本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥工程與
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別是涉及一種用于檢測(cè)與量化人促卵泡激素藥物體外生物活性的同源競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫分析法。
背景技術(shù)：
：促卵泡激素(fsh)是垂體前葉嗜堿性細(xì)胞合成和分泌的一種由兩個(gè)亞基通過(guò)非共價(jià)鍵結(jié)合形成的異源二聚體糖蛋白類促性腺激素。它與人類某些疾病(如不孕不育、絕經(jīng)后乳腺癌、卵巢癌等)密切相關(guān)，常用于臨床輔助治療用藥。以及其具有較高的社會(huì)經(jīng)濟(jì)價(jià)值，廣泛的應(yīng)用在畜牧業(yè)(如牛羊)、水產(chǎn)業(yè)(如漁業(yè))等領(lǐng)域。當(dāng)前，有兩類商業(yè)化的促卵泡生長(zhǎng)激素藥物產(chǎn)品均可在市場(chǎng)上獲得：一類是尿源促卵泡激素(ufsh),主要是從絕經(jīng)婦女尿液中提取純化獲得，如瑞士serono公司的tertinex/metrodin(1986)，ferring公司的bravelle(2002)，以及我國(guó)麗珠集團(tuán)的麗申寶(2010)。另一類是重組促卵泡激素(rfsh),主要是利用基因工程技術(shù)和細(xì)胞培養(yǎng)工藝來(lái)制備重組促卵泡激素生物制品，如瑞士serono公司的gonal-f(1995)、gonal-frff(2004)和gonal-frffpen(2004),以及荷蘭organon公司的puregon(1996)、follistimaq(2004)和elonva(2010)。近幾年來(lái)，隨著市場(chǎng)需求的增加，迫切需要長(zhǎng)效、安全的尿源或重組促卵泡激素藥物新品來(lái)供應(yīng)。然而，該種激素產(chǎn)品在上市之前，需要進(jìn)行嚴(yán)格的臨床試驗(yàn)，尤其是體內(nèi)外生物活性的鑒定與評(píng)估。目前，體外有效、快速的檢測(cè)與量化促卵泡生長(zhǎng)激素免疫技術(shù)僅有少數(shù)被報(bào)道。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(elisa)是一種用于檢測(cè)與量化抗體或抗原的方法和廣泛應(yīng)用在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域里的一種重要的診斷和分析工具。根據(jù)其檢測(cè)的方式不同，可以分為雙抗夾心elisa，間接elisa和競(jìng)爭(zhēng)elisa等。同源競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫分析法(同源競(jìng)爭(zhēng)elisa)起源于1997年發(fā)明的條紋鱸黃體生成素elisa，隨后應(yīng)用到歐洲黑鱸促卵泡激素的檢測(cè)與量化。這種檢測(cè)和量化的方式具有較高的靈敏性、精準(zhǔn)性和特異性，以及可再現(xiàn)性?；谏鲜鲷~類激素同源競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫的特點(diǎn)和指南，我們進(jìn)一步建立了一種新型的檢測(cè)與量化人促卵泡激素的同源競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫分析方法。這種分析方法與臨床上電化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測(cè)人促卵泡激素的效果相比，易于操作，生產(chǎn)成本較低，能同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品，并在一定范圍內(nèi)可直接根據(jù)酶標(biāo)儀檢測(cè)的吸光值反映出人促卵泡激素藥物或相關(guān)促卵泡激素樣品的體外生物學(xué)活性。