本發(fā)明屬于中藥檢測
技術(shù)領(lǐng)域：
，涉及一種利用離子色譜法檢測鹽杜仲中鹽含量的方法。
背景技術(shù)：
：杜仲為杜仲科植物杜仲EucommiaulmoidesOliv.的干燥樹皮。刮去粗皮，堆置“發(fā)汗”至內(nèi)皮呈紫褐色，曬干。飲片規(guī)格有杜仲與鹽杜仲，其中鹽杜仲炮制方法為鹽炙法，即取杜仲塊或絲，每100kg待炮制品用食鹽2kg，用鹽水將杜仲塊或絲拌勻，悶透，置炒制容器內(nèi)，以文火加熱，炒至斷絲、表面焦黑色。中醫(yī)臨床上主要使用鹽杜仲，認(rèn)為鹽入腎經(jīng)，有助于杜仲益腎作用，與臨床療效直接相關(guān)。具有補(bǔ)肝腎，強(qiáng)筋骨，安胎之功效。鹽杜仲飲片中醫(yī)臨床使用極其廣泛，突出問題為鹽炙法時炒制不到位，膠絲仍富彈性如生品，不按古法炮制，嚴(yán)重影響了臨床使用效果，迄今未有文獻(xiàn)報道測定鹽杜仲中含鹽量的技術(shù)。技術(shù)實現(xiàn)要素：針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種利用離子色譜法檢測鹽杜仲中鹽含量的方法。本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:一種利用離子色譜法檢測鹽杜仲中鹽含量的方法，其特征在于：該方法具體通過以下步驟實現(xiàn)：(1)氯化鈉對照品溶液的制備：利用離子色譜儀進(jìn)樣分析，并同時記錄峰面積，采用外標(biāo)法繪制氯離子的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程；(2)鹽杜仲供試品溶液的制備:采用與上述相同的色譜條件，利用離子色譜儀進(jìn)樣分析，并同時記錄峰面積，并根據(jù)步驟(1)的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計算得出供試品氯離子含量，進(jìn)一步得出供試品中鹽的含量。所述步驟(1)得出以單位為μg/ml的氯離子進(jìn)樣濃度與峰面積Y作標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為，Y＝0.176X+0.0741，r＝0.99997，式中r為線性相關(guān)系數(shù)，X為氯離子的濃度。所述的離子色譜儀為熱電ISC-5000A型，所用的色譜柱為AG19+AS19色譜柱，所用的柱溫20～40℃，抑制器電流為60～90mA，淋洗液為梯度淋洗。所用的柱溫30℃、抑制器電流為75mA。淋洗液為梯度洗脫，具體為：0～10分鐘10mmol的KOH，10～15分鐘10mmol的KOH～30mmol的KOH，15～25分鐘30mmol的KOH，25～26分鐘30mmol的KOH～10mmol的KOH，26～31分鐘10mmol的KOH。所述方法中每次進(jìn)樣的樣品體積為25μl。本發(fā)明的有益效果是目前市場上鹽杜仲在鹽炙時存在未按標(biāo)準(zhǔn)炮制工藝加工的現(xiàn)象，且鹽杜仲標(biāo)準(zhǔn)中也未規(guī)定含鹽量的限度，加之鹽杜仲的炮制程度在性狀上不易區(qū)分，本發(fā)明采用離子色譜法檢測鹽杜仲飲片鹽的含量，該方法精密度高、重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好，能夠?qū)崿F(xiàn)對鹽杜仲飲片鹽的含量的檢測，大大減少分析時間，并且方法簡單易行，方便可靠，能夠更好的控制鹽杜仲的炮制工藝，保證臨床用藥。附圖說明圖1是氯化鈉對照品離子色譜圖；圖2是鹽杜仲供試品離子色譜圖；圖3是實驗例3氯離子線性關(guān)系圖。圖中，橫坐標(biāo)代表時間，縱坐標(biāo)代表離子強(qiáng)度。