本發(fā)明涉及分析檢測，具體涉及穩(wěn)定劑及其應(yīng)用、易電離化合物的分析方法及高效液相色譜柱的再生方法。

背景技術(shù)：

1、離子化合物，尤其是易電離的離子化合物，如通過色譜條件對其進行分離，流動相中則需要使用到離子對試劑。使得色譜柱固定相帶電荷，利用電荷的異性相吸原理，吸附和保留易電離的維庫溴銨、羅庫溴銨、西吡氯銨等化合物，例如《中國藥典》2020年版二部、uspnf?2023、ep11.4中的流動相均采用了離子對試劑。

2、然而，上述方法有兩個比較明顯的缺點：一是導(dǎo)致離子對試劑吸附在色譜柱填料的活性位點上，難以被沖洗下來，進而影響固定相活性位點，會出現(xiàn)保留時間提前，理論塔板數(shù)降低，分離度變差的情況，而由于吸附過程是不可逆的，即便沖洗色譜柱再充分，也只是能部分恢復(fù)色譜柱的性能，色譜柱使用壽命均很短，經(jīng)濟成本較大。二是色譜柱的批內(nèi)批間差異導(dǎo)致了分離度的波動，色譜柱的硅膠表面會在出廠時殘留一部分的化學(xué)鍵(例如羥基等)，而色譜柱批間批內(nèi)殘留的微小差異，對于普通化合物的分離來說，并無較大影響，但對于有離子對試劑的色譜系統(tǒng)，一部分離子對試劑填充到固定相的縫隙中與其鍵合，故更容易顯示出色譜柱的批間差異對分離帶來的影響。

3、因此，如果能通過加入一種穩(wěn)定劑，改善針對使用離子對試劑，色譜柱極性受到影響的情況，使其再次達到保留時間回歸正常、理論板數(shù)增加、分離度符合要求的目的，將會對離子化合物的分析起到至關(guān)重要的作用。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供穩(wěn)定劑及其應(yīng)用、易電離化合物的分析方法及高效液相色譜柱的再生方法。本發(fā)明利用聚乙二醇單甲醚能夠改善色譜柱柱效降低，無法分離雜質(zhì)的情況。

2、為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

3、本發(fā)明提供了一種穩(wěn)定劑，包括聚乙二醇單甲醚和ph值調(diào)節(jié)劑。

4、本發(fā)明還提供了上述技術(shù)方案所述穩(wěn)定劑在易電離化合物的液相色譜分析中的應(yīng)用；所述分析為檢測或分離。

5、優(yōu)選地，所述穩(wěn)定劑還包括ph值調(diào)節(jié)劑。

6、優(yōu)選地，所述易電離化合物包括維庫溴銨、羅庫溴銨、哌庫溴銨和西吡氯銨中的一種或幾種。

7、本發(fā)明還提供了一種易電離化合物的分析方法，包括以下步驟：將待測易電離化合物進行分析，得到易電離化合物的分析結(jié)果；所述分析為檢測或分離；所述高效液相色譜分析采用的流動相中含有上述技術(shù)方案所述的穩(wěn)定劑。

8、優(yōu)選地，所述流動相中聚乙二醇單甲醚的濃度為4～6g/l。

9、優(yōu)選地，所述高效液相色譜分析的條件包括：色譜柱的填充劑包括十八烷基硅烷鍵合硅膠、硅膠或氰基鍵合硅膠，檢測波長為210～260nm，流動相流速為1～2ml/min，柱溫為30～45℃，進樣體積為20～100μl。

10、優(yōu)選地，當(dāng)所述易電離化合物為維庫溴銨時，所述高效液相色譜分析的流動相為第一弱堿性四甲基氫氧化銨水溶液、甲醇、乙腈和聚乙二醇單甲醚的混合溶劑；所述第一弱堿性四甲基氫氧化銨水溶液、甲醇和乙腈的體積比為120～150：235～265：600～630；所述第一弱堿性四甲基氫氧化銨水溶液的ph值為6.5～8。

11、優(yōu)選地，當(dāng)所述易電離化合物為羅庫溴銨時，所述高效液相色譜分析的流動相為第二弱堿性氫氧化四甲基銨溶液、乙腈和聚乙二醇單甲醚的混合溶劑；所述第二弱堿性氫氧化四甲基銨溶液和乙腈的體積比為5～15：85～95；所述第二弱堿性氫氧化四甲基銨溶液的ph值為6.5～8。

12、優(yōu)選地，當(dāng)所述易電離化合物為西吡氯銨時，所述高效液相色譜分析的流動相包括流動相a和流動相b；所述流動相a為甲醇；所述流動相b為四甲基氫氧化銨水溶液、磷酸二氫鉀水溶液和聚乙二醇單甲醚的混合溶液；所述流動相b的ph值為3～4.5；洗脫方式為梯度洗脫，所述梯度洗脫程序如下：0～8min，所述流動相a的體積分?jǐn)?shù)由50％增加至70％；8～30min，所述流動相a的體積分?jǐn)?shù)為70％；30～32min，所述流動相a的體積分?jǐn)?shù)由70％降低至50％；32～40min，所述流動相a的體積分?jǐn)?shù)為50％。

