本發(fā)明涉及藥物分析檢測領(lǐng)域，尤其涉及一種頭孢酯型藥物中鹵代酯的檢測方法。

背景技術(shù)：

1、頭孢酯型藥物有不同的合成路線，碘代酯是其必不可少的原料。碘代酯包括1-碘乙基異丙基碳酸酯及特戊酸碘甲酯。經(jīng)sarah?dereck軟件專家?guī)旒敖Y(jié)構(gòu)預(yù)測，該類鹵代酯為基因毒性雜質(zhì)。鹵代酯具有親電試劑的性質(zhì)，在生理條件下同體內(nèi)核酸、蛋白質(zhì)或其他重要成分中的親核中心發(fā)生取代反應(yīng)，使這些成分發(fā)生不可逆的損傷，表現(xiàn)為毒性、致突變或致癌等作用。為保證藥品安全，應(yīng)對其嚴(yán)格控制。根據(jù)人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會議(ich)發(fā)布的m7指導(dǎo)原則及藥品最大日服劑量計算，頭孢類藥物中該類鹵代酯殘留應(yīng)控制在25ppm以下。

2、《廣東化工》2019年第46卷，405期，169：公開了一種采用氣相色譜對頭孢泊肟酯中1-碘乙基異丙基碳酸酯殘留的定量檢測方法，以fid為檢測器，用乙腈為溶劑將供試品配制成100mg/ml的溶液，配制后直接進樣檢測，定量限濃度為30.69μg/ml，相當(dāng)于樣品溶液濃度的300ppm。但是，由于頭孢類化合物穩(wěn)定性較差，采用直接進樣法時，頭孢類化合物的酰胺鍵會在進樣口的高溫下斷裂，分解成小分子不斷進入色譜柱，對被測雜質(zhì)的測定產(chǎn)生干擾，使得檢測的靈敏度低，檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。

3、當(dāng)鹵代酯做為基因毒性雜質(zhì)控制時，頭孢酯型藥物中需嚴(yán)格控制鹵代酯含量，雜質(zhì)的限度較低，對檢測方法靈敏度要求高。因此，亟需一種靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確、操作簡便的頭孢酯型藥物中低含量鹵代酯的檢測方法。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、為了解決上述檢測靈敏度低，檢測結(jié)果不準(zhǔn)確的技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種頭孢酯型藥物中鹵代酯的檢測方法，通過對待測供試品進行萃取，實現(xiàn)鹵代酯的濃縮富集，消除頭孢類化合物干擾，該檢測方法操作簡單、靈敏度高、檢測結(jié)果準(zhǔn)確。

2、本發(fā)明的具體技術(shù)方案為：一種頭孢酯型藥物中鹵代酯的檢測方法，包括以下步驟：1)將頭孢酯型藥物樣品溶解于溶劑中，做為供試品儲備液，加入正己烷萃取，取上清液，得到供試品溶液；

3、2)將鹵代酯對照品溶解于溶劑中，做為對照品儲備液，加入正己烷萃取，取上清液，得到對照品溶液；

4、3)采用氣相色譜-質(zhì)譜法檢測供試品溶液和對照品溶液，使用外標(biāo)法計算得到頭孢酯型藥物中鹵代酯的含量。

5、采用液液萃取的前處理方式實現(xiàn)鹵代酯的濃縮富集，消除大部分基質(zhì)干擾。通過調(diào)控氣相參數(shù)，使鹵代酯與其他干擾物分離，使質(zhì)譜檢測保持高靈敏度，能完成供試品中低濃度鹵代酯的檢測，保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。

