本實(shí)用新型涉及生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種破傷風(fēng)疫苗接種效果快速評價(jià)試劑盒。
背景技術(shù)：
破傷風(fēng)是由破傷風(fēng)梭狀芽孢桿菌引起的感染性細(xì)菌性疾病。
破傷風(fēng)梭狀芽孢桿菌可產(chǎn)生兩種外毒素，即破傷風(fēng)菌溶血素和破傷風(fēng)痙攣毒素。破傷風(fēng)菌溶血素與發(fā)病機(jī)制無關(guān)；破傷風(fēng)痙攣毒素又稱破傷風(fēng)毒素，可阻斷中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，引發(fā)肌肉強(qiáng)直和痙攣，亦即破傷風(fēng)的典型表現(xiàn)，破傷風(fēng)可在任何年齡發(fā)病，病死率在10％至70％之間，視治療措施、患者的年齡和總體健康而異；絕大多數(shù)破傷風(fēng)病例與生育相關(guān)，多發(fā)于發(fā)展中國家，主要見于不潔分娩和產(chǎn)后衛(wèi)生條件較差的新生兒和孕產(chǎn)婦；兒童和成人受傷后發(fā)生破傷風(fēng)也是一個(gè)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。
人體感染破傷風(fēng)桿菌后很少檢測出針對破傷風(fēng)毒素的抗體以及針對其他破傷風(fēng)桿菌抗原的抗體，人體內(nèi)的破傷風(fēng)毒素抗體只能通過被動(dòng)免疫或主動(dòng)免疫獲得。
破傷風(fēng)毒素經(jīng)化學(xué)滅活，其致病性消失，免疫原性保留，稱為破傷風(fēng)類毒素，破傷風(fēng)類毒素能在動(dòng)物或人體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生破傷風(fēng)毒素抗體(破傷風(fēng)抗毒素)，破傷風(fēng)抗毒素能中和體內(nèi)破傷風(fēng)毒素。
人源或馬源破傷風(fēng)抗毒素能有效預(yù)防、改善和治療破傷風(fēng)，近期接受人源破傷風(fēng)抗毒素被動(dòng)免疫的個(gè)體可檢測出破傷風(fēng)毒素抗體。
新生兒可通過胎盤獲得抗破傷風(fēng)毒素母傳抗體，因此，母親在分娩前維持高滴度的抗體水平，能對新生兒提供足夠的抗新生兒破傷風(fēng)保護(hù)。
含破傷風(fēng)類毒素成分的疫苗能誘導(dǎo)人體產(chǎn)生破傷風(fēng)毒素抗體，使人體對破傷風(fēng)桿菌感染具有保護(hù)力。在完成疫苗基礎(chǔ)免疫后，抗體一般可維持十年左右，因此，每隔十年進(jìn)行一次加強(qiáng)免疫，才能維持破傷風(fēng)抗毒素水平在最低保護(hù)水平之上。
根據(jù)世界衛(wèi)生組織破傷風(fēng)疫苗立場文件所述，如采用的是標(biāo)準(zhǔn)的ELISA技術(shù)，破傷風(fēng)類毒素IgG抗體(抗毒素)濃度達(dá)到0.1至0.2IU/ml，視為具有保護(hù)力。
實(shí)驗(yàn)室檢測破傷風(fēng)類毒素IgG抗體的方法主要有間接血凝試驗(yàn)、毒素中和抗體實(shí)驗(yàn)、酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)(ELISA)等。
評價(jià)疫苗免疫效果最可靠的方法就是檢測接種者體內(nèi)血清中的特異抗體的含量。當(dāng)前市場上檢測破傷風(fēng)類毒素抗體的商品化試劑盒多采用酶聯(lián)免疫法和化學(xué)發(fā)光法，這些方法雖然靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確、化學(xué)發(fā)光試劑還可以對抗體進(jìn)行定量，但在實(shí)際操作上存在諸多不便，如步驟復(fù)雜、耗時(shí)較長，還需使用特定的儀器設(shè)備；試劑盒需4℃保存；對樣品要求靜脈采血等，不易在基層普及運(yùn)用。
