本發(fā)明涉及水產(chǎn)學(xué)領(lǐng)域，更具體地說，涉及一種利用微量元素評估文蛤放流效果的前處理方法。

背景技術(shù)：

文蛤又名花蛤，是我國近海重要的經(jīng)濟(jì)種類之一，主要分布于我國大陸和臺灣沿岸。文蛤肉質(zhì)鮮美、營養(yǎng)豐富，具有很高的食療藥用價值。近年來由于過度捕撈，環(huán)境污染等因素，野生文蛤開始逐步衰退，為了更好的保護(hù)文蛤，在我國近海開始廣泛開展文蛤苗種的放流，放流過后需要評估放流的效果。

傳統(tǒng)標(biāo)記重捕的放流效果評估方法因受限于回捕率低、標(biāo)記死亡率高、標(biāo)記困難、費(fèi)用高等因素的影響，而不適合用作文蛤放流效果的評估。微量元素主要指sr、ba等，它不能被降解，相反卻能在生物體上富集，因此貝殼上的微量元素也被看作是一種天然標(biāo)記來評估文蛤的放流效果，通過比較野外捕撈文蛤與養(yǎng)殖文蛤貝殼上的微量元素的差異，采用逐步判別分析捕撈成蛤是否來自于放流群體。要測定貝殼上的微量元素需要先對樣本進(jìn)行處理，但目前沒有快速準(zhǔn)確的處理并測量貝殼上的微量元素的方法，不便于后期分析它的生活環(huán)境與生活史。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

1.要解決的技術(shù)問題

針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的目前沒有快速準(zhǔn)確的處理并測量貝殼上的微量元素的方法問題，本發(fā)明的目的在于提供一種利用微量元素評估文蛤放流效果的前處理方法，它可以實(shí)現(xiàn)快速準(zhǔn)確的處理并測量貝殼上的微量元素。

2.技術(shù)方案

為解決上述問題，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案。

一種利用微量元素評估文蛤放流效果的前處理方法，包括如下步驟：

（1）分別隨機(jī)選擇實(shí)驗室飼養(yǎng)的文蛤和野外捕撈的文蛤，并將實(shí)驗室飼養(yǎng)的文蛤和野外捕撈的文蛤分別編號；

（2）將清水煮沸，放入文蛤，煮沸4-6分鐘；

（3）取出文蛤，然后用解剖刀和鑷子剔除貝殼內(nèi)部的肌肉和結(jié)締組織，并對文蛤貝殼進(jìn)行切割，分別切取文蛤幼苗的貝殼頂端和文蛤成體的貝殼邊緣，放入自封袋，編號，備用；

（4）用超聲波清洗文蛤幼苗的貝殼頂端和文蛤成體的貝殼邊緣9-11分鐘，清洗后用超純水沖洗；

（5）將清洗去污后的貝殼冷凍干燥24小時，研磨成粉末樣品，100目過篩，制備過程應(yīng)避免沾污待測元素；

（6）使用天平準(zhǔn)確稱取研磨后的粉末樣品，置于消解罐中，加入分析純硝酸消解，放入真空干燥箱中24小時；

（7）取出溶解好的溶液，用少量純硝酸溶液清洗消解罐的蓋子內(nèi)壁、罐體內(nèi)壁和濾渣至少3次，洗液一并過濾收集于50ml容量瓶中，用超純水定容至刻度；

（8）用慢速定量濾紙過濾容量瓶中的溶液，收集在離心管中備用；

（9）制備空白對比試樣：不加粉末樣品，自己處理純硝酸溶液，按照步驟（6）、（7）和（8）制備空白試樣；

（10）在電感耦合等離子質(zhì)譜儀上測定微量元素。

通過上述步驟方法能夠完全消解貝殼樣品上的sr等微量元素，也可以提高前處理的速度，為文蛤的放流效果的評估提供了一個新的前處理方法，能夠快速準(zhǔn)確的處理并測量貝殼上的微量元素，便于后期分析不同生長階段文蛤的微量元素含量，從而進(jìn)一步分析它的生活環(huán)境與生活史。

優(yōu)選地，所述步驟（3）中使用的解剖刀和鑷子在酸缸中浸泡過夜，用超聲清洗9-11分鐘，超純水沖洗，使用烘箱烘干，對解剖刀和鑷子進(jìn)行消毒去污處理，提高測量準(zhǔn)確度。

優(yōu)選地，所述步驟（3）中的切割工具使用小型手動切割機(jī)，通過小型手動切割機(jī)便于切割貝殼。

優(yōu)選地，所述步驟（6）中的天平使用百萬分之一天平，消解罐使用20ml高溫高壓消解罐，百萬分之一天平提高了稱重準(zhǔn)確度，20ml高溫高壓消解罐便于盛放并消解樣品粉末。

優(yōu)選地，所述消解罐內(nèi)膽為聚四氟乙烯，使用前在酸缸中浸泡過夜，用超聲清洗9-11分鐘，超純水沖洗3遍，使用烘箱烘干，消解罐內(nèi)膽為聚四氟乙烯抗腐蝕性好，使用前將消解罐在酸缸中浸泡過夜，用超聲清洗9-11分鐘，超純水沖洗3遍，使用烘箱烘干，進(jìn)一步提高了測量準(zhǔn)確度。

