本發(fā)明涉及一種檢測(cè)道地中藥的方法，屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

道地藥材指經(jīng)過(guò)中醫(yī)臨床長(zhǎng)期應(yīng)用優(yōu)選出來(lái)的，在特定地域，通過(guò)特定生產(chǎn)過(guò)程所產(chǎn)的，較在其他地區(qū)所產(chǎn)的同種藥材品質(zhì)佳、療效好，具有較高知名度的藥材。藥材的道地性一直是評(píng)價(jià)藥材品質(zhì)的獨(dú)特的綜合性標(biāo)準(zhǔn)。由于用傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)方法很難將不同產(chǎn)地的中藥材嚴(yán)格地區(qū)分鑒別開(kāi)，因此近些年來(lái)隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，一系列新的方法應(yīng)用于道地藥材的鑒別，主要包括hplc指紋圖譜技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)等，但是中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)受到是多種因素影響(如溫度、氣候、光照時(shí)間、土壤、水、栽培方法等等)，現(xiàn)在的研評(píng)價(jià)方法基本思路仍是在西醫(yī)藥理思想指導(dǎo)下，囿于“藥性唯成分論”的思維進(jìn)行的物質(zhì)成分尋找，試圖僅從某些物質(zhì)成分評(píng)價(jià)中藥整體質(zhì)量，忽略了其本身的整體屬性，缺乏按照中醫(yī)藥理論的自身特點(diǎn)的表征指標(biāo)。而且歷代本草及目前大量的研究都表明,不同地區(qū)的中藥的化學(xué)成分及遺傳物質(zhì)等方面的差異不明顯,這是其道地性特征不明顯,道地產(chǎn)區(qū)無(wú)法確認(rèn)的重要原因。

popp教授在量子理論及“耗散結(jié)構(gòu)理論”本質(zhì)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的生物系統(tǒng)電磁輻射行為的理論體系，描述生物輻射行為的理論體系生物光子輻射是生命系統(tǒng)的本質(zhì)現(xiàn)象，作為生命系統(tǒng)活動(dòng)過(guò)程中的產(chǎn)物，輻射攜帶有生命系統(tǒng)內(nèi)部的完整信息。當(dāng)生物系統(tǒng)處于激發(fā)后時(shí)，會(huì)發(fā)生延遲發(fā)光的現(xiàn)象，通過(guò)探測(cè)這些具有量子效應(yīng)的光子特性可以獲得生物系統(tǒng)內(nèi)部的整體信息，實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，生物光子輻射檢測(cè)技術(shù)能給出被測(cè)樣品由內(nèi)部變化及環(huán)境影響所引起的生物學(xué)效應(yīng)的整體信息，提供了一個(gè)關(guān)于生物系統(tǒng)基本特征的綜合指標(biāo)，符合中醫(yī)藥理論的整體觀念。

丹參(salviamiltiorrhizabge.)，別名紫丹參、血參、紅根等，為唇形科植物，以根入藥。主產(chǎn)四川、山東、河南、山西、河北、安徽等省，現(xiàn)全國(guó)大部分地區(qū)有分布。具有祛瘀止痛、活血通經(jīng)、清心除煩之功效，臨床上用于心腦血管、癌癥、中風(fēng)、肝炎等疾病的治療及抗衰老養(yǎng)生保健。然而由于丹參產(chǎn)地較多導(dǎo)致質(zhì)量不一，直接影響臨床療效。

目前利用生物系統(tǒng)的延遲發(fā)光研究中藥道地性尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道，尤其是，尚未有利用生物系統(tǒng)的延遲發(fā)光研究丹參道地性的相關(guān)報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明通過(guò)利用本草文獻(xiàn)記載的道地產(chǎn)區(qū)和非道地產(chǎn)區(qū)丹參延遲發(fā)光動(dòng)力學(xué)的差異，建立了一種新的丹參道地性的鑒定方法。