免疫膠體金快速診斷技術(shù)是建立在酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、乳膠凝集試驗(yàn)、單克隆抗體技術(shù)和免疫膠體金標(biāo)記技術(shù)基礎(chǔ)上，以膠體金為標(biāo)記物，利用特異的抗原抗體反應(yīng)放大反應(yīng)信號,通過直接觀察就可以判定結(jié)果的新技術(shù)。該技術(shù)具有簡單、快速、準(zhǔn)確和無污染等優(yōu)點(diǎn)，在臨床醫(yī)學(xué)檢測、動(dòng)物醫(yī)學(xué)檢測、激素檢測、食品安全檢測、藥物殘留和毒品快速檢測等諸多診斷領(lǐng)域迅速發(fā)展。目前，膠體金標(biāo)記快速檢測抗體的方法大體分為兩種：一種是將抗原標(biāo)金，待測抗體的抗體劃膜；另一種是將抗原劃膜，待測抗體的抗體標(biāo)金?，F(xiàn)有研究表明：因?yàn)榭贵w蛋白性質(zhì)較為穩(wěn)定，所以對抗體蛋白的膠體金標(biāo)記較為穩(wěn)定，上述第一種方法所述的抗原的膠體金標(biāo)記則存在頗多問題，因?yàn)榭乖酁椴《绢悾再|(zhì)多樣，有的大小甚至比膠體金顆粒還大，且穩(wěn)定性較差，因此很難直接將抗原標(biāo)記在膠體金顆粒上；即使勉強(qiáng)能將抗原標(biāo)記上，也需要抗原達(dá)到極高的純度，而對抗原病毒的純化是一項(xiàng)難度較大、成本較高的工程；也有人尋找抗原的重組抗原來代替這些天然抗原，但是很多抗原很難尋到能替代的重組抗原，而且即使有，成本也是極高的，因此上述第一種方法的局限性比較高。上述的第二種方法是將抗原進(jìn)行劃膜，這種方法使用待測抗體的抗體進(jìn)行金標(biāo)記，可以避免抗原金標(biāo)記的問題，但將抗原劃到膜上發(fā)生反應(yīng)，需要抗原具有較高的濃度和純度，這也增加了產(chǎn)品生產(chǎn)的成本和難度；另外將抗原劃到膜上，由于抗原穩(wěn)定性較差，很難長時(shí)間保存，檢測試紙的有效期極短。這些都是限制抗體快速檢測類試劑盒快速發(fā)展的原因。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本實(shí)用新型所要解決的技術(shù)問題是提供一種破傷風(fēng)疫苗接種效果快速評價(jià)試劑盒，解決采用膠體金標(biāo)記時(shí)抗原的顆粒大，純度要求高以及采用抗原劃膜時(shí)，由于抗原穩(wěn)定性差，很難長時(shí)間保存，檢測試紙的有效期極短的問題。
本實(shí)用新型解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下：一種破傷風(fēng)疫苗接種效果快速評價(jià)試劑盒，包括包裝盒、樣品稀釋液盛裝容器和檢測試紙；所述包裝盒包括盒體和蓋體，所述盒體內(nèi)設(shè)有第一隔板，所述第一隔板將所述盒體分為第一容納腔和第二容納腔，所述檢測試紙?jiān)O(shè)于所述第一容納腔內(nèi)，所述樣品稀釋液盛裝容器設(shè)于所述第二容納腔內(nèi)；所述蓋體包括第一蓋體和第二蓋體，所述第一蓋體設(shè)于所述第一容納腔的上方，所述第二蓋體設(shè)于所述第二容納腔的上方；所述第一容納腔內(nèi)設(shè)有若干個(gè)第二隔板，若干個(gè)所述第二隔板分別與所述盒體的外壁圍成第三容納腔，所述第三容納腔內(nèi)填充有干燥劑；所述第二隔板上設(shè)有多個(gè)直徑小于干燥劑粒徑的透氣孔；所述檢測試紙包括包被膜、標(biāo)記物結(jié)合墊和抗原墊；所述抗原墊上包被有破傷風(fēng)類毒素抗原，所述標(biāo)記物結(jié)合墊上包被有膠體金標(biāo)記的鼠抗破傷風(fēng)類毒素抗原單克隆抗體，所述包被膜上固定有檢測T線和質(zhì)控C線，所述檢測T線上包被有鼠抗人IgG抗體，所述質(zhì)控C線上包被破傷風(fēng)免疫球蛋白；所述檢測試紙的最低檢測線為0.1IU/ml。
