可通過熒光測量或通過電化發(fā)光測量進(jìn)行。在這種金屬絡(luò)合物中的金屬陽離子例如是一種過渡金屬或一種稀土金屬。這種金屬主要是釕，鋨，錸，銥，銠，鉑，銦，鈀，鉬，锝，銅，鉻或鎢。特別優(yōu)選的是釕，銥，錸，鉻和鋨。最常優(yōu)選的是釕。配位體L1，L2和L3是具有至少二個含氮雜環(huán)的配位體。優(yōu)選的是芳烴雜環(huán)例如雙吡啶基，雙吡唑基，三吡啶基和菲酚基。特別優(yōu)選的是選自雙吡啶環(huán)體系和菲咯啉環(huán)體系的配位體L1，L2和L3。金屬絡(luò)合物的反應(yīng)性的或可活化的功能基X是一種能與免疫活化物質(zhì)連結(jié)的反應(yīng)基，或一種能以簡單方式轉(zhuǎn)化成這種反應(yīng)基的可活化基。優(yōu)選的X基是一活化的羧酸基如羧酰鹵、羧酸酐或活化酯，例如N-羥基琥珀酰亞胺酯，對硝基苯酯，五氟苯基酯，咪唑基酯或N-羥基苯并三唑基酯，馬來酰亞胺，胺，羧酸，硫醇，鹵根，羥基或可光活化的基團(tuán)。此外絡(luò)合物含有一個或多個為電荷平衡所需的負(fù)電荷基A。例如適合的負(fù)電荷基是鹵根，OH-，碳酸根。烷基羧酸根，例如三氟乙酸根，硫酸根，六氟磷酸根和四氟硼酸根。特別優(yōu)選的是六氟磷酸根，三氟乙酸根和四氟硼酸根。本發(fā)明的金屬絡(luò)合物與由現(xiàn)有技術(shù)已知的金屬絡(luò)合物的區(qū)別在于，它含有至少一個選自C2-C3-亞烷基氧-單元，C2-C3-亞烷基硫-單元，C2-C3-亞烷基氨基-單元和多羥基-單元的親水基。多羥基-單元主要選自式(IIa)或(IIb)的基團(tuán)-NR-W(IIa)-O-W(IIb)其中W為一至少具有二個羥基的有機(jī)基團(tuán)，并R為氫或C1-C5-烷基，優(yōu)選為氫或C1-C3-烷基、有機(jī)基W優(yōu)選含有2至6、并特別優(yōu)選2至4個羥基。另外較適宜的W應(yīng)含有2到10、特別優(yōu)選3至6個碳原子。特別的、適合的多羥基單元的例子是多醇的基團(tuán)如甘油或氨基多醇的基團(tuán)。一種優(yōu)選的氨基多醇是三(2-氨基-2(羥基-甲基)-1，3-丙三醇)。在這種情況下，多羥基-單元具有式NR-C(CH2OH)3。這種多醇或氨基多醇是優(yōu)選以酯或酰胺的形式結(jié)合在金屬絡(luò)合物上。本發(fā)明的金屬絡(luò)合物的C2-C3-亞烷基氧-單元、C2-C3-亞烷基硫-單元和C2-C3-亞烷基氨基-單元優(yōu)選是C2-單元，并特別是乙烯氧基-單元。金屬絡(luò)合物中每一金屬陽離子含有優(yōu)選1至30、并特別優(yōu)選2到20個C2-C3-亞烷基-氧-單元，C2-C3-亞烷基硫-單元或C2-C3-亞烷基氨基-單元。這些單元是金屬絡(luò)合物雜環(huán)配位體取代基組分。它們可處在配位體之一和反應(yīng)性的或可活化的功能基X之間的連接物中，或/和處在單一的取代基中。亞烷基氧-單元，亞烷基硫-單元或亞烷基氨基-單元也可經(jīng)一橋接頭互相連結(jié)起來，該橋接頭上有時有一功能基X。另一方面，數(shù)個絡(luò)合物-單元也可經(jīng)橋頭互相連結(jié)起來。下面敘述了本發(fā)明金屬絡(luò)合物的優(yōu)選實施例。在本發(fā)明的第一優(yōu)選實施形式中，本發(fā)明的金屬絡(luò)合物具有通式(III)式中m，X和A定義如前面，R1，R2，R3，R4，R5和R6是相同或不同的，并各為一個或多個取代基，前提條件是，X經(jīng)取代基R1，R2，R3，R4，R5或R6之一連結(jié)在配位體之一上，并取代基R1，R2，R3，R4，R5和R6之一至少含有一個選自C2-C3-亞烷基氧-單元，C2-C3-亞烷基硫-單元和C2-C3-亞烷基氨基-單元的親水基。根據(jù)由虛線標(biāo)明的基團(tuán)是否存在，絡(luò)合物配位體可能是取代的菲咯啉體系或雙吡啶體系。在配位體上的取代基R1，R2，R3，R4，R5和R6，只要它們不含親水基，則優(yōu)選氫，C1-C5-烷基，特別優(yōu)選C1-C3-烷基。親水基優(yōu)選總共含有1至30、特別優(yōu)選2至20個亞烷基氧-單元，亞烷基硫-單元或/和亞烷基氨基-單元，特別是乙烯氧-單元。親水基可以是在具有連接能力的功能基X和配位體之一之間的連接物組分。在這種情況下，金屬絡(luò)合物主要具有通式(IIIa)式中M，X和A定義如上，R1，R2，R3，R4和R5定義如上。S是從0至6的一個整數(shù)，優(yōu)選從1至4，Y為選自C2-C3-亞烷基氧-單元，C2-C3-亞烷基硫-單元和C2-C3亞烷基氨基-單元，特別是乙烯氧-單元的具有1至10、優(yōu)選具有2至6個親水基單元的一個親水連接物基。但功能基X不一定非經(jīng)親水連接與配位體連結(jié)起來。在這種情況下，發(fā)明的金屬絡(luò)合物優(yōu)選具有通式(IIIb)式中M，X和A定義如前，R1，R2，R3，R4和R5定義如前，前提條件是，R1，R2，R3，R4或/和R5含有一親水取代基，該基通常包含1至10、優(yōu)選2至6個C2-C3-亞烷基氧-單元，C2-C3-亞烷基硫-單元或/和C2-C3亞烷基氨基-單元，特別是乙烯氧-單元。