本發(fā)明涉及一種抑制蛋白質(zhì)非特異性吸附的方法。具體而言，涉及一種使用以含有磷酰膽堿基的聚合物為主要成分的固相處理液、以及以同時(shí)具有磷酰膽堿基、羥基及疏水性基團(tuán)的聚合物為主要成分的樣品處理液的抑制蛋白質(zhì)吸附的方法。

本申請(qǐng)主張通過(guò)參照而被引用于此的日本專(zhuān)利申請(qǐng)第2015-031155號(hào)的優(yōu)先權(quán)。

背景技術(shù)：

在臨床檢查、診斷用藥的領(lǐng)域中，利用了免疫反應(yīng)的測(cè)定方法得到廣泛運(yùn)用。其中，檢查的高靈敏度化受到要求，臨床檢查、診斷用藥的靈敏度的提高成為了大的技術(shù)問(wèn)題。為了高靈敏度化，檢測(cè)方法逐漸由利用如過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶的酶反應(yīng)的方法轉(zhuǎn)變?yōu)槔脽晒饣蚧瘜W(xué)發(fā)光的方法。雖然通過(guò)使檢測(cè)方式為熒光或化學(xué)發(fā)光，理論上能夠確認(rèn)一分子的檢測(cè)對(duì)象物質(zhì)的存在，但是實(shí)際上并沒(méi)能得到目標(biāo)靈敏度。

作為影響利用免疫反應(yīng)進(jìn)行測(cè)定時(shí)的檢測(cè)靈敏度的一個(gè)主要原因，可列舉出，作為測(cè)定對(duì)象的抗體、抗原或者利用于測(cè)定的這些標(biāo)記物在免疫反應(yīng)容器或固相表面上的非特異性吸附。此外，作為樣品使用如血清、血漿、細(xì)胞提取物以及尿的多種生物分子共存的物質(zhì)時(shí)，由于如各種蛋白質(zhì)的非特定大量的共存物質(zhì)非特異性地吸附于免疫反應(yīng)容器或固相表面而引發(fā)的噪聲的生成，也是妨礙高靈敏度化的主要原因。

為了防止這些非特異性吸附，以往以來(lái)，使用了通過(guò)將不參與免疫反應(yīng)的如牛血清白蛋白、酪蛋白、明膠的來(lái)自生物的蛋白質(zhì)吸附于免疫反應(yīng)容器或固相表面，從而抑制蛋白質(zhì)的非特異性吸附的方法。然而，使用如牛血清白蛋白的來(lái)自生物的蛋白質(zhì)時(shí)，由于存在以bse為代表的生物污染問(wèn)題、批間偏差、保管溫度以及使用期限等的限制，因此期望以能夠解決這些問(wèn)題的化學(xué)合成品為主要成分的蛋白質(zhì)非特異性吸附抑制劑的開(kāi)發(fā)。

作為以化學(xué)合成品為主要成分的蛋白質(zhì)非特異性吸附抑制劑，公開(kāi)了以下的物質(zhì)。

專(zhuān)利文獻(xiàn)1公開(kāi)了“含有聚乙烯醇的阻斷劑”。專(zhuān)利文獻(xiàn)2公開(kāi)了“含有2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸膽堿聚合物的蛋白質(zhì)吸附抑制劑”。

這些方法僅通過(guò)將作為蛋白質(zhì)非特異性吸附抑制劑的化學(xué)合成品物理吸附于固相表面而發(fā)揮效果。這些方法雖然在一定程度上能夠避免在固相表面上的非特異性吸附，但是并不充分。并且沒(méi)有公開(kāi)或暗示本發(fā)明的樣品處理液。

現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)

專(zhuān)利文獻(xiàn)

專(zhuān)利文獻(xiàn)1：日本專(zhuān)利公開(kāi)平成4-19561號(hào)公報(bào)

專(zhuān)利文獻(xiàn)2：日本專(zhuān)利公開(kāi)平成7-83923號(hào)公報(bào)

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題

如上所述，本發(fā)明的目的在于，提供一種新的抑制蛋白質(zhì)非特異性吸附的方法。

解決技術(shù)問(wèn)題的技術(shù)手段

本發(fā)明的發(fā)明人們?yōu)榱私鉀Q上述技術(shù)問(wèn)題，進(jìn)行深入研究，其結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過(guò)使用以含有磷酰膽堿基的聚合物為主要成分的固相處理液處理固相，使用以同時(shí)具有磷酰膽堿基、羥基及疏水性基團(tuán)的聚合物為主要成分的樣品處理液處理樣品，然后將處理后的樣品加入到處理后的固相中，能夠解決上述技術(shù)問(wèn)題，完成了本發(fā)明。

