本發(fā)明涉及藥物制備技術領域，具體為一種含有人參或三七藥材的中藥制劑的檢測方法。

背景技術：

人參、三七均屬補益藥，在中藥制劑中經(jīng)常單用或合用，合用時多為君臣藥，二者所含化學成分同屬皂苷類，結構相似，薄層色譜行為也相近，給含有人參、三七藥材的中藥制劑制定標準帶來困難。

2015年《中國藥典》中對含有人參、三七的中藥制劑采用薄層色譜鑒別方法鑒定時，以人參皂苷 Rb1、人參皂苷 Rg1和三七皂苷 R1為對照品進行鑒別，但在實際工作中，由于三七皂苷R1和人參皂苷Re的Rf值極為接近，難以分離，以致于可能出現(xiàn)以人參替代三七或三七替代人參投料的假陽性結果，影響中藥制劑中對人參、三七鑒別的專屬性。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明正是針對以上技術問題，提供一種含有人參或三七藥材的中藥制劑的檢測方法。該檢測方法具有簡便、易行、專屬性強、重復性好的特點，有利于完善含有人參或三七的中藥制劑的質(zhì)量標準，防止生產(chǎn)上出現(xiàn)以人參替代三七或三七替代人參投料的中藥制劑，有助于提高該類中藥制劑的臨床使用安全性和穩(wěn)定性。

本發(fā)明的具體技術方案如下：

一種含有人參或三七藥材的中藥制劑的檢測方法,包括以下步驟：

（1）制備供試品溶液：取含有人參或三七的中藥組合物或中藥制劑，除去包衣，研細，取粉末2-5g，加三氯甲烷40ml，加熱回流1小時，棄去三氯甲烷液，藥渣揮干溶劑，加水0.5ml攪拌濕潤，加水飽和正丁醇10ml，超聲處理30分鐘，吸取上清液加3倍量氨試液，搖勻，放置分層，取上層液蒸干，殘渣加甲醇2-3ml使溶解，作為供試品溶液；

（2）制備陰性樣品溶液：按中藥組合物或中藥制劑的制備工藝制備不含人參、三七的成品，研細，取粉末2-5g，加三氯甲烷40ml，加熱回流1小時，棄去三氯甲烷液，藥渣揮干溶劑，加水0.5ml攪拌濕潤，加水飽和正丁醇10ml，超聲處理30分鐘，吸取上清液加3倍量氨試液，搖勻，放置分層，取上層液蒸干，殘渣加甲醇2-3ml使溶解，作為陰性樣品溶液；

（3）制備對照品溶液：取人參皂苷 Rb1對照品、人參皂苷Re對照品、人參皂苷 Rg1對照品、人參皂苷Rf對照和三七皂苷 R1對照品，加甲醇制成每1ml甲醇各含0.5-2mg的上述對照品的混合溶液，作為對照品混合溶液；

（4）檢測：取步驟（3）所述的混合對照品溶液1-3μl、步驟（1）所述的供試品溶液（可制備3批，分別為1批、2批、3批）0.3-3μl和步驟（2）所述的陰性樣品溶液0.3-3μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比90：45：6.5的二氯甲烷-無水乙醇-水為展開劑，展開劑置于層析缸中，于溫度5℃-20℃、相對濕度40%-80%的環(huán)境中飽和20分鐘，然后放入薄層板，繼續(xù)預飽和30分鐘后，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱2-3分鐘至斑點顯色清晰，分別在日光及紫外光365nm下檢視；（10%硫酸乙醇溶液的配置:是指用10ml的濃硫酸加入到90ml的無水乙醇中，即得。采用的濃硫酸的質(zhì)量分數(shù)在95%-98%。

（5）結果分析：含有人參、三七的中藥制劑的供試品色譜中，在和對照品人參皂苷 Rb1、對照品人參皂苷Re、對照品三七皂苷 R1、對照品人參皂苷Rf和對照品人參皂苷 Rg1的色譜相應位置上，日光下顯相同顏色的斑點，紫外光下顯相同顏色的熒光斑點；含有人參、不含三七的中藥制劑的供試品色譜中，在和對照品人參皂苷 Rb1、對照品人參皂苷Re、對照品人參皂苷Rf和對照品人參皂苷 Rg1的色譜相應位置上，日光下顯相同顏色的斑點，紫外光下顯相同顏色的熒光斑點；含有三七、不含人參的中藥制劑的供試品色譜中，對照品人參皂苷 Rb1、對照品人參皂苷Re、對照品三七皂苷 R1和對照品人參皂苷 Rg1的色譜相應位置上，日光下顯相同顏色的斑點，紫外光下顯相同顏色的熒光斑點；不含人參、三七的陰性樣品溶液色譜中，在與對照品色譜相應位置上，日光下不顯斑點，紫外光下不顯熒光斑點。

