本發(fā)明屬于藥物分析領(lǐng)域，涉及一種肺炎球菌多糖的定量檢測方法。

背景技術(shù)：

肺炎球菌是引起兒童侵襲性腦膜炎、肺炎和中耳炎的主要病原菌之一，是導(dǎo)致成人和兒童罹患肺炎疾病住院甚至死亡的重要原因，肺炎球菌是一種革蘭陽性菌，其基本毒力因子為莢膜多糖，按莢膜多糖抗原性的不同，可將其分為不同的血清型。迄今為止，23個血清型的肺炎鏈球菌多糖疫苗已經(jīng)研制成功，在23價肺炎球菌多糖疫苗成品指控項目中，23價肺炎球菌多糖含量是疫苗的重要檢測指標(biāo)。

現(xiàn)有的多糖定量檢測方法有顯色法，如蒽酮-硫酸法(吳凱、代澤友，改進(jìn)的蒽酮法檢測肺炎鏈球菌莢膜多糖結(jié)合物中多糖濃度(中國生物制品學(xué)雜志，2007，20(7)：536-538)，但該方法只是簡單的用葡萄糖作為標(biāo)準(zhǔn)品，通過建立標(biāo)準(zhǔn)曲線來獲取肺炎球菌多糖含量，所以結(jié)果往往與真實值偏差較大。因此，開發(fā)一種操作簡單、測定結(jié)果準(zhǔn)確的肺炎球菌多糖定量檢測方法，特別是多糖標(biāo)準(zhǔn)品的選擇是目前亟待解決的問題。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種肺炎球菌多糖的定量檢測方法。

本發(fā)明提供的肺炎球菌多糖的定量檢測方法，包括如下步驟：

1)以一系列不同濃度的肺炎球菌多糖標(biāo)準(zhǔn)品與其相應(yīng)的吸光度建立肺炎球菌多糖標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

2)配制不同濃度的肺炎球菌組合多糖，該濃度記為c組合理論；

根據(jù)步驟1)所得肺炎球菌多糖標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定所述肺炎球菌組合多糖的檢測濃度，該濃度記為c組合檢測；

定義c組合理論×校正系數(shù)＝c組合檢測；

所述肺炎球菌組合多糖由單糖組成；所述單糖的種類與摩爾比與所述步驟1)中所述肺炎球菌多糖標(biāo)準(zhǔn)品所含各單糖種類和摩爾比一致；

3)以一系列不同c組合理論的步驟2)所述肺炎球菌組合多糖與其對應(yīng)的吸光度建立肺炎球菌多糖組合多糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

4)將待測樣品的吸光度代入步驟3)所述肺炎球菌多糖組合多糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線，獲得對應(yīng)的所述待測樣品的多糖濃度，記為c待測，則所述待測樣品的實際多糖濃度為所述校正系數(shù)×c待測。

上述方法中，所用肺炎球菌多糖標(biāo)準(zhǔn)品可購自丹麥國立血清研究所；

所述步驟1)和步驟3)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線步驟中，向所述肺炎球菌多糖標(biāo)準(zhǔn)品或肺炎球菌組合多糖中加入顯色試劑進(jìn)行顯色反應(yīng)；顯色試劑為蒽酮硫酸溶液或四硼酸鈉硫酸溶液和咔唑的乙醇溶液，但并不局限于上述顯色試劑，只要保證能與肺炎球菌多糖標(biāo)準(zhǔn)品或肺炎球菌組合多糖進(jìn)行顯色反應(yīng)，且顯色深淺能與多糖濃度呈正比即可。具體的，所述肺炎球菌多糖為1型肺炎球菌多糖時，可選用四硼酸鈉硫酸溶液和咔唑的乙醇溶液作為顯色試劑。所述肺炎球菌多糖為其他類型時，可選用蒽酮硫酸溶液作為顯色試劑進(jìn)行顯色反應(yīng)；更具體的，如所述肺炎球菌多糖為肺炎球菌12f型(pn12f)時，選用蒽酮硫酸溶液作為顯色試劑進(jìn)行顯色反應(yīng)；所述肺炎球菌多糖為肺炎鏈球菌1型多糖(pn1型)時，選用四硼酸鈉硫酸溶液和咔唑的乙醇溶液作為顯色試劑進(jìn)行顯色反應(yīng)。

