本發(fā)明涉及一種al58805原料藥或藥物制劑中基因毒性雜質(zhì)的分析方法，特別涉及一種采用高效液相色譜法對(duì)al58805中基因毒性雜質(zhì)對(duì)甲苯磺酸甲酯和對(duì)甲苯磺酸乙酯進(jìn)行分離和定量測(cè)定的方法。

背景技術(shù)：

al58805是由南京愛(ài)德程醫(yī)藥科技有限公司研發(fā)的一類(lèi)新藥，是在通過(guò)計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)技術(shù)篩選得到的一種新型pi3k/mtor雙靶點(diǎn)激酶抑制劑，且具有完全自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)。前期的研究結(jié)果表明，al58805是一種優(yōu)秀的抗腫瘤藥物，作用靶點(diǎn)獨(dú)特，抗腫瘤作用明顯，毒副作用小，其在胃癌、腎癌、骨肉瘤、結(jié)腸癌裸小鼠移植瘤模型中已被證實(shí)有明顯的抗腫瘤活性，因此，開(kāi)發(fā)成新藥后將在臨床治療腫瘤中具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。

基因毒性雜質(zhì)：在以dna反應(yīng)物質(zhì)為主要研究對(duì)象的體內(nèi)/體外試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)它們對(duì)dna有潛在的破壞性。按照目前的法規(guī)來(lái)說(shuō)，(體內(nèi))基因毒性物質(zhì)在任何攝入量水平上對(duì)dna都有潛在的破壞性，這種破壞可能導(dǎo)致腫瘤的產(chǎn)生，所以必須嚴(yán)格控制。

對(duì)甲苯磺酸甲酯和對(duì)甲苯磺酸乙酯是合成al58805原料藥時(shí)產(chǎn)生的副產(chǎn)物，屬于潛在基因毒性雜質(zhì)。為了嚴(yán)格控制對(duì)甲苯磺酸甲酯和對(duì)甲苯磺酸乙酯的含量，需尋求一種簡(jiǎn)單、快捷、專(zhuān)屬性強(qiáng)、靈敏度高的分析方法顯得猶為重要。

關(guān)于al58805中對(duì)甲苯磺酸甲酯和對(duì)甲苯磺酸乙酯含量測(cè)定的方法在國(guó)內(nèi)外還沒(méi)有報(bào)道。現(xiàn)今，僅有關(guān)于其它藥物中對(duì)甲苯磺酸酯類(lèi)基因毒雜質(zhì)測(cè)定的文獻(xiàn)報(bào)道，報(bào)道中常用的檢測(cè)方法是高效液相色譜法、液質(zhì)聯(lián)用法，如長(zhǎng)春西汀中對(duì)甲苯磺酸甲酯和對(duì)甲苯磺酸乙酯的lc-ms/ms法測(cè)定^[1]、lc-ms/ms測(cè)定草酸右旋西酞普蘭中對(duì)甲苯磺酸酯類(lèi)基因毒性雜質(zhì)的含量^[2]、hplc法測(cè)定氫溴酸西酞普蘭中的基因毒性雜質(zhì)對(duì)甲苯磺酸乙酯^[3]。文獻(xiàn)^[1]和文獻(xiàn)^[2]基因毒性雜質(zhì)的線(xiàn)性范圍及定量限濃度均相似，文獻(xiàn)^[1]中對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯的定量限均為2.5ng/ml(2.5ppm)，線(xiàn)性范圍為2.5～50ng/ml，文獻(xiàn)^[3]中對(duì)甲苯磺酸乙酯的定量限為25.6ng/ml(5.12ppm)，線(xiàn)性范圍為25.6～187.5ng/ml。而且，雖然質(zhì)譜檢測(cè)器是一種高靈敏度的通用檢測(cè)器，然而高昂的價(jià)格限制了它的推廣使用。

[1]張薇，陳夷花，鄭楓.長(zhǎng)春西汀中對(duì)甲苯磺酸甲酯和對(duì)甲苯磺酸乙酯的lc-ms/ms法測(cè)定[j]，中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2015，46(12)：1334-1336.

