本發(fā)明涉及糖化血紅蛋白檢測(cè)試劑盒（熒光淬滅法）的制備方法，屬于生物化學(xué)定量分析的范疇。
背景技術(shù)：
：與血糖檢測(cè)相比，將hba1c用作診斷試驗(yàn)確有優(yōu)勢(shì)，2011年who（worldhealthorganization,世界衛(wèi)生組織）發(fā)表了用hba1c診斷糖尿病的咨詢報(bào)告，明確了hba1c可以用于糖尿病的診斷，并推薦hba1c≥6.5％作為糖尿病的診斷切點(diǎn)。我們的糖化血紅蛋白檢測(cè)試劑盒（熒光淬滅法）性能穩(wěn)定，具有準(zhǔn)確度高、不易受干擾的優(yōu)點(diǎn)。糖化血紅蛋白檢測(cè)試劑盒（熒光淬滅法）是配合一款poct（point-of-caretesting）的檢測(cè)設(shè)備使用，操作簡(jiǎn)單，而且我們的試劑盒配方采用液相硼酸鹽親和的方法，不涉及生物抗體，準(zhǔn)確度高，不易受干擾。與目前國(guó)內(nèi)的糖化血紅蛋白檢測(cè)試劑盒（免疫熒光法、免疫比濁法、免疫層析法）相比，具有明顯優(yōu)勢(shì)。文獻(xiàn)報(bào)道，免疫方法易受干擾物質(zhì)及抗體質(zhì)量的影響。造成干擾主要表現(xiàn)在三個(gè)方面。首先，被檢測(cè)物質(zhì)的某些物理性質(zhì)例如顏色、熒光性、光分布等。干擾物質(zhì)也可改變樣本的物理性質(zhì)例如表面張力、粘度、濁度、離子強(qiáng)度。第二，干擾物質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)也可改變酶活性、破壞試劑成分、抑制或增強(qiáng)指示反應(yīng)。干擾物質(zhì)也可促使檢測(cè)物質(zhì)形成復(fù)合物。第三，干擾物質(zhì)可有非特異性親和反應(yīng)影響。我們使用的糖化血紅蛋白檢測(cè)系統(tǒng)有三個(gè)主要的特征能夠避免干擾物質(zhì)的影響。首先，我們使用液相硼酸鹽親和糖化血紅蛋白引起熒光淬滅而進(jìn)行檢測(cè)。液相硼酸鹽親和糖化血紅蛋白的方法與以上免疫方法相比，由于不涉及抗體，采用的硼酸鹽只能特異性結(jié)合糖類物質(zhì)，所以不易受到干擾物質(zhì)影響。第二，當(dāng)樣本加入到反應(yīng)液里時(shí)，進(jìn)行了大比例的稀釋，4μl的血液加到2l反應(yīng)液里，稀釋比例為1:500，如此大的稀釋比例將會(huì)大大限制潛在干擾物質(zhì)的影響。第三，分析系統(tǒng)使用熒光檢測(cè)hba1c，熒光基團(tuán)發(fā)射出580nm的波長(zhǎng)，主要潛在的干擾物質(zhì)例如膽紅素，在這個(gè)波長(zhǎng)下不會(huì)有干擾產(chǎn)生。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一種通過液相硼酸鹽親和熒光淬滅的原理可進(jìn)行檢測(cè)糖化血紅蛋白含量的試劑盒配方及制備技術(shù)。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案：（1）熒光物質(zhì)的選擇，曙紅（又名伊紅）是一種可發(fā)熒光的氧雜蒽類弱酸性有機(jī)染料，曙紅熒光素由于具有高的發(fā)射效應(yīng)、高熒光量子產(chǎn)率而被廣泛應(yīng)用于生物、醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。選取曙紅—5-硫脲苯基硼酸三乙基胺鹽作為主要反應(yīng)物質(zhì)。（2）試劑杯材質(zhì)的選擇：聚甲基丙烯酸甲酯，俗稱有機(jī)玻璃，具有較好的透明性、化學(xué)穩(wěn)定性，力學(xué)性能和耐候性，易加工，外觀優(yōu)美等優(yōu)點(diǎn)。（3）不銹鋼珠包被曙紅—5-硫脲苯基硼酸三乙基胺鹽（4）配制熒光物質(zhì)的水溶液（附表1），控制點(diǎn)溫度，ph，濃度。