本實(shí)用新型的有益效果是：所采用的檢測試紙，通過引進(jìn)破傷風(fēng)類毒素抗原墊，同時(shí)在抗原墊中加入抗原保護(hù)液，解決了破傷風(fēng)類毒素抗原由于穩(wěn)定性差而不容易被金標(biāo)記的問題；另一方面，采用的破傷風(fēng)類毒素抗原為粗抗原，在檢測試紙反應(yīng)層析過程中，已經(jīng)通過雙抗體夾心法對粗抗原進(jìn)行了篩選和純化，保證了試劑反應(yīng)的特異性，因此不需對粗抗原進(jìn)一步純化就能達(dá)到反應(yīng)效果，制備成本低，利用推廣應(yīng)用。另采用的破傷風(fēng)疫苗接種效果快速評價(jià)試劑盒將樣品稀釋液盛裝容器和檢測試紙均設(shè)于包裝盒內(nèi)，用戶在使用時(shí)，無需另外準(zhǔn)備樣品稀釋液，使用更加方便，且樣品稀釋液盛裝容器和檢測試紙分別置于試劑盒的兩個(gè)容納腔中，且均對應(yīng)的設(shè)置一個(gè)蓋體，使試劑盒的結(jié)構(gòu)更加緊湊，另用戶在使用時(shí)只需打開第二蓋體即可取出樣品稀釋液，不會(huì)對檢測試紙?jiān)斐筛蓴_；另在包裝盒內(nèi)放有干燥劑，可吸收試劑盒內(nèi)的濕氣、氧氣，有效延長試劑瓶儲存診斷試劑的保存期限；另將試劑盒的靈敏度設(shè)置為0.1IU/ml，可實(shí)現(xiàn)對破傷風(fēng)疫苗接種效果的快速評估。
進(jìn)一步：所述第二隔板的數(shù)量為兩個(gè)，兩個(gè)所述的第二隔板分別設(shè)于所述第一容納腔的前端和后端。
上述進(jìn)一步方案的有益效果是：通過設(shè)置兩個(gè)第二隔板，進(jìn)一步的設(shè)置有兩個(gè)第三容納腔，且每個(gè)第三容納腔內(nèi)均放有干燥劑，加強(qiáng)對濕氣、氧氣的吸收。
進(jìn)一步：所述第一容納腔內(nèi)還設(shè)有用于固定所述檢測試紙的定位裝置。
上述進(jìn)一步方案的有益效果是：通過定位裝置可將檢測試紙鎖緊在第一容納腔中，防止其左右晃動(dòng)。
進(jìn)一步：所述定位裝置包括定位組件和活動(dòng)組件，所述定位組件和所述活動(dòng)組件分別設(shè)于所述第一容納腔的左端和右端；所述定位組件包括底板和U型定位塊，所述底板固定于所述盒體上；所述U型定位塊固定于所述底板的上方，且所述U型定位塊的開口端朝向所述活動(dòng)組件；所述活動(dòng)組件包括固定板、活動(dòng)板和銅片，所述固定板固定于所述盒體上；所述銅片的一端嵌設(shè)于所述固定板中，所述銅片的另一端抵設(shè)于所述活動(dòng)板上，所述活動(dòng)板可在所述盒體內(nèi)移動(dòng)。
上述進(jìn)一步方案的有益效果是：定位組件主要用于對檢測試紙的放置位置進(jìn)行定位，活動(dòng)組件可根據(jù)檢測試紙的具體大小進(jìn)行調(diào)整，是檢測試紙能夠卡緊在包裝盒中，避免其左右晃動(dòng)。
進(jìn)一步：所述活動(dòng)板的底部設(shè)有若干個(gè)凸起，所述盒體的底部設(shè)有若干個(gè)與所述凸起相匹配的滑槽。
上述進(jìn)一步方案的有益效果是：活動(dòng)板的底部設(shè)置凸起，且在盒體上設(shè)置與所述凸起相匹配的滑槽，可對活動(dòng)板在盒體內(nèi)的移動(dòng)進(jìn)行導(dǎo)向，防止活動(dòng)板的偏移。