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明提供了一種人促卵泡激素同源競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫分析方法來(lái)檢測(cè)與量化促卵泡激素藥物或相關(guān)促卵泡激素樣品的體外生物學(xué)活性。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：一種利用抗原--抗體免疫親和性來(lái)檢測(cè)、量化和反映人促卵泡激素體外生物學(xué)活性的分析方法。其中抗原來(lái)源于商業(yè)化的重組人促卵泡激素(果納芬，5.5ug(75iu)，merckserono公司；國(guó)藥準(zhǔn)字s20130055)和尿源促卵泡激素(麗申寶，75iu，中國(guó)麗珠集團(tuán)；國(guó)藥準(zhǔn)字h20052130)；抗體來(lái)源于商業(yè)化的單克隆anti–fshα抗體(abcam公司；商品目錄號(hào)ab9500)和羊抗鼠-hrp抗體(康為世紀(jì)公司；商品目錄號(hào)cw0102s)；封閉試劑來(lái)源于商業(yè)化的脫脂奶粉(美國(guó)bd公司；商品目錄號(hào)232100)、胎牛血清(wisent公司；商品目錄號(hào)086150)、牛血清白蛋白(sigma公司；商品目錄號(hào)v900933)和正常羊血清(jackson公司；商品目錄號(hào)005000121)。人促卵泡激素同源競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫分析法含有以下步驟。(1)抗原包被：96孔酶標(biāo)板(corning公司；商品型號(hào)2592)中包被60ul/well尿源促卵泡激素(麗申寶)溶液(1iu/mlor1000iu/l)，放置4℃冰箱過(guò)夜。同時(shí)在同一酶標(biāo)板中用磷酸鹽緩沖液pbs(ph7.2-7.4)分別包被5孔作非特異性結(jié)合組【接受anti–fshα抗體稀釋液和羊抗鼠-hrp抗體稀釋液】和4孔作空白對(duì)照組【僅接受羊抗鼠-hrp抗體稀釋液】【這兩組的作用是檢測(cè)封閉試劑的封閉效果和酶標(biāo)板是否每次清洗干凈】(2)封閉：第二天，用pbs包含0.05％tween-20(pbst)清洗酶標(biāo)板3次，每次60-90秒。隨后可以采用以下4種任意一種封閉方式進(jìn)行封閉：a)5％的脫脂奶粉【用電子天平稱量1g脫脂奶粉溶于20ml去離子水中，并用玻璃棒充分?jǐn)嚢杈鶆颉?320ul/well)封閉,37℃避光孵育2.5h；b)pbst包含3％的胎牛血清(fbs)【用移液槍取0.6ml胎牛血清溶于19.4mlpbst中并充分?jǐn)嚢杈鶆颉?320ul/well)封閉，37℃避光孵育1h；c)pbst包含2％的牛血清蛋白(bsa)【用電子天平稱量0.4g牛血清白蛋白溶于20mlpbst溶液中，并用玻璃棒充分?jǐn)嚢杈鶆颉糠忾](320ul/well)，37℃避光孵育1h；d)pbs包含2.5％的正常羊血清【根據(jù)說(shuō)明書先將凍干粉末態(tài)的正常羊血清溶于10ml無(wú)菌去離子水配成儲(chǔ)備母液，再將儲(chǔ)備母液用pbst溶液稀釋成2.5％工作液】(ngs)(320ul/well)封閉，37℃避光孵育1h。(3)孵育一抗：在分配到封閉好的酶標(biāo)板前，50ul尿源促卵泡激素標(biāo)品(麗申寶)、50ul重組促卵泡激素(果納芬)和50ul其他促卵泡激素供試樣品分別預(yù)先與50ul的單克隆anti–fshα抗體稀釋液【用移液槍取1ul的anti–fshα抗體加入到裝有12mlpbs的離心管(15ml)中充分混勻，即一抗初始稀釋按1：12000進(jìn)行稀釋。待與標(biāo)品或供試樣品等體積添加到同一小離心管(1.5ml)中后，即標(biāo)品或供試樣品濃度再次稀釋了2倍，一抗最終稀釋比例為1:24000】(最終稀釋濃度為1：24000)在1.5ml離心管中，放置4℃冰箱孵育過(guò)夜。尿源促卵泡激素(麗申寶)既是作包被抗原也作促卵泡激素標(biāo)品，標(biāo)準(zhǔn)曲線檢測(cè)范圍設(shè)置在0.015-1.98iu/ml。