本發(fā)明屬于藥物分析，具體涉及一種穿心蓮內(nèi)酯磺化物注射液的特征圖譜及磺化物含量的檢測方法。

背景技術(shù)：

1、穿心蓮內(nèi)酯是天然植物穿心蓮的主要有效成分，具有祛熱解毒，消炎止痛之功效，對細菌性與病毒性上呼吸道感染及痢疾有特殊療效。穿心蓮內(nèi)酯不溶于水，通過磺化工藝引入親水基團，制成的穿心蓮內(nèi)酯磺化物能夠與水融合，且抗菌抗炎療效顯著。由穿心蓮內(nèi)酯磺化物溶解于水制成的穿心蓮內(nèi)酯磺化物注射液，根據(jù)《獸藥管理條例》和《獸藥注冊辦法》規(guī)定，已有多家公司注冊銷售，用于豬支原體肺炎的輔助治療。

2、目前穿心蓮內(nèi)酯磺化物注射液中穿心蓮內(nèi)酯磺化物含量測定，采用的是紫外-可見分光光度法。紫外-可見光譜儀僅適用于微量分析，對于高濃度(一般是指濃度>0.01mol/l)物質(zhì)，物質(zhì)的吸光度和濃度之間的關(guān)系發(fā)生偏離，因此朗伯比爾定律不適用。影響比爾定律偏離的因素較多，如非單色光，雜散光，噪聲，化學因素等。且影響光學系統(tǒng)參數(shù)等外部或內(nèi)部因素較多，誤差難以很好的修正，對檢測結(jié)果的準確度影響較大，檢測結(jié)果不能做為認證依據(jù)。因此，有必要提供一種準確性更高的穿心蓮內(nèi)酯磺化物注射液的檢測方法，使其質(zhì)量得到有效控制。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、為了有效控制穿心蓮內(nèi)酯磺化物注射液的質(zhì)量品質(zhì)，本發(fā)明提供了一種穿心蓮內(nèi)酯磺化物注射液的hplc特征圖譜檢測方法，它是采用高效液相色譜法檢測，具體步驟如下：

2、a、供試品溶液制備：取穿心蓮內(nèi)酯磺化物注射液，加水混勻，即得；

3、b、對照品溶液制備：取磺化物對照品，加水溶解，即得；

4、c、分別量取供試品溶液和對照品溶液注入色譜儀，色譜條件如下：

5、色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相：以乙腈為流動相a，以磷酸二氫鉀緩沖液為流動相b；梯度洗脫程序為：

6、

7、

8、進一步地，步驟a所述穿心蓮內(nèi)酯磺化物注射液與水的體積比為5：25～125。

9、進一步地，步驟b所述對照品溶液每1ml含磺化物10～1000μg。

10、更進一步地，所述磺化物包括17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯-3,19-二硫酸酯鈉、17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯-19-硫酸酯鈉和/或17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯。

11、進一步地，步驟c所述色譜條件中色譜柱為：diamonsil?c18，柱長為250mm，內(nèi)徑為4.6mm，粒徑為5μm，柱溫25～35℃，進樣量5～25μl，流速為0.8～1.2ml·min-1，檢測波長220～230nm。

12、更進一步地，所述色譜條件中柱溫25℃，進樣量10μl，流速為0.1ml·min-1，檢測波長225nm。

13、進一步地，步驟c所述磷酸二氫鉀緩沖液為每1000ml水中含磷酸二氫鉀1.361g和庚烷-1-磺酸鈉1.0g的溶液。

14、進一步地，所述供試品溶液的色譜圖中共有8個特征峰，其中3個峰應(yīng)分別與相應(yīng)對照品色譜峰的保留時間相對應(yīng)，其余各峰的保留時間分別是峰2：29.366±1、峰4：30.905±1、峰5：37.749±1、峰6：47.059±1、峰7：52.957±1。

15、本發(fā)明還提供了一種穿心蓮內(nèi)酯磺化物注射液中磺化物的含量檢測方法，包括如下步驟：

16、1)取穿心蓮內(nèi)酯磺化物注射液，按權(quán)利要求1～7任一項所述方法檢測；

17、2)按外標法以峰面積計算穿心蓮內(nèi)酯磺化物注射液中磺化物的含量。

18、進一步地，所述磺化物包括17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯-3,19-二硫酸酯鈉、17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯-19-硫酸酯鈉和/或17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯；所述穿心蓮內(nèi)酯磺化物注射液中總磺化物含量為17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯-3,19-二硫酸酯鈉，17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯-19-硫酸酯鈉與17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯的含量之和的7.79～7.86倍。