[2]梁鍵謀，傅聰，陳悅.lc-ms/ms測(cè)定草酸右旋西酞普蘭中對(duì)甲苯磺酸酯類(lèi)基因毒性雜質(zhì)的含量[j]，中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2016，33(11)：1436-1440.

[3]孫樸.hplc法測(cè)定氫溴酸西酞普蘭中的基因毒性雜質(zhì)對(duì)甲苯磺酸乙酯[j]，藥學(xué)研究，2015，34(11)：637-639.

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺點(diǎn)與不足，本發(fā)明的目的是提供一種高效液相色譜法檢測(cè)al58805原料藥或藥物制劑中基因毒性雜質(zhì)(對(duì)甲苯磺酸甲酯和對(duì)甲苯磺酸乙酯)的方法。

通過(guò)高效液相色譜對(duì)樣品前處理、色譜柱、流動(dòng)相等條件反復(fù)篩選，探索出了合適的分析條件。為兼顧主成分與雜質(zhì)的分離要求，選擇了合適的緩沖溶液體系、流動(dòng)相的比例等關(guān)鍵檢測(cè)條件；為減少供試品溶液對(duì)雜質(zhì)測(cè)定的干擾，對(duì)樣品前處理中供試品濃度、ph值、析晶溫度、靜置時(shí)間、過(guò)濾方式等進(jìn)行了篩選，最終確立的方法達(dá)到了上述發(fā)明目的。

本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是：

本發(fā)明采用高效液相色譜法對(duì)al58805原料藥或包含al58805的藥物制劑中基因毒性雜質(zhì)對(duì)甲苯磺酸甲酯和對(duì)甲苯磺酸乙酯定量分析的方法，該方法的具體步驟如下：

(1)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制

分別稱(chēng)取對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯對(duì)照品適量，加乙腈溶解并稀釋制成每1ml中約含1mg的儲(chǔ)備溶液，后用乙腈-水(50:50v/v)逐步稀釋制成每1ml中約含對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯各5、30、60、100、150、200ng的溶液作為標(biāo)準(zhǔn)工作液。

(2)樣品前處理

取al58805供試品適量(約相當(dāng)于al58805100mg)，置10ml量瓶中，加適量乙腈-水(50:50v/v)溶解后，用1mol/l氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph至8.5～9.5，加乙腈-水(50:50v/v)稀釋至刻度，搖勻，超聲10分鐘，于0℃析晶30分鐘后，取出強(qiáng)力振搖，靜置0.5～1.5小時(shí)后，用微孔濾膜過(guò)濾，取濾液測(cè)定。

優(yōu)選地，樣品前處理中：用1mol/l氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph至9，靜置時(shí)間為1小時(shí)，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾。

(3)液相色譜檢測(cè)條件

流動(dòng)相：乙腈-磷酸水溶液；流速：0.8～1.2ml/min；柱溫：30～40℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：225nm；進(jìn)樣量：20μl；十八烷基鍵合硅膠色譜柱(c18色譜柱)，洗脫時(shí)間為18min；檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器。

進(jìn)一步地，所述流動(dòng)相乙腈-磷酸水溶液的體積比為50:50。

進(jìn)一步地，所述磷酸水溶液的濃度為5mmol/l-50mmol/l，優(yōu)選為15mmol/l。

進(jìn)一步地，所述流速為0.8～1.2ml/min，優(yōu)選為1.0ml/min。

進(jìn)一步地，所述柱溫為30～40℃，優(yōu)選為35℃。

進(jìn)一步地，所述c18色譜柱的規(guī)格為4.6mm×250mm，5μm。

(4)取步驟(1)中對(duì)甲苯磺酸甲酯和對(duì)甲苯磺酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液適量，用乙腈-水(50:50v/v)逐步稀釋成每1ml中約含對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯各100ng的溶液作為對(duì)照品溶液；精密稱(chēng)取al58805供試品適量(約相當(dāng)于al58805100mg)，置10ml量瓶中，按步驟(2)的方法前處理作為供試品溶液。精密量取對(duì)照品溶液20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積計(jì)算，6次進(jìn)樣的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不得大于2.0％；再精密量取供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標(biāo)法以峰面積按下式計(jì)算，計(jì)算公式：

