本實用新型屬于體外診斷醫(yī)療器械技術(shù)領(lǐng)域，特別是免疫檢測的試劑盒，具體涉及為一種I型志賀毒素時間分辨熒光免疫檢測試劑盒。

背景技術(shù)：

志賀毒素(shiga toxin，stx)是導(dǎo)致腸出血性大腸桿菌感染的主要致病因素之一，其可以透過破損的腸上皮細胞進入血液循環(huán)，與靶器官上皮細胞受體結(jié)合，造成腸道、中樞神經(jīng)系統(tǒng)等器官的損傷，嚴重時可引起溶血性尿毒綜合征，危及患者生命。并且具有暴發(fā)流行性感染的特點，已成為全世界所關(guān)注的的公共衛(wèi)生問題。志賀毒素分為stxI和stxII兩個亞型，stxII擁有多個變種，如stxIIc、stxIId、stxIIe、stxIIf等，而stxI則相對簡單，這也為通過免疫學(xué)手段檢測stxI提供了便利。目前雖然認為stxII是引起溶血性尿毒癥的主要因素，但是由stxI引起的溶血性尿毒癥仍然被經(jīng)常報道。

對病人糞便樣品進行病原菌分離培養(yǎng)仍然是目前診斷產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌感染的金標(biāo)準(zhǔn)，然而該種傳統(tǒng)方法具有操作步驟繁瑣，耗時長，結(jié)果評判主觀性較強等缺點，所以建立一種操作簡便，同時高靈敏性、高特異性的體外診斷方法，對于診斷、治療、傳染源追蹤和疫情控制均具有重大意義。

時間分辨熒光免疫分析技術(shù)(Time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)，是一種非同位素免疫分析技術(shù)，該技術(shù)使用鑭系元素標(biāo)記抗原或者抗體，根據(jù)鑭系元素螯合物的發(fā)光特點，通過時間分辨熒光免疫分析儀器同時對波長和時間兩個參數(shù)進行信號的檢測與分辨，從而達到定量分析待測目標(biāo)物質(zhì)含量的目的，并且可以有效地排除非特異性熒光的干擾，極大地提高分析靈敏度。在鑭系元素中，使用較多的主要是Eu(銪)和Tb(鋱)，Eu熒光壽命為1ms，在水中不穩(wěn)定，但加入增強劑之后可以克服該缺點；Tb熒光壽命為1.6ms，水中穩(wěn)定，但具有熒光波長短、散射嚴重、能量大易使組分分解等明顯劣勢，因此從測量方法學(xué)上看雖然Tb很好，但不適合用于生物分析，故Eu最為常用。

上述試劑需要低溫保存，現(xiàn)有的試劑盒使用時通常需要放入冰袋中或者取出后快速使用，因此導(dǎo)致試劑盒的使用不便。

本實用新型試劑盒針對現(xiàn)有技術(shù)試劑盒無低溫保持結(jié)構(gòu)及設(shè)置后試劑如何更好擺放的問題，本實用新型提供了一種I型志賀毒素時間分辨熒光免疫檢測試劑盒。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為了克服現(xiàn)有技術(shù)試劑盒無低溫保持結(jié)構(gòu)及設(shè)置后試劑如何更好擺放的問題，本實用新型提供一種I型志賀毒素時間分辨熒光免疫檢測試劑盒。

一種I型志賀毒素時間分辨熒光免疫檢測試劑盒，包括盒體，盒蓋，其特征在于，所述盒體內(nèi)設(shè)置一帶孔硬質(zhì)海綿，硬質(zhì)海綿上部中央設(shè)置一個抗stxI單克隆抗體包被的96微孔板凹槽；硬質(zhì)海綿上下兩側(cè)邊緣設(shè)置兩個冰袋孔；凹槽上下兩側(cè)分別水平設(shè)置3個stxI毒素參考標(biāo)準(zhǔn)品試劑瓶圓孔；凹槽左右兩側(cè)，一側(cè)設(shè)置一個Eu標(biāo)抗stxI單克隆抗體試劑瓶圓孔；另一側(cè)設(shè)置三個較大的圓孔，分別為增強液試劑瓶圓孔，濃縮清洗液試劑瓶圓孔，緩沖液試劑瓶圓孔。凹槽內(nèi)設(shè)置包被有stxI單克隆抗體的微孔板；各試劑瓶圓孔內(nèi)對應(yīng)放置相應(yīng)試劑瓶，冰袋孔內(nèi)設(shè)置兩冰袋。通過設(shè)置冰袋可以讓每個試劑保持在較低溫度，有效防止因為溫度過高導(dǎo)致的試劑變形，另外個試劑瓶的合理擺放也可以保證試劑盒使用時取放的方便性。