19、本發(fā)明穿心蓮內(nèi)酯磺化物注射液的hplc特征圖譜及磺化物含量的檢測方法，通過特定的色譜條件實現(xiàn)了穿心蓮內(nèi)酯磺化物注射液的hplc特征圖譜及磺化物含量檢測，且有專屬性強、精密度高的特點，檢測方法科學、先進、結(jié)果準確、評價方式合理、具有可操作，可有效的代替紫外分光光度法進行總磺化物的含量測定且結(jié)果精度更高。本發(fā)明將特征圖譜技術(shù)應(yīng)用于中獸藥注射液的質(zhì)量控制，僅需要進行一次高效液相檢測，即可同時測定總磺化物與指標成分的含量，體現(xiàn)一測多評的優(yōu)勢手段，使穿心蓮內(nèi)酯磺化物及其制劑得到快速有效的質(zhì)量控制。

20、顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。

21、以下通過實施例形式的具體實施方式，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進一步的詳細說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。

技術(shù)特征：

1.一種穿心蓮內(nèi)酯磺化物注射液的hplc特征圖譜檢測方法，其特征在于：它是采用高效液相色譜法檢測，具體步驟如下：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的hplc特征圖譜檢測方法，其特征在于：步驟a所述穿心蓮內(nèi)酯磺化物注射液與水的體積比為5：25～125。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的hplc特征圖譜檢測方法，其特征在于：步驟b所述對照品溶液每1ml含磺化物10～1000μg。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的hplc特征圖譜檢測方法，其特征在于：所述磺化物包括17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯-3,19-二硫酸酯鈉、17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯-19-硫酸酯鈉和/或17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的hplc特征圖譜檢測方法，其特征在于：步驟c所述色譜條件中色譜柱為：diamonsil?c18，柱長為250mm，內(nèi)徑為4.6mm，粒徑為5μm，柱溫25～35℃，進樣量5～25μl，流速為0.8～1.2ml·min-1，檢測波長220～230nm。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的hplc特征圖譜檢測方法，其特征在于：所述色譜條件中柱溫25℃，進樣量10μl，流速為1ml·min-1，檢測波長225nm。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的hplc特征圖譜檢測方法，其特征在于：步驟c所述磷酸二氫鉀緩沖液為每1000ml水中含磷酸二氫鉀1.361g和庚烷-1-磺酸鈉1.0g的溶液。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的hplc特征圖譜檢測方法，其特征在于：所述供試品溶液的色譜圖中共有8個特征峰，其中3個峰應(yīng)分別與相應(yīng)對照品色譜峰的保留時間相對應(yīng)，其余各峰的保留時間分別是峰2：29.366±1、峰4：30.905±1、峰5：37.749±1、峰6：47.059±1、峰7：52.957±1。

9.一種穿心蓮內(nèi)酯磺化物注射液中磺化物的含量檢測方法，其特征在于：包括如下步驟：

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的含量檢測方法，其特征在于：所述磺化物包括17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯-3,19-二硫酸酯鈉、17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯-19-硫酸酯鈉和/或17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯；所述穿心蓮內(nèi)酯磺化物注射液中總磺化物含量為17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯-3,19-二硫酸酯鈉，17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯-19-硫酸酯鈉與17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯的含量之和的7.79～7.86倍。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種穿心蓮內(nèi)酯磺化物注射液的HPLC特征圖譜及磺化物含量的檢測方法，其中HPLC特征圖譜檢測方法是采用高效液相色譜法檢測。本發(fā)明通過特定的色譜條件實現(xiàn)了穿心蓮內(nèi)酯磺化物注射液的HPLC特征圖譜及磺化物含量檢測，且有專屬性強、精密度高的特點，檢測方法科學、先進、結(jié)果準確、評價方式合理、具有可操作，可有效的代替紫外分光光度法進行總磺化物的含量測定且結(jié)果精度更高，使穿心蓮內(nèi)酯磺化物及其制劑得到快速有效的質(zhì)量控制。

技術(shù)研發(fā)人員：石湉,李鑫,董可,吳禹熹
受保護的技術(shù)使用者：石湉
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19