即，本發(fā)明如下所述。

1.一種抑制蛋白質(zhì)非特異性吸附的方法，其包括以下工序：

(i)使用以含有磷酰膽堿基的聚合物為主要成分的固相處理液處理固相的工序；以及

(ii)使用以同時(shí)具有磷酰膽堿基、羥基及疏水性基團(tuán)的聚合物為主要成分的樣品處理液處理樣品，進(jìn)一步將該處理后的樣品加入到(i)中處理后的固相中的工序；

或者，

(iii)使用以同時(shí)具有磷酰膽堿基、羥基及疏水性基團(tuán)的聚合物為主要成分的樣品處理液處理樣品的工序；以及

(iv)使用以含有磷酰膽堿基的聚合物為主要成分的固相處理液處理固相，進(jìn)一步將(iii)中處理后的樣品加入到該處理后的固相中的工序。

2.根據(jù)前項(xiàng)1所述的抑制蛋白質(zhì)非特異性吸附的方法，其中，所述含有磷酰膽堿基的聚合物、與所述同時(shí)具有磷酰膽堿基、羥基及疏水性基團(tuán)的聚合物的組合，為以下的任意1種以上，

(1)結(jié)構(gòu)單元為2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸膽堿、甲基丙烯酸丁酯以及甲基丙烯酸甘油酯的、含有磷酰膽堿基的聚合物，與結(jié)構(gòu)單元為2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸膽堿、甲基丙烯酸丁酯以及甲基丙烯酸甘油酯的、同時(shí)具有磷酰膽堿基、羥基及疏水性基團(tuán)的聚合物的組合；

(2)結(jié)構(gòu)單元為2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸膽堿、甲基丙烯酸丁酯以及甲基丙烯酸羥乙酯的、含有磷酰膽堿基的聚合物，與結(jié)構(gòu)單元為2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸膽堿、甲基丙烯酸丁酯以及甲基丙烯酸甘油酯的、同時(shí)具有磷酰膽堿基、羥基及疏水性基團(tuán)的聚合物的組合；

(3)結(jié)構(gòu)單元為2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸膽堿以及甲基丙烯酸丁酯的、含有磷酰膽堿基的聚合物，與結(jié)構(gòu)單元為2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸膽堿、甲基丙烯酸丁酯以及甲基丙烯酸甘油酯的、同時(shí)具有磷酰膽堿基、羥基及疏水性基團(tuán)的聚合物的組合，

(4)結(jié)構(gòu)單元為2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸膽堿以及甲基丙烯酸丁酯的、含有磷酰膽堿基的聚合物，與結(jié)構(gòu)單元為2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸膽堿、甲基丙烯酸丁酯以及甲基丙烯酸羥乙酯的、同時(shí)具有磷酰膽堿基、羥基及疏水性基團(tuán)的聚合物的組合；

(5)結(jié)構(gòu)單元為2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸膽堿以及甲基丙烯酸甘油酯的、含有磷酰膽堿基的聚合物，與結(jié)構(gòu)單元為2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸膽堿、甲基丙烯酸丁酯以及甲基丙烯酸甘油酯的、同時(shí)具有磷酰膽堿基、羥基及疏水性基團(tuán)的聚合物的組合；

以及，

(6)結(jié)構(gòu)單元為2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸膽堿以及甲基丙烯酸羥乙酯的、含有磷酰膽堿基的聚合物，與結(jié)構(gòu)單元為2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸膽堿、甲基丙烯酸丁酯以及甲基丙烯酸羥乙酯的、同時(shí)具有磷酰膽堿基、羥基及疏水性基團(tuán)的聚合物的組合。

發(fā)明效果

本發(fā)明的抑制蛋白質(zhì)非特異性吸附的方法中，包含于所使用的固相處理液以及樣品處理液中的聚合物，雖是化學(xué)合成品但具有高的抑制蛋白質(zhì)非特異性吸附的能力。因此，可以作為雖然具有批間偏差或生物污染等問(wèn)題、但仍被繼續(xù)使用的來(lái)自生物的蛋白質(zhì)非特異性吸附抑制劑的代替品而使用。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明的抑制蛋白質(zhì)非特異性吸附的方法(以后，有時(shí)稱(chēng)作“本發(fā)明的方法”)包括以下的工序。