圖1a和1b中表明了式(IIIa)化合物的一個實施例。這種化合物含有親水物只在基X-一個馬來酰亞胺(圖1a)或N-羥基琥珀酰亞胺酯(圖1b)-和配位體之間連接。但同樣的其他配位體也可有親水基。在圖1b中表明了式(IIIb)化合物的一個例子。這里基X是N-羥基琥珀酰亞胺酯。本發(fā)明的金屬絡(luò)合物的配位體也可互相連結(jié)，所以金屬絡(luò)合物是以半籠式或籠式的形式存在。一種優(yōu)選的本發(fā)明的以半籠或籠形式存在的金屬絡(luò)合物的實施形式具有通式(IV)式中M，X，n和A定義如前，R1，R2和R3相同或不同，并各為一個或多個連在雙吡啶配位體或菲咯啉配位體上的取代基-定義如前，Y各為親水的連接基，它包括選自C2-C3-亞烷基氧-單元，C2-C3-亞烷基硫-單元和亞烷基氨基單元，特別是乙烯氧-單元的1至10個親水單元。若取代基R1，R2和R3以式(IV)并必要時經(jīng)親水連接基共價互相連結(jié)起來時，則式(IV)的絡(luò)合物具有籠的形式。在圖2和3a中表明了式(IV)半籠式絡(luò)合物的例子。在圖3b中表明了籠式絡(luò)合物的例子。在圖2中的X基是一羧基。金屬陽離子和陰離子在圖3a和3b中沒有標(biāo)出來。式(IV)的絡(luò)合物不僅可為單體，而且也可為由優(yōu)選5個以下的單一金屬絡(luò)合物組成的低聚物。為此，有連接能力的功能基X舉例來說可以是一個在芳烴核例如苯核上的取代基，在這當(dāng)中，芳烴核上二個或多個剩下的取代位置可通過半蘢式的或籠式的金屬絡(luò)合物取代。在圖4和5中表明了式(IV)的低聚的金屬絡(luò)合物的例子。在這些圖中未標(biāo)出金屬離子和陰離子。在本發(fā)明的另一優(yōu)選實施形式中，金屬絡(luò)合物是用多羥基-單元取代的，并具有通式(V)式中M，X和A定義如前，Z為一連接基，R1’，R2’，R3’，R4’和R5，是相同的或不同的，并各為一個或多個取代基，例如氫或C1-C5-，特別是C1-C3-烷基，S是從0至6、優(yōu)選從1至4的一個整數(shù)，前提條件是，R1’，R2’，R3’或/和R4’含有一親水取代基，它包含一個多羥基-單元。金屬絡(luò)合物(V)的配位體X可經(jīng)一親水的連結(jié)物例如式(IIIa)的連結(jié)物。但也可經(jīng)式(IIIb)的連結(jié)物與配位體連接。取代基R5’優(yōu)選氫或C1-C5-，特別是C1-C3-烷基。在圖6中表明了式(V)化合物的一個例子。X基是一羧基。通式(V)的金屬絡(luò)合物中多羥基-單元的OH-基必要時可被親水基取代，例如通過C2-C3-亞烷基氧-單元、C2-C3-亞烷基硫-單元或/和C2-C3-亞烷基氨基-單元取代。在本發(fā)明的特定實施形式中，多羥基-單元的OH-基的親水取代基是通式(VIa)或(VIb)的樹枝狀物-A1-NR-W1(A2-NH-W2)n’(VIa)-A1-O-W1(A2-O-W2)n’(VIb)式中-A1和A2是相同的或不同的，并為連接物基團(tuán)，-W1和W2是相同的或不同的，并為至少具有2個羥基的有機(jī)基團(tuán)，-R為氫或C1-C5-烷基，優(yōu)選氫或C1-C3-烷基，并-n’是0或相應(yīng)為W1的羥基數(shù)目。連接物基A1和A2優(yōu)選是式(CH2)m’(C＝O)-基團(tuán)，式中m’是1至5、特別是1至3。W1和W2基優(yōu)選是多羥基-單元，它的定義相應(yīng)于式(IIa)，(IIb)所定義的基團(tuán)。若n’是0，則是第一代樹枝狀聚合物。若n’相應(yīng)于W1的羥基數(shù)目，則代表第二代樹枝狀聚合物。樹枝狀聚合物的羥基-端基必要時可被取代，例如通過式A3-R’的一個連接基，其中A3如A1和A2連接物基所定義，并R’為C1-C5，優(yōu)選C1-C3-烷基。制備本發(fā)明的金屬絡(luò)合物是通過一種金屬鹽、例如一種金屬鹵代物與相應(yīng)的配位體的反應(yīng)進(jìn)行的，并必要時通過六氟磷酸鹽陰離子或六氟硼酸鹽陰離子接著進(jìn)行鹵離子離子交換。這類方法在現(xiàn)有技術(shù)中，例如在歐洲專利EP-B-0178450和EP-B-0255534中記述過。這里就此對這種公開作了引證參考。制備親水的N-雜環(huán)的配位體，可以簡單的方式通過在芳烴的配位體上的取代、例如經(jīng)甲苯磺酸根的取代來進(jìn)行。也可以相應(yīng)的方式，用帶功能式X的親水連接物的連結(jié)來進(jìn)行。制備半籠結(jié)構(gòu)的或籠結(jié)構(gòu)的式(IV)金屬絡(luò)合物例如可通過在雙吡啶配位體上或菲咯啉配位體上加上亞烷基氧-單元，亞烷基硫-單元或/和亞烷基氨基一單元、并經(jīng)醚或酰胺鍵在橋端頭連接這種單元來實現(xiàn)。使用二個橋端頭可得到籠結(jié)構(gòu)。優(yōu)選是在一三價橋端頭上連接3個配位體，例如三個(Tris)。絡(luò)合物本身，如前所述，是通過與金屬鹽轉(zhuǎn)化制備的。