本發(fā)明屬于蘇丹紅i和蘇丹紅ii的定量分析方法技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種玉米苞葉薄膜微萃取高效液相色譜法測(cè)定紅酒中蘇丹紅i和ii濃度的方法。

背景技術(shù)：

蘇丹染料常被非法用于食品工業(yè)以模仿天然食品的顏色，進(jìn)而增加其銷售量?，F(xiàn)在蘇丹紅染料及其代謝產(chǎn)物被證明對(duì)人類具有致癌、致畸、致突變的作用，大多數(shù)國(guó)家已明令禁止將蘇丹紅染料作為食品添加劑使用。因此，建立可靠、快速、有效且高靈敏度的測(cè)定食品中蘇丹紅的方法很有必要。

蘇丹紅的檢測(cè)分析主要采用電化學(xué)檢測(cè)、高效液相色譜法、薄層色譜法、電泳、核磁共振法等，這些方法有的前處理過程復(fù)雜、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，有的設(shè)備儀器昂貴、檢測(cè)費(fèi)用高，有的靈敏度低，有的檢測(cè)組分單一。高效液相色譜法與不同的檢測(cè)器聯(lián)用是最廣泛使用測(cè)定食品中蘇丹紅染料的技術(shù)。然而，由于樣品基質(zhì)的復(fù)雜性和分析物含量低，干擾測(cè)定結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確性，因此在色譜分析之前，樣品的分離富集是至關(guān)重要的。

常用的分離富集蘇丹紅的方法有固相萃取和液相微萃取。但由于固相萃取過程繁瑣，并且耗費(fèi)時(shí)間和價(jià)格昂貴，液相微萃取低消耗、操作簡(jiǎn)單、溶劑消耗少、富集因子高但是重復(fù)性低。薄膜微萃取是一種新穎的固相微萃取技術(shù)，由于使用薄而寬的膜作為吸附劑提高了萃取相的比表面積，可以明顯縮短萃取時(shí)間，提高萃取和傳質(zhì)效率，增加測(cè)定的靈敏度和萃取的回收率。因此，研發(fā)薄膜微萃取膜是發(fā)展薄膜微萃取技術(shù)的核心。

玉米苞葉用于保護(hù)、包裹玉米，由于其柔韌特性常被用于包裝、編制等方面，更多的玉米苞葉都被當(dāng)作燃料或被棄置不用，十分可惜。然而目前尚沒有關(guān)于將玉米苞葉用作薄膜微萃取膜的相關(guān)報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明解決的技術(shù)問題是提供了一種操作簡(jiǎn)單、成本低廉、易于分離、抗干擾能力強(qiáng)且重復(fù)性好的玉米苞葉薄膜微萃取高效液相色譜法測(cè)定紅酒中蘇丹紅i和ii濃度的方法。

本發(fā)明為解決上述技術(shù)問題采用如下技術(shù)方案，一種玉米苞葉薄膜微萃取高效液相色譜法測(cè)定紅酒中蘇丹紅i和ii濃度的方法，其特征在于具體步驟為：

(1)玉米苞葉薄膜微萃取膜的制備

將干燥后的玉米苞葉裁剪為1cm×4cm的薄膜，再將裁剪后的玉米苞葉超聲清洗40min后于室溫干燥得到玉米苞葉薄膜微萃取膜備用；

(2)玉米苞葉薄膜微萃取高效液相色譜法測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

在一系列錐形瓶中分別加入1.0gnacl、10.00ml體積比為1:20的乙醇與水的混合溶液和200μl不同質(zhì)量濃度梯度的蘇丹紅i和蘇丹紅ii標(biāo)準(zhǔn)溶液，再將玉米苞葉薄膜微萃取膜加入錐形瓶中并密封，然后以160rpm的轉(zhuǎn)速于25℃振蕩吸附3h，取出玉米苞葉薄膜微萃取膜在室溫下晾干，用1.50ml甲醇洗脫10min，氮?dú)獯蹈上疵撘汉笥?.20ml甲醇溶解，設(shè)定高效液相色譜儀的參數(shù)分別為c18色譜柱，柱溫25℃，流動(dòng)相為純甲醇，流速1ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為478nm，依據(jù)配制樣品的濃度及高效液相色譜儀得到的曲線繪制濃度-峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(3)紅酒中蘇丹紅i和蘇丹紅ii含量的測(cè)定

在錐形瓶中加入1.0gnacl、10.00ml體積比為1:20的乙醇與水的混合溶液和200μl紅酒，再將玉米苞葉薄膜微萃取膜加入錐形瓶中并密封，然后以160rpm的轉(zhuǎn)速于25℃振蕩吸附3h，取出玉米苞葉薄膜微萃取膜在室溫下晾干，用1.50ml甲醇洗脫10min，氮?dú)獯蹈上疵撘汉笥?.20ml甲醇溶解，設(shè)定高效液相色譜儀的參數(shù)分別為c18色譜柱，柱溫25℃，流動(dòng)相為純甲醇，流速1ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為478nm，根據(jù)高效液相色譜儀得到的曲線計(jì)算峰面積并根據(jù)濃度-峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到紅酒中蘇丹紅i和蘇丹紅ii的濃度。