式中：as：對(duì)照品溶液中雜質(zhì)的平均峰面積；cs：對(duì)照品溶液中雜質(zhì)的濃度(ng/ml)；at：供試品溶液中雜質(zhì)的峰面積；ct：供試品溶液的濃度(mg/ml)。

本發(fā)明對(duì)采用高效液相色譜法檢測(cè)al58805中的基因毒性雜質(zhì)對(duì)甲苯磺酸甲酯和對(duì)甲苯磺酸乙酯含量的色譜條件進(jìn)行了優(yōu)化，取得了最佳色譜條件，然后針對(duì)此條件進(jìn)行對(duì)甲苯磺酸甲酯和對(duì)甲苯磺酸乙酯含量測(cè)定方法學(xué)驗(yàn)證。

本發(fā)明采用高效液相色譜法建立了al58805中對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯含量檢測(cè)的方法，樣品采用乙腈-水(50:50v/v)溶解后，通過(guò)調(diào)節(jié)供試品ph值使其析晶，從而降低供試品濃度，減少對(duì)基因毒性雜質(zhì)測(cè)定干擾的方法，本發(fā)明方法的效果和優(yōu)點(diǎn)是：

1、本發(fā)明可有效分離出al58805與基因毒性雜質(zhì)(對(duì)甲苯磺酸甲酯和對(duì)甲苯磺酸乙酯)，空白稀釋液不干擾基因雜質(zhì)的檢測(cè)，方法專(zhuān)屬性強(qiáng)，十分快速。

2、本發(fā)明能對(duì)基因毒性雜質(zhì)對(duì)甲苯磺酸甲酯和對(duì)甲苯磺酸乙酯進(jìn)行定量，且有較高的靈敏度，對(duì)甲苯磺酸甲酯檢測(cè)限為0.3ppm，定量限為1ppm；對(duì)甲苯磺酸乙酯檢測(cè)限為0.5ppm，定量限為1.4ppm，靈敏度高于參考文獻(xiàn)^[1]中l(wèi)c-ms/ms法。

3、本發(fā)明檢測(cè)方法檢測(cè)成本低廉、經(jīng)濟(jì)實(shí)用、專(zhuān)屬性強(qiáng)、簡(jiǎn)單快捷、靈敏度高，可用于al58805及含有al58805的藥物制劑中潛在基因毒性雜質(zhì)的質(zhì)量控制。

4、本發(fā)明方法經(jīng)過(guò)方法學(xué)驗(yàn)證，結(jié)果均符合要求，證明本發(fā)明可用于al58805中基因毒性雜質(zhì)對(duì)甲苯磺酸甲酯和對(duì)甲苯磺酸乙酯的含量檢測(cè)。

5、本發(fā)明與其它藥物中對(duì)甲苯磺酸酯類(lèi)基因毒雜質(zhì)檢測(cè)方法相比，增加了樣品前處理步驟(溶解、析晶、過(guò)濾等)，從而大大降低了進(jìn)樣溶液中供試品濃度，減少高濃度供試品溶液對(duì)雜質(zhì)測(cè)定的干擾和對(duì)色譜柱的傷害，并使得實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加準(zhǔn)確。

附圖說(shuō)明

圖1最佳色譜條件下對(duì)甲苯磺酸甲酯(mpts)、對(duì)甲苯磺酸乙酯(epts)的色譜圖；

圖2最佳色譜條件下al58805中添加對(duì)甲苯磺酸甲酯(mpts)、對(duì)甲苯磺酸乙酯(epts)的色譜圖；

圖3為基因毒性雜質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖：(a)對(duì)甲苯磺酸甲酯的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；(b)對(duì)甲苯磺酸乙酯的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；

圖4室溫條件下對(duì)甲苯磺酸甲酯和對(duì)甲苯磺酸乙酯的穩(wěn)定性示意圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步的說(shuō)明，但并不局限于此，凡是對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的精神和范圍，均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍中。