進(jìn)一步：所述第一蓋體上的加樣口的底部向下延伸形成第三圓筒。
上述進(jìn)一步方案的有益效果是：第三圓筒起到導(dǎo)流的作用，可防止添加樣品或添加樣品稀釋液時(shí)，液體到處散濺，且能夠保證添加的樣品稀釋液與樣品的位置一致，起到良好的稀釋作用。
進(jìn)一步：所述第一蓋體與所述第二蓋體之間通過鉸鏈連接，且所述第一蓋體與所述盒體之間、所述第二蓋體與所述盒體之間均通過卡合方式連接。
上述進(jìn)一步方案的有益效果是：確保第二蓋體的打開不會(huì)影響到檢測試紙的穩(wěn)定性。
進(jìn)一步：所述第二容納腔內(nèi)設(shè)有第二圓筒，所述第二圓筒用于放置所述樣品稀釋液盛裝容器。
上述進(jìn)一步方案的有益效果是：將樣品稀釋液盛裝容器卡設(shè)于第二圓筒內(nèi)，使樣品稀釋液盛裝容器的放置更加平穩(wěn)。
進(jìn)一步：所述標(biāo)記物結(jié)合墊為玻璃纖維。
進(jìn)一步：所述抗原墊為玻璃纖維、無紡布或聚酯膜。
上述進(jìn)兩步方案的有益效果是：使樣品加入到檢測試紙上后，可通過靜電作用和疏水相互作用等物理作用與蛋白質(zhì)結(jié)合且能通過毛細(xì)管現(xiàn)象展開。
附圖說明
圖1為本實(shí)用新型破傷風(fēng)疫苗接種效果快速評價(jià)試劑盒中的包裝盒的爆炸圖；
圖2為本實(shí)用新型中的檢測試紙的結(jié)構(gòu)示意圖；
圖3為本實(shí)用新型中的包裝盒在揭開第二蓋體時(shí)的結(jié)構(gòu)示意圖；
圖4為本實(shí)用新型中的活動(dòng)組件的結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合附圖對本實(shí)用新型的原理和特征進(jìn)行描述，所舉實(shí)例只用于解釋本實(shí)用新型，并非用于限定本實(shí)用新型的范圍。
如圖1至圖4所示，一種破傷風(fēng)疫苗接種效果快速評價(jià)試劑盒包括包裝盒1、樣品稀釋液盛裝容器和檢測試紙3；所述包裝盒1包括盒體12和蓋體13，所述盒體12內(nèi)設(shè)有第一隔板11，第一隔板11將所述盒體12分為第一容納腔111和第二容納腔112；所述檢測試紙3設(shè)于所述第一容納腔111內(nèi)，所述樣品稀釋液盛裝容器設(shè)于所述第二容納腔112內(nèi)；所述蓋體13包括第一蓋體131和第二蓋體132，所述第一蓋體131設(shè)于所述第一容納腔111的上方，所述第二蓋體132設(shè)于所述第二容納腔112的上方；所述第一容納腔111內(nèi)設(shè)有若干個(gè)第二隔板1115，若干個(gè)所述第二隔板1115分別與所述盒體12的外壁圍成第三容納腔1116，所述第三容納腔1116內(nèi)填充有干燥劑；所述第二隔板1115上設(shè)有多個(gè)直徑小于干燥劑粒徑的透氣孔1117；所述檢測試紙3包括包被膜32、標(biāo)記物結(jié)合墊33和抗原墊34；所述抗原墊34上包被有破傷風(fēng)類毒素抗原，所述標(biāo)記物結(jié)合墊33上包被有膠體金標(biāo)記的鼠抗破傷風(fēng)類毒素抗原單克隆抗體，所述包被膜32上固定有檢測T線321和質(zhì)控C線322，所述檢測T線321上包被有鼠抗人IgG抗體，所述質(zhì)控C線322上包被破傷風(fēng)免疫球蛋白；所述檢測試紙3的最低檢測線為0.1IU/ml。將樣品稀釋液盛裝容器和檢測試紙3均設(shè)于包裝盒1內(nèi)，用戶在使用時(shí)，無需另外準(zhǔn)備樣品稀釋液，使用更加方便，且樣品稀釋液盛裝容器和檢測試紙3分別置于試劑盒的兩個(gè)容納腔中，且均對應(yīng)的設(shè)置一個(gè)蓋體13，使試劑盒的尺寸更加緊湊，另用戶在使用時(shí)只需打開第二蓋體132即可取出樣品稀釋液，不會(huì)對檢測試紙3造成干擾；另在包裝盒1內(nèi)放有干燥劑，可吸收試劑盒內(nèi)的濕氣、氧氣，有效延長試劑瓶儲存診斷試劑的保存期限；另將試劑盒的靈敏度設(shè)置為0.1IU/ml，可實(shí)現(xiàn)對破傷風(fēng)疫苗接種效果的快速評估。