隨后分別將100ulanti–fshα抗體與尿源促卵泡激素混合液、100ulanti–fshα抗體與重組促卵泡激素混合液、100ulanti–fshα抗體與其他促卵泡激素樣品混合液加入到用pbst清洗3次的封閉好的酶標(biāo)板中，放置4℃冰箱無(wú)震蕩孵育48h。最大吸光值(b0)和非特異性結(jié)合(nbs)只接受100ul單克隆anti–fshα抗體最終稀釋溶液(1:24000)【一抗初始稀釋液(1:1200)與pbs溶液在小離心管(1.5ml)等體積混合】，空白對(duì)照組直接添加pbs溶液。(4)孵育酶標(biāo)二抗；用pbst清洗酶標(biāo)板5次，每次60-90秒。清洗完后每孔添加100ul羊抗鼠-hrp抗體稀釋液(用pbs稀釋，1:3000)【羊抗鼠-hrp酶標(biāo)二抗按1:3000用pbs溶液稀釋成工作液】，37℃避光孵育40min。(5)顏色反應(yīng):用pbst清洗酶標(biāo)板5次，每次60-90秒。清洗完后每孔添加100ultmb顯色液(索萊寶公司；商品目錄號(hào)pr1210)，37℃避光孵育8-10min，隨后添加2m50ul/well的硫酸終止反應(yīng)。使用酶標(biāo)儀(thermolabsystemmk-3)在450nm讀取吸光值。(6)原始數(shù)據(jù)處理:將原始數(shù)據(jù)導(dǎo)入excel軟件初步處理，隨后利用graphpadprism5軟件進(jìn)一步處理，以標(biāo)品和供試樣品的濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的450nm下吸光比值(bi/bo)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線和供試樣品的劑量-反應(yīng)曲線。同時(shí)利用originpro8軟件進(jìn)行擬合線性回歸分析。步驟(1)中麗申寶(75iu)最初用無(wú)菌蒸餾水(250ul)稀釋為300iu/ml儲(chǔ)備母液,并-20℃儲(chǔ)存?zhèn)溆?；用時(shí)將儲(chǔ)備母液用pbs(ph7.2-7.4)稀釋為1iu/ml。步驟(2)中每種封閉試劑所產(chǎn)生的背景值不同。步驟(3)中先將稀釋好的標(biāo)品或樣品用移液槍移入小離心管中，隨后再加入稀釋好的anti–fshα抗體溶液(1:12000)，直接用移液槍添加即可切記不要混勻，放置4℃冰箱孵育過(guò)夜即可，此步驟與包被抗原同步進(jìn)行；添加抗體-標(biāo)品或樣品混合液時(shí)，用移液槍混勻后再加入到封閉好的酶標(biāo)板中；48h孵育過(guò)程中切記請(qǐng)勿震蕩。步驟(6)中對(duì)于超過(guò)最大吸光值(bo)的抑制檢測(cè)值(bi)視為無(wú)效檢測(cè)值，不做統(tǒng)計(jì)和數(shù)據(jù)處理。所述其他人促卵泡激素樣品可為任意未知的促卵泡激素樣品。本發(fā)明有益效果在于：(1)本發(fā)明所述的促卵泡激素來(lái)源于尿源促卵激素、重組人促卵泡激素和其他人促卵泡激素相關(guān)樣品的任意一種。(2)本發(fā)明與臨床上化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測(cè)人促卵泡激素的效果相比，其易于操作，生產(chǎn)成本較低，能同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品濃度，并在一定范圍內(nèi)根據(jù)酶標(biāo)儀檢測(cè)的吸光值可直接反映出測(cè)試的人促卵泡激素的體外生物學(xué)活性。(3)本發(fā)明所檢測(cè)的曲線范圍寬廣，且標(biāo)品或樣品稀釋梯度符合線性規(guī)律(直接采用倍比稀釋)。此外檢測(cè)靈敏度雖然以iu/ml為單位，實(shí)質(zhì)性達(dá)到了以miu/ml為單位計(jì)算促卵泡激素體外生物學(xué)活性。(4)本發(fā)明中四種封閉體系中任意一種方式均可達(dá)到相應(yīng)封閉效果，尤其是采用5％的脫脂奶粉封閉所產(chǎn)生的背景值較低。附圖說(shuō)明圖1為同源競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫分析法整個(gè)工作流程。