1.一種頂空氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用定性定量測定植物油摻假的方法,其特征在于:包括以下步驟:
S1收集單一品種合格植物油;
S2使用頂空氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法采集樣品信息;
S3用數(shù)據(jù)分析軟件對(duì)采集的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,獲得各品種植物油的化合物信息;
S4使用化學(xué)計(jì)量學(xué)軟件,找出每一種植物油的標(biāo)記化合物;
S5通過方法學(xué)驗(yàn)證確定植物油摻假測定的定性定量標(biāo)記物;
S6通過確定的標(biāo)記物對(duì)樣品進(jìn)行定性定量測定;
其中S1所述的單一品種合格植物油,優(yōu)選為各種品牌的花生油,玉米油,芝麻油,大豆油,棕櫚油、菜籽油、棉籽油,每一品種一般為5-10個(gè)不同品牌,最少不低于3個(gè);
S2所述的頂空氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法,所用儀器為氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀帶頂空進(jìn)樣器,儀器條件如下:
a.頂空進(jìn)樣條件:樣品量:0.05-10g,進(jìn)樣加熱箱溫度:80-280℃,樣品加熱同時(shí)振搖頻率:100-700rpm,平衡時(shí)間:600-3000S,進(jìn)樣量:50-2500μL;
b.色譜條件:色譜柱:毛細(xì)管柱,程序升溫,進(jìn)樣口溫度:200-300℃,進(jìn)樣模式:分流或不分流進(jìn)樣,載氣:高純氦氣,恒流流速:0.5-3.0mL/min;
c.質(zhì)譜條件:傳輸線溫度:200-300℃,電離模式:EI源,數(shù)據(jù)采集方式:全掃描,質(zhì)量掃描范圍:20~1000amu,溶劑延遲時(shí)間:1-10min;
S3所述的數(shù)據(jù)分析軟件為AMDIS自動(dòng)質(zhì)譜解卷積和鑒定軟件(美國國家標(biāo)準(zhǔn)與技術(shù)研究院)、安捷倫Masshunter定性及定量分析軟件,所述的AMDIS自動(dòng)質(zhì)譜解卷積和鑒定軟件使用方法為利用NIST自動(dòng)質(zhì)譜解卷積和鑒定軟件(AMDIS)結(jié)合自帶譜庫(NISTFF香料香精庫),在SIMPLE模式處理所得GC-MS數(shù)據(jù)文件,解卷積參數(shù)峰寬(Component width)設(shè)置為15,相鄰峰差減(Adjacent peak subtraction)設(shè)置為one,分辨率(Resolution)、靈敏度(Sensitivity)和峰形要求(Shape requirements)均設(shè)置為medium,保留匹配因子(match factor)大于70的組分;
S4所述的化學(xué)計(jì)量學(xué)軟件為Mass Profiler Professional差異化分析軟件(美國安捷倫公司),方法為:分別采用按標(biāo)志篩選,頻率篩選,樣品差異篩選、單因素方差分析,逐級(jí)篩選不同類型植物油的最具特征性標(biāo)志化合物,通過逐級(jí)篩查,化合物數(shù)量降低,繼續(xù)使用PCA(主成分分析)和PLS-DA(最小二乘法分析)方法前對(duì)數(shù)據(jù)作降維處理,建立分類預(yù)測模型,對(duì)分類模型訓(xùn)練和模型驗(yàn)證準(zhǔn)確率均達(dá)到100%后,在構(gòu)建的植物油分類預(yù)測模型中鑒定出每種植物油相關(guān)的主要標(biāo)志化合物,每一種植物油包含多個(gè)標(biāo)記化合物;
S5所述通過方法學(xué)驗(yàn)證確定植物油摻假測定的定性定量標(biāo)記物,包括以下步驟:
S51將被摻假植物油與摻假植物油進(jìn)行不同比例混合,混合比例為0%、1%、5%、10%、20%、50%、70%、90%、100%,具體比例可根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整,以混合比例為橫坐標(biāo),以所選取的特征標(biāo)記物峰面積為縱坐標(biāo),制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,將待測樣品的峰面積帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行計(jì)算,得到摻假植物油在被摻假植物油中的摻假比例;
S52將多種植物油油按一定比例混合在一起,驗(yàn)證特征標(biāo)記物的定量準(zhǔn)確性和抗干擾能力;
S53選取不同混合比例的模擬摻假植物油,分別重復(fù)測定,計(jì)算變異系數(shù),驗(yàn)證方法的精密度;
S54將單一品種不同品牌的被摻假的合格植物油重復(fù)測定20次,計(jì)算特征標(biāo)記物空白值的標(biāo)準(zhǔn)偏差,按公式三倍空白值的標(biāo)準(zhǔn)偏差除以標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率得出檢出限;