如圖1所示，在第二隔板1115上設(shè)有多個(gè)通氣孔1117，可加強(qiáng)干燥劑的吸濕效果。所述第二隔板1115優(yōu)選為兩個(gè)，兩個(gè)所述第二隔板1115分別設(shè)于所述第一容納腔111的前后兩端，設(shè)于所述第一容納腔111前方的所述第二隔板1115的兩端均向第一容納腔111的前側(cè)壁延伸形成第三容納腔1116，設(shè)于所述第一容納腔111后方的所述第二隔板1115的兩端均向第一容納腔111的后側(cè)壁延伸形成另一第三容納腔1116。
所述第一容納腔111內(nèi)還設(shè)有用于固定所述檢測試紙3的定位裝置。通過定位裝置可將檢測試紙3鎖緊在第一容納腔111中，防止其左右晃動(dòng)。
如圖1所示，所述定位裝置包括定位組件1112和活動(dòng)組件1113，所述定位組件1112和所述活動(dòng)組件1113分別設(shè)于所述第一容納腔111的左端和右端；所述定位組件1112包括底板11121和U型定位塊11122，所述底板11121固定于所述盒體12上；所述U型定位塊11122固定于所述底板11121的上方，且所述U型定位塊11122的開口端朝向所述活動(dòng)組件1113；所述活動(dòng)組件1113包括固定板11131、活動(dòng)板11133和銅片11132，所述固定板11131固定于所述盒體12上；所述銅片11132的一端嵌設(shè)于所述固定板11131中，所述銅片11132的另一端翹起，翹起的所述銅片11132抵設(shè)于所述活動(dòng)板11133上，所述活動(dòng)板11133可在所述盒體12內(nèi)移動(dòng)。定位組件1112主要用于對檢測試紙3的放置位置進(jìn)行定位，活動(dòng)組件1113可根據(jù)檢測試紙3的具體大小進(jìn)行調(diào)整，使檢測試紙3能夠卡緊在包裝盒1中，避免其左右晃動(dòng)。
如圖1和圖4所示，所述活動(dòng)板11133的底部設(shè)有若干個(gè)凸起11134，所述盒體12的底部設(shè)有若干個(gè)與所述凸起11134相匹配的滑槽1118。凸起11134和滑槽1118的設(shè)置可對活動(dòng)板在盒體12內(nèi)的移動(dòng)進(jìn)行導(dǎo)向，防止活動(dòng)板11133的偏移。
如圖1所示，所述第一容納腔111內(nèi)還設(shè)有多個(gè)交叉型凸筋1114，多個(gè)所述交叉型凸筋1114均設(shè)于所述定位組件1112與所述活動(dòng)組件1113之間，所述第一蓋體131在與每個(gè)所述交叉型凸筋1114相匹配的位置上均設(shè)有多個(gè)凸條1312。通過設(shè)置交叉型凸筋1114和與交叉型凸筋1114相匹配的多個(gè)凸條1312，可對檢測試紙3起到良好的支撐以及固定的作用。
如圖1所示，所述第一蓋體131上設(shè)有加樣口，所述加樣口設(shè)于所述樣品墊35上方的所述第一蓋體131上，所述加樣口的底部向下延伸形成第三圓筒1313。第三圓筒1313起到導(dǎo)流的作用，可防止添加樣品或添加樣品稀釋液時(shí)，液體到處散濺，且能夠保證添加的樣品稀釋液與樣品的位置一致，起到良好的稀釋作用。
所述第一蓋體131上還設(shè)有防塵塞，所述防塵塞與所述加樣口相匹配?？煞乐辜訕涌谔幘奂覊m、雜質(zhì)，影響檢測試紙3檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。所述第一蓋體131上還設(shè)有觀察窗1314，所述觀察窗1314設(shè)于所述包被膜32上方的所述第一蓋體131上。便于用戶觀察檢測結(jié)果。