圖2為4種不同封閉試劑產(chǎn)生封閉背景值。圖3為采4種不同封閉試劑封閉形成的尿源促卵泡激素(麗申寶)標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖4為采用5％脫脂奶粉封閉形成的重組促卵泡激素(果納芬)劑量反應(yīng)曲線。圖5為采用5％脫脂奶粉封閉形成的昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)重組促卵泡激素上清劑量反應(yīng)曲線。具體實(shí)施方式以下通過(guò)實(shí)施案例形式的具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明的內(nèi)容作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。但不應(yīng)將其理解為本發(fā)明的范圍僅限于以下實(shí)施案例。凡基于本發(fā)明的內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)方案均屬于本發(fā)明的范圍。此外，根據(jù)此發(fā)明的內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明的基本技術(shù)思路的前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換和變更等。實(shí)施案例一：人尿源促卵泡激素標(biāo)品體外生物學(xué)活性的檢測(cè)與量化人尿源促卵泡激素(麗申寶，75iu)采用250ul無(wú)菌水稀釋為0.3iu/ul或300iu/ml儲(chǔ)備品于-20℃保存?zhèn)溆?。尿源促卵泡激素包被?6孔酶標(biāo)板中每孔包被60ul尿源促卵泡激素(麗申寶)溶液(1iu/ml，即300iu/ml的儲(chǔ)備品用pbs(ph7.2-7.4)稀釋為1iu/ml的包被抗原工作液)，另外用pbs分別包被5孔為非特異性結(jié)合組和包被4孔為空白對(duì)照組。隨后放置4℃冰箱過(guò)夜。尿源促卵泡激素既作包被抗原，也作競(jìng)爭(zhēng)抗原來(lái)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。首先把10.56ul的尿源促卵泡激素標(biāo)品-麗申寶(300iu/ml)在小離心管(1.5ml)用790ulpbs溶液稀釋為3.96iu/ml,然后依次在小離心管中按倍比稀釋成梯度；隨后，往每個(gè)梯度的標(biāo)品溶液的小離心管(1.5ml)中添加等體積的anti–fshα抗體溶液(一抗初始按1:12000用pbs溶液稀釋，混合后最終稀釋比例為1:24000，)【anti–fshα抗體(一抗)初始稀釋按1：12000用pbs溶液進(jìn)行稀釋，待與尿源促卵泡激素標(biāo)品等體積混合后，一抗最終稀釋比例則為1:24000】。隨后放置4℃冰箱過(guò)夜(這一步同前一步驟同時(shí)進(jìn)行)，整個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍為0.0155iu/ml---1.98iu/ml。封閉試劑進(jìn)行封閉：第二天，用pbs包含0.05％tween-20(pbst)清洗酶標(biāo)板3次，每次60-90秒。隨后可以采用5％的脫脂奶粉(320ul/well)封閉,37℃避光孵育2.5h。孵育單克隆anti–fshα抗體和人尿源促卵泡激素混合液：從1.5ml小離心管中取出100ul鼠源anti–fshα抗體和尿源促卵泡激素混合液【即將上述在1.5ml離心管中預(yù)先4℃孵育過(guò)夜的單克隆anti–fshα抗體和人尿源促卵泡激素混合液】添加到用pbst清洗3次的已封閉好的酶標(biāo)板中，每個(gè)梯度的一抗-標(biāo)品混合液重復(fù)3孔，隨后放置4℃冰箱無(wú)震蕩孵育48h。最大吸光值(b0)和非特異性結(jié)合(nbs)只接受100ul單克隆anti–fshα抗體最終稀釋溶液(1:24000)，空白對(duì)照組直接添加100ulpbs。