6、進一步的，所述鹵代酯為1-氯乙基異丙基碳酸酯、1-碘乙基異丙基碳酸酯、特戊酸氯甲酯、特戊酸碘甲酯中的一種或多種。

7、進一步的，所述頭孢酯型藥物為頭孢泊肟酯或頭孢妥侖匹酯。

8、進一步的，步驟3)中，氣相色譜-質(zhì)譜法中的氣相色譜條件為：

9、程序升溫：色譜柱初始柱溫為50～70℃，保持3～8min，以10～20℃/min速率升溫至290～310℃，保持2～5min；

10、進樣口溫度：150～200℃。

11、雖然萃取能消除大部分基質(zhì)干擾，但當(dāng)進樣口溫度過高時，少量未被分離的頭孢泊肟酯的酰胺鍵會斷裂產(chǎn)生干擾峰，因此進樣口溫度不宜過高，當(dāng)進樣口溫度為150～200℃區(qū)間時，既能保證目標(biāo)鹵代酯氣化，又能盡量減少干擾峰的出現(xiàn)。同時柱溫高可使進入色譜柱的干擾峰流出，使得分析儀器保持高靈敏度狀態(tài)。

12、進一步的，步驟3)中，氣相色譜-質(zhì)譜法中的氣相色譜條件為：

13、色譜柱：5％苯基甲基聚硅氧烷填料色譜柱；

14、載氣：高純氦氣；

15、進樣量：1-2μl；

16、流速：1.0～2.0ml/min；

17、分流比：(4-6):1。

18、作為優(yōu)選，所述氣相色譜條件中，色譜柱采用agilent?db-5ms，30m×0.25mm，1μm色譜柱；流速為1.0ml/min；進樣口溫度為170℃。

19、進一步的，步驟3)中，氣相色譜-質(zhì)譜法中的質(zhì)譜分析條件為：

20、離子源：ei源；

21、離子源溫度：230～250℃；

22、四級桿溫度：150～170℃；

23、接口溫度：300～320℃；

24、駐留時間：100～150ms。

25、進一步的，步驟3)中，氣相色譜-質(zhì)譜法中質(zhì)譜的各待測化合物的監(jiān)測模式及定量離子為：

26、1-氯乙基異丙基碳酸酯，sim，45；

27、1-碘乙基異丙基碳酸酯，sim，45；

28、特戊酸氯甲酯，mrm，85>57；

29、特戊酸碘甲酯，mrm，85>57。

30、進一步的，步驟1)和步驟2)中，溶劑為乙腈或甲醇。

31、頭孢酯型藥物在乙腈或甲醇的溶解度極大地高于其在正己烷中的溶解度。根據(jù)相似相溶原理，鹵代酯在正己烷溶解度較高而被萃取至正己烷中，而頭孢類化合物溶于乙腈或甲醇中。在降低供試品的實際濃度的同時也富集了待測雜質(zhì)，由此測得的鹵代酯含量準(zhǔn)確可靠。

32、進一步的，步驟1)和步驟2)中，萃取時間同為0.5～2min。

33、進一步的，步驟1)中，頭孢酯型藥物樣品與溶劑的質(zhì)量體積比為(2.4～54mg):1ml。

34、作為優(yōu)選，步驟1)中，頭孢酯型藥物樣品與溶劑的質(zhì)量體積比為(12～36mg):1ml。

35、進一步的，步驟2)中，鹵代酯對照品與溶劑的質(zhì)量體積比為(0.06～2.0μg)：1ml。

36、進一步的，步驟1)中，頭孢酯型藥物樣品溶解于溶劑中形成供試品儲備溶液，正己烷與供試品儲備溶液的體積比為1:(2～2.5)；步驟2)中，鹵代酯對照品溶解于溶劑中形成對照品儲備溶液，正己烷與對照品儲備溶液的體積比為1:(2～2.5)。