如圖1和圖3所示，所述第一蓋體131與所述第二蓋體132之間通過鉸鏈133連接，且所述第一蓋體131與所述盒體12之間、所述第二蓋體132與所述盒體12之間均通過卡合方式連接。具體的，所述第一容納腔111內(nèi)設(shè)有多個(gè)第一圓筒1111，所述第一蓋體131上設(shè)有多個(gè)與所述第一圓筒1111相匹配的第一凸起1311。盒體12和蓋體13之間可通過所述的第一圓筒1111和第一凸起1311進(jìn)行卡合連接，且采用第一圓筒1111和第一凸起1311配合還具有良好的定位效果。所述第二蓋體132上設(shè)有卡槽1321，所述卡槽1321設(shè)于所述第二蓋體132遠(yuǎn)離所述第一蓋體131的一側(cè)的內(nèi)壁上，所述盒體12上設(shè)有與所述卡槽1321相配合的第二凸起121。第二蓋體132與盒體12之間直接采用卡槽1321與第二凸起121進(jìn)行配合連接，方便開啟。
如圖1所示，所述第二容納腔112內(nèi)設(shè)有第二圓筒1121，所述第二圓筒1121用于放置所述樣品稀釋液盛裝容器。將樣品稀釋液盛裝容器卡設(shè)于第二圓筒1121內(nèi)，使樣品稀釋液盛裝容器的放置更加平穩(wěn)。所述樣品稀釋液盛裝容器可選為瓶體或包裝袋，且瓶體的瓶口或包裝袋的開口處設(shè)置為錐形，便于樣品稀釋液的倒出。
本實(shí)用新型破傷風(fēng)疫苗接種效果快速評價(jià)試劑盒的組裝方法為：首先撥動(dòng)活動(dòng)組件1113中的活動(dòng)板11133，將檢測試紙3的底板31放置在交叉型凸筋1114上并使檢測試紙3靠近樣品墊35的一端卡設(shè)于定位組件1112中，松開活動(dòng)板11133將檢測試紙3抵緊；然后將樣品稀釋液盛裝容器卡設(shè)于第二圓筒1121中，然后將盒體12和蓋體13通過第一圓筒1111和第一凸起1311進(jìn)行卡合連接，并將第二凸起121卡合在卡槽1321中。使用時(shí)，用戶只需揭開第二蓋體132，并將樣品稀釋液取出滴在加樣口處即可，操作簡單方便。
如圖2所示，所述檢測試紙3還包括底板31和吸收墊36，所述包被膜32設(shè)于所述底板31上；所述標(biāo)記物結(jié)合墊33、所述抗原墊34和所述樣品墊35依次搭接在所述包被膜32的一端，所述吸收墊36搭接在所述包被膜32的另一端。所述抗原墊34為玻璃纖維、無紡布或聚酯膜。所述標(biāo)記物結(jié)合墊33和樣品墊35為玻璃纖維，所述吸收墊36為吸水紙。
所述的樣品稀釋液為：含磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、氯化鈉的混合水溶液。以下實(shí)施例中，樣品稀釋液的組分為：磷酸氫二鈉5.72g，磷酸二氫鈉0.624g，氯化鈉8g，超純水定容至1L。
下面將對破傷風(fēng)類毒素IgG抗體檢測試紙3的制備、組裝、檢測原理以及檢測效果進(jìn)行詳細(xì)的說明：
1、主要材料
抗原：破傷風(fēng)類毒素抗原購自深圳市菲鵬生物股份有限公司購入，是從培養(yǎng)的破傷風(fēng)梭菌中提取破傷風(fēng)毒素，后經(jīng)甲醛脫毒制備而成，成為類毒素，其為粗純，不具有生物危害，用于制備抗原墊。
鼠抗人IgG單克隆抗體，購自廈門波生生物技術(shù)有限公司，用于硝酸纖維素膜T線的包被。
鼠抗破傷風(fēng)類毒素抗原單克隆抗體，購自武漢賽欣生物技術(shù)有限公司，用于標(biāo)記膠體金。
破傷風(fēng)免疫球蛋白，購自武漢斯泰克生物制品有限公司，用于硝酸纖維素膜質(zhì)控C線的包被。
氯金酸：sigma公司產(chǎn)品。
硝酸纖維素膜：millipore公司產(chǎn)品。
牛血清白蛋白(BSA)、酪蛋白：sigma公司產(chǎn)品。