以上所有的%，如無特殊說明，均表示為其質(zhì)量百分含量。

本發(fā)明的積極效果體現(xiàn)在：

（一）、該檢測方法具有簡便、易行、毒性低（該檢測方法展開系統(tǒng)中所用試劑均比中國藥典提供的有關人參、三七檢測方法中所用試劑毒性低，主要是本檢測方法用二氯甲烷替代三氯甲烷，避免了三氯甲烷的致癌性）、專屬性強、重復性好的特點。

（二）、有利于完善含有人參或三七的中藥制劑的質(zhì)量標準，防止生產(chǎn)上出現(xiàn)以人參替代三七或三七替代人參投料的中藥制劑，有助于提高該類中藥制劑的臨床使用安全性和穩(wěn)定性。

附圖說明：

圖1-1-1為展開系統(tǒng)Ⅰ展開的薄層色譜圖；

圖1-1-2為展開系統(tǒng)Ⅱ展開的薄層色譜圖；

圖1-1-3為展開系統(tǒng)Ⅲ展開的薄層色譜圖；

圖1-1-4為展開系統(tǒng)Ⅳ展開的薄層色譜圖，

其中，1為混合對照品1μl；2為供試品點樣0.5μl；3為供試品點樣0.5μl；4為供試品點樣0.5μl；5為陰性樣品0.5μl。

圖1-2-1為點狀點樣方式點樣后展開的薄層色譜圖；

圖1-2-2為帶狀點樣方式點樣后展開的薄層色譜圖；

其中，1為混合對照品1μl；2為供試品點樣0.2μl；3為供試品點樣0.3μl；4為供試品點樣0.4μl；5為供試品點樣0.5μl。

圖1-3供試品溶液薄層鑒別點樣量的薄層色譜圖；

其中，1為混合對照品1μl；2為供試品點樣0.2μl；3為供試品點樣0.3μl；4為供試品點樣0.4μl；5為供試品點樣0.5μl。

圖1-4-1為采用天津思利達科技有限公司——可裁剪板展開的薄層色譜圖；

圖1-4-2為采用天津思利達科技有限公司——高效板展開的薄層色譜圖；

圖1-4-3為采用青島裕民源硅膠試劑廠——玻璃板展開的薄層色譜圖；

圖1-4-4為采用青島海洋化工廠分廠——玻璃板展開的薄層色譜圖；

其中，1：混合對照品1μl；2：供試品點樣0.3μl；3：供試品點樣0.3μl；4：供試品點樣0.3μl；5：陰性樣品0.3μl。

圖1-5-1為溫度35℃環(huán)境中展開的薄層色譜圖；

圖1-5-2為溫度30℃環(huán)境中展開的薄層色譜圖；

圖1-5-3為溫度25℃環(huán)境中展開的薄層色譜圖；

圖1-5-4為溫度20℃環(huán)境中展開的薄層色譜圖；

圖1-5-5為溫度5℃環(huán)境中展開的薄層色譜圖；

其中，1：混合對照品1μl；2：供試品點樣0.3μl；3：供試品點樣0.3μl；4：供試品點樣0.3μl；5：陰性樣品點樣0.3μl。

圖1-6-1為相對濕度40%的濕度環(huán)境中展開的薄層色譜圖；

圖1-6-2為相對濕度88%的濕度環(huán)境中展開的薄層色譜圖；

其中，1：混合對照品1μl；2：供試品點樣0.3μl；3：供試品點樣0.3μl；4：供試

品點樣0.3μl；5：陰性樣品點樣0.3μl。

圖1-7-1專屬性考察的薄層色譜圖；

其中，1：混合對照品1μl；2：供試品點樣0.3μl；3：供試品點樣0.3μl；4：供試品點樣0.3μl；5：陰性樣品點樣0.3μl。

圖2-1 康爾心膠囊中人參、三七供試品溶液點樣量的薄層鑒別色譜圖；

其中，1：混合對照品1.5μl；2：供試品點樣0.2μl；3：供試品點樣0.3μl；4：供試品點樣0.4μl；5：供試品點樣0.5μl；6：供試品點樣0.6μl。

圖2-2康爾心膠囊中人參、三七專屬性考察的薄層色譜圖，

其中，1：混合對照品1.5μl；2：供試品1點樣0.5μl；3：供試品2點樣0.5μl； 4：供試品3點樣0.5μl；5：陰性樣品點樣0.5μl

圖3-1益心舒片中人參供試品溶液點樣量的薄層鑒別色譜圖;

