發(fā)明領(lǐng)域本申請屬于抗體領(lǐng)域和生物檢測領(lǐng)域，具體地，本申請?zhí)峁┝撕锒徊《究焖贆z測試紙及特異性單克隆抗體。

背景技術(shù)：

1、猴痘是一種由猴痘病毒(monkeypox?virus，mpxv)感染所致的一種人獸共患病毒性疾病，臨床上主要表現(xiàn)為發(fā)熱、皮疹、淋巴結(jié)腫大。

2、猴痘病毒是一種包膜雙鏈dna病毒，屬痘病毒科正痘病毒屬，是能對人類致病的4種正痘病毒之一，另外3種分別是天花病毒(variola?virus，varv)、痘苗病毒(vacciniavirus，vacv)和牛痘病毒(cowpox?virus，cpxv)。電鏡下猴痘病毒顆粒呈磚形或橢圓形，病毒顆粒存在有兩種感染形式:胞外包膜病毒(enveloped?virion，ev)和胞內(nèi)成熟毒粒(mature?virion，mv)，ev是病毒在細(xì)胞內(nèi)獲得一層外膜形成的，mv形式最為豐富，在環(huán)境中也最穩(wěn)定，是病毒在宿主間傳播的主要形式。目前已有20多重結(jié)構(gòu)蛋白在mv和ev病毒顆粒表面被鑒定，其中不少是中和抗體識別的靶抗原。其中a29l主要與細(xì)胞表面糖胺聚糖結(jié)合，介導(dǎo)病毒和細(xì)胞的融合，是猴痘病毒mv的重要膜蛋白，在痘苗病毒和牛痘病毒中與之同源的分別為a27l和162蛋白；

3、目前，pcr作為猴痘特異診斷的主要技術(shù)，但依賴于設(shè)備且易造成污染，目前也尚未建立核酸檢測以外的其他檢測方法。因此，需要密切關(guān)注猴痘病毒的流行情況，加強(qiáng)病毒檢測和監(jiān)測，盡快開發(fā)診斷試劑方法，以應(yīng)對猴痘病毒可能出現(xiàn)的流行。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、一方面，本申請?zhí)峁┝撕锒徊《究焖贆z測試紙，所述試紙為免疫層析試紙，其中包含猴痘病毒特異性單克隆抗體4c4和猴痘病毒特異性單克隆抗體9d5；

2、所述猴痘病毒特異性單克隆抗體4c4的重鏈cdr的氨基酸序列為h-cdr1：sytfscyw、h-cdr2：ilpasgst、h-cdr3：ssalctiittrgmdc；所述猴痘病毒特異性單克隆抗體4c4的輕鏈cdr的氨基酸序列為l-cdr1：ssvnf、l-cdr2：sts、l-cdr3：hqwssypwt；

3、所述猴痘病毒特異性單克隆抗體9d5的重鏈cdr的氨基酸序列為h-cdr1：gftvtsyw、h-cdr2：ilpgcdst、h-cdr3：stalstmittrgmdc；所述猴痘病毒特異性單克隆抗體9d5的輕鏈cdr的氨基酸序列為l-cdr1：lsnvdsngnty、l-cdr2：kv、l-cdr3：fehshvplt。

4、進(jìn)一步地，所述猴痘病毒特異性單克隆抗體4c4的重鏈氨基酸序列為seq?idno.1，和/或所述猴痘病毒特異性單克隆抗體4c4的輕鏈氨基酸序列為seq?id?no.6；

5、所述猴痘病毒特異性單克隆抗體9d5的重鏈氨基酸序列為seq?id?no.11，和/或所述猴痘病毒特異性單克隆抗體9d5的輕鏈氨基酸序列為seq?id?no.16。

6、進(jìn)一步地，所述猴痘病毒特異性單克隆抗體4c4為試紙上的劃膜抗體；所述猴痘病毒特異性單克隆抗體9d5為試紙上的標(biāo)記抗體。

7、進(jìn)一步地，所述猴痘病毒特異性單克隆抗體9d5上標(biāo)記有乳膠微球。

8、本申請免疫層析試紙中可用于標(biāo)記物不限于各種顏色的乳膠微球，經(jīng)過適當(dāng)?shù)恼{(diào)整和驗證，膠體金等標(biāo)記也可以使用。

9、進(jìn)一步地，所述試紙包含背板、硝酸纖維膜、乳膠微球墊、樣品墊、吸水紙；乳膠微球墊上噴涂有標(biāo)記有乳膠微球的猴痘病毒特異性單克隆抗體9d5；硝酸纖維膜噴涂有猴痘病毒特異性單克隆抗體4c4。

10、本申請免疫層析試紙的結(jié)構(gòu)不局限于上述基本結(jié)構(gòu)，在抗體不變的基礎(chǔ)上，其他基于雙抗夾心法的免疫層析試紙的部分和結(jié)構(gòu)也可以常規(guī)換用。背板、膜和墊部分的材料可以選用各種可用的種類。