實(shí)施例1：

一、標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備

分別精密稱(chēng)取對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯對(duì)照品適量，加乙腈溶解并稀釋制成每1ml中約含1mg的溶液作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，后用乙腈-水(50:50v/v)逐步稀釋成所需的濃度。

二、液相色譜條件

色譜柱為inertsustainc18(4.6×250mm,5μm)；流動(dòng)相為15mmol/l磷酸水溶液-乙腈

(50:50v/v)；檢測(cè)波長(zhǎng)為225nm；流速為1ml/min；柱溫為35℃；進(jìn)樣量20μl；洗脫時(shí)間為18min。

三、樣品前處理方法

取al58805供試品約100mg，置10ml量瓶中，加適量乙腈-水(50:50v/v)溶解后，用1mol/l氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph至9，加乙腈-水(50:50v/v)稀釋至刻度，搖勻，超聲10分鐘，于0℃析晶30分鐘后，取出強(qiáng)力振搖，靜置1小時(shí)后，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，取濾液測(cè)定。

四、方法學(xué)的驗(yàn)證

專(zhuān)屬性考察：空白稀釋液不干擾對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯的檢測(cè)，專(zhuān)屬性良好。

檢測(cè)限定量限考察：在本試驗(yàn)條件下，配制不同濃度的對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯對(duì)照品，檢測(cè)限以s/n≥3計(jì)，定量限以s/n≥10計(jì)，分別進(jìn)樣確定對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯的檢測(cè)限和定量限，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)下表1。

表1

對(duì)照品溶液穩(wěn)定性考察：取對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯混合對(duì)照品溶液(100ng/ml)，進(jìn)行溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)，分別測(cè)定放置0、3、7、10、17、24小時(shí)后的峰面積。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)下表2。

表2

對(duì)照品溶液室溫放置24小時(shí)，對(duì)甲苯磺酸甲酯的峰面積平均值為6.96，rsd為3.8％；對(duì)甲苯磺酸乙酯的峰面積平均值為6.46，rsd為3.7％，表明對(duì)照品溶液室溫放置24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

線(xiàn)性考察：取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液適量，用乙腈-水(50:50v/v)稀釋制成下列標(biāo)準(zhǔn)系列混合溶液。精密量取標(biāo)準(zhǔn)系列混合溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線(xiàn)性回歸，具體如表3和圖3所示。

表3

對(duì)甲苯磺酸甲酯線(xiàn)性回歸方程為y＝0.0638x+0.0004，回歸系數(shù)r為0.9999，說(shuō)明本品在3.320ng/ml～199.2ng/ml范圍內(nèi)線(xiàn)性良好；對(duì)甲苯磺酸乙酯線(xiàn)性回歸方程為y＝0.0623x-0.0444，回歸系數(shù)r為0.9997，說(shuō)明本品在4.550ng/ml～202.0ng/ml范圍內(nèi)線(xiàn)性良好。

準(zhǔn)確度：稱(chēng)取al58805供試品適量(約相當(dāng)于al58805100mg)，置10ml量瓶中，作為回收率基質(zhì)樣品；分別精密量取對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液0.1ml置10ml量瓶中，用乙腈-水(50:50v/v)稀釋制成每1ml中約含10μg的混合溶液作為雜質(zhì)溶液。以基因雜質(zhì)的含量(0.001％基質(zhì)樣品濃度)為基準(zhǔn)100％，精密量取雜質(zhì)溶液0.07ml、0.10ml、0.13ml分別置于盛有基質(zhì)樣品的10ml量瓶中，混勻，用乙腈-水(50:50v/v)定容，配制成含雜質(zhì)70％、100％、130％的溶液，同法平行3次，作為供試品溶液。具體配制方法見(jiàn)下表4。

表4

精密量取上述溶液各20μl，分別注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，量取峰面積(其中供試品中對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯的峰面積需扣除樣品基質(zhì)中對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯的峰面積)，計(jì)算回收率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)下表5和表6。

