本實(shí)用新型涉及電泳用預(yù)制膠領(lǐng)域,尤其涉及一種電泳用預(yù)制膠基片。
背景技術(shù):
目前,大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室都是自行配制聚丙烯酰胺凝膠,電泳結(jié)果受凝膠配方以及操作水平影響較大,可重復(fù)性差,在自行配制過程中消耗了大量的時間和人力物力。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:
為了解決上述現(xiàn)有技術(shù)問題,提出一種電泳用預(yù)制膠基片。
本實(shí)用新型采用的技術(shù)方案如下:
一種電泳用預(yù)制膠基片,包括基體和電泳梳子,其特征在于:所述基體包括前板、后板以及隔離窄條;
所述后板兩側(cè)設(shè)有隔離窄條,隔離窄條上覆有前板,所述前板與后板之間形成凝膠灌注腔;
所述電泳梳子由梳子基體和梳齒組成,梳子基體前端設(shè)有梳齒,梳齒的厚度不大于凝膠灌注腔的厚度;
所述前板與后板上面設(shè)有電泳梳子,下部設(shè)有密封條,所述密封條為長方形凹槽。
進(jìn)一步的,所述前板和后板采用玻璃材質(zhì)。
進(jìn)一步的,所述隔離窄條通過無影膠與后板粘合。
進(jìn)一步的,所述隔離窄條的厚度為1mm。
進(jìn)一步的,所述梳齒的兩端的齒根上設(shè)有定位點(diǎn),所述定位點(diǎn)凸起并與凝膠灌注腔的灌注口接觸定位。
進(jìn)一步的,所述梳子基體和梳齒采用塑料材料制成。
進(jìn)一步的,所述隔離窄條和密封條的材質(zhì)為硅膠或者橡膠。
進(jìn)一步的,所述隔離窄條和密封條的材質(zhì)為玻璃或者塑料。
進(jìn)一步的,所述隔離窄條和密封條的材質(zhì)為樹脂。
與現(xiàn)有技術(shù)相比,本實(shí)用新型具有如下優(yōu)點(diǎn):
為聚丙烯酰胺凝膠的成型提供一種封閉的承載體,避免了聚丙烯酰胺凝膠與外界直接接觸,從而解決了現(xiàn)有技術(shù)中凝膠保存時間短的缺陷,通過本申請的全套配件保存聚丙烯酰胺能夠使其保存時間提高到至少3個月。
聚丙烯酰胺凝膠在成型時,能夠形成樣品裝填孔,電泳時,拔出電泳梳子將預(yù)制膠直接插入電泳槽,樣品在基片前、后板之間的聚丙烯酰胺凝膠中進(jìn)行電泳分離,使用方便快捷。
本申請基片的凝膠灌注腔還為聚丙烯酰胺凝膠的成型提供模具的作用,因此,可以保障凝固的聚丙烯酰胺凝膠的厚度一致,進(jìn)而提高了電泳的分離能力。
通過本申請的基片,使得所加工出來的聚丙烯酰胺凝膠預(yù)制膠的一致性好,便于批量生產(chǎn),從而降低實(shí)驗(yàn)成本。
可用于蛋白質(zhì)相對分子量的測定,根據(jù)比較標(biāo)準(zhǔn)分子量的蛋白質(zhì)與待測蛋白質(zhì)在同一塊凝膠上電泳條帶的相對距離,可以大致確定蛋白質(zhì)的分子量大小。本預(yù)制膠中丙烯酰胺的濃度可配制范圍5-15%,用以分離不同分子量范圍的蛋白質(zhì)。
附圖說明
圖1為本實(shí)用新型結(jié)構(gòu)圖。
圖2為本實(shí)用新型前板、后板、隔離窄條和電泳梳子組合使用狀態(tài)圖。
圖3為圖2使用狀態(tài)的透視圖。
圖4為A-A向前板、后板和隔離窄條之間構(gòu)成的凝膠灌注腔結(jié)構(gòu)圖。
圖中:1、前板;2、后板;3、隔離窄條;4、梳齒;5、梳子基體;6、定位點(diǎn);7、凝膠灌注腔。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合附圖對本實(shí)用新型做進(jìn)一步的說明:
如圖1、2、3和4所示,一種電泳用預(yù)制膠基片,包括基體和電泳梳子,其特征在于:所述基體包括前板1、后板2以及隔離窄條3,所述前板1和后板2采用玻璃材質(zhì);
所述后板兩側(cè)設(shè)有隔離窄條3,所述隔離窄條3通過無影膠與后板2粘合,所述隔離窄條的厚度為1mm,隔離窄條上覆有前板,所述前板與后板之間形成凝膠灌注腔7,凝膠灌注腔7的厚度也為1mm;所述前板與后板上面設(shè)有電泳梳子,下部設(shè)有密封條,所述密封條為長方形凹槽,所述長方形凹槽的寬度略大于前板后板之和的厚度,長度略大于前板后板的長度,該長方形凹槽防止凝膠從凝膠灌注腔流出。
所述電泳梳子由梳子基體5和梳齒4組成,梳子基體5前端設(shè)有梳齒4,梳齒4的厚度不大于凝膠灌注腔7的厚度,所述梳齒的兩端的齒根上設(shè)有定位點(diǎn)6,所述定位點(diǎn)凸起并與凝膠灌注腔的灌注口接觸定位;所述梳子基體5和梳齒4采用塑料材料制成,塑料隔離窄條具體為亞克力材料。
所述隔離窄條和密封條的材質(zhì)為硅膠或者橡膠。
所述隔離窄條和密封條的材質(zhì)為玻璃或者塑料。
所述隔離窄條和密封條的材質(zhì)為樹脂。
實(shí)施例:
在基片的凝膠灌注腔內(nèi)灌注設(shè)置位于底層的聚丙烯酰胺分離膠和位于上層的聚丙烯酰胺濃縮膠,所述的梳子的梳齒由前板上端灌注口插入到聚丙烯酰胺濃縮膠的外端面內(nèi),并在聚丙烯酰胺濃縮膠的外端面內(nèi)形成點(diǎn)樣孔;一般來講,聚丙烯酰胺分離膠與聚丙烯酰胺濃縮膠的比例是4:1或5:1。
使用方法具體如下:
(1)拔下梳齒,露出電泳導(dǎo)電口,然后將其裝入電泳裝置中,填充Tris-SDS電極緩沖液后,在樣品點(diǎn)樣孔中裝入預(yù)處理后的電泳樣品,通電進(jìn)行電泳操作;
(2)電泳完成后,分離基片的前板和后板,并將凝膠取出,進(jìn)行凝膠染色脫色和干膠制作。
實(shí)施例,聚丙烯酰胺分離膠由分離膠混合溶液凝固成凝膠而成,該分離膠混合溶液包括有以下組分:
丙烯酰胺混合液質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為5%-15%,丙烯酰胺混合液中丙烯酰胺和甲叉丙烯酰胺質(zhì)量比為30-100:1;
1.5M pH為6.8的Tris-HCl緩沖液 體積分?jǐn)?shù)23-25%;
十二烷基硫酸鈉質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)1-2%;
過硫酸銨 質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)0.5-1%;
四甲基乙二胺體積分?jǐn)?shù)0.04%-0.08%;
余量為水 。
所述的聚丙烯酰胺濃縮膠由濃縮膠混合溶液凝固成凝膠而成,該濃縮膠混合溶液包括有以下組分:
丙烯酰胺混合液質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為5%,丙烯酰胺混合液中丙烯酰胺和甲叉丙烯酰胺質(zhì)量比為30-100:1;
1M pH為6.8的Tris-HCl緩沖液 體積分?jǐn)?shù)11-13%;
十二烷基硫酸鈉質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)0.05-0.1%;
過硫酸銨質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)0.05-0.1%;
四甲基乙二胺體積分?jǐn)?shù)0.05-0.1%;
余量為水 。
濃縮膠灌注工藝是:
1.將預(yù)制膠基片固定好,取4ml分離膠液于燒杯中,加入40μl的10%過硫酸銨(現(xiàn)配,或配置后-20°C分裝保存),2μlTEMED,混勻后加入到配膠的基片之間,并于其上層加入0.5ml去離子水,靜置30-50分鐘至膠凝固。倒去上層水層。
2.取2ml,5%的濃縮膠液,加入20μl的10%過硫酸銨,3μlTEMED,加上電泳梳子室溫放置10-30分鐘至膠凝固。
3.制備好的膠可即刻使用,也可以將制備好的膠連同基片和電泳梳子,裝入到自封袋,或其他致密性較好的塑料膜中,加入5ml去離子水,并用真空封口機(jī)封口(保證水分不外泄),此凝膠可在4°C避光保存12個月。
上述實(shí)施例中所用的溶液的配置工藝是:
(1)40%丙烯酰胺(Acr:Bis 為38.95:1.05) 稱取丙烯酰胺(Acr)389.5g及甲叉丙烯酰胺(Bis)10.5g,溶于總體積為600ml的水中。加熱至37℃溶解之,補(bǔ)加水至終體積為1L。貯棕色瓶中保存,可用一個月。本實(shí)施例Acr:Bis的比值還可以是30-100:1;
(2)1.5mol/L pH8.8 Tris-HCl緩沖液 取1mol/L HCL溶液48ml、三羥甲基甲烷(Tris)36.6g,加雙蒸餾水至80ml使其溶解,調(diào)pH至8.8,然后用雙蒸餾水稀釋至100ml,置棕色瓶中,4℃貯存。
(3)1.0mol/LpH6.8Tris-HCl緩沖液 取1mol/L HCL溶液48ml,Tris5.98g,加雙蒸餾水至80ml,調(diào)pH6.8,用雙蒸餾水稀釋至100ml,置棕色瓶中,4℃貯存。
(4) Tris-SDS電泳緩沖液 稱取SDS 6g、Tris 28.8g,加蒸餾水1000ml,調(diào)pH至8.3,加蒸餾水到1000ml,4℃貯存。用時可做10倍稀釋。
(5)10% 過硫酸銨(APS)和四甲基乙二胺(TEMED)。
(6)10%SDS(十二烷基磺酸鈉) 稱取SDS 10g,加蒸餾水100ml使其溶解。
上樣緩沖液取1.0mol/LpH6.8Tris-HCl緩沖液6.25ml,SDS 2.3g,1g/L溴酚藍(lán)10ml,加蒸餾水溶解,混合至100ml。
以上所述,僅為本實(shí)用新型的具體實(shí)施方式,但實(shí)用新型的保護(hù)范圍并不局限于此,任何熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員在本實(shí)用新型揭露的技術(shù)范圍內(nèi),可輕易想到的變化或替換,都應(yīng)涵蓋在實(shí)用新型的保護(hù)范圍之內(nèi)。