專利名稱：一種同時分析人基因組dna 22個基因座的熒光標記復合擴增的試劑盒及其使用方法和應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種22個基因座的熒光標記復合擴增檢驗試劑盒，具體是涉及一種同時分析人基因組DNA 22個基因座的五色熒光標記復合擴增試劑盒，該試劑盒可以應用于個體識別和親子鑒定。
背景技術：
短串聯重復序列基因座(STR)是目前普遍應用的遺傳標記。90年代初STR基因座多態(tài)性的發(fā)現，特別是STR基因座具有片段小容易擴增，適宜于檢驗微量和降解檢材，而且各基因座的擴增條件相似而能夠復合擴增，因而具有靈敏、準確、快速、信息量大等優(yōu)點。尤其是在建立DNA數據庫方面，STR復合擴增技術具有極大的優(yōu)越性。因此美國FBI選擇了
13 個 STR 基因座用于建立 DNA 數據庫-CODIS (Combined DNA Index System):CSFlP0、
D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、FGA, THOU TPOX, vWA。這些STR基因座通常被稱為13個核心基因座。正因為STR所具備的優(yōu)點和應用前景，法醫(yī)學界以及一些大的公司均投入大量的資金對其進行了開發(fā)性的研究。90年代中后期以美國ABI公司為代表的研發(fā)商建立起熒光復合擴增體系。目前最具代表性的是ABI(Applied Biosystems, USA)公司的Identifiler 和Promega (USA)公司的PowerPlex-16熒光檢測試劑盒。這兩個試劑盒均包括上述13個核心基因座。長期的DNA檢驗實踐表明，短串聯重復序列基因座的遺傳多態(tài)性在種族間存在一定的差異，各個基因座間差別也很大。在美國FBI推薦的13個核心基因座中，有部分基因座遺傳多態(tài)性不高，或是不同人群間差異較大。由此給DNA檢驗技術的應用及其效率帶來一定的影響。專利ZL200510096613. 6公開了一種同時分析人基因組DNA的多個基因座的熒光標記復合擴增系統，其特征在于所述的15個基因座為=AmeIogeniru D2S1338、D3S1358、 D5S818、D6S1043、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、Penta E、CSF1P0、 vWA、FGA。該專利提供了對15個基因座的分型結果，為4色熒光檢測試劑盒。我們對中國人群的短串聯重復序列基因座的遺傳多態(tài)性進行了深入的研究，并以此為依據開發(fā)新的短串聯重復序列基因座的復合擴增檢驗試劑盒，以求在5色熒光檢測試劑盒中，提供對包括Amelogenin在內的22個基因座的分型結果，同時提高試劑盒的累計個體識別能力和累積非父排除率。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的之一在于提供一種通過復合擴增22個基因座來進行個體識別和親子鑒定的熒光標記STR復合擴增檢驗試劑盒。涉及檢測人基因組中具有多態(tài)性的遺傳標記。本發(fā)明特別涉及用聚合酶鏈式反應在一個體系中同時擴增多個短串聯重復基因座。
為了實現本發(fā)明的目的，采用如下技術方案
一種同時分析人基因組DNA 22個基因座的熒光標記復合擴增的試劑盒，所述的22個基因座為D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、Penta Ε、D2S441、TPOX, THOU D2S1338、 CSF1P0、Penta D、D10S1248、D19S433、vWA、D21S11、D18S51、D6S1043、D8S1179、D5S818、 D12S391、FGA、性別基因座Amelogenin ；其特征在于該試劑盒包括22個基因座對應的引物如下
權利要求
1. 一種同時分析人基因組DNA 22個基因座的熒光標記復合擴增的試劑盒，所述的22 個基因座為D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、Penta Ε、D2S441、ΤΡΟΧ、ΤΗ01、D2S1338、 CSF1P0、Penta D、D10S1248、D19S433、vWA、D21S11、D18S51、D6S1043、D8S1179、D5S818、 D12S391、FGA、性別基因座Amelogenin ；其特征在于該試劑盒包括22個基因座對應的引物如下
2.根據權利要求1所述的一種同時分析人基因組DNA 22個基因座的熒光標記復合擴增的試劑盒，其特征在于22個基因座對應的引物的濃度為
3.根據權利要求1或2所述的一種同時分析人基因組DNA22個基因座的熒光標記復合擴增的試劑盒，其特征在于所述的每個基因座對應的引物中至少有一個引物的5’端進行熒光染料標記。
4.根據權利要求3所述的一種同時分析人基因組DNA22個基因座的熒光標記復合擴增的試劑盒，其特征在于所述的熒光染料標記物為6-FAM、HEX、TAMRA或R0X。
5.根據權利要求4所述的一種同時分析人基因組DNA22個基因座的熒光標記復合擴增的試劑盒，其特征在于將所述22個基因座分組，具體為D3S1358、D13S317、D7S820、 D16S539、Penta E和D2S441為第一組，該組基因座對應的引物的熒光標記物為6-FAM、 HEX、TEMRA 和 ROX 的任意一種；TPOX、THOl、D2S1338、CSF1P0、Penta D 和 D10S1248 為第二組，該組基因座對應的引物的熒光標記物為與第一組不同的熒光染料標記物；D19S433、 vffA, D21S11、D18S51、D6S1043為第三組，該組基因座對應的引物的熒光標記物為與第一組和第二組都不同的熒光染料標記物；D8S1179、D5S818、D12S391、FGA,以及性別基因座 Amelogenin為第四組，該組基因座對應的引物的熒光標記物為與第一組、第二組和第三組都不同的熒光染料標記物；該試劑盒還設有內標，其選用橙色熒光標記，熒光標記物為 SIZ。
6.根據權利要求1-5任意一種所述的一種同時分析人基因組DNA22個基因座的熒光標記復合擴增的試劑盒，其特征在于所述的試劑盒由如下組成
7. 一種同時分析人基因組DNA 22個基因座的熒光標記復合擴增的試劑盒的使用方法，其特征在于按如下步驟實現 A、擴增體系為
8.根據權利要求7—種同時分析人基因組DNA 22個基因座的熒光標記復合擴增的試劑盒的使用方法，其特征在于電泳采用多道或單道毛細管電泳。
9.根據權利要求7—種同時分析人基因組DNA 22個基因座的熒光標記復合擴增的試劑盒的使用方法，其特征在于其中基因組DNA樣品來源于精斑、唾液斑、組織、血痕或血液。
10.一種同時分析人基因組DNA 22個基因座的熒光標記復合擴增的試劑盒的應用，其特征在于該試劑盒用于個體識別、親子鑒定。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種同時分析人基因組DNA22個基因座的五色熒光標記復合擴增試劑盒；本發(fā)明將22個基因座分為4組，共涉及5種顏色的熒光標記；本發(fā)明的熒光標記復合擴增試劑盒的靈敏度高，在DNA模板量為0.12ng的條件下，可檢出全部22個基因座；適用于血濾紙、FTA卡采集樣本的直接擴增。
文檔編號C12Q1/68GK102321748SQ20111022932
公開日2012年1月18日 申請日期2011年8月11日 優(yōu)先權日2011年8月11日
發(fā)明者周翔, 夏子芳, 張秀芳, 杜蔚安, 楊輝, 鄭衛(wèi)國 申請人:無錫中德美聯生物技術有限公司