制備半籠和籠式金屬絡(luò)合物可按反應(yīng)示意圖III(圖9a和9b)進(jìn)行。制備通式(V)金屬絡(luò)全物例如通過按反應(yīng)路線I(圖7)的反應(yīng)進(jìn)行，方法是，使相應(yīng)取代的配位體與氨基多醇或部分被保護(hù)的多醇進(jìn)行轉(zhuǎn)化，借此式(IIa)或(IIb)的親水基加在配位體上。制備樹枝狀的金屬絡(luò)合物相應(yīng)于反應(yīng)路線II(圖8)進(jìn)行。本發(fā)明的另一主題是一處包含生物物質(zhì)在內(nèi)的共軛物，在生物物質(zhì)上至少連接一種本發(fā)明的金屬絡(luò)合物。適合的生物物質(zhì)的例子是細(xì)胞，病毒，亞細(xì)胞微粒，蛋白質(zhì)，脂蛋白，糖蛋白，肽，多肽，核酸，低聚糖，多糖，脂多糖，細(xì)胞代謝物，半抗原，激素，藥理的有效物質(zhì)，生物堿，類固醇，維生素，氨基酸和糖。金屬絡(luò)合物與生物活性物質(zhì)的結(jié)合主要是經(jīng)金屬絡(luò)合物上反應(yīng)性的或可活化的功能基進(jìn)行的，該功能基可與生物物質(zhì)的功能基共價結(jié)合。若功能基是活性酯，舉例來說則可與生物物質(zhì)的自由氨基結(jié)合。若功能基是馬來酰亞胺基，則可進(jìn)行與生物物質(zhì)的自由SH-基結(jié)合。以相似的方式也可實現(xiàn)生物物質(zhì)功能基的活化，舉例來說，接著可與金屬絡(luò)合物的自由的羧酸基、氨基或硫羥基反應(yīng)。在本發(fā)明的特別優(yōu)選的實施例中，使金屬絡(luò)合物連結(jié)在肽上，肽具有的長度優(yōu)選為最大50個氨基酸，并特別優(yōu)選為最大30個氨基酸。制備這種金屬絡(luò)合物示蹤肽優(yōu)選通過下述方法進(jìn)行，使肽與所希望的氨基酸序列在固相上合成，與此同時a)在合成之后，使活化的金屬絡(luò)合物、優(yōu)選金屬絡(luò)合物-活化酯衍生物連接到肽的N-末端的氨基上，或/和b)在合成期間，使一個氨基酸衍生物導(dǎo)入到肽的至少一個位置上，此氨基酸衍生物與金屬絡(luò)合物是共價連接的。金屬絡(luò)合物在肽的N-末端的氨基酸上的連接優(yōu)選通過在肽從固相上解離之前、并在保護(hù)基從氨基酸衍生物的反應(yīng)側(cè)基上解離之前進(jìn)行，該氨基酸衍生物是為肽合成所使用的。肽優(yōu)選含有免疫反應(yīng)的抗原決定基區(qū)和間隔基區(qū)，其中至少一個金屬絡(luò)合物-示蹤基連結(jié)在間隔基區(qū)。間隔基區(qū)優(yōu)選具有1至10個氨基酸的長度并定位在肽的氨基末端或/和羧基末端。間隔基區(qū)主要含有氨基酸，氨基酸具有電荷或/或能構(gòu)成氫橋。間隔基區(qū)的氨基酸優(yōu)選由下述化合物構(gòu)成，這些化合物為甘氨酸，β-丙氨酸，γ-氨基丁酸，ε-氨基己酸，賴氨酸和結(jié)構(gòu)式為NH2-[(CH2)yO]x-CH2-CH2-COOH的化合物，式中Y是2或3，X是1至10。肽的抗原決定基區(qū)主要來源于致病的生物體，例如細(xì)菌，病毒，和原生動物或來源于自身免疫-抗原。抗原決定基區(qū)特別優(yōu)選來源于病毒性的抗原，例如HIVI，HIVII或肝炎C-病毒(HCV)的氨基酸序列。生物物質(zhì)的其他優(yōu)的實施例是生物素，核酸，抗體或抗體斷片，多肽抗原，也就是說免疫反應(yīng)的多肽，或半抗原，即分子量從150至2000的有機(jī)分子，特別是甾類主環(huán)系統(tǒng)的分子，如卡烯丙酯，卡烯內(nèi)酯-苷(例如地谷新，地谷新配基)，甾族-生物堿，性激素例如黃體酮，糖皮質(zhì)激素等。半抗原的其他例子是前列腺素，無色-烯-二炔，凝血惡烷，藥理的有效物質(zhì)等。本發(fā)明的另外的一個主題是本發(fā)明的金屬絡(luò)合物或本發(fā)明的共軛體在免疫檢定方法中的應(yīng)用。此外金屬絡(luò)合物還用作示蹤基，藉其幫助，可在試液中進(jìn)行定性的或/和定量的分析測定。金屬絡(luò)合物的確定主要是通過電化發(fā)光來實現(xiàn)的，同時產(chǎn)生的發(fā)光物電化地作用于電極的表面上。用現(xiàn)有技術(shù)的金屬絡(luò)合物進(jìn)行發(fā)光測定的例子出現(xiàn)在歐洲專利EP-A-O，580979，世界專利WO90/05301，WO90/11511和WO92/14138中。因此上述公開的發(fā)光測定方法和設(shè)備在此聲明并入本發(fā)明。電化發(fā)光測定是在固相存在下進(jìn)行的，它主要由微粒、特別是由磁性的微粒組成，這種微粒具有一反應(yīng)層，例如具有抗生蛋白鏈菌素，以這種方式可證明含金屬絡(luò)合物作為示蹤基的免疫絡(luò)合物結(jié)合在固相上。電化發(fā)光測量優(yōu)選是在絡(luò)合物的還原劑例如胺存在下進(jìn)行的。優(yōu)選的是脂族胺，特別是伯、仲和叔烷基胺，其烷基通常有1至3個碳原子。特別優(yōu)選的是三丙基胺。但胺也可是芳族胺，如苯胺或雜環(huán)胺。這種還原劑可在絡(luò)合物的配位體范圍內(nèi)已整合成為一個整體。