所述蒽酮硫酸溶液和四硼酸鈉硫酸溶液中，硫酸的濃度為50％～90％，具體可為75％；蒽酮硫酸溶液的濃度均為0.05g/100ml～0.2g/100ml，具體可為0.1g/100ml。所述四硼酸鈉硫酸溶液為將四硼酸鈉溶于濃硫酸所得溶液；所述四硼酸鈉與濃硫酸的用量比為9.55g：1000ml。所述咔唑的乙醇溶液中，咔唑和無水乙醇的用量比為125mg：100ml。

所述步驟1)和步驟3)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線步驟中，所用顯色反應(yīng)均在沸水浴中進(jìn)行；反應(yīng)時間為5～35min，具體可為20min；

反應(yīng)完畢后還包括在水浴中靜置的步驟；所述靜置步驟中，靜置的時間具體為5～15min或10min；水浴的溫度具體為0～80℃，具體可為40℃。

測定吸光度步驟中，吸光度的測量波長為400nm～700nm或530nm，具體可為620nm。該步驟可用紫外分光光度計完成；其中肺炎1型優(yōu)選在530nm處測定吸光度值。

所述步驟2)中，所述肺炎球菌組合多糖具體可為按照pn12f型肺炎球菌多糖的結(jié)構(gòu)式按照摩爾比為n葡萄糖：n半乳糖：n巖藻糖：nn-乙?；事短前罚簄n-乙酰基半乳糖胺＝2：1：1：1：1的比例配制而得的pn12f型組合糖，或者按照肺炎鏈球菌1型多糖(pn1型)的結(jié)構(gòu)式，按照摩爾比為n半乳糖醛酸：nn-乙酰-d-半乳糖胺＝2：1的比例配制而得的pn1型組合糖。

該方法適用于各種糖型的肺炎鏈球菌多糖，如如下各種糖型的肺炎鏈球菌2、3、4、5、6a、6b、7f、8、9n、9v、10a、11a、12f、14、15b、17a、17f、18c、19a、19f、20、22f、23f、33f型多糖，更具體可為肺炎鏈球菌1型多糖(pn1型)或肺炎球菌12f型(pn12f)。

本發(fā)明為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點與不足，減小實驗結(jié)果的偏差，本發(fā)明開發(fā)了一種分析成本低、操作簡單的定量檢測方法。該方法以便宜易得的單糖為原料，按照標(biāo)準(zhǔn)多糖中各單糖摩爾比混合配制而成得到組合糖，以組合糖和外購標(biāo)準(zhǔn)糖分別建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，對同一批待測肺炎球菌多糖濃度進(jìn)行檢測，兩者檢測結(jié)果進(jìn)行比較得出校正系數(shù)，在以后的檢測中，以組合糖代替外購標(biāo)準(zhǔn)糖，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線檢測肺炎多糖濃度，通過校正系數(shù)校正，得出肺炎多糖的最終濃度，該結(jié)果與外購標(biāo)準(zhǔn)糖作為標(biāo)準(zhǔn)品檢測結(jié)果偏差很小，不大于5.0％，在適當(dāng)操作條件下，標(biāo)準(zhǔn)偏差可控制在0.4％。該方法克服了外購標(biāo)準(zhǔn)糖成本昂貴的問題，大大降低了分析成本，具有重要的應(yīng)用價值。

附圖說明

圖1為pn12f型肺炎球菌外購標(biāo)準(zhǔn)糖濃度與吸光度值線性關(guān)系。

圖2為pn12f型肺炎球菌組合糖濃度與其相應(yīng)吸光度線性關(guān)系。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但本發(fā)明并不限于以下實施例。所述方法如無特別說明均為常規(guī)方法。所述原材料如無特別說明均能從公開商業(yè)途徑獲得。

實施例1

肺炎球菌12f型(pn12f)