其中，1：混合對照品2μl;2：供試品點樣1μl; 3：供試品點樣2μl; 4：供試品點樣3μl; 5：供試品點樣4μl; 6：供試品點樣5μl

圖4益心舒片中人參專屬性考察的薄層色譜圖；

其中，1：混合對照品2μl；2：供試品1點樣3μl；3：供試品2點樣3μl；4：供試品3點樣3μl；5：陰性樣品點樣3μl。

圖4-1 羊藿三七膠囊中三七供試品溶液點樣量的薄層鑒別色譜圖；

其中，1：混合對照品1μl；2：供試品點樣0.2μl；3：供試品點樣0.3μl；4：供試品點樣0.4μl；5：供試品點樣0.5μl；6：供試品點樣0.6μl。

圖4-2為羊藿三七膠囊中三七專屬性考察的薄層色譜圖。

其中，1：混合對照品1μl；2：供試品1點樣0.3μl；3：供試品2點樣0.3μl；4：供試品3點樣0.3μl；5：陰性樣品點樣0.3μl。

具體實施方式

為了使本發(fā)明的目的、技術方案及優(yōu)點更加清楚明白，下面結合具體實施方式對本發(fā)明作進一步的詳細描述，但不應將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于下述實施例。

1 儀器和試藥：

KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；DK-98-Ⅱ電熱恒溫水浴（天津市秦斯特儀器有限公司）、硅膠G薄層板（天津思利達科技有限公司，可裁剪板，批號：160122），硅膠60A（天津思利達科技有限公司，可裁剪型高效板，批號：16025），硅膠G薄層板（青島海浪硅膠干燥劑有限公司，玻璃板，批號：20150502），硅膠G薄層板（青島海洋化工廠分廠，玻璃板，批號：20160611），薄層色譜掃描儀（CAMAG，made in Switzerland）、自動點樣儀（CAMAG，made in Switzerland）、人參皂苷Rf（中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用，批號：111719-201104）、人參皂苷Rg₁（中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用，批號：110703-201529）、人參皂苷Re（中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用，批號：110754-201525）、人參皂苷Rb₁（中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用，批號：110704-201424）、三七皂苷R₁（中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用，批號：110745-201318）；甲醇、無水乙醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、二氯甲烷、正丁醇均為分析純。

防癡丹，其中藥組合物的配方組成為：人參181.1g、川芎 181.1g、三七90.5g、水蛭90.5g、冰片5.434g、麝香 1.811g。

防癡丹的具體制備方法如下：按比例稱取以上六味原料藥，水蛭粉碎成粗粉，加10倍質(zhì)量水微微沸騰煎煮，煎煮2次，每次1小時，合并水煎液，濾過，濃縮至相對密度為1.0，加乙醇至濃度為60wt%，靜置24小時，濾過，取藥渣備用；人參、川芎、三七三味藥加總質(zhì)量6倍60wt%的乙醇回流提取3次，每次1.5小時，合并提取液，濾過，回收乙醇，濃縮至適量，將上述藥渣與濃縮液混溶，噴霧干燥，制成干膏粉；冰片和人工麝香共研，加入干膏粉和適量輔料，混勻，制成顆粒，壓制1000片，包薄膜衣，即得。

實驗例1：一種中藥組合物即防癡丹中人參、三七的薄層色譜鑒別

1. 供試品溶液的制備：取防癡丹20片，除去包衣，研細，取粉末5g，加三氯甲烷40ml，加熱回流1小時，棄去三氯甲烷液，藥渣揮干溶劑，加水0.5ml攪拌濕潤，加水飽和正丁醇10ml，超聲處理30分鐘，吸取上清液加3倍量氨試液，搖勻，放置分層，取上層液蒸干，殘渣加甲醇1.5ml使溶解，作為供試品溶液。

2. 制備陰性樣品溶液：按防癡丹的制備工藝制備不含人參、三七的成品，研細，取粉末5g，加三氯甲烷40ml，加熱回流1小時，棄去三氯甲烷液，藥渣揮干溶劑，加水0.5ml攪拌濕潤，加水飽和正丁醇10ml，超聲處理30分鐘，吸取上清液加3倍量氨試液，搖勻，放置分層，取上層液蒸干，殘渣加甲醇1.5ml使溶解，作為陰性樣品溶液。

3. 對照品溶液的制備：取人參皂苷Rb₁對照品、人參皂苷Re對照品、人參皂苷Rf對照品、人參皂苷Rg₁對照品及三七皂苷R₁對照品加甲醇制成每1ml各含2mg的混合溶液，作為混合對照品溶液。

4. 薄層方法選擇

4.1展開系統(tǒng)的選擇

展開系統(tǒng)Ⅰ：三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（體積比為15:40:22:10，10℃以下放置的下層溶液）