進一步，所述試劑瓶圓孔的口徑略大于試劑瓶口徑，此種設(shè)置可以防止試劑瓶在圓孔內(nèi)晃動。

進一步，所述兩個冰袋孔為細長方孔，冰袋形狀與細長孔相同，此種設(shè)置可以保證整個試劑盒溫度的均一性。

進一步，硬質(zhì)海綿上的三個較大的圓孔朝外傾斜設(shè)置。此種設(shè)置可以保證較大的試劑瓶不會過高，影響盒蓋的扣合。

進一步，各試劑瓶伸出圓孔的高度相同。

進一步，所述硬質(zhì)海綿通過膠粘或熱塑方式固定于盒體內(nèi)，硬質(zhì)海綿的大小及深度與盒體相同。

進一步，所述微孔板凹槽兩側(cè)設(shè)置方便取拿的弧形口。弧形口的設(shè)置方便對微孔板的取放。

進一步，所述冰袋孔上還設(shè)置與孔大小相同的硬質(zhì)海綿覆蓋，海綿覆蓋的設(shè)置可以防止冰袋融化后脫出。

進一步，所述硬質(zhì)海綿覆蓋上設(shè)置可收回的提鉤。提鉤的設(shè)置方便海綿覆蓋的取蓋。

進一步，所述硬質(zhì)海綿的微孔板凹槽正下方設(shè)置一個空腔，空腔的設(shè)置可以進一步保證所有試劑瓶所處溫度的均一性，防止硬質(zhì)海綿形成實體對溫度傳輸造成干擾。

進一步，所述盒體與盒蓋通過摩擦力較大的轉(zhuǎn)軸連接，非轉(zhuǎn)軸一側(cè)設(shè)置卡扣。

進一步，盒蓋扣合后，盒蓋頂貼近各試劑瓶，此種設(shè)置可以有效防止試劑瓶在試劑盒內(nèi)晃動。

本實用新型的有益效果為：

試劑盒內(nèi)設(shè)計冰袋可以有效減少運輸及使用過程中因溫度過高造成的試劑失效的發(fā)生，盒體內(nèi)各試劑瓶布局合理，有效節(jié)省所述盒體內(nèi)部空間，使得單個試劑盒的體積得到壓縮，降低了試劑盒的運輸成本。

附圖說明

圖1為本實用新型整體結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2為本實用新型不帶各試劑瓶、微孔板及冰袋整體結(jié)構(gòu)示意圖；

圖3為本實用新型硬質(zhì)海綿結(jié)構(gòu)示意圖；

圖4本實用新型不帶各試劑瓶、微孔板及冰袋的硬質(zhì)海綿結(jié)構(gòu)示意圖；

圖5為本實用新型硬質(zhì)海綿剖視結(jié)構(gòu)示意圖；

圖6為本實用新型各試劑瓶、微孔板及冰袋擺放結(jié)構(gòu)示意圖；

圖中，1、盒體；2、盒蓋；3、硬質(zhì)海綿；31、96微孔板；32、凹槽；33、弧形口；41、緩沖液試劑瓶圓孔；42、緩沖液試劑瓶；43、增強液試劑瓶圓孔；44、增強液試劑瓶；45、濃縮清洗液試劑瓶圓孔；46、濃縮清洗液試劑瓶；51、Eu標(biāo)抗stxI單克隆抗體試劑瓶圓孔；52、Eu標(biāo)抗stxI單克隆抗體試劑瓶；53、stxI毒素參考標(biāo)準(zhǔn)品試劑瓶圓孔；54、stxI毒素參考標(biāo)準(zhǔn)品試劑瓶；61、冰袋孔；62、冰袋；63、海綿覆蓋；64、提鉤；7、空腔；8、轉(zhuǎn)軸；9、突起結(jié)構(gòu)。