(i)使用以含有磷酰膽堿基的聚合物為主要成分的固相處理液處理固相的工序；以及(ii)使用以同時(shí)具有磷酰膽堿基、羥基及疏水性基團(tuán)的聚合物為主要成分的樣品處理液處理樣品，進(jìn)一步將該處理后的樣品加入到(i)中處理后的固相中的工序；或者，

(iii)使用以同時(shí)具有磷酰膽堿基、羥基及疏水性基團(tuán)的聚合物為主要成分的樣品處理液處理樣品的工序；以及(iv)使用以含有磷酰膽堿基的聚合物為主要成分的固相處理液處理固相，進(jìn)一步將(iii)中處理后的樣品加入到該處理后的固相中的工序。

以下，對(duì)本發(fā)明的方法進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)地說(shuō)明。

本發(fā)明的方法能夠在利用酶反應(yīng)、或者免疫球蛋白的抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行測(cè)定的免疫學(xué)測(cè)定方法等中使用，其中所述酶反應(yīng)利用了例如：蛋白質(zhì)、多肽、類(lèi)固醇、脂質(zhì)、激素等，更具體而言，利用了各種抗原、抗體、受體、酶等。

具體而言，可以適用于公知的放射免疫分析法(ria)、酶免疫分析法(eia)、熒光免疫分析法(fia)、化學(xué)發(fā)光免疫分析法(clia)、乳膠比濁法等，特別優(yōu)選適用于酶免疫分析法(eia)、熒光免疫分析法(fia)、化學(xué)發(fā)光免疫分析法(clia)、乳膠比濁法、蛋白質(zhì)印跡法等。

在這些公知的免疫學(xué)測(cè)定法中，在使抗體或者抗原結(jié)合于固相表面后，利用固相處理液處理未結(jié)合抗體或者抗原的固相表面，另一方面，利用樣品處理液處理樣品，從而抑制蛋白質(zhì)的非特異性吸附。

本發(fā)明的“固相”是指進(jìn)行免疫反應(yīng)的地點(diǎn)(反應(yīng)容器)。特別是，可以通過(guò)物理吸附、化學(xué)結(jié)合、生物學(xué)結(jié)合等，將參與免疫反應(yīng)的酶、抗體、抗原、多肽等固定于固相表面。

固相的材質(zhì)沒(méi)有特別的限定，可列舉出例如，聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯、聚碳酸酯、聚甲基丙烯酸甲酯、玻璃、金屬、陶瓷、硅橡膠、聚偏氟乙烯膜(以下pvdf膜)、尼龍膜、硝酸纖維素膜等。其中，優(yōu)選聚苯乙烯和聚甲基丙烯酸甲酯、聚碳酸酯，特別優(yōu)選聚苯乙烯。此外，這些材質(zhì)的形狀沒(méi)有特別的限定，可列舉出試管、滴定板、膠乳、磁性微粒等。

本發(fā)明的“樣品”是指，如全血、血清、血漿、細(xì)胞提取物、淚液、唾液、尿、糞便等的多種生物分子共存的樣品，沒(méi)有特別的限定。

本發(fā)明的“固相處理液”是指，將至少含有磷酰膽堿基的聚合物作為主要成分，用于處理固相(特別是用于使固相處理液與固相表面接觸)的溶液。本發(fā)明的固相處理液若具有含有磷酰膽堿基的聚合物，則沒(méi)有特別的限定，例如含有1種以上的如下的聚合物。

2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸膽堿(mpc：含有磷酰膽堿基的聚合物)

mpc與甲基丙烯酸丁酯(bma：具有疏水性基團(tuán)的聚合物)與甲基丙烯酸甘油酯(gr：具有羥基的聚合物)的共聚物(mpc-bma-gr)

mpc與bma與甲基丙烯酸羥乙酯(hma：具有羥基的聚合物)的共聚物(mpc-bma-hma)

mpc與gr的共聚物(mpc-gr)

mpc與hma的共聚物(mpc-hma)

mpc與bma的共聚物(mpc-bma)

mpc與甲基丙烯酸十八烷基酯(sma：具有疏水性基團(tuán)的聚合物)的共聚物(mpc-sma)

mpc與甲基丙烯酸月桂酯(lma：具有疏水性基團(tuán)的聚合物)的共聚物(mpc-lma)

上述含有磷酰膽堿基的聚合物中的mpc的組成比(摩爾比)沒(méi)有特別的限定，為1～100％，優(yōu)選為5～100％，更優(yōu)選為20～80％。

作為本發(fā)明的固相處理液的溶劑，若為能夠使用于免疫學(xué)測(cè)定方法的緩沖液或純水，則均可以使用。例如可以使用，磷酸緩沖液、醋酸緩沖液、碳酸緩沖液、檸檬酸緩沖液、tris緩沖液、hepes緩沖液、生理鹽水等，沒(méi)有特別的限定。