1.試劑與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

⑴蒽酮硫酸溶液：將75ml濃硫酸緩慢加入25ml純水中，充分?jǐn)嚢枥鋮s，精密稱取蒽酮0.1g，溶于上述硫酸溶液中。

⑵肺炎球菌多糖標(biāo)準(zhǔn)品：pn12f型肺炎多糖標(biāo)準(zhǔn)品來源于丹麥國立血清研究所。

⑶肺炎球菌12f多糖待測樣品：201404002h2，各項檢測指標(biāo)均合格。

⑷肺炎球菌組合多糖：依據(jù)pn12f型肺炎球菌多糖的結(jié)構(gòu)式，按照摩爾比為n葡萄糖：n半乳糖：n巖藻糖：nn-乙?；事短前罚簄n-乙酰基半乳糖胺＝2：1：1：1：1的比例配制pn12f型組合糖。

2.儀器

⑴紫外分光光度計(uv-1800)

⑵比色皿：45*12.5*12.5(mm)

⑶試管：10ml

⑷分析天平：感量0.01mg

⑸移液器：thermo，gh98732；eppendorf，232200a

⑹電熱恒溫水浴箱：hh.w21.420

3.試樣制備

⑴pn12f型肺炎球菌多糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制(標(biāo)準(zhǔn)糖)：pn12f型標(biāo)準(zhǔn)多糖(外購)10mg溶于2ml純水中配制成5mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，取160μl用超純水稀釋至4ml，配制成200μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

⑵pn12f型肺炎球菌組合糖溶液配制(組合糖)：精密稱取葡萄糖36.0mg、半乳糖18.0mg、巖藻糖16.4mg、n-乙酰基甘露糖胺22.1mg、n-乙?；肴樘前?2.1mg，用超純水定容到100ml，臨用前稀釋7倍配制成163.7μg/ml的組合糖溶液。

⑶pn12f型樣品糖(201404002h2)(150μg/ml)：精密稱取樣品糖15.0mg，用超純水稀釋至100ml配制成濃度為150μg/ml的樣品溶液。

4.測定步驟

4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

在7個10ml試管中，分別加入標(biāo)準(zhǔn)糖溶液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，每管用超純水補(bǔ)足至1.0ml。向7支試管中分別加4ml蒽酮硫酸溶液，蓋上塞子，混勻后放入試管架，沸水浴中20分鐘后，再放入40℃水浴中10min，放置紫外分光光度計中在波長620nm處測量吸光度。

以pn12f型標(biāo)準(zhǔn)糖濃度(μg/ml)與其相應(yīng)的吸光度值做直線回歸，相關(guān)系數(shù)不低于0.99。

4.2試樣的測定

在6個10ml試管中，分別加入組合糖溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8ml、1.0ml，每管用超純水補(bǔ)足至1.0ml。

在3個10ml試管中，分別加入肺炎球菌12f樣品糖溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml于比色管中，平行3份，每管用超純水補(bǔ)足至1.0ml。

向上述組合糖試管和樣品糖試管中分別加4ml蒽酮硫酸溶液，蓋上塞子，混勻后放入試管架，沸水浴中20分鐘后，再放入40℃水浴中10min，放置紫外分光光度計中在波長620nm處測量吸光度。