具體實施方式

實施例1一種I型志賀毒素時間分辨熒光免疫檢測試劑盒

一種I型志賀毒素時間分辨熒光免疫檢測試劑盒，包括盒體1，盒蓋2，其中盒體1內(nèi)設(shè)置一帶孔硬質(zhì)海綿3，硬質(zhì)海綿3上部中央設(shè)置一個抗stxI單克隆抗體包被的96微孔板31凹槽32；硬質(zhì)海綿3上下兩側(cè)邊緣設(shè)置兩個冰袋孔61；凹槽32上下兩側(cè)分別水平設(shè)置3個stxI毒素參考標(biāo)準(zhǔn)品試劑瓶圓孔53；凹槽32左右兩側(cè)，一側(cè)設(shè)置一個Eu標(biāo)抗stxI單克隆抗體試劑瓶圓孔51；另一側(cè)設(shè)置三個較大的圓孔，分別為增強液試劑瓶圓孔43，濃縮清洗液試劑瓶圓孔45，緩沖液試劑瓶圓孔41。凹槽32內(nèi)設(shè)置包被有stxI單克隆抗體的微孔板31；各孔內(nèi)對應(yīng)放置相應(yīng)物品，具體為：冰袋孔61內(nèi)設(shè)置冰袋62，凹槽32內(nèi)設(shè)置96微孔板31；stxI毒素參考標(biāo)準(zhǔn)品試劑瓶圓孔53內(nèi)設(shè)置stxI毒素參考標(biāo)準(zhǔn)品試劑瓶54；Eu標(biāo)抗stxI單克隆抗體試劑瓶圓孔51設(shè)置Eu標(biāo)抗stxI單克隆抗體試劑瓶52；增強液試劑瓶圓孔43內(nèi)設(shè)置增強液試劑瓶44；濃縮清洗液試劑瓶圓孔45內(nèi)設(shè)置濃縮清洗液試劑瓶46；緩沖液試劑瓶圓孔41設(shè)置緩沖液試劑瓶42。通過設(shè)置冰袋62可以讓每個試劑保持在較低溫度，有效防止因為溫度過高導(dǎo)致的試劑變形，另外各試劑瓶的合理擺放也可以保證試劑盒使用時取放的方便性。

試劑瓶圓孔的口徑略大于試劑瓶口徑，此種設(shè)置可以防止試劑瓶在圓孔內(nèi)晃動。兩個冰袋孔61為細長方孔，冰袋62形狀與細長孔相同，此種設(shè)置可以保證整個試劑盒溫度的均一性。硬質(zhì)海綿3上的三個較大的圓孔朝外傾斜設(shè)置。此種設(shè)置可以保證較大的試劑瓶不會過高，影響盒蓋2的扣合。各試劑瓶伸出圓孔的高度相同。

硬質(zhì)海綿3通過膠粘方式固定于盒體1內(nèi)，硬質(zhì)海綿3的大小及深度與盒體1相同。

微孔板31凹槽32兩側(cè)設(shè)置方便取拿的弧形口33?；⌒慰?3的設(shè)置方便對微孔板31的取放。

盒體1與盒蓋2通過摩擦力較大的轉(zhuǎn)軸8連接，非轉(zhuǎn)軸一側(cè)設(shè)置卡扣，卡扣結(jié)構(gòu)對應(yīng)設(shè)置在盒體1與盒蓋2上的突起結(jié)構(gòu)9。盒蓋2扣合后，盒蓋2頂貼近各試劑瓶，此種設(shè)置可以有效防止試劑瓶在試劑盒內(nèi)晃動。

實施例2一種I型志賀毒素時間分辨熒光免疫檢測試劑盒

一種I型志賀毒素時間分辨熒光免疫檢測試劑盒，包括盒體1，盒蓋2，其中盒體1內(nèi)設(shè)置一帶孔硬質(zhì)海綿3，硬質(zhì)海綿3上部中央設(shè)置一個抗stxI單克隆抗體包被的96微孔板31凹槽32；硬質(zhì)海綿3上下兩側(cè)邊緣設(shè)置兩個冰袋孔61；凹槽32上下兩側(cè)分別水平設(shè)置3個stxI毒素參考標(biāo)準(zhǔn)品試劑瓶圓孔53；凹槽32左右兩側(cè)，一側(cè)設(shè)置一個Eu標(biāo)抗stxI單克隆抗體試劑瓶圓孔51；另一側(cè)設(shè)置三個較大的圓孔，分別為增強液試劑瓶圓孔43，濃縮清洗液試劑瓶圓孔45，緩沖液試劑瓶圓孔41。凹槽32內(nèi)設(shè)置包被有stxI單克隆抗體的微孔板31；各孔內(nèi)對應(yīng)放置相應(yīng)物品，具體為：冰袋孔61內(nèi)設(shè)置冰袋62，凹槽32內(nèi)設(shè)置96微孔板31；stxI毒素參考標(biāo)準(zhǔn)品試劑瓶圓孔53內(nèi)設(shè)置stxI毒素參考標(biāo)準(zhǔn)品試劑瓶54；Eu標(biāo)抗stxI單克隆抗體試劑瓶圓孔51設(shè)置Eu標(biāo)抗stxI單克隆抗體試劑瓶52；增強液試劑瓶圓孔43內(nèi)設(shè)置增強液試劑瓶44；濃縮清洗液試劑瓶圓孔45內(nèi)設(shè)置濃縮清洗液試劑瓶46；緩沖液試劑瓶圓孔41設(shè)置緩沖液試劑瓶42。通過設(shè)置冰袋62可以讓每個試劑保持在較低溫度，有效防止因為溫度過高導(dǎo)致的試劑變形，另外各試劑瓶的合理擺放也可以保證試劑盒使用時取放的方便性。

