本發(fā)明涉及Pd²⁺的檢測(cè)技術(shù)，具體涉及(E)-4-(二苯基氨基)苯甲醛O-丙-2-炔-1-基肟化合物與甲烷(1:2)(TP1)及其合成方法，以及TP1作為試劑在檢測(cè)Pd²⁺中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

鈀作為一種稀有的鉑族元素，其在科學(xué)研究和工業(yè)生產(chǎn)中的重要意義，如牙科、燃料電池、不飽和烴加氫和珠寶首飾等，在科學(xué)研究和工業(yè)生產(chǎn)中也得到了廣泛的關(guān)注,是航天、航空等高科技領(lǐng)域以及汽車制造業(yè)不可缺少的關(guān)鍵材料。然而，殘留的鈀往往會(huì)通過(guò)各種方式進(jìn)入環(huán)境，包括土壤，植物和河流。在這種情況下，少量的鈀可能通過(guò)皮膚吸收或食物和水的攝入而進(jìn)入我們身體。它對(duì)人體健康有嚴(yán)重的危害，如導(dǎo)致過(guò)敏反應(yīng)、嚴(yán)重的原發(fā)性皮膚病和眼部疾病等。主要原因是鈀可以攻擊細(xì)胞的生物大分子，如含有氨基酸、蛋白巰基、DNA等，這會(huì)干擾細(xì)胞的正常生理過(guò)程。

目前已報(bào)道的用于檢測(cè)Pd²⁺的檢測(cè)方法有原子吸收光譜法(AAS)，高效液相色譜法與固相微萃取、電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜(ICP/OES)和X射線熒光，通常需要昂貴的儀器和復(fù)雜的樣品前處理，從而限制了它的應(yīng)用。與它們相比，因?yàn)闊晒鈽?biāo)記法成本低廉，非破壞性和實(shí)時(shí)性的特點(diǎn)，已得到了廣泛使用。基于此發(fā)展一種檢測(cè)過(guò)程簡(jiǎn)單、靈敏、成本低、適合臨床、科研使用的檢測(cè)Pd²⁺的方法非常必要。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
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本發(fā)明的目的是提供一種Pd²⁺檢測(cè)試劑及其合成方法，以及將該檢測(cè)試劑用于定量檢測(cè)Pd²⁺，而且檢測(cè)時(shí)在水相中進(jìn)行、選擇性高、靈敏度高、速度快。

本發(fā)明提供的Pd²⁺檢測(cè)試劑是(E)-4-(二苯基氨基)苯甲醛O-丙-2-炔-1-基肟化合物與甲烷(1:2)化合物(TP1)，英文名：(E)-4-(diphenylamino)benzaldehyde O-prop-2-yn-1-yloxime compound with methane(1:2)，結(jié)構(gòu)式為：

(E)-4-(二苯基氨基)苯甲醛O-丙-2-炔-1-基肟化合物與甲烷(1:2)化合物的合成方法，步驟為：

(1)將三苯胺和氯化氧磷完全溶解于DMF中，攪拌；向混合物中倒入冰水，用氫氧化鈉 中和，過(guò)濾；粗產(chǎn)物通過(guò)硅膠柱純化，得到4-(N，N-二苯氨基)苯甲醛；

(2)向4-(N，N-二苯氨基)苯甲醛中加入鹽酸羥胺和醋酸鈉，攪拌，減壓蒸餾，硅膠柱層析純化，得到4-(N，N-二苯氨基)苯甲醛肟；

(3)將4-(N，N-二苯氨基)苯甲醛肟和氫化鈉完全溶解于四氫呋喃中，攪拌，隨后加入溴丙炔，攪拌，萃取，收集有機(jī)層，減壓蒸餾和柱色譜分離得到淡黃色固體，即得到Pd²⁺檢測(cè)試劑TP1。