37、進一步的，步驟1)中，取2～6ml體積的供試品儲備溶液進行萃取。

38、進一步的，步驟2)中，取2～6ml體積的對照品儲備溶液進行萃取。

39、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點：

40、本發(fā)明提供了一種能夠準(zhǔn)確測定頭孢酯型藥物中鹵代酯的檢測方法，通過對供試品和對照品進行萃取前處理，消除大部分基質(zhì)干擾，并實現(xiàn)鹵代酯的濃縮富集。通過優(yōu)化色譜參數(shù)，使鹵代酯與其他干擾物分離，保持質(zhì)譜檢測的高靈敏度，保證結(jié)果的準(zhǔn)確性；優(yōu)化質(zhì)譜條件，使檢測限達0.055μg/ml以下，定量限達0.2μg/ml以下，且經(jīng)過準(zhǔn)確度驗證，能測得極低含量的鹵代酯。本方法專屬性、靈敏度、準(zhǔn)確度、線性、重復(fù)性均符合驗證要求，對頭孢酯型藥物質(zhì)量控制及臨床用藥安全性具有十分重要的意義。

技術(shù)特征：

1.一種頭孢酯型藥物中鹵代酯的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種頭孢酯型藥物中鹵代酯的檢測方法，其特征在于，所述鹵代酯為1-氯乙基異丙基碳酸酯、1-碘乙基異丙基碳酸酯、特戊酸氯甲酯、特戊酸碘甲酯中的一種或多種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種頭孢酯型藥物中鹵代酯的檢測方法，其特征在于，所述頭孢酯型藥物為頭孢泊肟酯或頭孢妥侖匹酯。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種頭孢酯型藥物中鹵代酯的檢測方法，其特征在于，步驟3)中，氣相色譜-質(zhì)譜法中的氣相色譜條件為：

5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種頭孢酯型藥物中鹵代酯的檢測方法，其特征在于，步驟3)中，氣相色譜-質(zhì)譜法中的質(zhì)譜分析條件為：

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種頭孢酯型藥物中鹵代酯的檢測方法，其特征在于，步驟3)中，氣相色譜-質(zhì)譜法中質(zhì)譜的各待測化合物的監(jiān)測模式及定量離子為：

7.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的一種頭孢酯型藥物中鹵代酯的檢測方法，其特征在于，步驟1)和步驟2)中，溶劑為乙腈或甲醇。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種頭孢酯型藥物中鹵代酯的檢測方法，其特征在于，步驟1)中，頭孢酯型藥物樣品與溶劑的質(zhì)量體積比為(2.4～54mg)：1ml。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種頭孢酯型藥物中鹵代酯的檢測方法，其特征在于，步驟2)中，鹵代酯對照品與溶劑的質(zhì)量體積比為(0.06～2.0μg)：1ml。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種頭孢酯型藥物中鹵代酯的檢測方法，其特征在于，步驟1)中，頭孢酯型藥物樣品溶解于溶劑中形成供試品儲備溶液，正己烷與供試品儲備溶液的體積比為1:(2～2.5)；步驟2)中，鹵代酯對照品溶解于溶劑中形成對照品儲備溶液，正己烷與對照品儲備溶液的體積比為1:(2～2.5)。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及藥物分析檢測領(lǐng)域，公開了一種頭孢酯型藥物中鹵代酯的檢測方法，包括以下步驟：1)將頭孢酯型藥物樣品溶解于溶劑中，做為供試品儲備液，加入正己烷萃取，取上清液，得到供試品溶液；2)將鹵代酯對照品溶解于溶劑中，做為對照品儲備液，加入正己烷萃取，取上清液，得到對照品溶液；3)采用氣相色譜?質(zhì)譜法檢測供試品溶液和對照品溶液，使用外標(biāo)法計算得到頭孢酯型藥物中鹵代酯的含量。通過正己烷萃取和篩選色譜條件等使得使鹵代酯與頭孢類化合物分離；優(yōu)化氣相色譜和質(zhì)譜條件，使得檢測限度達0.055μg/ml以下，定量限達0.2μg/ml以下，且定量限濃度經(jīng)過準(zhǔn)確度的驗證，使得工業(yè)檢測更加方便有效準(zhǔn)確。

技術(shù)研發(fā)人員：譚躍浪,張俊梅,趙燕青,彭榮花,張春俠,蔣慧丹
受保護的技術(shù)使用者：浙江普洛得邦制藥有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19