此外，本發(fā)明的固相處理液的濃度優(yōu)選為0.0125～5.0wt％(以全部聚合物的重量換算)，更優(yōu)選為0.1～0.5wt％。

本發(fā)明的“樣品處理液”，是指將至少同時(shí)具有磷酰膽堿基、羥基和疏水性基團(tuán)的聚合物作為主要成分，用于處理樣品的溶液。處理樣品是指，利用樣品處理液稀釋樣品，將樣品加入到樣品處理液中，將樣品處理液加入到樣品中等。

本發(fā)明的樣品處理液，若含有同時(shí)具有磷酰膽堿基、羥基和疏水性基團(tuán)的聚合物，則沒(méi)有特別的限定，例如含有1種以上的如下的聚合物。

mpc與bma與gr的共聚物(mpc-bma-gr)

mpc與bma與hma的共聚物(mpc-bma-hma)

mpc與bma與甲基丙烯酸羥丙酯(hpm：具有羥基的聚合物)的共聚物(mpc-bma-hpm)

mpc與sma與gr的共聚物(mpc-sma-gr)

mpc與sma與hma的共聚物(mpc-sma-hma)

mpc與sma與hpm的共聚物(mpc-sma-hpm)

mpc與lma與gr的共聚物(mpc-lma-gr)

mpc與lma與hma的共聚物(mpc-lma-hma)

mpc與lma與hpm的共聚物(mpc-lma-hpm)

上述同時(shí)具有磷酰膽堿基、羥基和疏水性基團(tuán)的聚合物中的mpc的組成比(摩爾比)沒(méi)有特別的限定，為1～95％，優(yōu)選為5～80％，更優(yōu)選為10～60％。

作為本發(fā)明的樣品處理液的溶劑，若為能夠使用于免疫學(xué)測(cè)定方法的緩沖液或純水，則均可以使用。例如可以使用，磷酸緩沖液、醋酸緩沖液、碳酸緩沖液、檸檬酸緩沖液、tris緩沖液、hepes緩沖液、生理鹽水等，沒(méi)有特別的限定。

此外，本發(fā)明的樣品處理液的濃度優(yōu)選為0.0125～5.0wt％(以全部聚合物的重量換算)，更優(yōu)選為0.1～0.5wt％。

本發(fā)明的方法，首先將以含有磷酰膽堿基的聚合物為主要成分的固相處理液添加到固相表面(免疫測(cè)定法用樹(shù)脂容器(滴定板等))。更具體而言，在使抗體或者抗原結(jié)合于固相表面后，將固相處理液添加到該固相中。另一方面，利用以同時(shí)具有磷酰膽堿基、羥基和疏水性基團(tuán)的聚合物為主要成分的樣品處理液稀釋樣品，將該樣品添加到處理后的固相表面。更具體而言，也可以將樣品處理液添加到測(cè)定中所添加的試劑或者樣品中。具體而言，將樣品處理液添加于含有待檢物質(zhì)的血清、或者含有標(biāo)記抗體或標(biāo)記抗原的試劑、或者這些的全部中，進(jìn)行混合。進(jìn)一步，即使在作為樣品的血清中的待檢物質(zhì)吸附于固相不再成為問(wèn)題的情況下，添加標(biāo)記抗體或者標(biāo)記抗原時(shí)，也可以混合樣品處理液。通過(guò)這些操作，能夠抑制包含于樣品中的目標(biāo)以外的蛋白質(zhì)(待檢物質(zhì)以外的蛋白質(zhì))的非特異性吸附。

作為固相處理液的主要成分的含有磷酰膽堿基的聚合物與作為樣品處理液的主要成分的同時(shí)具有磷酰膽堿基、羥基和疏水性基團(tuán)的聚合物的組合，具體地可列舉出如下的組合，但是沒(méi)有特別的限定(左側(cè)的聚合物表示含有磷酰膽堿基的聚合物，右側(cè)的聚合物表示同時(shí)具有磷酰膽堿基、羥基及疏水性基團(tuán)的聚合物)。