S55按上述步驟每種植物油確定2-4個(gè)特征標(biāo)記物,選取其中1個(gè)響應(yīng)強(qiáng)度高、線性好、變異系數(shù)小、抗干擾能力強(qiáng)的特征標(biāo)記物作定量用,其他的作為定性用,也可以只使用一個(gè)特征標(biāo)記物同時(shí)做定性定量用;
S6所述通過確定的標(biāo)記物對(duì)樣品進(jìn)行定性定量測定的采集方式為選擇離子掃描,以S51所述的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定性定量分析。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的頂空氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用定性定量測定植物油摻假的方法,其特征在于:S2所述的頂空氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法,所用儀器為6890/5975氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國安捷倫公司)帶COMBI PAL型全自動(dòng)三位一體進(jìn)樣器,儀器條件如下:
a.頂空進(jìn)樣條件:樣品量:0.5g,進(jìn)樣加熱箱溫度:180℃,樣品加熱同時(shí)振搖頻率:500rpm,平衡時(shí)間:2700S,進(jìn)樣量:500μL,
b.色譜條件:色譜柱:HP-5MS毛細(xì)管柱( 30 m×0.25mm×0.25 μm),升溫程序:初始溫度40℃,保持 3min,以5℃/min升溫至120℃,再以10℃/min升溫至300℃,進(jìn)樣口溫度260℃,進(jìn)樣模式:脈沖不分流進(jìn)樣,脈沖壓力15psi,持續(xù)1min,載氣:高純氦氣,恒流流速:1.0mL/min;
c.質(zhì)譜條件:傳輸線溫度:280℃,電離模式:EI源,數(shù)據(jù)采集方式:全掃描,質(zhì)量掃描范圍:20~400amu,溶劑延遲時(shí)間:3min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的頂空氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用定性定量測定植物油摻假的方法,其特征在于:S2所述的頂空氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法,所用儀器為6890/5975氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國安捷倫公司)帶COMBI PAL型全自動(dòng)三位一體進(jìn)樣器,儀器條件如下:
a.頂空進(jìn)樣條件:樣品量:0.5g,進(jìn)樣加熱箱溫度:180℃,樣品加熱同時(shí)振搖頻率:500rpm,平衡時(shí)間:3000S,進(jìn)樣量:1000μL;
b.色譜條件:色譜柱:HP-88毛細(xì)管柱( 100 m×0.25mm×0.20 μm),升溫程序:初始溫度40℃,保持5min,以5℃/min升溫至245℃,保持5min,進(jìn)樣口溫度250℃,進(jìn)樣模式:脈沖不分流進(jìn)樣,脈沖壓力15psi,持續(xù)1min,載氣:高純氦氣,恒流流速:1.0mL/min;
c.質(zhì)譜條件:傳輸線溫度:250℃,電離模式:EI源,數(shù)據(jù)采集方式:全掃描,質(zhì)量掃描范圍:20~400amu,溶劑延遲時(shí)間:8.3min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的頂空氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用定性定量測定植物油摻假的方法,其特征在于:所采用的儀器為頂空氣相色譜配FID檢測器。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的頂空氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用定性定量測定植物油摻假的方法,其特征在于:S6所述通過確定的標(biāo)記物對(duì)樣品進(jìn)行定性定量測定,以2,3-辛二酮為特征標(biāo)記物,以99.1為定量離子,定性定量測定花生油中摻假大豆油,將大豆油與花生油進(jìn)行不同比例混合,混合比例為0%、1%、5%、10%、20%、50%、70%、90%、100%,以混合比例為橫坐標(biāo),以所選取的特征標(biāo)記物峰面積為縱坐標(biāo),制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,將待測樣品的峰面積帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行計(jì)算,得到大豆油在花生油中的摻假比例,線性方程為y=2774.6x+43467,相關(guān)系數(shù)R2>0.99,在玉米油、菜籽油、棕櫚油、棉籽油存在的多元體系下,回收率在72.2-105.3%,精密度在13%以內(nèi),檢出限為3.8%。