本發(fā)明提出利用天然的玉米苞葉作為薄膜微萃取膜，聯(lián)合高效液相色譜成功實(shí)現(xiàn)了從紅酒中分離并檢測(cè)蘇丹紅i和蘇丹紅ii，同時(shí)也提升了玉米苞葉自身的使用價(jià)值，具有較好的發(fā)展前景。

附圖說明

圖1是玉米苞葉薄膜微萃取膜吸附蘇丹紅i和蘇丹紅ii前的掃描電鏡圖；

圖2是玉米苞葉薄膜微萃取膜吸附蘇丹紅i和蘇丹紅ii后的掃描電鏡圖；

圖3是蘇丹紅i和蘇丹紅ii的標(biāo)準(zhǔn)曲線色譜圖；

圖4是玉米苞葉薄膜微萃取紅酒中的蘇丹紅i和蘇丹紅ii加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)色譜圖，其中a-直接注射200.0μg/l的蘇丹紅i和蘇丹紅ii標(biāo)準(zhǔn)溶液，b-紅酒空白，c-紅酒加標(biāo)100.0μg/l的蘇丹紅i和蘇丹紅ii標(biāo)準(zhǔn)溶液，經(jīng)玉米苞衣薄膜微萃取膜富集后，d-紅酒加標(biāo)200.0μg/l的蘇丹紅i和蘇丹紅ii標(biāo)準(zhǔn)溶液，經(jīng)玉米苞衣薄膜微萃取膜富集后。

具體實(shí)施方式

以下通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容做進(jìn)一步詳細(xì)說明，但不應(yīng)該將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)施例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。

實(shí)施例

(1)玉米苞葉薄膜微萃取膜的制備

將干燥后的玉米苞葉裁剪為1cm×4cm的薄膜，再將裁剪后的玉米苞葉超聲清洗40min后于室溫干燥得到玉米苞葉薄膜微萃取膜備用；

(2)玉米苞葉薄膜微萃取高效液相色譜法測(cè)定標(biāo)注曲線的繪制

在一系列錐形瓶中分別加入1.0gnacl、10.00ml體積比為1:20的乙醇與水的混合溶液和200μl不同質(zhì)量濃度梯度(濃度分別為20.0μg/l、50.0μg/l、100.0μg/l、200.0μg/l和500.0μg/l)的蘇丹紅i和蘇丹紅ii標(biāo)準(zhǔn)溶液，再將玉米苞葉薄膜微萃取膜加入錐形瓶中并密封，然后以160rpm的轉(zhuǎn)速于25℃振蕩吸附3h，取出玉米苞葉薄膜微萃取膜在室溫下晾干，用1.50ml甲醇洗脫10min，氮?dú)獯蹈上疵撘汉笥?.20ml甲醇溶解，設(shè)定高效液相色譜儀的參數(shù)分別為c18色譜柱，柱溫25℃，流動(dòng)相為純甲醇，流速1ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為478nm，依據(jù)配制樣品的濃度及高效液相色譜儀得到的曲線繪制濃度-峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線，在優(yōu)化條件下使用該方法富集、分離、洗脫蘇丹紅，并用高效液相色譜測(cè)定，色譜圖見圖3，表1給出了該方法的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差和檢出限；

表1玉米苞葉薄膜微萃取蘇丹紅i和蘇丹紅ii相關(guān)參數(shù)

圖1-2是玉米苞葉薄膜微萃取膜吸附蘇丹紅i和蘇丹紅ii前后的掃描電鏡圖，由圖可知吸附前玉米苞葉表面絨毛豎立，吸附蘇丹紅i和蘇丹紅ii后玉米苞葉表面絨毛已經(jīng)成匍匐姿態(tài)。

(3)紅酒中蘇丹紅i和ii含量的測(cè)定

在錐形瓶中加入1.0gnacl、10.00ml體積比為1:20的乙醇與水的混合溶液和200μl紅酒，再將玉米苞葉薄膜微萃取膜加入錐形瓶中并密封，然后以160rpm的轉(zhuǎn)速于25℃振蕩吸附3h，取出玉米苞葉薄膜微萃取膜在室溫下晾干，用1.50ml甲醇洗脫10min，氮?dú)獯蹈上疵撘汉笥?.20ml甲醇溶解，設(shè)定高效液相色譜儀的參數(shù)分別為c18色譜柱，柱溫25℃，流動(dòng)相為純甲醇，流速1ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為478nm，根據(jù)高效液相色譜儀得到的曲線計(jì)算峰面積并根據(jù)濃度-峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到紅酒中蘇丹紅i和蘇丹紅ii的濃度，最終紅酒中未測(cè)定出蘇丹紅i和蘇丹紅ii。同時(shí)測(cè)定了蘇丹紅i和蘇丹紅ii加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，加標(biāo)濃度分別為100μg/l和200μg/l，回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差見表2，色譜圖見圖4，從圖4可以看出，玉米苞葉薄膜微萃取膜對(duì)紅酒中的蘇丹紅i和蘇丹紅ii具有較好的富集效果。

表2玉米苞葉薄膜微萃取紅酒中的蘇丹紅i和蘇丹紅ii加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)

以上實(shí)施例描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征及優(yōu)點(diǎn)，本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實(shí)施例的限制，上述實(shí)施例和說明書中描述的只是說明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明原理的范圍下，本發(fā)明還會(huì)有各種變化和改進(jìn)，這些變化和改進(jìn)均落入本發(fā)明保護(hù)的范圍內(nèi)。