回收率計(jì)算公式：

實(shí)際回收量＝au×fs×cs

式中：ws：雜質(zhì)對(duì)照品的質(zhì)量(mg)；cs：雜質(zhì)對(duì)照品的含量(％)；au：供試品溶液中雜質(zhì)的峰面積(扣除基質(zhì)中雜質(zhì)峰面積)；fs：雜質(zhì)濃度與峰面積比。

表5

表6

從上述系列表可以看出，對(duì)甲苯磺酸甲酯測(cè)定平均回收率為92.1％，rsd為2.8％(n＝9)，對(duì)甲苯磺酸乙酯測(cè)定平均回收率為101.4％，rsd為2.7％(n＝9)，表明該方法檢測(cè)對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯的準(zhǔn)確度良好。

實(shí)施例2：

1、標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備與實(shí)施例1相同；

2、液相色譜條件中：流動(dòng)相為5mmol/l磷酸水溶液-乙腈(50:50v/v)；其余與實(shí)施例1相同。

3、樣品前處理：與實(shí)施例1相同。

4、方法學(xué)驗(yàn)證和實(shí)施例1相同，結(jié)果表明，對(duì)甲苯磺酸甲酯平均回收率(藥典中標(biāo)準(zhǔn)為80-115％)為89.0％，rsd為1.6％，對(duì)甲苯磺酸乙酯平均回收率(藥典中標(biāo)準(zhǔn)為80-115％)為101.7％，rsd為2.3％，該方法檢測(cè)對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯的準(zhǔn)確度良好。

實(shí)施例3：

1、標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備與實(shí)施例1相同；

2、液相色譜條件中流動(dòng)相為50mmol/l磷酸水溶液-乙腈(50:50v/v)；其余與實(shí)施例1相同。

3、樣品前處理：與實(shí)施例1相同。

4、方法學(xué)驗(yàn)證和實(shí)施例1相同，結(jié)果表明，對(duì)甲苯磺酸甲酯平均回收率為93.1％，rsd為1.7％，對(duì)甲苯磺酸乙酯平均回收率為102.1％，rsd為2.7％，該方法檢測(cè)對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯的準(zhǔn)確度良好。

實(shí)施例4：

1、標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備與實(shí)施例1相同；

2、液相色譜條件中流動(dòng)相為30mmol/l磷酸水溶液-乙腈(50:50v/v)；其余與實(shí)施例1相同。

3、樣品前處理：與實(shí)施例1相同。

4、方法學(xué)驗(yàn)證和實(shí)施例1相同，結(jié)果表明，對(duì)甲苯磺酸甲酯平均回收率為94.1％，rsd為2.7％，對(duì)甲苯磺酸乙酯平均回收率為99.5％，rsd為2.2％，該方法檢測(cè)對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯的準(zhǔn)確度良好。

實(shí)施例5：

1、標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備與實(shí)施例1相同；

2、液相色譜條件與實(shí)施例1相同。

3、樣品前處理：其余步驟和實(shí)施例1相同，只是用1mol/l氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph至8.5。

4、方法學(xué)驗(yàn)證和實(shí)施例1相同，結(jié)果表明，對(duì)甲苯磺酸甲酯測(cè)定平均回收率為99.0％，rsd為2.3％，對(duì)甲苯磺酸乙酯測(cè)定平均回收率為105.8％，rsd為1.2％，該方法檢測(cè)對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯的準(zhǔn)確度良好。

實(shí)施例6：

1、標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備與實(shí)施例1相同；

2、液相色譜條件與實(shí)施例1相同。

3、樣品前處理：其余步驟和實(shí)施例1相同，只是用1mol/l氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph至9.5。

4、方法學(xué)驗(yàn)證和實(shí)施例1相同，結(jié)果表明，對(duì)甲苯磺酸甲酯測(cè)定平均回收率為86.1％，rsd為2.3％，對(duì)甲苯磺酸乙酯測(cè)定平均回收率為107.2％，rsd為0.8％，該方法檢測(cè)對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯的準(zhǔn)確度良好。