mpc與mpc-bma-gr

mpc與mpc-bma-hma

mpc與mpc-bma-hpm

mpc與mpc-sma-gr

mpc與mpc-sma-hma

mpc與mpc-sma-hpm

mpc與mpc-lma-gr

mpc與mpc-lma-hma

mpc與mpc-lma-hpm

mpc-bma-gr與mpc-bma-gr

mpc-bma-gr與mpc-bma-hma

mpc-bma-gr與mpc-bma-hpm

mpc-bma-gr與mpc-sma-gr

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mpc-bma-gr與mpc-sma-hpm

mpc-bma-gr與mpc-lma-gr

mpc-bma-gr與mpc-lma-hma

mpc-bma-gr與mpc-lma-hpm

mpc-bma-hma與mpc-bma-gr

mpc-bma-hma與mpc-bma-hma

mpc-bma-hma與mpc-bma-hpm

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mpc-bma-hma與mpc-sma-hpm

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mpc-bma-hma與mpc-lma-hpm

mpc-gr與mpc-bma-gr

mpc-gr與mpc-bma-hma

mpc-gr與mpc-bma-hpm

mpc-gr與mpc-sma-gr

mpc-gr與mpc-sma-hma

mpc-gr與mpc-sma-hpm

mpc-gr與mpc-lma-gr

mpc-gr與mpc-lma-hma

mpc-gr與mpc-lma-hpm

mpc-hma與mpc-bma-gr

mpc-hma與mpc-bma-hma

mpc-hma與mpc-bma-hpm

mpc-hma與mpc-sma-gr

mpc-hma與mpc-sma-hma

mpc-hma與mpc-sma-hpm

mpc-hma與mpc-lma-gr

mpc-hma與mpc-lma-hma

mpc-hma與mpc-lma-hpm

mpc-bma與mpc-bma-gr

mpc-bma與mpc-bma-hma

mpc-bma與mpc-bma-hpm

mpc-bma與mpc-sma-gr

mpc-bma與mpc-sma-hma

mpc-bma與mpc-sma-hpm

mpc-bma與mpc-lma-gr

mpc-bma與mpc-lma-hma

mpc-bma與mpc-lma-hpm

mpc-sma與mpc-bma-gr

mpc-sma與mpc-bma-hma

mpc-sma與mpc-bma-hpm

mpc-sma與mpc-sma-gr

mpc-sma與mpc-sma-hma

mpc-sma與mpc-sma-hpm

mpc-sma與mpc-lma-gr

mpc-sma與mpc-lma-hma

mpc-sma與mpc-lma-hpm

mpc-lma與mpc-bma-gr

mpc-lma與mpc-bma-hma

mpc-lma與mpc-bma-hpm

mpc-lma與mpc-sma-gr

mpc-lma與mpc-sma-hma

mpc-lma與mpc-sma-hpm

mpc-lma與mpc-lma-gr

mpc-lma與mpc-lma-hma

mpc-lma與mpc-lma-hpm

作為上述固相處理液的主要成分的含有磷酰膽堿基的聚合物中的mpc的組成比(摩爾比)，沒(méi)有特別的限定，為1～100％，優(yōu)選為5～100％，更優(yōu)選為20～80％。除mpc以外的共聚成分的組成比，沒(méi)有特別的限定，為99～0％，優(yōu)選為95～0％，更優(yōu)選為80～20％。

此外，作為上述樣品處理液的主要成分的、同時(shí)具有磷酰膽堿基、羥基及疏水性基團(tuán)的聚合物中的mpc的組成比(摩爾比)，沒(méi)有特別的限定，為1～95％，優(yōu)選為5～80％，更優(yōu)選為10～60％。除mpc以外的共聚成分的組成比，沒(méi)有特別的限定，為99～5％，優(yōu)選為95～20％，更優(yōu)選為90～40％。

作為固相處理液的主要成分的含有磷酰膽堿基的聚合物與作為樣品處理液的主要成分的同時(shí)具有磷酰膽堿基、羥基及疏水性基團(tuán)的聚合物的更優(yōu)選的組合，具體地可列舉出如下的物質(zhì)，但是沒(méi)有特別的限定。

結(jié)構(gòu)單元為2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸膽堿、甲基丙烯酸丁酯以及甲基丙烯酸甘油酯的、含有磷酰膽堿基的聚合物，與結(jié)構(gòu)單元為2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸膽堿、甲基丙烯酸丁酯以及甲基丙烯酸甘油酯的、同時(shí)具有磷酰膽堿基、羥基和疏水性基團(tuán)的聚合物；

結(jié)構(gòu)單元為2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸膽堿、甲基丙烯酸丁酯以及甲基丙烯酸羥乙酯的、含有磷酰膽堿基的聚合物，以及結(jié)構(gòu)單元為2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸膽堿、甲基丙烯酸丁酯以及甲基丙烯酸甘油酯的、同時(shí)具有磷酰膽堿基、羥基及疏水性基團(tuán)的聚合物；