這樣的體系特別適合于測定以高濃度形式存在的分析物。另外必要時，加強(qiáng)劑可為一種非離子的表面活化劑，例如乙氧基化的酚。這樣的物質(zhì)是例如以商業(yè)名為TritonX100或TritonN401可買到的。另一方面，通過熒光也可證實發(fā)光金屬絡(luò)合物，在這當(dāng)中，通過用適宜波長的光輻射激發(fā)金屬螯合物并測量由此產(chǎn)生的熒光發(fā)射。進(jìn)行熒光測定的一些例子出現(xiàn)在EP-A-O178450和EP-A-O255534中。此外通過下述實施例和圖5對本發(fā)明進(jìn)行說明圖1a為一種式(IIIa)金屬絡(luò)合物，圖1b為一種式(IIIb)金屬絡(luò)合物，圖1c為一種式(IV)金屬絡(luò)合物，圖2為一種式(IV)金屬絡(luò)合物，圖3a為一種式(IV)金屬絡(luò)合物，圖3b為一種式(IV)金屬絡(luò)合物，圖4為一種式(IV)金屬絡(luò)合物，圖5為一種式(IV)金屬絡(luò)合物，圖6為一種式(V)金屬絡(luò)合物，圖7為制備式(V)金屬絡(luò)合物的反應(yīng)示意圖，圖8為制備式(V)金屬絡(luò)合物的另一反應(yīng)示意圖，圖9a和9b為制備式(IV)金屬絡(luò)合物的反應(yīng)示意圖和圖10為金屬絡(luò)合物-黃體酮-共軛物實施例1制備親水的雙吡啶-配位體(4，4’-雙(甲氧基-乙氧基-乙氧基)-雙吡啶)使50ml二異丙基酰胺鋰在由環(huán)己烷、乙苯和四氫呋喃組成的混合物中的溶液冷卻至-78℃。滴入350ml在四氫呋喃中的50mmol雙吡啶溶液。攪拌2小時，然后滴入在四氫呋喃中的100mmol甲氧基-乙氧基-乙氧基-甲苯磺酸酯的溶液。在-78℃經(jīng)1小時后，使反應(yīng)混合物在室溫過夜。然后加入氯化鈉水溶液。接著用一旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除掉四氫呋喃，并用乙酸酯提取殘余物。產(chǎn)物經(jīng)硅膠色譜提純。洗提劑乙酸酯-甲醇-氨95/4/1，或用具有乙酸酯-石油醚的氨基-硅膠作為洗提劑。H-NMR(CDCl3)3.6ppm(m.CH2CH2)＝16H7.12-8.5ppm(bpy)＝6H實施例2制備雙(雙乙二醇-雙吡啶)-二氯釕絡(luò)合物將三氯化釕連同雙倍摩爾過剩量的在實施例1中制備的配位體和7至8倍過剩量的氯化鋰溶入二甲基甲酰胺(DMF)中，并在回流下煮沸6小時。除去溶劑，使殘余物溶入水，并用乙酸酯提取，并接著用氯仿提取。合并氯仿相，干燥，過濾并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮。產(chǎn)物用薄層色譜經(jīng)氨基硅膠用乙腈/水10/1純化(Rf＝0.58)。實施例3合成雙(雙乙二醇-雙吡啶)-4(4(4’-甲基-2，2’雙吡啶基))-丁酸3.0g在實施例2中制備的釕-絡(luò)合物在氬氣氛下溶入240ml乙醇-水的混合物中。向其中加入0.82g雙吡啶基-丁酸-衍生物，并在回流下加熱3小時。將溶液進(jìn)行濃縮，用乙酸酯洗滌并用氯仿提取。旋轉(zhuǎn)濃縮，并經(jīng)SP-交聯(lián)葡聚糖(凝膠)純化殘余物(洗提劑NaC/HCl在水中)。產(chǎn)率500mg，純度(HPLC)93％質(zhì)譜(ms)(PosLIMS)1455.5＝Ru2+絡(luò)合物PF6-實施例4制備親水的金屬絡(luò)合物-活化酯衍生物將260mg在實施例3中制備的絡(luò)合物溶入二氯甲烷中，并加入當(dāng)量摩爾數(shù)量的二環(huán)己基碳化二亞胺/N-羥基琥珀酰亞胺酯。攪拌12小時，濾出DCH并旋轉(zhuǎn)濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)制備的高壓液體色譜(HPLC)純化。產(chǎn)率為85％。實施了例5制施備親水的金施屬絡(luò)合物-馬來酰亞胺-衍生物按照EP-A-O580979，將150mg金屬絡(luò)合物釕(雙吡啶)2(雙吡啶-CO-N-羥基丁二酰亞胺酯)與100mg馬來酰亞胺基-氨基-二噁辛烷(MADOO)和三乙胺一起在二氯甲烷中進(jìn)行約12小時的轉(zhuǎn)化。反應(yīng)混合物用水搖蕩，分離三次，并將得自有機(jī)相的殘余物經(jīng)交聯(lián)葡聚糖(凝膠)-HL20-柱子用二氯甲烷/甲醇凈化。得到圖1a標(biāo)明的化合物Ru(雙吡啶)2(雙吡啶-CO-MADOO)。質(zhì)譜M+＝1025.3(相應(yīng)于Ru2+PF6-絡(luò)合物)實施例6制備親水的金屬絡(luò)合物-活化酯-衍生物使0.5mmol在實施例5中作原料使用的釕絡(luò)合物在20ml二氯甲烷中與0.5mmol單-BOC-二氨基二噁辛烷在20ml二氯甲烷中和當(dāng)量的三乙胺進(jìn)行轉(zhuǎn)化，純化如實施例5所述。BOC-保護(hù)基按標(biāo)準(zhǔn)方法(三氟乙酸/二氯甲烷)分離。將生成的產(chǎn)物與當(dāng)量摩爾數(shù)量的辛二酸-雙-N-15羥基琥珀酰亞胺在二甲基甲酰胺中、在室溫下轉(zhuǎn)化2小時。