4.3實驗結(jié)果及分析

⑴以pn12f型肺炎球菌標(biāo)準(zhǔn)多糖作為標(biāo)準(zhǔn)品測定結(jié)果如下：

表1pn12f型標(biāo)準(zhǔn)糖各濃度對應(yīng)的吸光度值

pn12f型肺炎球菌標(biāo)準(zhǔn)糖濃度與其吸光度線性關(guān)系見附圖1

⑵以pn12f型標(biāo)準(zhǔn)糖作為標(biāo)準(zhǔn)品測定樣品糖、組合糖結(jié)果如下：

表2pn12f樣品糖、組合糖濃度檢測結(jié)果

⑶以pn12f型組合糖作為標(biāo)準(zhǔn)品計算待測樣品結(jié)果如下：

表3pn12f型組合糖各濃度對應(yīng)的吸光度值

以pn12f型組合糖濃度與其相應(yīng)吸光度做線性回歸，線性關(guān)系見附圖2

⑷以pn12f型組合糖濃度與其相應(yīng)吸光度做直線回歸，計算樣品糖濃度如下：

表4以pn12f型組合糖濃度與其吸光度的線性關(guān)系，計算待測樣品結(jié)果

由上表可以看出，以pn12f型組合糖濃度與其相應(yīng)吸光度做線性回歸計算待測樣品濃度重復(fù)性較好，變異系數(shù)較小，但都與以pn12f型標(biāo)準(zhǔn)糖濃度與其相應(yīng)吸光度做線性回歸檢測樣品結(jié)果值存在偏差，若在以后的實驗中用pn12f型組合糖溶液作為標(biāo)準(zhǔn)品檢測樣品，則需要找到其樣品檢測值與標(biāo)準(zhǔn)品檢測值之間的關(guān)系。

⑸分析pn12f型組合糖理論濃度值與檢測值之間的差異可得：

表5pn12f型組合糖理論濃度值與檢測值(μg/ml)之間的校正系數(shù)關(guān)系

表5中，理論值即為c組合理論；檢測值即為c組合檢測；

表6以pn12f型組合糖作為標(biāo)準(zhǔn)品檢測樣品結(jié)果*校正系數(shù)(1.9)與以pn12f型標(biāo)準(zhǔn)糖作為標(biāo)準(zhǔn)品測定樣品結(jié)果之間的偏差

備注：pn12f型標(biāo)準(zhǔn)糖作為標(biāo)準(zhǔn)品檢測樣品結(jié)果值為c標(biāo)，pn12f型組合糖作為標(biāo)準(zhǔn)品檢測樣品結(jié)果值c組合。

由上表可以得出：使用系數(shù)1.9校正(pn12f)2015004002h2樣品的檢測結(jié)果，與外購標(biāo)準(zhǔn)品檢測結(jié)果之間的標(biāo)準(zhǔn)偏差值均在3％以內(nèi)，表明使用組合糖代替外購標(biāo)準(zhǔn)糖來檢測樣品糖含量具有良好的重復(fù)性，且偏差均值為1.2％。

在以后的樣品糖檢測中，用組合糖作為標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線，將樣品糖濃度檢測結(jié)果乘以系數(shù)1.9即為樣品糖實際濃度值，偏差小，解決了外購標(biāo)準(zhǔn)糖昂貴成本問題。

5.組合糖代替外購標(biāo)準(zhǔn)糖做標(biāo)準(zhǔn)曲線方法驗證

5.1重復(fù)性試驗

通過重復(fù)試驗，計算待測樣品的cv值與sd值，用pn12f外購標(biāo)準(zhǔn)糖檢測待檢樣品cv值為1.1％，組合糖檢測待檢樣品cv值為1.3％，用組合糖與外購標(biāo)準(zhǔn)糖分別做標(biāo)準(zhǔn)品檢測樣品，兩者檢測結(jié)果之間的偏差為1.2％，對上述pn2型到pn33f型共24種組合糖做標(biāo)準(zhǔn)品分別進(jìn)行重復(fù)性試驗驗證，cv值與sd值均在5％以內(nèi)，表明用組合糖代替外購標(biāo)準(zhǔn)糖來檢測樣品時，樣品的處理方法和測定方法都具有良好的重復(fù)性。

5.2加樣回收率試驗

平行取pn12f待檢多糖樣品6份，隨機(jī)平均分成2組，向其中一組分別加入待檢樣品的80％，100％，120％的組合糖標(biāo)樣，混合均勻后，按照“實施例4.1”和“實施例4.2”的方法進(jìn)行處理，計算組合糖加樣回收率，檢測結(jié)果如下：

表7pn12f型組合糖加樣回收率測定結(jié)果

表824種組合糖型加樣回收率測定(n＝3)以及以組合糖作為標(biāo)準(zhǔn)品檢測樣品濃度時所用系數(shù)：

回收率均在95.3％～108.3％之間，表明用組合糖代替外購標(biāo)準(zhǔn)糖檢測樣品的準(zhǔn)確度較高，可很好地應(yīng)用于日常分析和檢測。