展開系統(tǒng)Ⅱ：氯仿-甲醇-水（體積比為13:7:2，10℃以下放置的下層溶液）

展開系統(tǒng)Ⅲ：正丁醇-乙酸乙酯-水（體積比為4:1:5，10℃以下放置的上層溶液）

展開系統(tǒng)Ⅳ：二氯甲烷：無水乙醇：水（體積比為90：45：6.5）

吸取上述對照品溶液1μl、供試品溶液a、供試品溶液b、供試品溶液c和陰性樣品各0.5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，分別用展開系統(tǒng)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，分別置日光和紫外光燈(365nm)下檢視。測試結果見圖1-1-1至圖1-1-4不同展開系統(tǒng)展開的薄層色譜圖，具體為：圖1-1-1展開系統(tǒng)Ⅰ展開的薄層色譜圖；圖1-1-2展開系統(tǒng)Ⅱ展開的薄層色譜圖；圖1-1-3展開系統(tǒng)Ⅲ展開的薄層色譜圖；圖1-1-4展開系統(tǒng)Ⅳ展開的薄層色譜圖，其中，1為混合對照品1μl；2為供試品點樣0.5μl；3為供試品點樣0.5μl；4為供試品點樣0.5μl；5為陰性樣品0.5μl。

結論：經(jīng)分析四種不同展開系統(tǒng)的薄層色譜圖可知，展開系統(tǒng)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的薄層色譜圖只能顯出四個斑點，說明此三種系統(tǒng)均不能分離五種對照品，而展開系統(tǒng)Ⅳ能將五種對照品分離，并且展開系統(tǒng)Ⅳ相比展開系統(tǒng)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，配置方法更簡便，系統(tǒng)所用試劑毒性較低，故選擇展開系統(tǒng)Ⅳ作為本品薄層鑒別的展開系統(tǒng)。

4.2點樣方式選擇

由于展開系統(tǒng)Ⅳ展開的薄層色譜圖中三七皂苷R1和人參皂苷Re的斑點距離較近，分離度較差，故考察點狀點樣和帶狀點樣，以期使此二種成分更好地分離。具體測試結果見圖1-2-1和圖1-2-2，不同點樣方式點樣后展開的薄層色譜圖，具體為：圖1-2-1為點狀點樣展開的薄層色譜圖；圖1-2-2為帶狀點樣展開的薄層色譜圖，其中，1為混合對照品1μl；2為供試品點樣0.3μl；3為供試品點樣0.3μl；4為供試品點樣0.3μl；5為陰性樣品0.3μ。

結論：比較不同點樣方式點樣后展開的薄層色譜圖可見，帶狀點樣后展開的薄層色譜圖斑點更清晰，分離度較好，故選用帶狀點樣。

4.3點樣量考察

按照選定的薄層鑒別方法，取對照品溶液1μl，供試品溶液0.2μl、0.3μl、0.4μl、0.5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點顯色清晰，置日光和紫外光燈（365nm）下檢視。測試結果見圖1-3 供試品溶液點樣量的薄層鑒別色譜圖，其中，1為混合對照品1μl；2為供試品點樣0.2μl；3為供試品點樣0.3μl；4為供試品點樣0.4μl；5為供試品點樣0.5μl。

結論：分析供試品溶液不同點樣量的薄層色譜圖可得，點樣0.3μl時主斑點顯色較清晰，且分離度較好，故確定本品供試品溶液的點樣量為0.3μl。

5.耐用性考察

5.1不同薄層板的考察

選取四個不同廠家的硅膠G薄層板，分別取混合對照品溶液1μl，和供試品溶液a、供試品溶液b、供試品溶液c和陰性樣品溶液各0.3μl，點于同一硅膠G薄層板上，按照已選定的薄層色譜條件展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點顯色清晰，置日光和紫外光燈（365nm）下檢視。測試不同薄層板展開的效果，圖1-4-1為天津思利達科技有限公司——可裁剪板；圖1-4-2為天津思利達科技有限公司——高效板；圖1-4-3為青島裕民源硅膠試劑廠——玻璃板；圖1-4-4為青島海洋化工廠分廠——玻璃板。其中，1：混合對照品1μl 2：供試品點樣0.3μl；3：供試品點樣0.3μl；4：供試品點樣0.3μl；5：陰性樣品0.3μl。