具體實施方式本發(fā)明所采用的儀器為熱電ISC-5000A型離子色譜儀，AG19+AS19色譜柱，柱溫30℃，梅特勒ME204電子分析天平、賽多利斯BP211D電子分析天平，為現(xiàn)有產(chǎn)品；采用的試藥為氯化鈉基準(zhǔn)物質(zhì)(批號20038661)，試驗所用水均為高純水。所采用的離子色譜條件為：AG19+AS19色譜柱；抑制器電流：75mA；淋洗液為梯度洗脫：0～10分鐘10mmol的KOH，10～15分鐘10mmol的KOH～30mmol的KOH，15～25分鐘30mmol的KOH，25～26分鐘30mmol的KOH～10mmol的KOH，26～31分鐘10mmol的KOH；柱溫30℃；進(jìn)樣體積25μl。已知鹽杜仲飲片炮制工藝為取杜仲絲，每100kg待炮制品用食鹽2kg，用鹽水將杜仲絲拌勻，悶透，置炒制容器內(nèi)，以文火加熱，炒至斷絲、表面焦黑色。一種利用離子色譜法檢測鹽杜仲中鹽含量的方法，采用離子色譜儀進(jìn)行檢測、外標(biāo)法定量分析，具體步驟包括：(1)氯化鈉對照品溶液的制備：分別精密稱取對照品10.81mg、10.05mg，置100ml量瓶中，加水溶解并定容至刻度，濃度分別為108.1μg/ml、201.1μg/ml，作為對照品儲備液A、B備用；精密吸取上述濃度為108.1μg/ml的對照品儲備液A各1ml，分別置25ml、10ml、5ml、2ml量瓶中，用水稀釋至刻度，得到濃度分別為4.324μg/ml、10.81μg/ml、21.62μg/ml、54.05μg/ml的對照品溶液C、D、E、F。(2)鹽杜仲供試品溶液的制備：取供試品適量，粉碎，精密稱定供試品粉末0.5g，置離心管中，精密加入高純水50ml，搖勻，離心，取上清液作為供試品溶液；(3)氯化鈉對照品溶液和鹽杜仲供試品溶液色譜圖將對照品溶液A、B、C、D、E、F搖勻后，利用離子色譜儀上的25μl定量環(huán)自動進(jìn)樣分析，并同時記錄峰面積，得出以氯離子進(jìn)樣濃度(μg/ml)與峰面積Y作標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為：Y＝0.176X+0.0741，r＝0.99997，r＞0.995，證明方程擬合度高，方程可用，式中r為線性相關(guān)系數(shù)，X為氯離子的濃度；將鹽杜仲供試品溶液采用同樣的色譜條件在離子色譜儀上以25μl定量環(huán)自動進(jìn)樣分析，并同時記錄峰面積，讀取鹽含量結(jié)果。實施例1取10kg杜仲絲，用適量水溶解食鹽100.17g，將杜仲絲杜仲絲拌勻，悶透，置炒制容器內(nèi)，以文火加熱，炒至斷絲、表面焦黑色。按上述的色譜條件進(jìn)行技術(shù)檢測，結(jié)果為0.92％。計算公式：實施例2取10kg杜仲絲，用適量水溶解食鹽200.07g，將杜仲絲杜仲絲拌勻，悶透，置炒制容器內(nèi)，以文火加熱，炒至斷絲、表面焦黑色。按擬定的技術(shù)檢測，結(jié)果為1.92％。計算公式同實施例1。實施例3取10kg杜仲絲，用適量水溶解食鹽999.76g，將杜仲絲杜仲絲拌勻，悶透，置炒制容器內(nèi)，以文火加熱，炒至斷絲、表面焦黑色。按擬定的技術(shù)檢測，結(jié)果為9.83％。計算公式同實施例1。實驗例所采用的供試品鹽杜仲飲片的編號為2016G0598。1.提取溶劑的選擇取供試品適量，粉碎，精密稱定供試品粉末0.5g，置離心管中，精密加入80℃高純水與高純水各50ml，搖勻，超聲30分鐘，離心，取上清液作為供試品溶液，測定，結(jié)果80℃高純水與高純水供試品中氯離子的含量無顯著性差異，但高純水取用方便，故確定高純水為提取溶劑。表1提取溶劑的選擇2.提取方式的選擇取供試品適量，粉碎，精密稱定供試品粉末0.5g，置離心管中，精密加入高純水50ml，分別搖勻、超聲10分鐘、超聲30分鐘、超聲60分鐘，離心，取上清液作為供試品溶液，測定，結(jié)果搖勻、超聲10分鐘、超聲30分鐘、超聲60分鐘供試品中氯離子的含量無顯著性差異，故確定提取方式簡單的搖勻為提取方式。