本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供一種檢測(cè)丹參道地性的方法，包括以下步驟：

(1)藥品篩選：篩選公認(rèn)丹參道地產(chǎn)地，并收集道地產(chǎn)地丹參和非道地產(chǎn)地丹參，收集不同批次的丹參中藥材若干批；

(2)確定丹參延遲發(fā)光檢測(cè)條件：環(huán)境溫度為22～24℃，濕度為50～55％；光電倍增管制冷時(shí)間2～2.5h，制冷最低恒定溫度為-23～-25℃；激發(fā)光源為白光，激發(fā)光照時(shí)間為10～12s；計(jì)數(shù)間隔時(shí)間為1s，計(jì)數(shù)量為200個(gè)；

盛放中藥樣品的平皿直徑4～5cm，4～5g丹參樣品平鋪在平皿底部；丹參樣品顆粒大小為80～120目；中藥樣品含水量控制為6.5％-8％；

(3)丹參道地性的檢測(cè)：

采用超微弱發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)后，繪制不同產(chǎn)地丹參的延遲發(fā)光動(dòng)力學(xué)曲線(xiàn)；

通過(guò)對(duì)延遲發(fā)光動(dòng)力學(xué)曲線(xiàn)進(jìn)行取對(duì)數(shù)處理后進(jìn)行線(xiàn)性擬合分析，擬合公式為y＝ax+b，獲得每個(gè)地區(qū)丹參延遲發(fā)光曲線(xiàn)的衰減斜率和截距；

進(jìn)一步通過(guò)大樣本分析建立其判別范圍數(shù)值，建立以道地產(chǎn)地丹參生物光子衰減斜率和截距作為鑒別參數(shù)，待檢測(cè)丹參樣品收集處理后，通過(guò)直接檢測(cè)該樣品的延遲發(fā)光動(dòng)力學(xué)曲線(xiàn)，分析其斜率和截距，對(duì)比道地產(chǎn)地丹參鑒別參數(shù)，判斷該待檢測(cè)丹參樣品是否為道地中藥。

本發(fā)明還提供上述方法在檢測(cè)丹參道地性中的應(yīng)用。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的技術(shù)方案具有如下有益效果：

利用不同產(chǎn)地丹參延遲發(fā)光延遲動(dòng)力學(xué)差異以及對(duì)丹參延遲發(fā)光曲線(xiàn)的衰減斜率和截距的分析來(lái)更方便和定量地鑒別道地中藥丹參。該方法靈敏度高、快速、操作簡(jiǎn)單、判別準(zhǔn)確性高，用于區(qū)分丹參是否道地藥材，評(píng)價(jià)中藥材的質(zhì)量，具有極大的應(yīng)用潛力。

附圖說(shuō)明

構(gòu)成本發(fā)明的一部分的說(shuō)明書(shū)附圖用來(lái)提供對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步理解，本發(fā)明的示意性實(shí)施例及其說(shuō)明用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的不當(dāng)限定。

圖1是檢測(cè)中藥道地性的裝置示意圖。

圖2是濾波片輪載體部分的示意圖。

圖3是丹參延遲發(fā)光動(dòng)力學(xué)衰減曲線(xiàn)。

具體實(shí)施方式

應(yīng)該指出，以下詳細(xì)說(shuō)明都是示例性的，旨在對(duì)本發(fā)明提供進(jìn)一步的說(shuō)明。除非另有指明，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解的相同含義。

需要注意的是，這里所使用的術(shù)語(yǔ)僅是為了描述具體實(shí)施方式，而非意圖限制根據(jù)本發(fā)明的示例性實(shí)施方式。如在這里所使用的，除非上下文另外明確指出，否則單數(shù)形式也意圖包括復(fù)數(shù)形式，此外，還應(yīng)當(dāng)理解的是，當(dāng)在本說(shuō)明書(shū)中使用術(shù)語(yǔ)“包含”和/或“包括”時(shí)，其指明存在特征、步驟、操作、器件、組件和/或它們的組合。