（5）分裝溶液，試劑杯里分裝2ml反應(yīng)試劑壓內(nèi)層鋁箔膜，蓋藍(lán)色杯蓋。在藍(lán)色微孔里加入步驟2的包被曙紅復(fù)合熒光物質(zhì)的不銹鋼珠，再次壓外層鋁箔膜。表1成分含量氯化銨0.535%疊氮化鈉0.05%乙二胺四乙酸鈉（edta）2*10-8%脫氧膽酸鈉0.4%triton-100（辛基苯基聚氧乙烯醚）3*10-8%本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和有益效果：本發(fā)明應(yīng)用紅細(xì)胞裂解液和熒光淬滅技術(shù)定量測(cè)定糖化血紅蛋白，提供了反應(yīng)試劑的配方成分及配制技術(shù)。該試劑盒性能穩(wěn)定，準(zhǔn)確度高，線性良好，精密度高配制操作簡(jiǎn)單，試劑盒是完全封閉的，不易受環(huán)境影響，同時(shí)不污染環(huán)境，對(duì)操作者安全，沒有毒害作用。配合糖化血紅蛋白分析儀a1c-youpan配套使用，4分鐘就出結(jié)果，實(shí)驗(yàn)步驟少，操作簡(jiǎn)單，減少患者的等待時(shí)間，提高了臨床檢測(cè)的效率。附圖說明圖1糖化血紅蛋白檢測(cè)試劑盒試劑杯。具體實(shí)施方式下述實(shí)施例中所用方法如無特別說明均為常施方法。實(shí)施例1：試劑珠包被不銹鋼珠的制備采用4攝氏度孵育法。試劑珠包被具體操作如下：稱取0.0132g曙紅偶聯(lián)熒光物質(zhì)，溶于160ml乙醇，將帶底托的770個(gè)不銹鋼珠浸泡溶液中，4攝氏度孵育過夜。實(shí)施例2:試劑的配制配制稀釋液：首先將triton-100稀釋成體積分?jǐn)?shù)為0.3%的溶液1，再將溶液1稀釋10倍形成溶液2（濃度為3×10-2%），繼續(xù)稀釋1000倍形成溶液3（3×10-5%）作為母液備用。配制1m氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取4.0g氫氧化鈉溶于80ml純化水，溶解后定容至100ml配液：將5000ml燒杯置于磁力攪拌器上，加入1000ml去離子純化水，分別稱取8.56g氯化銨、6.4g脫氧膽酸鈉加入燒杯中，溶解后加入1.6mltriton-100溶液3和0.32ml的proclin300，混勻后加入去離子純化水，轉(zhuǎn)移至量筒定容至1600ml。使用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph到9.0。實(shí)施例3:分裝反應(yīng)混合液拿住購置的試劑杯（圖1）的上部，加入2ml反應(yīng)混合液，嚴(yán)禁接觸底部。此杯相當(dāng)于石英杯的作用，如污染將影響熒光吸光值。加入反應(yīng)混合液以后，迅速壓上內(nèi)層鋁箔膜，蓋藍(lán)色杯蓋。此時(shí)將實(shí)施例1得到的不銹鋼珠加到藍(lán)色杯蓋的小孔位置。不銹鋼珠的作用除了包被熒光物質(zhì)外，還相當(dāng)于磁力攪拌器的作用（糖化血紅蛋白分析儀檢測(cè)室有電機(jī)裝置）。最后，壓外層鋁箔膜。全部分裝以后，將試劑杯裝盒低溫2-8攝氏度保存。技術(shù)特征：技術(shù)總結(jié)本申請(qǐng)涉及一種糖化血紅蛋白檢測(cè)試劑盒（熒光淬滅法）制備方法。液相硼酸鹽親和熒光淬滅法可定量檢測(cè)糖化血紅蛋白的試劑配方BBZ。本發(fā)明主要提供了試劑配方BBZ的主要成分、濃度及制備技術(shù)。該試劑可配合糖化血紅蛋白分析儀A1C?YouPan使用，用于臨床定量檢測(cè)糖尿病患者的糖化血紅蛋白（HbA1c），也可用于正常人和糖尿病風(fēng)險(xiǎn)人群的監(jiān)測(cè)。技術(shù)研發(fā)人員：郗日沫;趙盼杰;關(guān)強(qiáng)受保護(hù)的技術(shù)使用者：天津三箭生物技術(shù)股份有限公司技術(shù)研發(fā)日：2017.06.05技術(shù)公布日：2017.10.24