實(shí)施例7：

1、標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備與實(shí)施例1相同；

2、液相色譜條件與實(shí)施例1相同。

3、樣品前處理：其余步驟和實(shí)施例1相同，只是取出強(qiáng)力振搖后，靜置0.5小時(shí)。

4、方法學(xué)驗(yàn)證和實(shí)施例1相同，結(jié)果表明，對(duì)甲苯磺酸甲酯測(cè)定平均回收率為91.5％，rsd為3.2％，對(duì)甲苯磺酸乙酯測(cè)定平均回收率為102.8％，rsd為2.3％，該方法檢測(cè)對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯的準(zhǔn)確度良好。

實(shí)施例8：

1、標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備與實(shí)施例1相同；

2、液相色譜條件與實(shí)施例1相同。

3、樣品前處理：其余步驟和實(shí)施例1相同，只是取出強(qiáng)力振搖后，靜置1.5小時(shí)。

4、方法學(xué)驗(yàn)證和實(shí)施例1相同，結(jié)果表明，對(duì)甲苯磺酸甲酯測(cè)定平均回收率為95.5％，rsd為2.1％，對(duì)甲苯磺酸乙酯測(cè)定平均回收率為95.8％，rsd為2.9％，該方法檢測(cè)對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯的準(zhǔn)確度良好。

實(shí)施例9：

1、標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備與實(shí)施例1相同；

2、液相色譜條件中柱溫為30℃，其余與實(shí)施例1相同。

3、樣品前處理：與實(shí)施例1相同。

4、方法學(xué)驗(yàn)證和實(shí)施例1相同，結(jié)果表明，對(duì)甲苯磺酸甲酯平均回收率為93.2％，rsd為1.8％，對(duì)甲苯磺酸乙酯平均回收率為102.6％，rsd為2.6％，該方法檢測(cè)對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯的準(zhǔn)確度良好。

實(shí)施例10：

1、標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備與實(shí)施例1相同；

2、液相色譜條件中柱溫為40℃，其余與實(shí)施例1相同。

3、樣品前處理：與實(shí)施例1相同。

4、方法學(xué)驗(yàn)證和實(shí)施例1相同，結(jié)果表明，對(duì)甲苯磺酸甲酯平均回收率為90.4％，rsd為3.5％，對(duì)甲苯磺酸乙酯平均回收率為90.6％，rsd為1.9％，該方法檢測(cè)對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯的準(zhǔn)確度良好。

實(shí)施例11：

1、標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備與實(shí)施例1相同；

2、液相色譜條件中流速為0.8ml/min，其余與實(shí)施例1相同。

3、樣品前處理：與實(shí)施例1相同。

4、方法學(xué)驗(yàn)證和實(shí)施例1相同，結(jié)果表明，對(duì)甲苯磺酸甲酯平均回收率為101.5％，rsd為3.1％，對(duì)甲苯磺酸乙酯平均回收率為106.5％，rsd為3.0％，該方法檢測(cè)對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯的準(zhǔn)確度良好。

實(shí)施例12：

1、標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備與實(shí)施例1相同；

2、液相色譜條件中流速為1.2ml/min，其余與實(shí)施例1相同。

3、樣品前處理：與實(shí)施例1相同。

4、方法學(xué)驗(yàn)證和實(shí)施例1相同，結(jié)果表明，對(duì)甲苯磺酸甲酯平均回收率為92.6％，rsd為3.5％，對(duì)甲苯磺酸乙酯平均回收率為107.2％，rsd為2.0％，該方法檢測(cè)對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯的準(zhǔn)確度良好。

綜上所述，本發(fā)明方法能夠有效的分離al58805中的對(duì)甲苯磺酸甲酯和對(duì)甲苯磺酸乙酯，能夠準(zhǔn)確、快速測(cè)定基因毒性雜質(zhì)對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯，該方法簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確、有效，精密度高，專(zhuān)屬性強(qiáng)，是測(cè)定al58805原料藥或包含al58805的藥物制劑中對(duì)甲苯磺酸甲酯、對(duì)甲苯磺酸乙酯的理想方法。