去掉溶劑，將殘余物吸收入水中，并冰結(jié)干燥。生成的產(chǎn)物在圖1b中標(biāo)明。H-NMR7.2-8.9ppm雙吡啶(22H)；2.8ppmN-羥基琥珀酰亞胺酯(4H)實施例7合成金屬絡(luò)合物-庚烷-共軛物10mg得自實施例4的N-羥基琥珀酰亞胺酯與3.2mg黃體酮-3-羧甲基-肟-金剛烷基二氧基辛烷(diamondioxyoctan)溶入2ml二氯甲烷中，再添加1.2μl三乙胺并在室溫攪拌12小時。除去溶劑并使殘余物經(jīng)交聯(lián)葡聚糖純化。生成的共軛物示于圖10中。質(zhì)譜(posLIMS)M+＝1923.0(釕-絡(luò)合物-黃體酮-共軛物2+三氟乙酸酯)實施例8制備金屬螯合物-示蹤的-肽利用芴基甲氧基羰基-(Fmoc)-固相肽合成法，在批處理肽合成器中，例如AppliedBiosystems(應(yīng)用的生物體系)A431或A433，備金屬螯合物-示蹤的肽。為此使用了各4.0當(dāng)量的表1中所示的氨基酸衍生物表1在方案(a)中(在固相合成結(jié)束之后導(dǎo)入示蹤標(biāo)記)，將活化的親水釕(雙吡啶基)3-絡(luò)合物(BPRu)連結(jié)到肽的N-終端氨基酸上。在間隔基區(qū)使用了賴氨酸-衍生物K1并在抗原決定基區(qū)使用了賴氨酸-衍生物K2。按方案(b)，金屬螯合基導(dǎo)入肽序列是通過直接引入連結(jié)金屬螯合物的氨基酸衍生物進(jìn)行的，例如在序列內(nèi)經(jīng)一個與金屬螯合物活化酯ε-衍生化的賴氨酸基例如賴氨酸-衍生物K3，或通過使用α-衍生化的氨基酸基的N-終端來進(jìn)行。使氨基酸或氨基酸衍生物溶入N-甲基-吡咯烷酮中，在400-500mg4-(2’，4’-二甲氧苯基-Fmoc-氨甲基)-苯氧基-樹脂(四面體學(xué)28(1987)2107)上，肽的分布為0.4-0.7mmol/g(JACS95(1973)，1328)。關(guān)于Fmoc-氨基酸衍生物的連結(jié)反應(yīng)，用4當(dāng)量的二環(huán)己基碳化二亞胺和4當(dāng)量的N-羥基苯并三唑在20分鐘內(nèi)進(jìn)行，在二甲基甲酰胺中作反應(yīng)介質(zhì)。在每一合成步驟之后，用20％的哌啶在二甲基甲酰胺中裂解Fmoc-基20分鐘。肽序列中存在半胱氨酸時，在合成結(jié)束以后，用碘在六氟異丙醇/二氯甲烷中在固相上直接進(jìn)行氧化。從載體上釋放肽和耐酸保護(hù)基的分解是在室溫用20ml三氟乙酸、0.5ml乙二硫醇，1ml苯硫基甲烷，1.5g酚和1ml水在40分鐘內(nèi)進(jìn)行。接著向反應(yīng)液中摻入300ml冷卻的二異丙基醚，并在0℃保持40分鐘，使肽完全沉淀。濾出沉淀，用二異丙醚洗滌，用少量50％的乙酸溶解，并冷凍干燥。得到的原料利用預(yù)備的高壓液體色譜(HPLC)在Delta-PakRPC18-物質(zhì)上(柱子50×30mm100A，15μ)經(jīng)一相應(yīng)的梯度(洗脫劑A水，0.1％三氟乙酸，洗脫劑B乙腈，0.1％三氟乙酸)在約120分鐘內(nèi)進(jìn)行純化。洗脫物的本體利用離子噴射-質(zhì)譜儀檢驗。引入金屬螯合物示蹤標(biāo)記是按方案(a)經(jīng)相應(yīng)的活化酯-衍生物在結(jié)合在載體上的肽的自由N-終端氨基上進(jìn)行的。此外向每一自由伯式功能氨基滴加4當(dāng)量的親水釕(雙吡啶基)3-絡(luò)合物(BPRu)，活化用N-羥基苯并三唑/二環(huán)己基碳化二亞胺，并溶入少量的二甲亞礬中，并在室溫攪拌。轉(zhuǎn)換是經(jīng)分析用高壓液體色譜進(jìn)行的。產(chǎn)物自載體分離后，利用備好的高壓液體色譜純化，洗脫物本體利用離子噴射-質(zhì)譜儀檢驗。肽的制備也可通過方案(a)和(b)的結(jié)合實現(xiàn)，也就是說，在序列內(nèi)引入連結(jié)金屬螯合物的氨基酸衍生物，裂解N-終端的Fmoc-基并使自由N-終端的氨基與金屬螯合物酯衍生物反應(yīng)。在按方案(b)固相合成期間，在唯一的直接引入連結(jié)的金屬螯合物的氨基酸衍生物時，事后導(dǎo)入金屬螯合物-活化酯不再是必需的。由HIVI或HIVII的區(qū)域gp120，gp41和gp32制備了表2中所示的肽-金屬絡(luò)合物-共軛物。表2釕基化的線性肽</tables>由HCV的NS5-區(qū)，NS4-區(qū)和芯區(qū)合成了表3中所示的肽。表3釕基化的線性肽</tables>通過在樹脂上N-終端衍生化，或在序列中經(jīng)一個與生物素活化酯-ε-衍生化的賴氨酸基(Fmoc-賴氨酸(生物素)-OH)能制備生物素示蹤的肽。實施例9制備二乙基-α，α，α’，α’-四(乙氧基羰基)-2，2’-雙吡啶-4，4’-二基-二丙酸酯(圖7中的相應(yīng)化合物(1))。向由6.85g(29.5mmol)三乙基-甲烷-三羧酸酯和4.1g(29.7mmol)碳酸鉀在50ml甲苯/二甲基甲酰胺(3/2)中組成的混合物中，在50℃和好的攪拌情況下，滴加2.00g(5.8mmol)4，4’-雙(溴甲基)-2，2’-雙吡啶在40ml甲苯/二甲基甲酰胺中(3/2)。