表2提取方式的選擇3.線性關(guān)系考察3.1對照品溶液的制備精密吸取上述濃度為108.1μg/ml的對照品溶液各1ml，分別置25ml、10ml、5ml、2ml量瓶中，用水稀釋至刻度，濃度分別為4.324μg/ml、10.81μg/ml、21.62μg/ml、54.05μg/ml的對照品溶液。將濃度為4.324μg/ml、10.81μg/ml、21.62μg/ml、54.05μg/ml、108.1μg/ml、201.1μg/ml的對照品溶液分別進(jìn)樣25μl，按上述色譜條件進(jìn)行測定，以氯離子進(jìn)樣濃度(μg/ml)與峰面積(Y)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程為Y＝0.176X+0.0741，r＝0.99997。結(jié)果表明氯離子進(jìn)樣濃度在4.324μg/ml～201μg/ml范圍內(nèi)，與峰面積呈良好的線性關(guān)系。3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制分別精密吸取上述制備好的對照品儲備液A溶液1ml分別置25ml、10ml、5ml、2ml量瓶中，用高純水定容至刻度，分別作為對照品溶液，再取對照品1溶液、對照品2溶液，自動進(jìn)樣25μl，按上述色譜條件進(jìn)行測定，以氯離子進(jìn)樣濃度(μg/ml)與峰面積(Y)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程為Y＝0.176X+0.0741，r＝0.99997。結(jié)果表明氯離子進(jìn)樣濃度在4.324μg/ml～201μg/ml范圍內(nèi)，與峰面積呈良好的線性關(guān)系。線性關(guān)系如圖3。表3氯離子標(biāo)準(zhǔn)曲線測定結(jié)果進(jìn)樣濃度(μg/ml)峰面積4.3240.962510.811.97521.623.86954.059.4485108.119.085201.035.5064.精密度實驗吸取對照品A溶液25ul，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次，測定，記錄其峰面積值，結(jié)果氯離子峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.11％,表明精密度良好。表4精密度實驗結(jié)果5.穩(wěn)定性實驗取同一批供試品，照供試品溶液的制備方法制成供試品溶液，分別在0、3、5、9、16、18、24小時測定，計算其峰面積的RSD為0.42％，表明本品24小時內(nèi)穩(wěn)定性良好。表5穩(wěn)定性試驗結(jié)果6.重復(fù)性實驗取同一批供試品樣品6份，照文中供試品制備方法制成供試品溶液，同法測定，計算氯離子的含量，其RSD值為1.25％，結(jié)果表明重復(fù)性良好。表6重復(fù)性實驗結(jié)果7.氯離子回收率實驗采用加樣回收法，向離心管中精密加入0.2588mg/ml的氯化鈉對照品溶液10ml，平行6份，取重復(fù)性試驗項下的樣品約0.25g，氯離子含量10.4753mg/g，精密加入高純水40ml，按供試品溶液同法制備，測定含量，平均回收率為98.15％，RSD為1.85％，表明回收率良好。表7氯離子回收率實驗結(jié)果擬定限度的建立《2015年版中國藥典四部》中鹽炙法的規(guī)定為每100kg杜仲加食鹽量為2kg。另外查閱北京、甘肅、上海、浙江等地的地方飲片炮制規(guī)范，基本同藥典規(guī)定。故建立的限度為含鹽量以氯離子計，為1.5％～2.5％。當(dāng)前第1頁1 2 3