優(yōu)選地，所述步驟（6）中準(zhǔn)確稱取過篩后的貝殼粉末為1mg，純硝酸為5ml，一定比例的貝殼粉末和純硝酸便于后期測量計算。

優(yōu)選地，所述步驟（6）真空干燥箱的溫度調(diào)至90攝氏度，一定溫度的真空干燥箱便于消解罐對粉末進(jìn)行消解。

優(yōu)選地，所述步驟（10）微量元素測定分析步驟為：

（1）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:以空白對比試樣的純硝酸溶液為標(biāo)準(zhǔn)系列的最低濃度點(diǎn)，制備至少5個濃度點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)系列。內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)使用液通過蠕動泵在線加入。將標(biāo)準(zhǔn)系列從低濃度至高濃度依次導(dǎo)入霧化器進(jìn)行分析，以各元素的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的響應(yīng)值和內(nèi)標(biāo)響應(yīng)值的比值為縱坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線便于測定并分析微量元素的含量；

（2）測定試樣:每個試樣測定前，用純硝酸溶液沖洗系統(tǒng)直至信號降至最低，待分析信號穩(wěn)定后開始測定，若試樣中待測目標(biāo)元素濃度超過標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍，須經(jīng)稀釋后重新測定，稀釋液使用純硝酸溶液，純硝酸溶液沖洗系統(tǒng)中使用5%的純硝酸溶液沖洗進(jìn)樣管，霧化器等，降低儀器的背景信號，避免元素干擾；

（3）根據(jù)測定結(jié)果計算出實(shí)驗室飼養(yǎng)的文蛤和野外捕撈的文蛤的微量元素含量，通過對比實(shí)驗室飼養(yǎng)的文蛤與野外捕撈的文蛤測量結(jié)果，便于后期分析生活環(huán)境與生活史，從而便于分析捕撈文蛤是否來自于放流群體。

優(yōu)選地，所述濃度點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)系列為0,20ug/l，40ug/l,60ug/l,

80ug/l,100ug/l，通過建立多個標(biāo)準(zhǔn)系列的最低濃度點(diǎn)便于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3.有益效果

相比于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：

（1）本方案的能夠完全消解貝殼樣品上的sr等微量元素，也可以提高前處理的速度，為文蛤的放流效果的評估提供了一個新的前處理方法，能夠快速準(zhǔn)確的處理并測量貝殼上的微量元素，便于后期分析不同生長階段文蛤的微量元素含量，從而進(jìn)一步分析它的生活環(huán)境與生活史。

（2）對解剖刀和鑷子進(jìn)行消毒去污處理，提高測量準(zhǔn)確度。

（3）通過小型手動切割機(jī)便于切割貝殼。

（4）百萬分之一天平提高了稱重準(zhǔn)確度，20ml高溫高壓消解罐便于盛放并消解樣品粉末。

（5）消解罐內(nèi)膽為聚四氟乙烯抗腐蝕性好，使用前將消解罐在酸缸中浸泡過夜，用超聲清洗9-11分鐘，超純水沖洗3遍，使用烘箱烘干，進(jìn)一步提高了測量準(zhǔn)確度。

（6）一定比例的貝殼粉末和純硝酸便于后期測量計算。

（7）一定溫度的真空干燥箱便于消解罐對粉末進(jìn)行消解。

（8）通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線便于測定并分析微量元素的含量，純硝酸溶液沖洗系統(tǒng)中使用5%的純硝酸溶液沖洗進(jìn)樣管，霧化器等，降低儀器的背景信號，避免元素干擾，通過對比實(shí)驗室飼養(yǎng)的文蛤與野外捕撈的文蛤測量結(jié)果，便于后期分析生活環(huán)境與生活史，從而便于分析捕撈文蛤是否來自于放流群體。

（9）通過建立多個標(biāo)準(zhǔn)系列的最低濃度點(diǎn)便于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

具體實(shí)施方式

下面將對本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述；顯然；所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例；而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例；本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實(shí)施例；都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

實(shí)施例1：

一種利用微量元素評估文蛤放流效果的前處理方法，包括如下步驟：

（1）分別隨機(jī)選擇實(shí)驗室飼養(yǎng)的文蛤和野外捕撈的文蛤各20個，并將實(shí)驗室飼養(yǎng)的文蛤和野外捕撈的文蛤分別編號；

（2）將清水煮沸，放入文蛤，煮沸4-6分鐘，便于將肌肉與貝殼分開；

（3）取出文蛤，然后用解剖刀和鑷子剔除貝殼內(nèi)部的肌肉和結(jié)締組織，有一些結(jié)締組織比較難分離，需要用解剖刀和鑷子剔除，這些組織會影響分析結(jié)果，并對文蛤貝殼進(jìn)行切割，分別切取文蛤幼苗的貝殼頂端和文蛤成體的貝殼邊緣，放入自封袋，編號，備用，解剖刀和鑷子在酸缸中浸泡過夜，用超聲清洗9-11分鐘，超純水沖洗，使用烘箱烘干，對解剖刀和鑷子進(jìn)行消毒去污處理，提高測量準(zhǔn)確度，切割貝殼工具使用小型手動切割機(jī)，通過小型手動切割機(jī)便于切割貝殼；