正如背景技術(shù)所介紹的，現(xiàn)有技術(shù)中檢測(cè)丹參道地性方法存在一定的不足，為了解決如上的技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明人經(jīng)過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，同一種藥材丹參不同產(chǎn)地的延遲發(fā)光行為存在一定差異，這種差異與其生長(zhǎng)環(huán)境、化學(xué)成分等密切相關(guān)，基于對(duì)道地丹參延遲發(fā)光行為的研究，處理延遲發(fā)光動(dòng)力學(xué)衰減曲線(xiàn)數(shù)據(jù)，得到丹參延遲發(fā)光曲線(xiàn)的衰減斜率和截距；通過(guò)對(duì)衰減斜率和截距的判斷，用于區(qū)分丹參是否為道地藥材。

故本發(fā)明提出了一種檢測(cè)丹參道地性的方法，包括以下步驟：

(1)藥品篩選：篩選公認(rèn)丹參道地產(chǎn)地，并收集道地產(chǎn)地丹參和非道地產(chǎn)地丹參，收集不同批次的丹參中藥材若干批；

(2)確定丹參延遲發(fā)光檢測(cè)條件：環(huán)境溫度為22～24℃，濕度為50～55％；光電倍增管制冷時(shí)間2～2.5h，制冷最低恒定溫度為-23～-25℃；激發(fā)光源為白光，激發(fā)光照時(shí)間為10～12s；計(jì)數(shù)間隔時(shí)間為1s,計(jì)數(shù)量為200個(gè)；

盛放中藥樣品的平皿直徑4～5cm，4～5g丹參樣品平鋪在平皿底部；丹參樣品顆粒大小為80～120目；樣品含水量控制方式為干燥器中連續(xù)干燥16h，中藥樣品含水量控制為6.5％-8％；

(3)丹參道地性的檢測(cè)：

采用超微弱發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)后，繪制不同產(chǎn)地丹參的延遲發(fā)光動(dòng)力學(xué)衰減曲線(xiàn)；

通過(guò)對(duì)延遲發(fā)光動(dòng)力學(xué)衰減曲線(xiàn)進(jìn)行取對(duì)數(shù)處理后進(jìn)行線(xiàn)性擬合分析，擬合公式為y＝ax+b，獲得每個(gè)地區(qū)丹參延遲發(fā)光衰減曲線(xiàn)的衰減斜率和截距；

進(jìn)一步通過(guò)大樣本分析建立其判別范圍數(shù)值，建立以道地產(chǎn)地丹參生物光子衰減斜率和截距作為鑒別參數(shù)，待檢測(cè)丹參樣品收集處理后，通過(guò)直接檢測(cè)該樣品的延遲發(fā)光動(dòng)力學(xué)衰減曲線(xiàn)，分析其斜率和截距，對(duì)比道地產(chǎn)地丹參鑒別參數(shù)，判斷該待檢測(cè)丹參樣品是否為道地中藥。

步驟(1)中，藥品依據(jù)中藥典籍及學(xué)術(shù)文獻(xiàn)進(jìn)行篩選。

本發(fā)明中的若干是指數(shù)量大于2或2以上。

步驟(2)中，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)不同的激發(fā)光源、樣品的含水量、樣品的顆粒大小對(duì)延遲發(fā)光有著明顯的影響。為了后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可對(duì)比性和準(zhǔn)確性，在本發(fā)明優(yōu)選的技術(shù)方案中，檢測(cè)條件為：環(huán)境溫度為22℃，濕度為50％；光電倍增管制冷時(shí)間2h，制冷最低恒定溫度為-23℃；激發(fā)光源為白光，激發(fā)光照時(shí)間為10s；計(jì)數(shù)間隔時(shí)間為1s,計(jì)數(shù)量為200個(gè)，連續(xù)測(cè)量三次；

盛放中藥樣品的平皿直徑5cm，5g丹參樣品平鋪在平皿底部；樣品含水量控制方式為干燥器中連續(xù)干燥16h。

步驟(3)中，所述超微弱發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)為現(xiàn)有技術(shù)中常規(guī)的檢測(cè)系統(tǒng)。