在65℃繼續(xù)攪拌4天，過濾并接著在真空中去掉溶劑。將油狀殘余物收入100ml甲苯中，并先后3次用水、3次用7％苛性鈉溶液、并3次用水振蕩分離。集中有機(jī)相，并經(jīng)硫酸鈉干燥，在真空中去掉揮發(fā)分后，將殘余物用環(huán)己烷重結(jié)晶，為完全除去不純物，進(jìn)行柱色譜分離(SiO2，CHCl3/甲醇(10∶1)第一帶)。無色晶體(環(huán)己烷)產(chǎn)率2.95g(79％)熔點(diǎn)116℃1H-NMR(250MHz，CDCl3，25℃)δ＝1，21(t，18H，3J＝7，2Hz)，3，57(s，4H)，4，22(q，12H，3J＝7，2Hz)，7，25(dd，2H，3J＝5，1Hz，4J＝1，2Hz)，8，29(d，2H，4J＝1，2Hz)，8，51(dd，2H，3J＝5，1Hz，4J＝1，2Hz)13C-NMR(75MHz，CDCl3，25℃)δ＝13，96(CH3)，38，1(CH2)，62，6(H2CO)，66，5(CCO)，123，4，123，6，145，9，149，0，155(吡啶基-C，CH)，166，5(C＝O).IR(KBr/固相)[cm-1]556，610，863，1026，1186，1258，1305，1594，1737vs.2988MS-50(180℃，70eV，300μA，m/e)gef.644，2585C32H40N2O12(644，682)實施例10制備N，N’-雙(2-羥基-1，1-雙(羥甲基)-乙基)-α，α-雙羥基-2，2’-雙吡啶-4，4’-二基二丙酰胺(相應(yīng)表7中的化合物(2))向由752.7mg(1.17mmol)得自實施例7的六酯和848.6mg(7.00mmol)α，α，α-三-(羥甲基)-甲胺在10ml經(jīng)CaH2干燥的二甲基亞礬訓(xùn)組成的溶液中、攪拌下加入967.5mg(7.00mmol)碳酸鉀。在加堿之后混合物變?yōu)榈S色。在25℃繼續(xù)攪拌10小時后，離心分離懸浮液，并自固體碳酸鉀傾析溶液。在真空(0.001毫巴)、30℃去除溶劑。使黃色油狀的殘余物懸浮入微量水中，并通過慢慢加入干燥的丙酮(經(jīng)P4O10蒸餾過)使產(chǎn)物沉淀出來。在冷卻中進(jìn)行完全沉淀。傾析溶液并經(jīng)P4O10干燥殘余物數(shù)天。剩下一種吸濕性的無色固體，它可直接用于精制。產(chǎn)率0.652g(67％)1H-NMR(250MHz，DMSO-d6，25℃)δ＝3，08(d，4H)，3，22(s，8H)，3，47(d，8H，2J＝10，8Hz)，3，55(d，8H，2J＝11，1Hz)，3，69(t，2H)，4，6-5，1(bs，OH)，7，27(d，2H，吡啶基-H，3J＝4，8Hz)，7，4-7，7(s，NH)，8，23(s，2H，吡啶基-H)，8，51(d，2H，吡啶基-H，3J＝4，8Hz)13CNMR(75MHz，DMSO-d6，25℃)δ＝30，7(CH2)，59，7(CH2OH)，61，7(CR4)，63，34(CR4)，78，5(CCO)，122，8，126，0，146，0，148，7，155，0(吡啶基-C，CH2)，170，2(CONH)IR(Kbr/固相)[cm-1]3336，2936，2880，1675，1597，1559，1533，1465，1363，1051(vs)FAB-MS(m-NBA，m/e)833，3，855，3，871，3，965，2(M+H)，(M+Na)，(M+K)，(M+Cs)C34H52N6O18(832，3)實施例11按反應(yīng)示意圖III(圖9a和9b)制備半籠式的或籠式的親水配位體投料2.6g(10mmol)雙吡啶-甲基溴80ml2-甲氧基乙胺10g碳酸鉀實驗進(jìn)行在攪拌下，將溴化物加到粉碎的碳酸鉀在2-甲氧基乙胺中的懸浮液中。然后在室溫攪拌懸浮液12小時。接著過濾，蒸去過剩的2-甲氧基乙胺，并在真空中干燥殘余物。殘余物進(jìn)行色譜分離(SiO2；CH2Cl2/CH3OH/NH3，100∶10∶1)。得一淺黃色油。產(chǎn)率1.06g(3.85mmol)38％1H-NMR(250MHz，CDCl3)1，95(s，1H，NH)；2，26(s，3H，Pyri-dyl-CH3)，2，7(t，3J＝5，28Hz，2H，OCH2)；3，24(s，3H，OCH3)；3，41(t，3J＝5，28Hz，2H，NCH2)；3，76(s，2H，吡啶基-CH2)，7，5(dd，3J＝8，35Hz，4J＝2，17Hz，1H，吡啶基-H)；7，69(dd，3J＝8，19Hz，4J＝2，24Hz，1H)，吡啶基-H)；8，17(d，3J＝8，02Hz，1H，吡啶基-H)；8，22(d，3J＝8，24Hz，1H，吡啶基-H)；8，39(d4J＝1，84Hz，1H，吡啶基-H)；8，85(d，4J＝1，85Hz，1H，吡啶基-H)ppm.投料2.26(10mmol)三一醇6.67(35mmol)甲苯磺?；然飳嶒炦M(jìn)行在冷卻、保護(hù)氣體和攪拌情況下，將甲苯磺酰基氯化物在20ml吡啶中的溶液摻入三醇在20ml吡啶中的溶液中，使反應(yīng)混合物的溫度不超過10℃。然后在室溫再攪拌24小時。