11、另一方面，本申請?zhí)峁┝藱z測猴痘病毒的非診斷方法，所述方法使用上述猴痘病毒快速檢測試紙進(jìn)行檢測。

12、所述非診斷方法包括但不限于檢測環(huán)境、器械、食品、藥品是否受到病毒污染的方法。

13、另一方面，本申請?zhí)峁┝撕锒徊《咎禺愋詥慰寺】贵w，所述單克隆抗體重鏈cdr的氨基酸序列為h-cdr1：sytfscyw、h-cdr2：ilpasgst、h-cdr3：ssalctiittrgmdc；所述單克隆抗體輕鏈cdr的氨基酸序列為l-cdr1：esvdnyglsf、l-cdr2：aa、l-cdr3：qqskevpwt；或者單克隆抗體重鏈cdr的氨基酸序列為h-cdr1：gftvtsyw、h-cdr2：ilpgcdst、h-cdr3：stalstmittrgmdc；所述單克隆抗體輕鏈cdr的氨基酸序列為l-cdr1：lsnvdsngnty、l-cdr2：kv、l-cdr3：fehshvplt。

14、進(jìn)一步地，所述單克隆抗體重鏈氨基酸序列為seq?id?no.1，所述單克隆抗體輕鏈氨基酸序列為seq?id?no.6；或者，所述單克隆抗體重鏈氨基酸序列為seq?id?no.11，所述單克隆抗體輕鏈氨基酸序列為seq?id?no.16。

15、另一方面，本申請?zhí)峁┝松鲜鰡慰寺】贵w在制備猴痘病毒檢測試劑中的應(yīng)用。

16、所述檢測試劑不限于上述雙抗夾心法免疫層析試紙，包括但不限于阻斷法免疫層析試紙、一般elisa方法檢測試劑等均在本申請的保護(hù)范圍之內(nèi)。

17、另一方面，本申請?zhí)峁┝司幋a猴痘病毒特異性單克隆抗體的基因，所述基因包含seq?id?no.5和seq?id?no.10，或者所述基因包含seq?id?no.15和seq?id?no.20。

18、通過構(gòu)建載體、轉(zhuǎn)化、培養(yǎng)、收獲、純化等本領(lǐng)域常規(guī)步驟，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以使用上述基因生產(chǎn)前述抗體，其中的載體、宿主細(xì)胞等本領(lǐng)域技術(shù)人員可以常規(guī)構(gòu)建。

技術(shù)特征：

1.猴痘病毒快速檢測試紙，其特征在于，所述檢測試紙為免疫層析試紙，其中包含猴痘病毒特異性單克隆抗體4c4和猴痘病毒特異性單克隆抗體9d5；

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測試紙，所述猴痘病毒特異性單克隆抗體4c4的重鏈氨基酸序列為seq?id?no.1，和/或所述猴痘病毒特異性單克隆抗體4c4的輕鏈氨基酸序列為seqid?no.6；所述猴痘病毒特異性單克隆抗體9d5的重鏈氨基酸序列為seq?id?no.11，和/或所述猴痘病毒特異性單克隆抗體9d5的輕鏈氨基酸序列為seq?id?no.16。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的檢測試紙，所述猴痘病毒特異性單克隆抗體4c4為試紙上的劃膜抗體；所述猴痘病毒特異性單克隆抗體9d5為試紙上的標(biāo)記抗體。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測試紙，所述猴痘病毒特異性單克隆抗體9d5上標(biāo)記有乳膠微球。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測試紙，所述試紙包含背板、硝酸纖維膜、乳膠微球墊、樣品墊、吸水紙；乳膠微球墊上噴涂有標(biāo)記有乳膠微球的猴痘病毒特異性單克隆抗體9d5；硝酸纖維膜噴涂有猴痘病毒特異性單克隆抗體4c4。

6.檢測猴痘病毒的非診斷方法，其特征在于，所述方法使用根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項所述的檢測試紙進(jìn)行檢測。

7.猴痘病毒特異性單克隆抗體，其特征在于，所述單克隆抗體重鏈cdr的氨基酸序列為h-cdr1：sytfscyw、h-cdr2：ilpasgst、h-cdr3：ssalctiittrgmdc；所述單克隆抗體輕鏈cdr的氨基酸序列為l-cdr1：esvdnyglsf、l-cdr2：aa、l-cdr3：qqskevpwt；或者單克隆抗體重鏈cdr的氨基酸序列為h-cdr1：gftvtsyw、h-cdr2：ilpgcdst、h-cdr3：stalstmittrgmdc；所述單克隆抗體輕鏈cdr的氨基酸序列為l-cdr1：lsnvdsngnty、l-cdr2：kvs、l-cdr3：fehshvplt。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的單克隆抗體，所述單克隆抗體重鏈氨基酸序列為seq?idno.1，所述單克隆抗體輕鏈氨基酸序列為seq?id?no.6；或者，所述單克隆抗體重鏈氨基酸序列為seq?id?no.11，所述單克隆抗體輕鏈氨基酸序列為seq?id?no.16。

9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的單克隆抗體在制備猴痘病毒檢測試劑中的應(yīng)用。

10.編碼猴痘病毒特異性單克隆抗體的基因，其特征在于，所述基因包含seq?id?no.5和seq?id?no.10，或者所述基因包含seq?id?no.15和seq?id?no.20。

技術(shù)總結(jié)
本申請?zhí)峁┝撕锒徊《究焖贆z測試紙及其中的猴痘病毒特異性抗體，該檢測試紙為免疫層析試紙，其中包含猴痘病毒特異性單克隆抗體4C4和猴痘病毒特異性單克隆抗體9D5。本申請的猴痘病毒快速檢測試紙對猴痘病毒具有良好的靈敏度和特異性，完善了猴痘病毒檢測手段。

技術(shù)研發(fā)人員：盧帥,宋文俊,孫宇天,李月
受保護(hù)的技術(shù)使用者：北京溯本源和生物科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19