結(jié)構(gòu)單元為2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸膽堿以及甲基丙烯酸丁酯的、含有磷酰膽堿基的聚合物，和結(jié)構(gòu)單元為2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸膽堿、甲基丙烯酸丁酯以及甲基丙烯酸甘油酯的、同時(shí)具有磷酰膽堿基、羥基及疏水性基團(tuán)的聚合物；

結(jié)構(gòu)單元為2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸膽堿以及甲基丙烯酸丁酯的含有磷酰膽堿基的聚合物、和結(jié)構(gòu)單元為2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸膽堿、甲基丙烯酸丁酯以及甲基丙烯酸羥乙酯的、同時(shí)具有磷酰膽堿基、羥基及疏水性基團(tuán)的聚合物；

結(jié)構(gòu)單元為2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸膽堿以及甲基丙烯酸甘油酯的、含有磷酰膽堿基的聚合物，和結(jié)構(gòu)單元為2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸膽堿、甲基丙烯酸丁酯以及甲基丙烯酸甘油酯的、同時(shí)具有磷酰膽堿基、羥基及疏水性基團(tuán)的聚合物；

結(jié)構(gòu)單元為2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸膽堿以及甲基丙烯酸羥乙酯的、含有磷酰膽堿基的聚合物，和結(jié)構(gòu)單元為2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸膽堿、甲基丙烯酸丁酯以及甲基丙烯酸羥乙酯的、同時(shí)具有磷酰膽堿基、羥基及疏水性基團(tuán)的聚合物。

在作為上述的固相處理液的主要成分的含有磷酰膽堿基的聚合物、與作為樣品處理液的主要成分的同時(shí)具有磷酰膽堿基、羥基及疏水性基團(tuán)的聚合物的更優(yōu)選的組合中，作為固相處理液的主要成分的含有磷酰膽堿基的聚合物中的mpc的組成比(摩爾比)沒(méi)有特別的限定，為1～99％，優(yōu)選為5～99％，更優(yōu)選為20～80％。除mpc以外的共聚成分的組成比，沒(méi)有特別的限定，為99～1％，優(yōu)選為95～1％，更優(yōu)選為80～20％。

此外，在作為上述的固相處理液的主要成分的含有磷酰膽堿基的聚合物、與作為樣品處理液的主要成分的同時(shí)具有磷酰膽堿基、羥基及疏水性基團(tuán)的聚合物的更優(yōu)選的組合中，作為樣品處理液的主要成分的同時(shí)具有磷酰膽堿基、羥基和疏水性基團(tuán)的聚合物中的mpc的組成比(摩爾比)，沒(méi)有特別的限定，為1～95％，優(yōu)選為5～80％，更優(yōu)選為10～60％。除mpc以外的共聚成分的組成比，沒(méi)有特別的限定，為99～5％，優(yōu)選為95～20％，更優(yōu)選為90～40％。

本發(fā)明的方法，更具體而言，例如，在使酶或抗體等蛋白質(zhì)或抗原結(jié)合在各種免疫學(xué)測(cè)定法中所使用的固相表面上后，使用固相處理液對(duì)該固相表面進(jìn)行處理即可。作為使用固相處理液進(jìn)行處理的固相表面，例如，在使用由聚苯乙烯制造的板時(shí)，通過(guò)將蛋白質(zhì)物理吸附或者化學(xué)結(jié)合于該板上，進(jìn)行洗凈后，將固相處理液添加于該固相中，能夠得到具有抑制蛋白質(zhì)非特異性吸附的效果的固相表面。

進(jìn)一步，使用具有抑制蛋白質(zhì)非特異性吸附的效果的固相表面進(jìn)行測(cè)定時(shí)，關(guān)于使用樣品處理液的處理，將含有目標(biāo)物質(zhì)(待檢物質(zhì))的血清、標(biāo)記抗體或者標(biāo)記抗原，或者這些的全部混合即可?；旌戏椒](méi)有特別的限定，具體而言，將樣品處理液加入含有目標(biāo)物質(zhì)的血清、或者含有標(biāo)記抗體或者標(biāo)記抗原的溶液中，進(jìn)行攪拌即可。另外，樣品處理液，在添加前，也可以利用本身公知的溶劑進(jìn)行稀釋。

實(shí)施例

通過(guò)以下的實(shí)施例以及比較例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)地說(shuō)明，但是本發(fā)明不受下述實(shí)施例的范圍的限定。

(共聚物的合成)