試劑瓶圓孔的口徑略大于試劑瓶口徑，此種設(shè)置可以防止試劑瓶在圓孔內(nèi)晃動。兩個冰袋孔61為細長方孔，冰袋62形狀與細長孔相同，此種設(shè)置可以保證整個試劑盒溫度的均一性。硬質(zhì)海綿3上的三個較大的圓孔朝外傾斜設(shè)置。此種設(shè)置可以保證較大的試劑瓶不會過高，影響盒蓋2的扣合。各試劑瓶伸出圓孔的高度相同。

硬質(zhì)海綿3通過膠粘方式固定于盒體1內(nèi)，硬質(zhì)海綿3的大小及深度與盒體1相同。

微孔板31凹槽32兩側(cè)設(shè)置方便取拿的弧形口33?；⌒慰?3的設(shè)置方便對微孔板31的取放。冰袋孔61上還設(shè)置與孔大小相同的硬質(zhì)海綿3覆蓋，海綿覆蓋63的設(shè)置可以防止冰袋62融化后脫出。硬質(zhì)海綿3覆蓋上設(shè)置可收回的提鉤64。提鉤64的設(shè)置方便海綿覆蓋63的取蓋。盒體1與盒蓋2通過摩擦力較大的轉(zhuǎn)軸8連接，非轉(zhuǎn)軸一側(cè)設(shè)置卡扣，卡扣結(jié)構(gòu)對應(yīng)設(shè)置在盒體1與盒蓋2上的突起結(jié)構(gòu)9。盒蓋2扣合后，盒蓋2頂貼近各試劑瓶，此種設(shè)置可以有效防止試劑瓶在試劑盒內(nèi)晃動。

實施例3一種I型志賀毒素時間分辨熒光免疫檢測試劑盒

一種I型志賀毒素時間分辨熒光免疫檢測試劑盒，包括盒體1，盒蓋2，其中盒體1內(nèi)設(shè)置一帶孔硬質(zhì)海綿3，硬質(zhì)海綿3上部中央設(shè)置一個抗stxI單克隆抗體包被的96微孔板31凹槽32；硬質(zhì)海綿3上下兩側(cè)邊緣設(shè)置兩個冰袋孔61；凹槽32上下兩側(cè)分別水平設(shè)置3個stxI毒素參考標(biāo)準(zhǔn)品試劑瓶圓孔53；凹槽32左右兩側(cè)，一側(cè)設(shè)置一個Eu標(biāo)抗stxI單克隆抗體試劑瓶圓孔51；另一側(cè)設(shè)置三個較大的圓孔，分別為增強液試劑瓶圓孔43，濃縮清洗液試劑瓶圓孔45，緩沖液試劑瓶圓孔41。凹槽32內(nèi)設(shè)置包被有stxI單克隆抗體的微孔板31；各孔內(nèi)對應(yīng)放置相應(yīng)物品，具體為：冰袋孔61內(nèi)設(shè)置冰袋62，凹槽32內(nèi)設(shè)置96微孔板31；stxI毒素參考標(biāo)準(zhǔn)品試劑瓶圓孔53內(nèi)設(shè)置stxI毒素參考標(biāo)準(zhǔn)品試劑瓶54；Eu標(biāo)抗stxI單克隆抗體試劑瓶圓孔51設(shè)置Eu標(biāo)抗stxI單克隆抗體試劑瓶52；增強液試劑瓶圓孔43內(nèi)設(shè)置增強液試劑瓶44；濃縮清洗液試劑瓶圓孔45內(nèi)設(shè)置濃縮清洗液試劑瓶46；緩沖液試劑瓶圓孔41設(shè)置緩沖液試劑瓶42。通過設(shè)置冰袋62可以讓每個試劑保持在較低溫度，有效防止因為溫度過高導(dǎo)致的試劑變形，另外各試劑瓶的合理擺放也可以保證試劑盒使用時取放的方便性。