本發(fā)明提供的一種快速檢測(cè)Pd²⁺的方法，是基于TP1化合物，在pH為7.4的HEPES溶液中定量地檢測(cè)Pd²⁺的含量；具體步驟為：

(1)、配制pH＝7.4、濃度為10mM的HEPES緩沖溶液，配制2mM的TP1的乙醇溶液；

(2)、將2000μL pH 7.4的HEPES緩沖溶液和1μL TP1的乙醇溶液加到干凈的熒光比色皿中，在熒光分光光度儀上檢測(cè)，隨著待測(cè)樣的加入，423nm的熒光強(qiáng)度逐漸減弱；

(3)、將2000μL pH 7.4的HEPES緩沖溶液和1μL TP1的乙醇溶液加到另外七個(gè)熒光比色皿中，分別再加入體積為1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0μL的Pd²⁺溶液，在熒光分光光度儀上測(cè)定423nm對(duì)應(yīng)的熒光強(qiáng)度F為7125、6429、5026、3833、2680、1835、1085、365，以Pd²⁺濃度為橫坐標(biāo)，以相對(duì)熒光強(qiáng)度F-F₀為縱坐標(biāo)繪制圖，F(xiàn)₀＝7129，得到Pd²⁺濃度的工作曲線；線性回歸方程為：F-F₀＝7129.5833-1014.9881c，c的單位為μM；

(4)、將2000μL pH 7.4的HEPES緩沖溶液和1μL TP1的乙醇溶液加到干凈的熒光比色皿中，用微量進(jìn)樣器吸取VμL待測(cè)樣品溶液，加入到此干凈的熒光比色皿中，在熒光分光光度儀上檢測(cè)，將測(cè)得的熒光強(qiáng)度代入步驟(3)的線性回歸方程，得到濃度c，待測(cè)樣品C_{待測(cè)樣}＝2000μL×c×10^-6/VμL，即可求得Pd²⁺的濃度。

該檢測(cè)方法對(duì)Pd²⁺顯示了高的靈敏性和選擇性，檢測(cè)過(guò)程在水相中進(jìn)行，簡(jiǎn)便、快速，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)和效果：1、檢測(cè)體系成本低廉，合成簡(jiǎn)單；2、本發(fā)明的檢測(cè)方法，在純水相中進(jìn)行，對(duì)Pd²⁺顯示了高的靈敏性和選擇性；3、檢測(cè)手段簡(jiǎn)單，只需要借助熒光分光光度儀即可實(shí)現(xiàn)。

附圖說(shuō)明：

圖1實(shí)施例1制備的TP1化合物的核磁氫譜圖

圖2實(shí)施例1制備的TP1化合物的核磁碳譜圖

圖3實(shí)施例1制備的TP1化合物的質(zhì)譜圖

圖4實(shí)施例2TP1化合物與Pd²⁺作用的熒光發(fā)射圖

圖5實(shí)施例3TP1化合物與各種分析物的熒光柱狀圖

圖6實(shí)施例4測(cè)定Pd²⁺的工作曲線

圖7測(cè)定樣品的熒光發(fā)射圖

具體實(shí)施方式：

實(shí)施例1TP1化合物的制備及表征

將三苯胺(4.9g，0.005mol)和氯化氧磷(30g，0.2mol)完全溶解于50毫升DMF，1小時(shí)后，向混合物中倒入冰水，用20％的氫氧化鈉中和后過(guò)濾；粗產(chǎn)物通過(guò)硅膠柱層析純化(氯仿:石油醚＝1:3作為洗脫劑)，產(chǎn)率85％；

將4-(N，N-二苯氨基)苯甲醛(1.6克，6毫摩爾)溶解于二氯甲烷(25毫升)中，隨后加入溶解于75ml乙醇中的鹽酸羥胺(1.6克，24毫摩爾)和醋酸鈉(2.4克，30毫摩爾)，該混合物在室溫下攪拌3小時(shí)，并減壓蒸餾，粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化(CH₂Cl₂作為洗脫劑)得到白色固體，產(chǎn)率85％；

將4-(N，N-二苯氨基)苯甲醛肟(46毫克，0.16毫摩爾)和氫化鈉(8毫克，0.2毫摩爾)溶解于四氫呋喃(2毫升)并在0℃下攪拌30min；隨后向混合物中加入1ml溶解于四氫呋喃的溴丙炔；攪拌1小時(shí)，在室溫下，用水(10毫升)和乙酸乙酯(30毫升)萃??；收集有機(jī)層并用無(wú)水硫酸鎂干燥，真空減壓蒸餾和柱色譜層析純化(正己烷/乙酸乙酯＝2:1作為洗脫劑)，得到淡黃色固體TP1化合物，產(chǎn)率：90％。