合成了本實(shí)施例中所使用的高分子化合物以及比較例中所使用的高分子化合物。具體而言，合成了2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸膽堿(mpc)與甲基丙烯酸甘油酯(gr)的共聚物(mpc-gr)、mpc與gr與甲基丙烯酸丁酯(bma)的共聚(mpc-bma-gr)、mpc與bma與甲基丙烯酸羥乙酯(hma)的共聚物(mpc-bma-hma)、mpc與hma的共聚物(mpc-hma)、以及mpc與bma的共聚物(mpc-bma)。

詳細(xì)而言，合成了以下7種聚合物1～6。

聚合物1：mpc-bma-gr共聚物a(mpc/bma/gr＝40/20/40＝含有磷酰膽堿基的聚合物/具有疏水性基團(tuán)的聚合物/具有羥基的聚合物)，重均分子量100kda；

聚合物2：mpc-bma-gr共聚物b(mpc/bma/gr＝40/40/20＝含有磷酰膽堿基的聚合物/具有疏水性基團(tuán)的聚合物/具有羥基的聚合物)，重均分子量100kda；

聚合物3：mpc-bma-hma共聚物(mpc/bma/hma＝20/20/60＝含有磷酰膽堿基的聚合物/具有疏水性基團(tuán)的聚合物/具有羥基的聚合物)，重均分子量1000kda；

聚合物4：mpc-gr共聚物(mpc/gr＝50/50＝含有磷酰膽堿基的聚合物/具有羥基的聚合物)，重均分子量300kda；

聚合物5：mpc-hma共聚物(mpc/hma＝70/30＝含有磷酰膽堿基的聚合物/具有羥基的聚合物)，重均分子量500kda；

聚合物6：mpc-bma共聚物(mpc/bma＝80/20＝含有磷酰膽堿基的聚合物/具有疏水性基團(tuán)的聚合物)，重均分子量600kda；

聚合物7：mpc-bma共聚物(mpc/bma＝30/70＝含有磷酰膽堿基的聚合物/具有疏水性基團(tuán)的聚合物)，重均分子量100kda。

(括號(hào)中示出了各個(gè)聚合物的原料組成中的摩爾比、以及具有各個(gè)基團(tuán)的聚合物。)

將各個(gè)聚合物的單體稱(chēng)量至聚合容器中。使用乙醇與水的混合溶劑作為反應(yīng)溶劑，將總單體濃度調(diào)整為1.0mol/l。然后，將作為聚合引發(fā)劑的偶氮二異丁腈(aibn)添加于稱(chēng)量的單體中。使聚合引發(fā)劑的濃度為1mol％。

然后，將聚合容器內(nèi)部進(jìn)行充分的氮?dú)饨粨Q后，使聚合容器在60℃下保持24小時(shí)，以此進(jìn)行聚合反應(yīng)。此后，將得到的反應(yīng)混合物進(jìn)行冰浴冷卻后，通過(guò)滴入二乙醚，使聚合物沉淀。將沉淀的聚合物過(guò)濾分離，利用二乙醚進(jìn)行清洗后，減壓使其干燥。由此得到了白色粉末狀的各個(gè)聚合物。將得到的各個(gè)聚合物溶解于純水中，作為5wt％的水溶液而保存。

對(duì)得到的各個(gè)聚合物進(jìn)行元素分析，確認(rèn)得到了與原料組成一致的共聚物。

(抑制蛋白質(zhì)非特異性吸附的能力的測(cè)定方法)

將合成的聚合物1～7以及部分皂化的聚乙烯醇(pva205，kurarayco.,ltd制造)、牛血清白蛋白(bsa)分別溶解于杜氏磷酸緩沖溶液(sigma-aldrichco.,llc制造，以下記作d-pbs)中，使其為1wt％，制備了含有各個(gè)聚合物的固相處理液以及作為對(duì)照液的bsa溶液、d-pbs溶液。

然后，將調(diào)制為1wt％的含有各個(gè)聚合物的固相處理液、bsa溶液或者d-pbs溶液分別加入到由聚碳酸酯制成的96孔板中(300μl/孔)，在25℃下培育3個(gè)小時(shí)。進(jìn)一步，在培育3小時(shí)后，使用吸氣器將溶液完全去除，反復(fù)進(jìn)行以300μl/孔的方式分別添加與去除d-pbs的操作，進(jìn)行了5次清洗。

作為模擬血清溶液，制備了含有50mg/ml人血清白蛋白、10mg/ml人igg(人免疫球蛋白g)的d-pbs模擬血清溶液。

制備10％模擬血清溶液(包括樣品處理液、作為對(duì)照液的聚合物4、聚合物5、bsa溶液、或d-pbs溶液)，其中分別包含終濃度為1％的合成的聚合物1～7以及部分皂化聚乙烯醇、bsa的溶液或d-pbs。