結論：分析比較不同薄層板展開的薄層色譜圖，結果表明在已選定的薄層色譜條件下，不同薄層板均能達到鑒別目的。

5.2溫度考察

在相對濕度固定為60%的條件下，分別改變薄層展開環(huán)境的溫度，取點好樣的薄層板，置5℃和35℃環(huán)境中展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點顯色清晰，置日光和紫外光燈（365nm）下檢視。測試不同相對溫度環(huán)境中展開的薄層色譜圖，圖1-5-1為溫度35℃環(huán)境中展開的薄層色譜圖；圖1-5-2為溫度30℃環(huán)境中展開的薄層色譜圖；圖1-5-3為溫度25℃環(huán)境中展開的薄層色譜圖；圖1-5-4為溫度20℃環(huán)境中展開的薄層色譜圖；圖1-5-5為溫度5℃環(huán)境中展開的薄層色譜圖。其中，1：混合對照品1μl；2：供試品點樣0.3μl；3：供試品點樣0.3μl；4：供試品點樣0.3μl；5：陰性樣品點樣0.3μl。

結論：在5℃環(huán)境中展開的薄層色譜圖各主斑點清晰，且分離度較好；在35℃環(huán)境中展開的薄層色譜圖斑點模糊，且分離度較差，表明高溫對本品薄層色譜鑒別影響較大。另考察室溫30℃、25℃和20℃環(huán)境中該鑒別方法的可行性，可見30℃、25℃環(huán)境中展開的薄層色譜圖斑點仍不清晰，分離度較差，20℃時可達到鑒別目的，故該薄層鑒別方法在5℃～20℃耐用性良好。

5.3濕度考察

在溫度固定為5℃的條件下，分別改變薄層展開環(huán)境的相對濕度，取點好樣的薄層板，分別置相對濕度為40%和88%的環(huán)境中展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點顯色清晰，置日光和紫外光燈（365nm）下檢視。測定不同相對濕度環(huán)境中展開的薄層色譜圖，圖1-6-1為相對濕度40%的濕度環(huán)境中展開的薄層色譜圖；圖1-6-2為相對濕度88%的濕度環(huán)境中展開的薄層色譜圖。其中，1：混合對照品1μl；2：供試品點樣0.3μl；3：供試品點樣0.3μl；4：供試品點樣0.3μl；5：陰性樣品點樣0.3μl。

結論：該薄層展開在相對濕度40%和88%環(huán)境中主斑點清晰，分離度好，故該法在相對濕度40%～88%環(huán)境中耐用性良好。

6.專屬性考察

取步驟3所述的混合對照品溶液1μl、步驟1所述的供試品溶液a、供試品溶液b、供試品溶液c各0.3μl和步驟2所述的陰性樣品溶液0.3μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比90：45：6.5的二氯甲烷-無水乙醇-水為展開劑，展開劑置于層析缸中，于溫度5℃、相對濕度40%的環(huán)境中飽和20分鐘，然后放入薄層板，繼續(xù)預飽和30分鐘后，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱3分鐘至斑點顯色清晰，分別在日光及紫外光（365nm）下檢視，觀察陰性有無干擾。具體見圖圖1-7-1，專屬性考察的薄層色譜圖，其中， 1：混合對照品1μl；2：供試品點樣0.3μl；3：供試品點樣0.3μl；4：供試品點樣0.3μl；5：陰性樣品點樣0.3μl。

結論：不含人參、三七的供試品在皂苷類對照品斑點相應的位置上無干擾，表明該薄層鑒別方法的專屬性良好。

綜合以上實驗結果，同時鑒別該中藥組合物制劑中人參、三七的檢測方法如下：取步驟3所述的混合對照品溶液1μl、步驟1所述的供試品溶液a、供試品溶液b、供試品溶液c各0.3μl和步驟2所述的陰性樣品溶液0.3μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比90：45：6.5的二氯甲烷-無水乙醇-水為展開劑，展開劑置于層析缸中，于溫度5℃-20℃、相對濕度40%-80%的環(huán)境中飽和20分鐘，然后放入薄層板，繼續(xù)預飽和30分鐘后，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱2-3分鐘至斑點顯色清晰，分別在日光及紫外光（365nm）下檢視。該中藥組合物的供試品色譜中，在和對照品人參皂苷 Rb1、對照品人參皂苷Re、對照品三七皂苷 R1、對照品人參皂苷Rf和對照品人參皂苷 Rg1的色譜相應位置上，日光下顯相同顏色的斑點，紫外光下顯相同顏色的熒光斑點，說明該中藥組合物同時含有人參、三七；不含人參、三七的陰性樣品溶液色譜中，在與對照品色譜相應位置上，日光下不顯斑點，紫外光下不顯熒光斑點，說明該檢測方法專屬性強，陰性無干擾。

實驗例2：市售康爾心膠囊或根據(jù)中國藥典處方制備康爾心膠囊浸膏中人參、三七的薄層色譜鑒別

1. 制備供試品溶液：取康爾心膠囊浸膏，研細，取粉末5g，加三氯甲烷40ml，加熱回流1小時，棄去三氯甲烷液，藥渣揮干溶劑，加水0.5ml攪拌濕潤，加水飽和正丁醇10ml，超聲處理30分鐘，吸取上清液加3倍量氨試液，搖勻，放置分層，取上層液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液。