本發(fā)明中所述的大樣本是指樣本個(gè)數(shù)為30或30以上。

能夠表征中藥材生物光子發(fā)射特性的參數(shù)很多，包括衰減速率、強(qiáng)度、統(tǒng)計(jì)熵、輻射光譜等，經(jīng)過(guò)試驗(yàn)驗(yàn)證和分析，本發(fā)明采用丹參延遲發(fā)光衰減曲線(xiàn)的衰減斜率和截距能夠顯著的判別丹參的道地性，與其他參數(shù)相比，具有顯著差異，該參數(shù)使得檢測(cè)結(jié)果十分容易區(qū)分。

采用該分析方法能夠直觀的判別丹參是否為道地藥材，無(wú)需進(jìn)行相關(guān)的驗(yàn)證和分析，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

本發(fā)明還提供上述方法在檢測(cè)丹參道地性中的應(yīng)用。

為了使得本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠更加清楚地了解本發(fā)明的技術(shù)方案，以下將結(jié)合具體的實(shí)施例詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案。

實(shí)施例1

一種檢測(cè)丹參道地性的方法，包括以下步驟：

1)藥品篩選：依據(jù)中藥典籍及學(xué)術(shù)文獻(xiàn)，篩選道地藥材產(chǎn)地的丹參：四川中江，山東長(zhǎng)清；非道地藥材產(chǎn)地的丹參：安徽亳州，河南平頂山，陜西商洛，河北行唐各3批。

取供試品5g，平鋪于干燥至恒重的石英平皿中，厚度不超過(guò)5mm；精密稱(chēng)定，打開(kāi)瓶蓋放置在干燥鍋中(huiyu)干燥16小時(shí)。干燥結(jié)束后將瓶蓋蓋好，移出干燥鍋，精密稱(chēng)定并保存?zhèn)溆谩?/p>

2)打開(kāi)實(shí)驗(yàn)室的空調(diào)系統(tǒng)，設(shè)置溫度恒定為22℃，濕度恒定為rh50％。實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件達(dá)到穩(wěn)定后打開(kāi)超微弱發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)。

3)測(cè)量前將樣品平鋪在平皿的底部。打開(kāi)樣品室(或稱(chēng)暗室)開(kāi)關(guān)，將含有樣品的平皿放置到樣品臺(tái)上；調(diào)整位置使平皿的中心正好對(duì)著光電倍增管的探頭；調(diào)整樣品臺(tái)的高度使樣品表面距離光電倍增管的探頭5cm；關(guān)閉超微弱發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)樣品室門(mén)并擰緊旋鈕，務(wù)必保證暗室中無(wú)外界光線(xiàn)的干擾。

4)實(shí)驗(yàn)時(shí)先設(shè)置電壓1256v，并打開(kāi)光電倍增管高壓開(kāi)關(guān)；設(shè)置測(cè)量相關(guān)參數(shù)，測(cè)量間隔時(shí)間為1秒，激發(fā)時(shí)間10s，測(cè)量時(shí)間為200秒，選擇激發(fā)光源為白光，濾波片輪設(shè)置參數(shù)為“allfilter”。

5)設(shè)置檢測(cè)模式為“background”，檢測(cè)儀器的背景噪聲水平。背景噪聲達(dá)到要求后，設(shè)置檢測(cè)模式為(delayedluminescence)，點(diǎn)擊開(kāi)始按鈕，此時(shí)激發(fā)光源處的快門(mén)(s2)開(kāi)啟，光電倍增管處的快門(mén)(s1)處于關(guān)閉狀態(tài)，激發(fā)光照射到樣品處，10s后，快門(mén)s2關(guān)閉，同時(shí)快門(mén)s1開(kāi)啟，光電倍增管開(kāi)始檢測(cè)樣品的延遲發(fā)光。隨著濾波片輪的轉(zhuǎn)動(dòng)，中藥材樣品延遲發(fā)光在不同波長(zhǎng)條件下的光子強(qiáng)度被技術(shù)，并將數(shù)據(jù)存儲(chǔ)于獨(dú)立的excel文檔中備用。每個(gè)樣品測(cè)量3次。得到丹參延遲發(fā)光衰減曲線(xiàn)，如圖3所示。

6)利用origin9.1軟件，將丹參延遲發(fā)光參數(shù)進(jìn)行處理，將橫坐標(biāo)和縱坐標(biāo)取對(duì)數(shù)后畫(huà)出折線(xiàn)圖。