實施例2

肺炎鏈球菌1型多糖(pn1型)

6.試劑與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

⑴四硼酸鈉硫酸溶液：精密稱取四硼酸鈉9.55g，溶于濃硫酸1000ml中，兩者混勻，室溫保存。

⑵咔唑溶液：精密稱取咔唑125mg，加無水乙醇100ml，溶解后置于棕色瓶中，2～8℃保存。

⑶肺炎球菌多糖標(biāo)準(zhǔn)品(pn1型)：pn1型肺炎多糖標(biāo)準(zhǔn)品來源于丹麥國立血清研究所。

⑷肺炎球菌多糖待測樣品(pn1型)：jk01b-a201307007，各項檢測指標(biāo)均合格。

⑸肺炎球菌組合多糖(pn1型)：依據(jù)pn1型肺炎球菌多糖的結(jié)構(gòu)式，確定其由半乳糖醛酸、n-乙酰-d-半乳糖胺兩種單糖組成，摩爾比為n半乳糖醛酸：nn-乙酰-d-半乳糖胺＝2：1，按照上述比例配制pn1型組合糖。

7.儀器

⑴紫外分光光度計(uv-1800)

⑵比色皿：45*12.5*12.5(mm)

⑶試管：10ml

⑷分析天平：感量0.01mg

⑸移液器：thermo，gh98732；eppendorf，232200a

⑹電熱恒溫水浴箱：hh.w21.420

8.試樣制備

⑴pn1型肺炎球菌多糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制：pn1型標(biāo)準(zhǔn)多糖(外購)10mg溶于2ml純水中配制成5mg/ml的多糖溶液，取5mg/ml的多糖溶液85μl，用超純水稀釋至4ml，配制成106.3μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

⑵pn1型肺炎球菌組合糖溶液配制：精密稱取半乳糖醛酸42.4mg、n-乙酰-d-半乳糖胺22.1mg，用超純水定容到500ml配制成129μg/ml的組合糖溶液。

⑶pn1型樣品(jk01b-a201307007)(160μg/ml)：精密稱取樣品糖8.0mg，用超純水稀釋至50ml配制成濃度為160μg/ml的溶液。

9.測定步驟

9.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

在7個10ml試管中，分別加入肺炎球菌多糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，每管用超純水補(bǔ)足至1.0ml。向7支試管中分別加5ml四硼酸鈉硫酸溶液，蓋上塞子，并在管口纏上封口膜，混勻后放入試管架，沸水浴中15分鐘后冷卻至20℃。然后再加入0.2ml咔唑溶液，蓋上塞子，混勻后放入試管架中沸水浴15min，冷卻至20℃后，放置紫外分光光度計中在波長530nm處測量吸光度。

以pn1型肺炎球菌標(biāo)準(zhǔn)試液中多糖濃度(μg/ml)與其相應(yīng)的吸光度做直線回歸，相關(guān)系數(shù)不低于0.99。

9.2試樣的測定

在6個10ml試管中，分別加入肺炎球菌組合糖溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.8ml，每管用超純水補(bǔ)足至1.0ml。

在3個10ml試管中，分別加入肺炎球菌樣品糖溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml于比色管中，平行3份，每管用超純水補(bǔ)足至1.0ml。

向上述組合糖試管和樣品糖試管中分別加5ml四硼酸鈉硫酸溶液，蓋上塞子，并在管口纏上封口膜，混勻后放入試管架，沸水浴中15分鐘后冷卻至20℃。然后再加入0.2ml咔唑溶液，蓋上塞子，混勻后放入試管架中沸水浴15min，冷卻至20℃后，放置紫外分光光度計中在波長530nm處測量吸光度。