2. 制備陰性樣品溶液：按康爾心膠囊的制備工藝制備不含人參、三七的成品，研細，取粉末5g，加三氯甲烷40ml，加熱回流1小時，棄去三氯甲烷液，藥渣揮干溶劑，加水0.5ml攪拌濕潤，加水飽和正丁醇10ml，超聲處理30分鐘，吸取上清液加3倍量氨試液，搖勻，放置分層，取上層液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為陰性樣品溶液。

3. 制備對照品溶液：取人參皂苷 Rb1對照品、人參皂苷Re對照品、人參皂苷 Rg1對照品、人參皂苷Rf對照和三七皂苷 R1對照品，加甲醇制成每1ml甲醇各含0.5mg的上述對照品的混合溶液，作為對照品混合溶液。

4. 點樣量考察

取步驟3中混合對照品溶液1μl，步驟2中供試品溶液0.2μl、0.3μl、0.4μl、0.5μl、0.6μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比90：45：6.5的二氯甲烷-無水乙醇-水10℃為展開劑，展開劑置于層析缸中，于溫度5℃、相對濕度40%的環(huán)境中飽和20分鐘，然后放入薄層板，繼續(xù)預飽和30分鐘后，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱3分鐘至斑點顯色清晰，分別在日光及紫外光（365nm）下檢視。見圖2-1 供試品溶液薄層鑒別點樣量的考察，其中，1：混合對照品1.5μl；2：供試品點樣0.2μl；3：供試品點樣0.3μl；4：供試品點樣0.4μl；5：供試品點樣0.5μl；6：供試品點樣0.6μl。

結論：分析供試品溶液不同點樣量的薄層色譜圖可得，點樣0.5μl時主斑點顯色較清晰，且分離度較好，故確定本品供試品溶液的點樣量為0.5μl。

5.專屬性考察

取步驟3所述的混合對照品溶液1.5μl、步驟1所述的供試品溶液a、供試品溶液b、供試品溶液c各0.5μl和步驟2所述的陰性樣品溶液0.5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比90：45：6.5的二氯甲烷-無水乙醇-水為展開劑，展開劑置于層析缸中，于溫度5℃、相對濕度40%的環(huán)境中飽和20分鐘，然后放入薄層板，繼續(xù)預飽和30分鐘后，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱3分鐘至斑點顯色清晰，分別在日光及紫外光（365nm）下檢視，觀察陰性有無干擾。見圖2-2專屬性考察的薄層色譜圖，其中，1：混合對照品1.5μl；2：供試品1點樣0.5μl；3：供試品2點樣0.5μl；4：供試品3點樣0.5μl；5：陰性樣品點樣0.5μl。

結論：不含人參、三七的供試品在皂苷類對照品色譜斑點相應的位置上無干擾，表明該薄層鑒別方法的專屬性良好。

綜合以上實驗結果，同時鑒別康爾心膠囊中人參、三七的檢測方法如下：取步驟3所述的混合對照品溶液1.5μl、步驟1所述的供試品溶液a、供試品溶液b、供試品溶液c各0.5μl和步驟2所述的陰性樣品溶液0.5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比90：45：6.5的二氯甲烷-無水乙醇-水為展開劑，展開劑置于層析缸中，于溫度5℃-20℃、相對濕度40%-80%的環(huán)境中飽和20分鐘，然后放入薄層板，繼續(xù)預飽和30分鐘后，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱2-3分鐘至斑點顯色清晰，分別在日光及紫外光（365nm）下檢視?？禒栃哪z囊的供試品色譜中，在和對照品人參皂苷 Rb1、對照品人參皂苷Re、對照品三七皂苷 R1、對照品人參皂苷Rf和對照品人參皂苷 Rg1的色譜相應位置上，日光下顯相同顏色的斑點，紫外光下顯相同顏色的熒光斑點，說明康爾心膠囊中同時含有人參、三七；不含人參、三七的陰性樣品溶液色譜中，在與對照品色譜相應位置上，日光下不顯斑點，紫外光下不顯熒光斑點，說明該檢測方法專屬性強，陰性無干擾。

實驗例3：市售益心舒片或根據(jù)中國藥典處方制備益心舒片浸膏中人參的薄層色譜鑒別

1. 制備供試品溶液：取益心舒片浸膏，研細，取粉末2g，加三氯甲烷40ml，加熱回流1小時，棄去三氯甲烷液，藥渣揮干溶劑，加水0.5ml攪拌濕潤，加水飽和正丁醇10ml，超聲處理30分鐘，吸取上清液加3倍量氨試液，搖勻，放置分層，取上層液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液。