13、本發(fā)明還提供了一種高效液相色譜柱的再生方法，包括以下步驟：利用再生流動相對上述技術(shù)方案所述分析方法使用的色譜柱進行再生；所述再生流動相中含有聚乙二醇單甲醚。

14、在使用離子對試劑時，調(diào)節(jié)保留時間的方式與普通反相不同，改變流動相ph值可以抑制易電離化合物(目標(biāo)化合物)發(fā)生電離，使目標(biāo)化合物在流動相中以中性的分子形態(tài)存在，使得易電離化合物的檢測分離更加的有效。聚乙二醇單甲醚具有一定的表面活性劑的作用，可以與離子對試劑在一定ph值范圍內(nèi)協(xié)同作用，既達到了分離易電離化合物的目的，也避免了離子對試劑對色譜柱的損壞，進而延長色譜柱的壽命。對已經(jīng)無法達到易電離化合物檢測分離要求的色譜柱，使其再次滿足色譜峰分離要求，在易電離化合物的檢測分離中起著至關(guān)重要的作用。而且，本發(fā)明通過在流動相中加入穩(wěn)定劑進行高效液相色譜分析，方法簡便，可大大節(jié)約色譜柱的投入成本。

技術(shù)特征：

1.一種穩(wěn)定劑，包括聚乙二醇單甲醚和ph值調(diào)節(jié)劑。

2.權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定劑在易電離化合物的液相色譜分析中的應(yīng)用；所述分析為檢測或分離。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述易電離化合物包括維庫溴銨、羅庫溴銨、哌庫溴銨和西吡氯銨中的一種或幾種。

4.一種易電離化合物的分析方法，包括以下步驟：

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的分析方法，其特征在于，所述流動相中聚乙二醇單甲醚的濃度為4～6g/l。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的分析方法，其特征在于，所述高效液相色譜分析的條件包括：色譜柱的填充劑包括十八烷基硅烷鍵合硅膠、硅膠或氰基鍵合硅膠，檢測波長為210～260nm，流動相流速為1～2ml/min，柱溫為30～45℃，進樣體積為20～100μl。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的分析方法，其特征在于，當(dāng)所述易電離化合物為維庫溴銨時，所述高效液相色譜分析的流動相為第一弱堿性四甲基氫氧化銨水溶液、甲醇、乙腈和聚乙二醇單甲醚的混合溶劑；所述第一弱堿性四甲基氫氧化銨水溶液、甲醇和乙腈的體積比為120～150：235～265：600～630；所述第一弱堿性四甲基氫氧化銨水溶液的ph值為6.5～8。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的分析方法，其特征在于，當(dāng)所述易電離化合物為羅庫溴銨時，所述高效液相色譜分析的流動相為第二弱堿性氫氧化四甲基銨溶液、乙腈和聚乙二醇單甲醚的混合溶劑；所述第二弱堿性氫氧化四甲基銨溶液和乙腈的體積比為5～15：85～95；所述第二弱堿性氫氧化四甲基銨溶液的ph值為6.5～8。

9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的分析方法，其特征在于，當(dāng)所述易電離化合物為西吡氯銨時，所述高效液相色譜分析的流動相包括流動相a和流動相b；所述流動相a為甲醇；所述流動相b為四甲基氫氧化銨水溶液、磷酸二氫鉀水溶液和聚乙二醇單甲醚的混合溶液；所述流動相b的ph值為3～4.5；洗脫方式為梯度洗脫，所述梯度洗脫程序如下：0～8min，所述流動相a的體積分?jǐn)?shù)由50％增加至70％；8～30min，所述流動相a的體積分?jǐn)?shù)為70％；30～32min，所述流動相a的體積分?jǐn)?shù)由70％降低至50％；32～40min，所述流動相a的體積分?jǐn)?shù)為50％。

10.一種高效液相色譜柱的再生方法，包括以下步驟：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了一種穩(wěn)定劑及其應(yīng)用、易電離化合物的分析方法及高效液相色譜柱的再生方法，涉及分析檢測技術(shù)領(lǐng)域。聚乙二醇單甲醚具有一定的表面活性劑的作用，可以與離子對試劑在一定pH值范圍內(nèi)協(xié)同作用，可以抑制易電離化合物(目標(biāo)化合物)發(fā)生電離，使目標(biāo)化合物在流動相中以中性的分子形態(tài)存在，既達到了分離易電離化合物的目的，也避免了離子對試劑對色譜柱的損壞，進而延長色譜柱的壽命。對已經(jīng)無法達到易電離化合物檢測分離要求的色譜柱，使其再次滿足色譜峰分離要求，在易電離化合物的檢測分離中起著至關(guān)重要的作用。而且，本發(fā)明通過在流動相中加入穩(wěn)定劑進行高效液相色譜分析，方法簡便，可大大節(jié)約色譜柱的投入成本。

技術(shù)研發(fā)人員：陶小剛,劉力明,陳彥,葉妙華,冼少琴,王綏楊,王世陽,王小玉,周園園,符慧椰,陳女俊,朱麗秋
受保護的技術(shù)使用者：海南靈康制藥有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19