本發(fā)明涉及文冠果茶葉領(lǐng)域；尤其涉及一種文冠果茶葉中抗氧化活性的分析方法。

背景技術(shù)：

1、目前，從天然植物中獲取綠色、安全的抗氧化劑成為人們的研究熱點(diǎn)。文冠果不僅是食用價(jià)值很高的油料作物，其各部位含豐富的藥用成分，曾作為蒙藥被錄入1977年版《中華人民共和國藥典》。

2、文冠果屬于藥食同源植物，國內(nèi)外研究者對文冠果各個(gè)部位的化學(xué)成分進(jìn)行了研究。文冠果并沒有毒性，文冠果茶呈現(xiàn)出黃色或是黃綠色，擁有獨(dú)特的氣味，不過并不是青草的香味，在其制作成飲品之后，則表現(xiàn)出橙黃色，味道比較醇厚，細(xì)品十分滋潤。文冠果茶在生產(chǎn)制造的環(huán)節(jié)里，通過特殊工藝盡可能留存了文冠果葉的營養(yǎng)元素與治療效果，把文冠果茶泡成茶水，不但令人百喝不厭，同時(shí)還可以發(fā)揮良好的保健治療效果。

3、文冠果不同部位的主要植物化學(xué)成分，包括三萜類、黃酮類、酚酸類、香豆素類、木脂素類、半萜類、單萜類、生物堿和甾醇。其中，三萜是文冠果的主要成分之一，迄今為止，已從文冠果中報(bào)告了三萜類化合物，其主鏈主要由羽扇豆烷型、甘遂烷型、玉蕊醇型、環(huán)阿屯烷型、羊毛脂烷型等。從文冠果中分離并鑒定了許多黃酮類化合物，主要類型是黃銅、黃烷酮、二氫黃酮、雙黃酮等化合物。酚酸作為生物活性物質(zhì)廣泛分布于文冠果中。從文冠果中分離的酚類化合物為原兒茶酸、乙基原兒茶甲酸、香草酸、對羥基苯甲醛、3,4,5-三甲氧基苯甲酸、對羥基苯基乙酸2-羥基-6-甲基苯甲酸、酪醇和對羥基甲基苯甲酸香草酸等化合物。

4、在文冠果提取物中作為抗氧化劑的活性物質(zhì)通常是酚酸、類黃酮和皂苷。這些抗氧化劑通過減少氧化應(yīng)激損傷對人類有益。雖然抗氧化活性不具有藥理意義，但它是一種基本的治療因素，并且常常伴隨著其他特定的藥理作用。

5、文冠果茶中的提取物質(zhì)擁有良好的抗炎效果，不管是文冠果枝、葉還是果、干等，都具備改善風(fēng)濕病的效果。文冠果葉的蛋白質(zhì)含量大概在19％-23％之間，并且富含著16類氨基酸，尤其是文冠果葉中的賴氨酸含量達(dá)到了35mg/kg；此外還富含著5.53％楊梅樹皮甙，所以擁有良好的抑菌消炎、降低血脂以及膽固醇等功效，這對風(fēng)濕病以及三高患者都有良好的治療效果。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供了一種文冠果茶葉中抗氧化活性的分析方法。

2、本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

3、本發(fā)明涉及一種文冠果茶葉中抗氧化活性的分析方法，包括以下步驟：

4、步驟1，儀器的準(zhǔn)備

5、gen5酶標(biāo)儀(熱電公司，美國)；超純水系統(tǒng)(頗爾富迪生物分析儀器有限公司,上海)；bs210s型電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司，德國)；jp-040s型潔盟牌超聲波清洗器(深圳市潔盟清洗設(shè)備有限公司)；sqp型電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司，德國)；

6、步驟2，材料與試劑的準(zhǔn)備

7、蘆丁(批號(hào)：bwb51607)、沒食子酸(批號(hào)：8338)對照品均購于普天同創(chuàng)科技有限公司(深圳)，維生素c(vc，)，dpph自由基清除能力試劑盒(貨號(hào)：ads-w-dp001)，abts自由基清除能力試劑盒(貨號(hào)：ads-w-ab001)，總抗氧化能力(t-aoc)(frap法)試劑盒(貨號(hào)：ads-w-ky005-96)，色譜甲醇及其余試劑均為分析純；