2. 制備陰性樣品溶液：按益心舒片的制備工藝制備不含人參的成品，研細，取粉末2g，加三氯甲烷40ml，加熱回流1小時，棄去三氯甲烷液，藥渣揮干溶劑，加水0.5ml攪拌濕潤，加水飽和正丁醇10ml，超聲處理30分鐘，吸取上清液加3倍量氨試液，搖勻，放置分層，取上層液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為陰性樣品溶液。

3. 制備對照品溶液：取人參皂苷 Rb1對照品、人參皂苷Re對照品、人參皂苷 Rg1對照品、人參皂苷Rf對照和三七皂苷 R1對照品，加甲醇制成每1ml甲醇各含0.5mg的上述對照品的混合溶液，作為對照品混合溶液。

4. 點樣量考察

取步驟3中混合對照品溶液2μl，步驟2中供試品溶液1μl、2μl、3μl、4μl、5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比90：45：6.5的二氯甲烷-無水乙醇-水為展開劑，展開劑置于層析缸中，于溫度5℃、相對濕度40%的環(huán)境中飽和20分鐘，然后放入薄層板，繼續(xù)預飽和30分鐘后，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱3分鐘至斑點顯色清晰，分別在日光及紫外光（365nm）下檢視。見圖3-1 供試品溶液薄層鑒別點樣量的考察，其中，1：混合對照品2μl；2：供試品點樣1μl；3：供試品點樣2μl；4：供試品點樣3μl；5：供試品點樣4μl；6：供試品點樣5μl。

結論：分析供試品溶液不同點樣量的薄層色譜圖可得，點樣3μl時主斑點顯色較清晰，且分離度較好，故確定本品供試品溶液的點樣量為3μl。

5.專屬性考察

取步驟3所述的混合對照品溶液2μl、步驟1所述的供試品溶液a、供試品溶液b、供試品溶液c各3μl和步驟2所述的陰性樣品溶液3μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比90：45：6.5的二氯甲烷-無水乙醇-水為展開劑，展開劑置于層析缸中，于溫度5℃、相對濕度40%的環(huán)境中飽和20分鐘，然后放入薄層板，繼續(xù)預飽和30分鐘后，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱3分鐘至斑點顯色清晰，分別在日光及紫外光（365nm）下檢視，觀察陰性有無干擾。見圖4專屬性考察的薄層色譜圖，其中，1：混合對照品2μl；2：供試品1點樣3μl；3：供試品2點樣3μl；4：供試品3點樣3μl； 5：陰性樣品點樣3μl。

結論：不含人參的供試品在皂苷類對照品色譜斑點相應的位置上無干擾，表明該薄層鑒別方法的專屬性良好。

綜合以上實驗結果，鑒別益心舒片中人參的檢測方法如下：取步驟3所述的混合對照品溶液2μl、步驟1所述的供試品溶液a、供試品溶液b、供試品溶液c各3μl和步驟2所述的陰性樣品溶液3μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比90：45：6.5的二氯甲烷-無水乙醇-水為展開劑，展開劑置于層析缸中，于溫度5℃-20℃、相對濕度40%-80%的環(huán)境中飽和20分鐘，然后放入薄層板，繼續(xù)預飽和30分鐘后，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱2-3分鐘至斑點顯色清晰，分別在日光及紫外光（365nm）下檢視。益心舒片的供試品色譜中，在和對照品人參皂苷 Rb1、對照品人參皂苷Re、對照品人參皂苷Rf、對照品人參皂苷 Rg1的色譜相應位置上，日光下顯相同顏色的斑點，紫外光下顯相同顏色的熒光斑點，在和對照品三七皂苷 R1的色譜相應位置上，日光下無相同顏色的斑點，紫外光下無相同顏色的熒光斑點，說明益心舒片中含有人參，不含三七，并且不存在用三七替代人參的現(xiàn)象；不含人參的陰性樣品溶液色譜中，在與對照品色譜相應位置上，日光下不顯斑點，紫外光下不顯熒光斑點，說明該檢測方法專屬性強，陰性無干擾。

實驗例4：市售羊藿三七膠囊或根據(jù)中國藥典處方制備羊藿三七膠囊浸膏中三七的薄層色譜鑒別

1. 制備供試品溶液：取羊藿三七膠囊浸膏，研細，取粉末2g，加三氯甲烷40ml，加熱回流1小時，棄去三氯甲烷液，藥渣揮干溶劑，加水0.5ml攪拌濕潤，加水飽和正丁醇10ml，超聲處理30分鐘，吸取上清液加3倍量氨試液，搖勻，放置分層，取上層液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液。