孵育羊抗鼠-hrp酶標(biāo)二抗；用pbst清洗酶標(biāo)板5次，每次60-90秒。清洗完后每孔添加100ul羊抗鼠-hrp抗體(用pbs稀釋，1:3000)【羊抗鼠-hrp酶標(biāo)二抗按1:3000用pbs溶液稀釋成工作液】，37℃避光孵育40min。顏色反應(yīng)和反應(yīng)終止:用pbst清洗酶標(biāo)板5次，每次60-90秒。清洗完后每孔添加100ultmb顯色液(索萊寶公司；商品目錄號(hào)pr1210)，37℃避光孵育8-10min，隨后添加2m50ul/well的硫酸終止反應(yīng)。使用酶標(biāo)儀(thermolabsystemmk-3)在450nm讀取吸光值。原始數(shù)據(jù)處理和繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：把酶標(biāo)儀讀取的原始數(shù)據(jù)導(dǎo)入excel軟件中，計(jì)算每個(gè)梯度每一孔與最大吸光值(均值)的比值(即bi/bo)。然后以bi/bo為縱坐標(biāo)，尿源促卵泡激素(麗申寶)標(biāo)品稀釋濃度梯度為橫坐標(biāo)，利用graphpadprism5軟件繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。同時(shí)，采用originpro8進(jìn)行擬合線性回歸分析。實(shí)施案例二：人重組促卵泡激素(果納芬)樣品體外生物學(xué)活性的檢測(cè)與量化人尿源促卵泡激素(麗申寶，75iu)和人重組促卵泡激素(果納芬，75iu)分別采用250ul無(wú)菌水稀釋為0.3iu/ul或300iu/ml儲(chǔ)備品于-20℃保存?zhèn)溆谩Ｈ∧蛟创俾雅菁に匕唬?6孔酶標(biāo)板中每孔包被60ul尿源促卵泡激素(麗申寶)溶液(1iu/ml，即300iu/ml的儲(chǔ)備品用pbs(ph7.2-7.4)稀釋為1iu/ml的包被抗原工作液)，另外用pbs溶液分別包被5孔為非特異性結(jié)合組和包被4孔為空白對(duì)照組。隨后放置4℃冰箱過(guò)夜。人重組促卵泡激素作競(jìng)爭(zhēng)抗原來(lái)繪制劑量反應(yīng)曲線。首先把10.56ul的的人重組促卵泡激素樣品-果納芬(300iu/ml)在小離心管(1.5ml)用用790ulpbs溶液稀釋為3.96iu/ml,然后依次在小離心管中按倍比稀釋成梯度；隨后，往每個(gè)梯度的標(biāo)品溶液的小離心管(1.5ml)中添加等體積的anti–fshα抗體溶液(一抗初始按1:12000用pbs溶液稀釋，與重組促卵泡激素供試樣混合后最終稀釋比例為1:24000)。隨后放置4℃冰箱過(guò)夜(這一步同前一步驟同時(shí)進(jìn)行)，整個(gè)劑量反應(yīng)曲線范圍也為0.0155iu/ml---1.98iu/ml。封閉試劑進(jìn)行封閉:第二天，用pbs包含0.05％tween-20(pbst)清洗酶標(biāo)板3次，每次60-90秒。隨后可以采用5％的脫脂奶粉(320ul/well)封閉,37℃避光孵育2.5h。孵育單克隆anti–fshα抗體和人重組促卵泡激素混合液：從上述在1.5ml離心管中預(yù)先4℃孵育過(guò)夜的單克隆anti–fshα抗體和人尿源促卵泡激素混合液中取出100ul添加到用pbst清洗3次的已封閉好的酶標(biāo)板中【用移液槍充分混勻后添加到封閉好的酶標(biāo)板】，每個(gè)梯度混合液重復(fù)3次，隨后放置4℃冰箱無(wú)震蕩孵育48h。最大吸光值(b0)和非特異性結(jié)合(nbs)只接受100ul單克隆anti–fshα抗體最終稀釋溶液(1:24000)，空白對(duì)照組直接添加100ulpbs。孵育羊抗鼠-hrp酶標(biāo)二抗；用pbst清洗酶標(biāo)板5次，每次60-90秒。清洗完后每孔添加100ul羊抗鼠-hrp抗體(用pbs稀釋，1:3000)【羊抗鼠-hrp酶標(biāo)二抗按1:3000用pbs溶液稀釋成工作液】，37℃避光孵育40min。顏色反應(yīng)和反應(yīng)終止:用pbst清洗酶標(biāo)板5次，每次60-90秒。清洗完后每孔添加100ultmb顯色液(索萊寶公司；商品目錄號(hào)pr1210)，37℃避光孵育8-10min，隨后添加2m50ul/well的硫酸終止反應(yīng)。