8、步驟3，樣品的提?。悍Q取文冠果茶葉粉末1g，分別用甲醇和水超聲提取30min，再用甲醇稀釋成不同濃度的樣品提取液，備用；

9、步驟4，依次進(jìn)行abts法、dpph法、frap法的分析；

10、abts工作液的配置：臨用前將加水溶解后的試劑一和試劑二按照1:1比例混合，避光反應(yīng)12h，再用無水乙醇稀釋20倍，得abts工作液，備用；

11、trolox標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置：稱取2mg標(biāo)準(zhǔn)品trolox至ep管，加2ml甲醇充分溶解得母液1mg/ml；將母液用甲醇稀釋成以下濃度的標(biāo)準(zhǔn)品：0，20，40，60，80，100μg/ml；

12、abts自由基清除率的計(jì)算公式如下：

13、清除率＝[(1-(a測定-a對照)÷a空白)×100]％

14、測定步驟：(1)在96孔板的每個(gè)檢測孔中加入190μl?abts工作液；(2)空白孔中加入無水乙醇，陽性對照為抗壞血酸10mg/ml，標(biāo)準(zhǔn)曲線檢測孔內(nèi)加入各種濃度的trolox標(biāo)準(zhǔn)溶液，樣品檢測孔內(nèi)加入不同倍數(shù)稀釋的各種樣品，輕輕混勻；(3)在室溫25℃避光靜置6min，酶標(biāo)儀測定734nm處吸光值a。

15、所述dpph法的具體步驟為：

16、dpph工作液的配置：臨用前甩幾下使試劑落入底部，再加19ml無水乙醇充分溶解備用；

17、trolox標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置：稱取2mg標(biāo)準(zhǔn)品trolox至ep管，加2ml甲醇充分溶解得母液1mg/ml，將母液用甲醇稀釋成以下濃度的標(biāo)準(zhǔn)品：0，5，10，15，20，25μg/ml；

18、dpph自由基清除率的計(jì)算公式如下：

19、清除率＝[(1-(a測定-a對照)÷a空白)×100]％

20、測定步驟：(1)先在ep管中加入樣品和標(biāo)準(zhǔn)品溶液，空白管中加入80％甲醇，陽性對照為抗壞血酸10mg/ml,再加150μl?dpph工作液；(2)混勻，在室溫25℃避光靜置30min，12000rpm，室溫離心5min，取200μl至96孔板中，酶標(biāo)儀測定734nm處吸光值a。

21、所述frap法的具體步驟為：

22、顯色液配置：將試劑一、試劑二、試劑三按10:1:1的比例混合，現(xiàn)配現(xiàn)用，注意避光；

23、trolox標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置：稱取2mg標(biāo)準(zhǔn)品trolox至ep管，加2ml甲醇充分溶解，4μmol/ml標(biāo)準(zhǔn)品母液，備用；將母液用樣品提取液稀釋成以下濃度的標(biāo)準(zhǔn)品：0，0.4，1.2，2.0，2.8，3.6μmol/ml；按照測定管加樣體系操作；

24、總抗氧化能力的計(jì)算公式如下：

25、總抗氧化能力(μmol?trolox/ml)＝[(δa-0.371)÷0.0605×10-3]÷1×0.005

26、測定步驟：(1)先在測定管中加入樣品提取液和標(biāo)準(zhǔn)品溶液，加入蒸餾水25μl和顯色液170μl；空白管中加入蒸餾水30μl和顯色液170μl，陽性對照為抗壞血酸10mg/ml；(2)混勻后，在室溫25℃準(zhǔn)確反應(yīng)10min，酶標(biāo)儀測定590nm處吸光值a；δa＝a測定-a空白。

27、本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：

28、(1)本發(fā)明所涉及的檢測方法，得知文冠果葉、果殼乙醇提取物具有顯著的體外抗氧化、抗hiv和抗腫瘤等多種活性，超聲輔助提取法操作簡便，耗時(shí)短，提取效率高，更有利于文冠果葉中有效成分的提取，且提取物具有較強(qiáng)的體外抗氧化能力。

29、(2)本發(fā)明所涉及的文冠果茶葉與普通葉茶相比，文冠果茶的芽茶具有更高的抗氧化活性和多酚、黃酮含量，且芽茶與葉茶的抗氧化活性與多酚和黃酮含量呈極顯著正相關(guān)，說明酚類物質(zhì)與抗氧化能力有很大的關(guān)系。