2. 制備陰性樣品溶液：按羊藿三七膠囊的制備工藝制備不含三七的成品，研細，取粉末2g，加三氯甲烷40ml，加熱回流1小時，棄去三氯甲烷液，藥渣揮干溶劑，加水0.5ml攪拌濕潤，加水飽和正丁醇10ml，超聲處理30分鐘，吸取上清液加3倍量氨試液，搖勻，放置分層，取上層液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為陰性樣品溶液。

3. 制備對照品溶液：取人參皂苷 Rb1對照品、人參皂苷Re對照品、人參皂苷 Rg1對照品、人參皂苷Rf對照和三七皂苷 R1對照品，加甲醇制成每1ml甲醇各含1mg的上述對照品的混合溶液，作為對照品混合溶液。

4. 點樣量考察

取步驟3中混合對照品溶液1μl，步驟2中供試品溶液0.2μl、0.3μl、0.4μl、0.5μl、0.6μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比90：45：6.5的二氯甲烷-無水乙醇-水為展開劑，展開劑置于層析缸中，于溫度5℃、相對濕度40%的環(huán)境中飽和20分鐘，然后放入薄層板，繼續(xù)預飽和30分鐘后，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱3分鐘至斑點顯色清晰，分別在日光及紫外光（365nm）下檢視。見圖4-1 供試品溶液薄層鑒別點樣量的考察，其中，1：混合對照品1μl；2：供試品點樣0.2μl；3：供試品點樣0.3μl；4：供試品點樣0.4μl；5：供試品點樣0.5μl；6：供試品點樣0.6μl。

結論：分析供試品溶液不同點樣量的薄層色譜圖可得，點樣0.3μl時主斑點顯色較清晰，且分離度較好，故確定本品供試品溶液的點樣量為0.3μl。

5.專屬性考察

取步驟3所述的混合對照品溶液1μl、步驟1所述的供試品溶液a、供試品溶液b、供試品溶液c各0.3μl和步驟2所述的陰性樣品溶液0.3μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比90：45：6.5的二氯甲烷-無水乙醇-水10℃為展開劑，展開劑置于層析缸中，于溫度5℃、相對濕度40%的環(huán)境中飽和20分鐘，然后放入薄層板，繼續(xù)預飽和30分鐘后，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱3分鐘至斑點顯色清晰，分別在日光及紫外光（365nm）下檢視，觀察陰性有無干擾。見圖4-2，專屬性考察的薄層色譜圖，其中，1：混合對照品1μl；2：供試品1點樣0.3μl；3：供試品2點樣0.3μl；4：供試品3點樣0.3μl；5：陰性樣品點樣0.3μl。

結論：不含人參、三七的供試品在皂苷類對照品色譜斑點相應的位置上無干擾，表明該薄層鑒別方法的專屬性良好。

綜合以上實驗結果，鑒別羊藿三七膠囊中三七的檢測方法如下：取步驟3所述的混合對照品溶液1μl、步驟1所述的供試品溶液a、供試品溶液b、供試品溶液c各0.3μl和步驟2所述的陰性樣品溶液0.3μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比90：45：6.5的二氯甲烷-無水乙醇-水為展開劑，展開劑置于層析缸中，于溫度5℃-20℃、相對濕度40%-80%的環(huán)境中飽和20分鐘，然后放入薄層板，繼續(xù)預飽和30分鐘后，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱2-3分鐘至斑點顯色清晰，分別在日光及紫外光（365nm）下檢視。羊藿三七膠囊的供試品色譜中，在和對照品人參皂苷 Rb1、對照品人參皂苷Re、對照品三七皂苷 R1、對照品人參皂苷 Rg1的色譜相應位置上，日光下顯相同顏色的斑點，紫外光下顯相同顏色的熒光斑點，在和對照品人參皂苷Rf的色譜相應位置上，日光下無相同顏色的斑點，紫外光下無相同顏色的熒光斑點，說明羊藿三七膠囊中含有三七，不含人參，并且不存在用人參替代三七的現(xiàn)象；不含三七的陰性樣品溶液色譜中，在與對照品色譜相應位置上，日光下不顯斑點，紫外光下不顯熒光斑點，說明該檢測方法專屬性強，陰性無干擾。

對所公開的實施例的上述說明，使本領域?qū)I(yè)技術人員能夠?qū)崿F(xiàn)或使用本發(fā)明。對這些實施例的多種修改對本領域的專業(yè)技術人員來說將是顯而易見的，本文中所定義的一般原理可以在不脫離本發(fā)明的精神或范圍的情況下，在其它實施例中實現(xiàn)。因此，本發(fā)明將不會被限制于本文所示的這些實施例，而是要符合與本文所公開的原理和新穎特點相一致的最寬的范圍。