接著小心地澆上由10ml水，20ml甲醇和8ml濃鹽酸組成的混合物。沉淀出的產(chǎn)物或分離出的油進(jìn)行過濾或分離并色譜純化(SiO2；CH2Cl2/CH3OH/NH3，100∶10∶1)。得無色晶體。熔點(diǎn)smp57-59℃1H-NMR(250MHz，CD2Cl2)2，4(s，9H，Ar-CH3)；3，25(s，2H，CH2)；3，88(s，6H，CH2)；4，22(s，2H，CH2)；7，02-7，1(m，2H，Ar-H)；7，25-7，3(m，3H，Ar-H)；7，31(d，3J＝6，46Hz，6H，Ar-H)；7，31(d，3J＝6，46Hz，6H，Ar-H)；7，67(d，3J＝6，46Hz，Ar-H)ppm13C-NMRu.DEPT-135(62，8MHz，CDCl3)；145，36；137，20；131，75；43，82(Cq)；130，05；128，39；128，33；127，92；127，75；127，23(CH)；73，28，66，71；66，31(CH2)；21，67(CH3)ppm實施例13親水金屬絡(luò)合物在免疫檢測中的應(yīng)用為證明抗肝炎C-病毒(HCV)特定的抗體，進(jìn)行了雙抗原橋接試驗。在這種情況下，用釕示蹤的抗原和生物素化的抗原對要測定的抗體在有抗生蛋白鏈菌素覆蓋層的固相存在下卵化試樣液。在試樣液中，根據(jù)閃光體系(Flash-system)、可通過電化發(fā)光測定固相的示蹤標(biāo)記確定抗HCV-抗體的存在。作為抗原，使用了含HCV氨基酸1207-1488的HCV-多肽。這種氨基酸序列和制備這樣的多肽已在DE-A-4428705.4中敘述過。為了用琥珀酰亞胺酯活化的釕金屬絡(luò)合物使HCV-多肽衍生化，將冷凍干燥的多肽溶入100mM磷酸鈉緩沖液中，其pH6.5，蛋質(zhì)濃度為10mg/ml，含0.1％SDS。通過添加5M，使pH值調(diào)至8.5，并用二硫蘇糖醇使溶液的最終濃度為2mM。向這種溶液加入與所希望的化學(xué)計量量相應(yīng)數(shù)量的、在二甲基亞礬中的琥珀酰亞胺酯活化的釕金屬絡(luò)合物，并接著在65℃攪拌下孵化60分鐘。用通過賴氨酸增加反應(yīng)混合物，使反應(yīng)最終濃度為10mM，并經(jīng)繼續(xù)30分鐘孵化而停止。接著使料經(jīng)pH6.5，0.1％SDS的100mM磷酸鈉緩沖液進(jìn)行透析。將蔗糖(終濃度6.5％(W/V))摻入產(chǎn)生的蛋白質(zhì)溶液，并分批冷凍干燥。為制備一種用馬來酰亞胺活化的釕絡(luò)合物衍生化的HCV-多肽，將冷凍干燥的蛋白質(zhì)收入pH6.5，0.1％SDS(蛋白質(zhì)濃度10mg/ml)的100mM磷酸鈉緩沖液中。向這種溶液加入與所希望的化學(xué)計量量相應(yīng)數(shù)量的、在二甲基亞礬中的馬來酰亞胺活化的釕絡(luò)合物，并在25℃在攪拌下，孵化60分鐘。用通過賴氨酸增加反應(yīng)混合物，使反應(yīng)終濃度為10mM，并經(jīng)繼續(xù)30分鐘的孵化而停止。反應(yīng)混合物接著進(jìn)行如上所述的透析，加入蔗糖并分批冷凍干燥。進(jìn)行了三個實點(diǎn)，其中使用了各不相同的釕化的抗原。對實點(diǎn)A(對比)，使在實施例5和6中作為原料使用的釕-絡(luò)合物按EP-A-O580979以化學(xué)計量的比例1∶3連結(jié)在多肽上。對實點(diǎn)B，多肽與在實施例5中制備的本發(fā)明親水釕-絡(luò)合物以化學(xué)計量的比例1∶3相連結(jié)。作為生物素化了的抗原，在所有3個實點(diǎn)中都用了多肽，此多肽以化學(xué)計量的比例1∶6已經(jīng)連結(jié)在馬來酰亞胺活化的生物素上。這種釕化的抗原和生物素化的抗原已各以濃度為400ng/ml的試驗被使用。權(quán)利要求1.通式(I)的金屬絡(luò)合物〔M(L1L2L3)〕n-XmA(I)式中-M是一選自稀土金屬離子或過渡金屬離子的二價的或三價的金屬陽離子，-L1，L2和L3相同或不同，并為具有至少二個含氮雜環(huán)的配位體，同時L1，L2和L3經(jīng)氮原子連結(jié)在金屬陽離子上，-X是一反應(yīng)性的或可活化的功能基，它共價連結(jié)在至少一個配位體L1，L2，L3上，-n是從1至10的一個整數(shù)，-m是從1至6的一個整數(shù)，并-A為一個或多個為電荷平衡必需的、帶負(fù)電荷的基團(tuán)，其特征在于，該絡(luò)合物含有至少一個選自C2-C3亞烷基氧-單元，C2-C3-亞烷基硫-單元，C2-C3亞烷基氨基-單元或/和多羥基-單元的親水基。2.按照權(quán)利要求1的絡(luò)合物，其特征在于，金屬陽離子M是釕-，錸-，鋨-，鉻-或銥離子。3.按照權(quán)利要求1或2的絡(luò)合物，其特征在于，金屬陽離子是一個釕離子。4.按照權(quán)利要求1至3之一的絡(luò)合物，其特征在于，配位體L1，L2，L3含有雙吡啶-環(huán)體系或/和菲咯啉-環(huán)體系。5.