（4）用超聲波清洗文蛤幼苗的貝殼頂端和文蛤成體的貝殼邊緣9-11分鐘，清洗后用超純水沖洗，9-10分鐘的超純水沖洗，基本可以完全清洗干凈貝殼表面的殘留物；

（5）將清洗去污后的貝殼冷凍干燥24小時，研磨成粉末樣品，100目過篩，制備過程應(yīng)避免沾污待測元素，貝殼一般較硬，經(jīng)過24h冷凍干燥后的樣品更容易進(jìn)行研磨；

（6）使用天平準(zhǔn)確稱取研磨后的粉末樣品，置于消解罐中，加入分析純硝酸消解，放入真空干燥箱中24小時，天平使用百萬分之一天平，消解罐使用20ml高溫高壓消解罐，百萬分之一天平提高了稱重準(zhǔn)確度，20ml高溫高壓消解罐便于盛放并消解樣品粉末，消解罐內(nèi)膽為聚四氟乙烯，使用前在酸缸中浸泡過夜，用超聲清洗9-11分鐘，超純水沖洗3遍，使用烘箱烘干，消解罐內(nèi)膽為聚四氟乙烯抗腐蝕性好，使用前將消解罐在酸缸中浸泡過夜，用超聲清洗9-11分鐘，超純水沖洗3遍，使用烘箱烘干，進(jìn)一步提高了測量準(zhǔn)確度，準(zhǔn)確稱取過篩后的貝殼粉末為1mg，純硝酸為5ml，一定比例的貝殼粉末和純硝酸便于后期測量計算，真空干燥箱的溫度調(diào)至90攝氏度，一定溫度的真空干燥箱便于消解罐對粉末進(jìn)行消解，該條件下溶解效果好，微量元素的提取更完整；

（7）取出溶解好的溶液，用少量純硝酸溶液清洗消解罐的蓋子內(nèi)壁、罐體內(nèi)壁和濾渣至少3次，洗液一并過濾收集于50ml容量瓶中，用超純水定容至刻度，避免了微量元素的損失；

（8）用慢速定量濾紙過濾容量瓶中的溶液，收集在離心管中備用，避免大顆粒堵塞儀器的霧化器；

（9）制備空白對比試樣：不加粉末樣品，自己處理純硝酸溶液，按照步驟（6）、（7）和（8）制備空白試樣，空白試驗便于進(jìn)行空白對照。

（10）在電感耦合等離子質(zhì)譜儀上測定微量元素，微量元素測定分析步驟為：

（1）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:以空白對比試樣的純硝酸溶液為標(biāo)準(zhǔn)系列的最低濃度點(diǎn)，另制備至少5個濃度點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)系列，濃度點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)系列為0,20ug/l，40ug/l,60ug/l,80ug/l,100ug/l，通過建立多個標(biāo)準(zhǔn)系列的最低濃度點(diǎn)便于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)使用液通過蠕動泵在線加入。將標(biāo)準(zhǔn)系列從低濃度至高濃度依次導(dǎo)入霧化器進(jìn)行分析，以各元素的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的響應(yīng)值和內(nèi)標(biāo)響應(yīng)值的比值為縱坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線便于測定并分析微量元素的含量；

（2）測定試樣:每個試樣測定前，用純硝酸溶液沖洗系統(tǒng)直至信號降至最低，待分析信號穩(wěn)定后開始測定，若試樣中待測目標(biāo)元素濃度超過標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍，須經(jīng)稀釋后重新測定，稀釋液使用純硝酸溶液，純硝酸溶液沖洗系統(tǒng)中使用5%的純硝酸溶液沖洗進(jìn)樣管，霧化器等，降低儀器的背景信號，避免元素干擾；

（3）根據(jù)測定結(jié)果計算出實(shí)驗室飼養(yǎng)的文蛤和野外捕撈的文蛤的微量元素含量，通過對比實(shí)驗室飼養(yǎng)的文蛤與野外捕撈的文蛤測量結(jié)果，便于后期分析生活環(huán)境與生活史，從而便于分析捕撈文蛤是否來自于放流群體。

通過上述步驟方法能夠完全消解貝殼樣品上的sr等微量元素，也可以提高前處理的速度，為文蛤的放流效果的評估提供了一個新的前處理方法，能夠快速準(zhǔn)確的處理并測量貝殼上的微量元素，便于后期分析不同生長階段文蛤的微量元素含量，從而進(jìn)一步分析它的生活環(huán)境與生活史。

以上所述；僅為本發(fā)明較佳的具體實(shí)施方式；但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此；任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍內(nèi)；根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其改進(jìn)構(gòu)思加以等同替換或改變；都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。