¹H NMR(600MHz,25℃,CDCl₃-d₆):δ8.08(s,1H),7.47(d,2H,J＝12,7.31(m,4H),7.25(m,6H),7.14(m,6H),4.77(d,2H),2.52(s,1H)(圖1)；¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆):δ149.9,147.7,130.15,125.41,124.13,121.97,80.69,77.66,61.61(圖2)；calcd.for C₂₂H₁₈N₂O[M+1]⁺:327.14,found 327.92(圖3).

實(shí)施例2

配制pH＝7.4、濃度為10mM的HEPES緩沖溶液，并用乙醇配制2mM的TP1化合物溶液；把2mL的HEPES(pH 7.4)溶液及1μL TP1化合物的乙醇溶液加到干凈的熒光比色皿中，取Pd²⁺的溶液，逐漸用微量進(jìn)樣器加到此比色皿中，邊加樣邊在熒光分光光度儀上檢測(cè)，隨著Pd²⁺的加入，423nm處熒光強(qiáng)度逐漸減弱，熒光發(fā)射圖(見圖4)。

實(shí)施例3

配制pH＝7.4、濃度為10mM的HEPES緩沖溶液，并用乙醇配制2mM的TP1化合物溶液；在22個(gè)熒光比色皿中，各加入2mL的HEPES(pH 7.4)溶液和1μL的TP1化合物的乙醇溶液，再分別加入7摩爾當(dāng)量Pd²⁺，以及10摩爾當(dāng)量的各種分析物：Na⁺,Ni⁺,K⁺,Ag⁺,Au⁺,Zn²⁺,Ca²⁺,Mg²⁺,Cu²⁺,Pt²⁺,Mn²⁺,Fe³⁺,Cr³⁺and Al³⁺,在熒光分光光度儀上檢測(cè)，繪制不同分析物對(duì)應(yīng)的423nm相對(duì)熒光強(qiáng)度的柱狀圖，(見圖5)。Pd²⁺使得TP1化合物的熒光淬滅，其 它的分析物沒有引起TP1化合物熒光強(qiáng)度的變化。

經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，其它分析物不干擾體系對(duì)Pd²⁺的測(cè)定。

實(shí)施例4

配制pH＝7.4、濃度為10mM的HEPES緩沖溶液，并用乙醇配制2mM的TP1化合物溶液，用蒸餾水配制2mM的Pd²⁺溶液；把2mL的HEPES(pH 7.4)溶液和1μL的TP1化合物的乙醇溶液加到熒光比色皿中，分別再加入Pd²⁺溶液的體積為1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0時(shí)，在熒光分光光度儀上測(cè)定423nm對(duì)應(yīng)的熒光強(qiáng)度F為7125、6429、5026、3833、2680、1835、1085、365，以Pd²⁺濃度為橫坐標(biāo)，以相對(duì)熒光強(qiáng)度F-F₀為縱坐標(biāo)繪制圖，F(xiàn)₀＝7129，得到Pd²⁺濃度的工作曲線(見圖6)；線性回歸方程為：F-F₀＝7129.5833-1014.9881c，c的單位為μM；

實(shí)施例5

配制pH＝7.4的HEPES(10mM)緩沖溶液，配制2mM的Pd²⁺水溶液，并用乙醇配制2mM的TP1化合物溶液；把2mL的pH 7.4，HEPES溶液和1μL的TP1化合物的乙醇溶液加到干凈的熒光比色皿中，取Pd²⁺的溶液6.5μL，用微量進(jìn)樣器加到此比色皿中，同時(shí)在熒光光譜儀上測(cè)定423nm的對(duì)應(yīng)的熒光強(qiáng)度F為6784，通過(guò)實(shí)施例4的線性回歸方程，求得c＝7.37×10^-6mol/L，偏差為0.87％。見圖7。