將含有各個(gè)樣品處理液的10％模擬血清溶液、含有作為對(duì)照液的聚合物4的10％模擬血清溶液、含有作為對(duì)照液的聚合物5的10％模擬血清溶液、含有作為對(duì)照液的bsa溶液的10％模擬血清溶液、或者含有作為對(duì)照液的d-pbs溶液的10％模擬血清溶液分別加入到由聚碳酸酯制成的96孔板(300μl/孔)中，在25℃下培育了1個(gè)小時(shí)。1小時(shí)后，使用吸氣器將溶液完全去除，反復(fù)進(jìn)行分別添加(300μl/孔)與去除d-pbs的操作，進(jìn)行了5次清洗。

將稀釋了5000倍的pod-抗人igg抗體(過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗人免疫球蛋白g抗體，rocklandco.,ltd制造)分別添加(100μl/孔)，在25℃下培育了1個(gè)小時(shí)。1小時(shí)后，使用吸氣器將溶液完全去除，反復(fù)進(jìn)行以300μl/孔的方式分別添加與去除d-pbs的操作，進(jìn)行了5次清洗。清洗后，以100μl/孔的方式加入tmb微孔板過(guò)氧化物酶底物(microwellperoxidasesubstrate)(mos制造)，使其在25℃下反應(yīng)15分鐘。通過(guò)分別添加0.3mol/l的硫酸溶液(100μl/孔)，使顯色反應(yīng)停止，測(cè)定450nm的吸光度，檢測(cè)了吸附的蛋白質(zhì)。

另外，使用的固相，固相處理液以及樣品處理液的組合如下所述。

[實(shí)施例1-1]

將未處理的聚碳酸酯作為固相使用，以表1中所示的組合測(cè)定了抑制蛋白質(zhì)吸附的能力。

[實(shí)施例1-2]

將未處理的聚苯乙烯作為固相使用，以表2中所示的組合測(cè)定了抑制蛋白質(zhì)吸附的能力。

[實(shí)施例1-3]

將未處理的聚甲基丙烯酸甲酯作為固相使用，以表3中所示的組合測(cè)定了抑制蛋白質(zhì)吸附的能力。

[實(shí)施例1-4]

將maxisorp(thermofishersientificco.,ltd制造)作為固相使用，以表4中所示的組合測(cè)定了抑制蛋白質(zhì)吸附的能力。

[比較例1-1]

將未處理的聚碳酸酯作為固相使用，以表1中所示的組合測(cè)定了抑制蛋白質(zhì)吸附的能力。

[比較例1-2]

將未處理的聚苯乙烯作為固相使用，以表2中所示的組合測(cè)定了抑制蛋白質(zhì)吸附的能力。

[比較例1-3]

將未處理的聚甲基丙烯酸甲酯作為固相使用，以表3中所示的組合測(cè)定了抑制蛋白質(zhì)吸附的能力。

[比較例1-4]

將maxisorp(thermofishersientificco.,ltd制造)作為固相使用，以表4中所示的組合測(cè)定了抑制蛋白質(zhì)吸附的能力。

將實(shí)施例1-1、1-2、1-3、1-4以及比較例1-1、1-2、1-3、1-4的抑制蛋白質(zhì)非特異性吸附的能力的測(cè)定結(jié)果示于下述表1～表4中。

[表1]

[表2]

[表3]

[表4]

根據(jù)上述表1～表4的抑制蛋白質(zhì)非特異性吸附的能力的測(cè)定結(jié)果，確認(rèn)到，在使用以含有磷酰膽堿基的聚合物為主要成分的固相處理液、以及以同時(shí)具有磷酰膽堿基、羥基及疏水性基團(tuán)的聚合物為主要成分的樣品處理液的、本發(fā)明的抑制蛋白質(zhì)非特異性吸附的方法中，包含于所使用的固相處理液以及樣品處理液中的聚合物雖是化學(xué)合成品，也具有高的抑制蛋白質(zhì)非特異性吸附的能力。

另外，比較例1-1-3、1-2-3、1-3-2、1-3-3、1-4-2以及1-4-3的抑制蛋白質(zhì)非特異性吸附的能力低的原因在于，樣品處理液中不含有具有疏水性基團(tuán)的聚合物。

工業(yè)實(shí)用性

本發(fā)明能夠提供一種新的抑制蛋白質(zhì)非特異性吸附的方法。