試劑瓶圓孔的口徑略大于試劑瓶口徑，此種設(shè)置可以防止試劑瓶在圓孔內(nèi)晃動。兩個冰袋孔61為細長方孔，冰袋62形狀與細長孔相同，此種設(shè)置可以保證整個試劑盒溫度的均一性。硬質(zhì)海綿3上的三個較大的圓孔朝外傾斜設(shè)置。此種設(shè)置可以保證較大的試劑瓶不會過高，影響盒蓋2的扣合。各試劑瓶伸出圓孔的高度相同。

硬質(zhì)海綿3通過熱塑方式固定于盒體1內(nèi)，硬質(zhì)海綿3的大小及深度與盒體1相同。微孔板31凹槽32兩側(cè)設(shè)置方便取拿的弧形口33。弧形口33的設(shè)置方便對微孔板31的取放。冰袋孔61上還設(shè)置與孔大小相同的硬質(zhì)海綿3覆蓋，海綿覆蓋63的設(shè)置可以防止冰袋62融化后脫出。硬質(zhì)海綿3覆蓋上設(shè)置可收回的提鉤64。提鉤64的設(shè)置方便海綿覆蓋63的取蓋。硬質(zhì)海綿3的微孔板31凹槽32正下方設(shè)置一個空腔7，空腔7的設(shè)置可以進一步保證所有試劑瓶所處溫度的均一性，防止硬質(zhì)海綿3形成實體對溫度傳輸造成的干擾。盒體1與盒蓋2通過摩擦力較大的轉(zhuǎn)軸8連接，非轉(zhuǎn)軸一側(cè)設(shè)置卡扣，卡扣結(jié)構(gòu)對應(yīng)設(shè)置在盒體1與盒蓋2上的突起結(jié)構(gòu)9。盒蓋2扣合后，盒蓋2頂貼近各試劑瓶，此種設(shè)置可以有效防止試劑瓶在試劑盒內(nèi)晃動。

實施例4 stxI TRFIA樣品測定

(1)試劑的準(zhǔn)備

a、銪標(biāo)記stxI單克隆抗體凍干粉：使用前將凍干品置于實驗臺平衡至室溫，溶解于1ml蒸餾水中。

b、根據(jù)待測樣品的數(shù)量選擇相應(yīng)的抗體反應(yīng)板條，同樣在使用前平衡至室溫。

c、洗滌液：將濃縮洗板液用蒸餾水1：25倍稀釋，作為工作洗滌液。

d、銪標(biāo)記stxI單克隆抗體的稀釋：在實驗前1小時內(nèi)根據(jù)樣品量以緩沖液按1：300的比例進行稀釋。

(2)試驗步驟

a、取反應(yīng)微孔板，靜置平衡至室溫，從第一孔，即A1孔開始，每孔依次加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品(共6個標(biāo)準(zhǔn)點，建議做復(fù)孔以保證標(biāo)準(zhǔn)曲線的可靠性)。在標(biāo)準(zhǔn)品后依次加入50μl樣品(建議采用雙孔測量)。

b、加完標(biāo)準(zhǔn)品及樣本之后，每孔加入150μl緩沖液，25℃，300轉(zhuǎn)/分鐘振蕩孵育1小時，工作洗滌液沖洗5次。

c、每孔依次加入已經(jīng)用反應(yīng)緩沖液稀釋300倍的銪標(biāo)記單克隆抗體200μl，25℃，300轉(zhuǎn)/分鐘振蕩孵育1小時，工作洗滌液沖洗5次。

d、每孔加入增強液200μl，25℃靜置孵育5分鐘后測量。

e、待測試運行結(jié)束后，退出樣本，收回所用試劑于2～8℃放置。所用抗體反應(yīng)板條取出后棄去，切勿重復(fù)使用。

結(jié)果處理：根據(jù)已知stxI濃度的系列參考標(biāo)準(zhǔn)品的相應(yīng)發(fā)光強度cps可得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過雙對數(shù)數(shù)學(xué)模型回歸處理得到回歸直線，待測樣品的stxI濃度可以通過其相應(yīng)發(fā)光強度cps從回歸直線上反算出來(表1)。

表1 stxI濃度的系列參考標(biāo)準(zhǔn)品的熒光值

本實用新型所述實施例是指導(dǎo)性的，而并非對實施方式的限定，只是幫助理解本實用新型，因此本實用新型并不限于具體實施方式中所述的實施例，凡是由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本實用新型的技術(shù)方案得出的其他具體實施方式，同樣屬于本實用新型保護的范圍。