其余化學(xué)試劑均為分析純試劑。
臨床實(shí)驗(yàn)由公司在武漢市省級以上臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)完成，其中破傷風(fēng)類毒素IgG抗體陽性樣本176份，陰性樣本192份。
破傷風(fēng)類毒素IgG抗體檢測試劑盒(ELISA法)：購自德國維潤賽潤，是CE已認(rèn)證的商用產(chǎn)品。
2、標(biāo)記物結(jié)合墊33的制備
氯金酸-檸檬酸三鈉還原法制備直徑為40nm的膠體金溶液，制備完成后，取100ml膠體金溶液置于磁力攪拌器上緩慢攪拌，調(diào)節(jié)pH至8.0，然后按每100ml膠體金溶液0.5mg抗體加入鼠抗破傷風(fēng)類毒素抗原單克隆抗體0.5mg，繼續(xù)攪拌30min，再加入終濃度為1％的BSA進(jìn)行封閉，繼續(xù)攪拌30min。標(biāo)記結(jié)束后，以10000r/min對標(biāo)記液進(jìn)行離心，棄上清，然后將沉淀用復(fù)溶溶液進(jìn)行復(fù)溶至原體積，所述復(fù)溶溶液的配方為：Tris：1.965g，Casein-Na：2.5g，檸檬酸三鈉：2.5g，吐溫-20：0.50ml，蔗糖：10.0g，用超純水定容至1L。將復(fù)溶好的金標(biāo)記溶液按每1ml溶液鋪18cm2的比例均勻鋪在玻璃纖維上，置于37℃，相對濕度低于20％的環(huán)境中，干燥12-18小時(shí)，制成標(biāo)記物結(jié)合墊33。
3、抗原墊34的制備
將破傷風(fēng)類毒素抗原使用抗原保護(hù)液進(jìn)行稀釋到20倍得到抗原液，將稀釋好的抗原液按每1ml溶液鋪18cm2的比例均勻鋪在玻璃纖維、無紡布或聚酯膜上，置于37℃，相對濕度低于40％的環(huán)境中，干燥4小時(shí)，制成抗原墊34。所述抗原保護(hù)液的配方為：Na2HPO4：5.72g，NaH2PO4：0.624g，檸檬酸三鈉：8.5g，蔗糖：10g，水定容至1L；所述破傷風(fēng)類毒素抗原為粗抗原，其中抗原的含量為40wt％至50wt％。
4、包被膜32的制備
使用0.02M，pH為7.2的磷酸鹽緩沖液將鼠抗人IgG單克隆抗體分別稀釋成2.0mg/ml(T線溶液)，破傷風(fēng)免疫球蛋白稀釋至300IU/ml(C線溶液)。然后使用劃膜儀將檢測T線321與質(zhì)控C線322溶液按1.5ul/cm的出液量均勻地包被于NC膜(硝酸纖維素膜)上，NC膜已事先黏貼于塑料底板上，包被完成后，將NC膜置于37℃，相對濕度低于40％的環(huán)境中，干燥3至4小時(shí)，制成包被膜32。
5、破傷風(fēng)類毒素IgG抗體檢測試紙3的組裝
在干燥環(huán)境下(溫度20至25℃，相對濕度低于30％)，將包被膜32置于潔凈環(huán)境中，在靠近包被膜32的檢測T線321的一端緊密壓接標(biāo)記物結(jié)合墊33，標(biāo)記物結(jié)合墊33(標(biāo)記物結(jié)合墊33已事先切裁成6mm寬)緊密壓接在包被膜32上的長度為2mm左右，抗原墊34(抗原墊已事先切裁成10mm寬)緊密壓接在標(biāo)記物結(jié)合墊33的另一端，抗原墊34(抗原墊34已事先切裁成10mm寬)緊密壓接在標(biāo)記物結(jié)合墊33的長度為2mm左右，樣品墊35緊密壓接抗原墊34的另一端，樣品墊35緊密壓接抗原墊34上的長度為4至5mm，最后用切條機(jī)將貼好的底板31切成約4mm寬的檢測試紙3。
6、破傷風(fēng)類毒素IgG抗體檢測試紙3的使用方法