9.3實驗結(jié)果及分析

⑴以pn1型肺炎球菌標(biāo)準(zhǔn)糖作為標(biāo)準(zhǔn)品測定結(jié)果如下：

表9pn1型標(biāo)準(zhǔn)糖各濃度對應(yīng)的od值

⑵以pn1型標(biāo)準(zhǔn)糖作為標(biāo)準(zhǔn)品測定樣品糖、組合糖結(jié)果如下：

表10pn1型樣品糖、組合糖檢測結(jié)果

⑶以pn1型肺炎球菌組合多糖作為標(biāo)準(zhǔn)品計算待測樣品結(jié)果如下：

表11pn1型肺炎球菌組合多糖各濃度對應(yīng)吸光度值

⑷以pn1型組合糖溶液濃度與其相應(yīng)吸光度做直線回歸，檢測結(jié)果如下：

表12以pn1型組合糖濃度與其吸光度做線性回歸，計算待測樣品濃度

由上表可以看出，以pn1型組合糖溶液濃度與其相應(yīng)吸光度做線性回歸計算待測樣品結(jié)果重復(fù)性較好，變異系數(shù)較小，但都與以pn1型標(biāo)準(zhǔn)糖濃度與其相應(yīng)吸光度做線性回歸檢測樣品結(jié)果值存在偏差，若在以后的實驗中用pn1型組合糖溶液作為標(biāo)準(zhǔn)曲線檢測樣品，則需要找到其樣品檢測值與標(biāo)準(zhǔn)檢測值之間的關(guān)系。

⑸分析pn1型肺炎球菌組合糖理論濃度值與檢測值之間的差異可得：

表13pn1型肺炎球菌組合糖檢測值與理論濃度值之間的校正系數(shù)關(guān)系

表13中，理論值即為c組合理論；檢測值即為c組合檢測；

表14以pn1型組合糖濃度與其相應(yīng)吸光度值做線性回歸計算樣品結(jié)果*校正系數(shù)(0.8)與以pn1型標(biāo)準(zhǔn)糖作為標(biāo)準(zhǔn)品測定樣品結(jié)果之間的偏差

備注：pn1型肺炎球菌標(biāo)準(zhǔn)糖作為標(biāo)準(zhǔn)品檢測樣品結(jié)果值為c標(biāo)，pn1型肺炎球菌組合糖作為標(biāo)準(zhǔn)品檢測樣品結(jié)果值c組合。

由上表可以得出：使用系數(shù)0.8校正(pn1)jk01b-a201307007樣品的檢測結(jié)果，與外購標(biāo)準(zhǔn)糖檢測結(jié)果之間的標(biāo)準(zhǔn)偏差值均在3％以內(nèi)，表明使用組合糖代替外購標(biāo)準(zhǔn)糖來檢測樣品糖含量具有良好的重復(fù)性，且偏差均值為1.0％，可以使用該系數(shù)進(jìn)行實驗。

10.組合糖代替外購標(biāo)準(zhǔn)糖做標(biāo)準(zhǔn)曲線方法驗證

10.1重復(fù)性試驗

通過重復(fù)試驗，計算待測樣品的cv值與sd值，用pn1型外購標(biāo)準(zhǔn)糖檢測待檢樣品cv值為1.1％，組合糖檢測待檢樣品cv值為1.1％，用組合糖與外購標(biāo)準(zhǔn)糖分別做標(biāo)準(zhǔn)品檢測樣品，兩者檢測結(jié)果之間的偏差為1.0％，表明用組合糖代替外購標(biāo)準(zhǔn)糖來檢測樣品時，樣品的處理方法和測定方法都具有良好的重復(fù)性。

10.2加樣回收率試驗

平行取待測多糖樣品(160μg/ml)6份，每份取0.2ml，隨機(jī)平均分成2組，其中一組加入待測樣品濃度的80％，100％，120％的組合糖溶液，混合均勻后，分別按照“實施例4.1”和“實施例4.2”的方法進(jìn)行處理和測定，計算組合糖的加樣回收率。

表15pn1型肺炎球菌組合糖加樣回收率測定結(jié)果

從上表結(jié)果中可以看出，組合糖加樣回收率在99.5％～106.1％之間，用組合糖代替外購標(biāo)準(zhǔn)糖做標(biāo)準(zhǔn)曲線，該方法準(zhǔn)確度較高，重復(fù)性較好，價格便宜易得，可很好地應(yīng)用于日常分析和檢測。