按照權(quán)利要求1至4之一的絡(luò)合物，其特征在于，反應(yīng)性的或可活化的功能基X是羧酸酰鹵，羧酸酐，活化酯，馬來酰亞胺，胺，羧酸，硫醇，鹵化物，羥基或可光活化的基團(tuán)。6.按照權(quán)利要求1至5之一的絡(luò)合物，其特征在于，帶負(fù)電荷的基團(tuán)A是六氟磷酸根，三氟乙酸根，四氟硼酸根或鹵根離子。7.按照權(quán)利要求1至6之一的絡(luò)合物，其特征在于，多羥基-單元選自式(IIa)或(IIb)的基團(tuán)-NR-W(IIa)-O-W(IIb)式中W為具有至少2個羥基的有機(jī)基團(tuán)，R為氫或C1-C5-烷基。8.按照權(quán)利要求7的絡(luò)合物，其特征在于，多羥基-單元為式-NR-C(CH2OH)3所示。9.按照權(quán)利要求1至8之一的絡(luò)合物，其特征在于，C2-C3-亞烷基氧-，C2-C3-亞烷基硫-或C2-C3-亞烷基氨基-單元是乙烯氧基-，乙烯硫基-或乙烯氨基-單元。10.按照權(quán)利要求1至9之一的絡(luò)合物，其特征在于，每個金屬陽離子存在有1至30個C2-C3-亞烷基氧-，C2-C3-亞烷基硫-或C2-C3-亞烷基氨基-單元。11.按照權(quán)利要求1至10之一的、具有通式(III)的絡(luò)合物；式中M，X和A定義如權(quán)利要求1，R1，R2，R3，R4，R5和R6相同或不同，并各為一個或多個取代基，其前提條件是，X經(jīng)R1，R2，R3，R4，R5或R6取代基之一與配位體之一相結(jié)合，并至少R1，R2，R3，R4，R5或R6取代基之一含有至少一個選自C2-C3-亞烷基氧-，C2-C3-亞烷基硫-和C2-C3-亞烷基氨基-單元的親水基。12.按照權(quán)利要求11的通式(IIIa)的絡(luò)合物式中M，X和A定義如權(quán)利要求1，R1，R2，R3，R4和R5定義如權(quán)利要求11，S是0至6的一個整數(shù)，Y為選自C2-C3-亞烷基氧-，C2-C3-亞烷基硫-和C2-C3-亞烷基氨基-單元的、具有1至10個親水單元的一個親水基。13.按照權(quán)利要求11的通式(IIIb)的絡(luò)合物；式中M，X和A定義如權(quán)利要求1，R1，R2，R3，R4和R5定義如權(quán)利要求11，S是0至6的一個整數(shù)，其前提條件是，R1，R2，R3，R4或/和R5含有一個親水取代基，它各包含1至10個C2-C3-亞烷基氧-，C2-C3-亞烷基硫-或/和C2-C3-亞烷基氨基-單元。14.按照權(quán)利要求1至10之一的通式(IV)的絡(luò)合物式中M，X，n和A定義如權(quán)利要求1，R1，R2和R3相同或不同，并各為一個或多個取代基，Y各為一親水的連接物基團(tuán)，它包含選自C2-C3-亞烷基氧-，C2-C3-亞烷基硫-和C2-C3-亞烷基氨基-單元的1至10個親水單元。15.按照權(quán)利要求1至10之一的通式(V)的絡(luò)合物式中M，X和A定義如權(quán)利要求1，Z為一連接物基，R1’，R2’，R3’，R4’和R5’相同或不同，并各為一個或多個取代基，其前提條件是，R1’，R2’，R3’或/和R4’含有至少一個親水取代基，該取代基包括一個多羥基-單元。16.按照權(quán)利要求15的絡(luò)合物，其特征在于，多羥基-單元的OH-基是通過另外的親水基取代的。17.按照權(quán)利要求16的絡(luò)合物，其特征在于，這些另外的親水基包含一個樹枝狀物或一個式(VIa)或(VIb)樹枝狀物的構(gòu)件-A1-NR-W1(A2-NR-W2)n’(VIa)-A1-O-W1(A2-O-W2)n’(VIb)式中-A1和A2相同或不同，并為連接體基，-W1和W2相同或不同，并為一個具有至少2個羥基的有機(jī)基團(tuán)，-R為氫或C1-C5-烷基，并-n’是0或與W1的羥基數(shù)相應(yīng)的數(shù)。18.含有生物物質(zhì)的共軛物，其上至少連結(jié)了按照權(quán)利要求1至17之一的一種金屬絡(luò)合物。19.按照權(quán)利要求18的共軛物，其特征在于，生物物質(zhì)是生物素，抗體或抗體斷片，核酸，多肽抗原，免疫反應(yīng)性的肽或半抗原。20.按照權(quán)利要求1至17之一的金屬絡(luò)合物或按照權(quán)利要求18或19的共軛物在免疫檢定方法中的應(yīng)用。21.按照權(quán)利要求20的應(yīng)用，用在電化發(fā)光方法中。22.按照權(quán)利要求21的應(yīng)用，其特征在于，在還原劑存在下，對金屬絡(luò)合物進(jìn)行電化發(fā)光測量。23.按照權(quán)利要求22的應(yīng)用，其特征在于，還原劑是在金屬絡(luò)合物的配位體范圍內(nèi)整合成一整體。全文摘要本發(fā)明涉及新的親水金屬絡(luò)合物和其在免疫化驗中作為發(fā)光示蹤基的應(yīng)用。文檔編號G01N33/58GK1152923SQ95194207公開日1997年6月25日申請日期1995年7月24日優(yōu)先權(quán)日1994年7月25日發(fā)明者R·海爾曼,H-P·約瑟爾,G·帕皮爾特,F·沃特爾,B·福洛比爾,J·愛斯比尼爾申請人:伯倫格曼海姆有限公司