使用酶標(biāo)儀(thermolabsystemmk-3)在450nm讀取吸光值。原始數(shù)據(jù)處理和繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：把酶標(biāo)儀讀取的原始數(shù)據(jù)導(dǎo)入excel軟件中，計(jì)算每個(gè)梯度每一孔與最大吸光值(均值)的比值(即bi/bo)。然后以bi/bo為縱坐標(biāo)，人重組促卵泡激素(果納芬)樣品稀釋濃度梯度為橫坐標(biāo)，利用graphpadprism5軟件繪制出劑量反應(yīng)曲線。同時(shí)，采用originpro8進(jìn)行擬合線性回歸分析。實(shí)施案例三：人尿源促卵泡激素標(biāo)品體外生物學(xué)活性的檢測(cè)與量化操作和實(shí)施案例一相同，但封閉試劑采用2％牛血清白蛋白(bsa)替代5％的脫脂奶粉進(jìn)行封閉。實(shí)施案例四：人尿源促卵泡激素標(biāo)品體外生物學(xué)活性的檢測(cè)與量化操作和實(shí)施案例一相同，但封閉試劑采用3％胎牛血清(fbs)替代5％的脫脂奶粉進(jìn)行封閉。實(shí)施案例五：人尿源促卵泡激素標(biāo)品體外生物學(xué)活性的檢測(cè)與量化操作和實(shí)施案例一相同，但封閉試劑采用2.5％正常羊血清(ngs)替代5％的脫脂奶粉進(jìn)行封閉。驗(yàn)證案例：(1)曲線與范圍組別樣品或標(biāo)品濃度范圍擬合線性r2曲線范圍[bi/bo(％)]實(shí)施案例一0.0155iu/ml---1.98iu/ml0.8286310％—80％實(shí)施案例二0.0155iu/ml---1.98iu/ml0.6175110％—90％實(shí)施案例三0.0155iu/ml---1.98iu/ml0.9722620％—90％實(shí)施案例四0.0155iu/ml---1.98iu/ml0.9778030％—100％實(shí)施案例五0.0155iu/ml---1.98iu/ml0.8973320％—100％(2)有效性【1和2兩種對(duì)系統(tǒng)有效性的評(píng)估】【1】同源競(jìng)爭(zhēng)elisa有效性評(píng)估，采用本實(shí)驗(yàn)與湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)聯(lián)合開發(fā)出昆蟲桿狀病毒系統(tǒng)表達(dá)的重組促卵泡激素上清做供試樣品，并按10倍，20倍，40倍，80倍等系列稀釋后做體外活性量化檢測(cè)與評(píng)估。其中上清樣品稀釋在20-320倍之間均能有效檢測(cè)出其體外生物學(xué)活性(圖5)?！?】同源競(jìng)爭(zhēng)elisa有效性評(píng)估，我們采用重組促卵泡激素(果納芬)做供試品，并按尿源促卵泡激素(麗申寶)標(biāo)品稀釋梯度進(jìn)行稀釋，操作如上述案例二。其中供試品稀釋在0.0155iu/ml—1.98iu/ml范圍內(nèi)均能有效檢測(cè)和量化出其體外生物學(xué)活性(圖4)。(3)準(zhǔn)確性同源競(jìng)爭(zhēng)elisa準(zhǔn)確性評(píng)估,取重復(fù)5次測(cè)量的最大吸光值(bo)做數(shù)理統(tǒng)計(jì)(序號(hào)為1,2,3,4,5)，每次在酶標(biāo)板中設(shè)置6孔，并計(jì)算每次bo平均值，標(biāo)準(zhǔn)偏差和變異系數(shù)[cv(％)]，其結(jié)果如表1所示?！咀⒁饷看螠y(cè)量的od450(bo)值在0.7-0.9之間，如不在此區(qū)間則視為無(wú)效檢測(cè)結(jié)果】表1同源競(jìng)爭(zhēng)elisa準(zhǔn)確性評(píng)估序號(hào)重復(fù)孔數(shù)bo平均值標(biāo)準(zhǔn)偏差值變異系數(shù)[cv(％)]160.843830.018612.01260.822500.053786.54360.739170.032864.45460.716750.015592.18560.753170.045496.04當(dāng)前第1頁(yè)12