將待檢血清或血漿或全血(待檢樣品)平衡至室溫，并將制備好的檢測試紙3放入包裝盒1中，通過加樣口向樣品墊35處加入5ul待檢樣品，再加入2至3滴樣品稀釋液，若樣品中含有破傷風(fēng)類毒素IgG抗體，其將和抗原墊34中的破傷風(fēng)類毒素抗原形成破傷風(fēng)類毒素抗原-破傷風(fēng)類毒素IgG抗體復(fù)合物，該復(fù)合物向前移動(dòng)，復(fù)合物中的破傷風(fēng)類毒素抗原再與標(biāo)記物結(jié)合墊33中的膠體金標(biāo)記的鼠抗破傷風(fēng)類毒素抗原單克隆抗體結(jié)合，形成破傷風(fēng)類毒素IgG抗體-破傷風(fēng)類毒素抗原-膠體金標(biāo)記的鼠抗破傷風(fēng)類毒素抗原單克隆抗體免疫復(fù)合物，該復(fù)合物由于層析作用沿紙條向前移動(dòng)，至檢測T線321，復(fù)合物中的破傷風(fēng)類毒素IgG抗體與檢測T線321上包被的鼠抗人IgG單克隆抗體反應(yīng)形成鼠抗人IgG單克隆抗體-破傷風(fēng)類毒素IgG抗體-破傷風(fēng)類毒素抗原-膠體金標(biāo)記的鼠抗破傷風(fēng)類毒素抗原單克隆抗體免疫復(fù)合物，該復(fù)合物可聚集在檢測區(qū)，當(dāng)聚集的復(fù)合物達(dá)到一定的數(shù)量時(shí)，則形成一條肉眼可見的條帶(T線)，判斷結(jié)果為陽性；若樣品中不含有或含很少量的破傷風(fēng)類毒素IgG抗體，則不能形成免疫復(fù)合物，即不能形成肉眼可見的條帶，判斷結(jié)果為陰性；質(zhì)控C線322作為試劑的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，陽性和陰性檢測樣品均會(huì)產(chǎn)生條帶。具體的，在20分鐘內(nèi)可直接用肉眼觀察檢測T線321和質(zhì)控C線322的顯色情況：質(zhì)控C線322不顯色，說明本試驗(yàn)失??；質(zhì)控C線322顯色，檢測T線321不顯色說明破傷風(fēng)疫苗接種不成功；質(zhì)控C線322和檢測T線321均顯色說明破傷風(fēng)疫苗接種成功。
7、根據(jù)世界衛(wèi)生組織規(guī)定的破傷風(fēng)類毒素IgG抗體的最低保護(hù)滴度為0.1IU/ml，當(dāng)破傷風(fēng)類毒素IgG抗體濃度≥0.1IU/ml說明人體對破傷風(fēng)具有抵抗性，當(dāng)破傷風(fēng)類毒素IgG抗體濃度＜0.1IU/ml說明人體對破傷風(fēng)還沒有產(chǎn)生抵抗性，因此本檢測試紙將檢測破傷風(fēng)類毒素IgG抗體的檢測臨界值設(shè)置為0.1IU/ml，T線顯線表明破傷風(fēng)類毒素IgG抗體的濃度≥0.1IU/ml，破傷風(fēng)疫苗接種成功，T線不顯線表明破傷風(fēng)類毒素IgG抗體的濃度＜0.1IU/ml，破傷風(fēng)疫苗接種不成功。因此，本實(shí)用新型所述的試劑盒可以實(shí)現(xiàn)快速評價(jià)破傷風(fēng)疫苗的接種效果。
8、臨床樣品檢測結(jié)果對照
對公司收集的臨床血清樣本使用本申請檢測試紙及商用檢測ELISA試劑盒同時(shí)進(jìn)行檢測，再對檢測結(jié)果進(jìn)行對照。
以ELISA試劑盒為對照，對破傷風(fēng)類毒素IgG抗體進(jìn)行檢測，檢測出176份破傷風(fēng)類毒素IgG陽性樣本，192份破傷風(fēng)類毒素IgG陰性樣本，而本檢測試紙檢測出173份破傷風(fēng)類毒素IgG陽性樣本，195份破傷風(fēng)類毒素IgG陰性樣本，總體符合率為98.10％。臨床檢測結(jié)果表明，本試劑盒的性能與ELISA試劑盒相比無顯著差異，說明本實(shí)用新型適合用于臨床檢驗(yàn)，具有實(shí)用價(jià)值。
以上所述僅為本實(shí)用新型的較佳實(shí)施例，并不用以限制本實(shí)用新型，凡在本實(shí)用新型的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本實(shí)用新型的保護(hù)范圍之內(nèi)。