利用線(xiàn)性方程進(jìn)行擬合，獲取斜率和截距。通過(guò)分析道地產(chǎn)地丹參與非道地產(chǎn)地丹參生物光子衰減斜率和截距的差異，證實(shí)該方法可以作為鑒別道地產(chǎn)地的技術(shù)方法。

表1不同產(chǎn)地延遲發(fā)光衰減曲線(xiàn)截距和斜率

最終我們對(duì)比不同產(chǎn)地有效成分含量與延遲發(fā)光參數(shù)的差異。

表2不同產(chǎn)地丹參參數(shù)對(duì)比

從表2我們可以看出不同產(chǎn)地的不同丹參的有效成分含量與丹參種植區(qū)域存在著相關(guān)性，高緯度地區(qū)河南、陜西、河北、山東丹參酮iia、隱丹參酮和丹參酮i含量(以干燥品計(jì))(％)為平均值0.55，低緯度區(qū)四川、安徽為0.19，高緯度地區(qū)河南、陜西、河北、山東丹酚酸b含量(以干燥品計(jì))(％)含量為8.05，低緯度地區(qū)四川、安徽為6.6。兩種有效成分含量高緯度產(chǎn)區(qū)的丹參均高于低緯度地區(qū)。同樣通過(guò)分析延遲發(fā)光衰減曲線(xiàn)參數(shù)衰減斜率和截距我們發(fā)現(xiàn)高緯度地區(qū)河南、陜西、河北、山東分別為-2.13,5.09，而低緯度地區(qū)四川、安徽分別為-2.37,5.57。同時(shí)數(shù)據(jù)顯示，四川、山東種植斜率及截距與其他產(chǎn)地存在差異，通過(guò)利用丹參延遲發(fā)光檢測(cè)分析不同批次的丹參延遲發(fā)光參數(shù)、斜率和截距可以為鑒別道地中藥材提供一種新的方法。

進(jìn)一步通過(guò)大樣本分析建立其判別范圍數(shù)值，建立以道地產(chǎn)地丹參生物光子衰減斜率和截距作為鑒別參數(shù)，新的待測(cè)丹參樣品收集處理后，通過(guò)直接檢測(cè)該樣品的生物光子衰減曲線(xiàn)，分析其斜率和截距，對(duì)比道地產(chǎn)地丹參鑒別范圍，判斷該待檢測(cè)丹參樣品是否為道地中藥。

經(jīng)過(guò)檢測(cè)新的丹參樣品的道地性，該方法的檢測(cè)準(zhǔn)確率高達(dá)100％。

實(shí)施例2

一種實(shí)施例1中的方法使用的檢測(cè)丹參道地性的超微弱發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)，如圖1所示，包括激發(fā)光源1、樣品室2，光電倍增管3、濾光輪4、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)5和顯示器6。

其中激發(fā)光源1用于產(chǎn)生激發(fā)光，發(fā)射出的光線(xiàn)可以射入樣品室2，光電倍增管3用于測(cè)量樣品室2中樣品受激發(fā)后發(fā)射的生物光子強(qiáng)度，數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)5用于分析和處理光電倍增管3所測(cè)得的數(shù)據(jù)，光電倍增管3和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)電路連接，顯示器6顯示得到處理后的數(shù)據(jù)分析曲線(xiàn)。

所述激發(fā)光源上設(shè)有用于控制入射光的輻照時(shí)間的快門(mén)s1，所述光電倍增管前設(shè)有用于控制入射到光陰極的光照射時(shí)刻的快門(mén)s2，所述光電倍增管3與快門(mén)s2之間設(shè)有濾光輪4。如圖2所示，濾光輪4的載體部分是一個(gè)鏤空8個(gè)圓孔的金屬圓盤(pán)，其中七個(gè)圓孔中分別放置gg395、gg455、gg495、gg550、rg610、rg665、rg715不同波長(zhǎng)的長(zhǎng)通干涉濾波片，一個(gè)圓孔為空。

上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡(jiǎn)化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。