本發(fā)明涉及一種薄層色譜耦合紅外技術(shù)分析煙草污染物的方法，屬于煙草污染物理化檢驗(yàn)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

薄層色譜(TLC)又叫薄層層析，是最早發(fā)明的色譜技術(shù)之一。廣泛應(yīng)用于各種天然和合成有機(jī)物的分離和鑒定，也用于小量物質(zhì)的精制，具有操作簡(jiǎn)便，分離速度快，效率高等諸多優(yōu)點(diǎn)。一般來(lái)說(shuō)，薄層層析主要包括薄層板的制備、樣品的滴加、展開(kāi)、顯色、比較Rf值及定量分析等操作手段。但是，由于薄層板的制備比較復(fù)雜，而且很難保證一致性，造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確等諸多問(wèn)題，因此實(shí)際操作中主要采用廠家統(tǒng)一生產(chǎn)的經(jīng)過(guò)活化的薄層板，從而大大縮減了實(shí)驗(yàn)時(shí)間，減少工作量，提高了實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性。市場(chǎng)上薄層板有多種類型，目前使用比較廣泛的主要是硅膠板和熒光性板。對(duì)于樣品的滴加，最好在密閉的容器中進(jìn)行，避免因空氣中水分而降低活化板的吸附性。若在空氣中滴加，一般不超過(guò)10分鐘。樣品滴加的方式與紙上層析相似；樣品量為5-10微克，滴加后的原點(diǎn)擴(kuò)散直徑不超過(guò)5毫米，原點(diǎn)間的間距為1.5-2.0厘米。原點(diǎn)與玻璃板下端邊緣距離為1.5-2.0厘米。展開(kāi)劑浸入高度為0.5厘米。在展開(kāi)時(shí)，最常用的展開(kāi)操作是一次上行法。若分離復(fù)雜的成分，可采用雙向上行法或者遞次上行法(先用一種展開(kāi)劑展開(kāi)，揮除溶劑后，再用另一種展開(kāi)劑按同樣方式展開(kāi))。如不加粘合劑，則常采用近水平式的展開(kāi)(薄層板與容器底部交角在10°～40°)。

紅外光譜檢測(cè)技術(shù)是對(duì)極少量物質(zhì)進(jìn)行定性定量分析的常用方法之一。紅外光譜最突出的特點(diǎn)是具有高度的特征性，除光學(xué)異構(gòu)體外，每種化合物都有自己的紅外吸收光譜。任何氣態(tài)、液態(tài)、固態(tài)樣品均可用紅外光譜來(lái)測(cè)定。從分子的特征吸收光譜的峰形、峰位以及峰強(qiáng)可判斷該化合物中是否存在某些官能團(tuán)，進(jìn)而推斷其分子結(jié)構(gòu)，可用于化合物的鑒定，并進(jìn)行定性和定量分析。

煙葉在生產(chǎn)、運(yùn)輸以及存放的過(guò)程中會(huì)受到外源物質(zhì)的污染，從而影響煙葉的香氣和口味，但是如何快速的檢測(cè)煙葉物質(zhì)中的污染物，這是一個(gè)實(shí)際工作中較難解決的問(wèn)題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的發(fā)明點(diǎn)在于提供一種薄層色譜耦合紅外技術(shù)分析煙草污染物的方法，該方法具有操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)時(shí)間短、靈敏度高、適用性強(qiáng)等特點(diǎn)。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種薄層色譜耦合紅外技術(shù)分析煙草污染物的方法，包括以下步驟：

1)煙草樣品溶液的制備：用萃取劑萃取煙草樣品，過(guò)濾得樣品溶液1；

2)薄層層析：取煙草樣品溶液1在薄層板上點(diǎn)樣，然后把薄層板用展開(kāi)劑展開(kāi)，檢測(cè)目標(biāo)物的位置并標(biāo)記，刮下目標(biāo)物后萃取劑萃取，得含有目標(biāo)物的煙草樣品溶液2；

3)紅外光譜檢測(cè)：將煙草樣品溶液2用紅外光譜分析；

4)紅外光譜數(shù)據(jù)分析：比較不含污染物的煙草樣品與含有污染物的樣品紅外光譜圖，確定污染物的特征峰。

5)污染物篩查：通過(guò)特征峰，確認(rèn)污染物。

步驟1)所述的萃取劑為丙酮。

為了獲得較好的展開(kāi)效果，使目標(biāo)物與其他組分分離效果更好，本發(fā)明步驟2)在薄層板上點(diǎn)樣的標(biāo)準(zhǔn)為樣點(diǎn)直徑不超過(guò)0.5cm，樣點(diǎn)間距離不低于1.5cm，點(diǎn)樣起點(diǎn)距底部邊緣至少1.5cm。

步驟2)所述的展開(kāi)劑為丙酮。

為了獲得較好的分離效果，本發(fā)明步驟2)中展開(kāi)的條件為展開(kāi)為薄層板浸入展開(kāi)劑深度不超過(guò)0.5cm，薄層板與容器底部二面角在10°～40°之間，展開(kāi)高度為薄層板長(zhǎng)度的2/3～4/5。

本發(fā)明中步驟2)檢測(cè)目標(biāo)物的位置所用的方法優(yōu)選為用紫外光檢測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)為254～365nm。

步驟3)所述的紅外光譜分析中掃描波長(zhǎng)范圍為4000～400㎝^-1。

步驟5)所述的污染物篩查為通過(guò)污染物的特征峰與污染物的標(biāo)準(zhǔn)紅外圖譜比較或者與工具上標(biāo)準(zhǔn)紅外圖譜進(jìn)行比較，進(jìn)而確認(rèn)污染物。污染物的標(biāo)準(zhǔn)圖譜可以從現(xiàn)有的紅外圖譜數(shù)據(jù)庫(kù)獲得，比如美國(guó)化學(xué)會(huì)旗下數(shù)據(jù)庫(kù)Scifinder等獲得，也可以是從工具書(shū)獲得紅外光譜等方式。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比的優(yōu)點(diǎn)：

本發(fā)明的薄層色譜耦合紅外技術(shù)分析煙草污染物的方法先用薄層層析把樣品分離，再用紫外光檢測(cè)污染物的位置，然后刮下污染物，并用萃取液萃取，再用紅外技術(shù)分析。用薄層色譜分離，可以除去煙葉樣品中與污染物不相干的物質(zhì)，即Rf值距離污染物遠(yuǎn)的物質(zhì)，對(duì)污染物進(jìn)行富集，增加了污染物的濃度，使分析更加容易。

另一方面可以減少煙葉紅外吸收對(duì)污染物紅外吸收的干擾，提高測(cè)定的準(zhǔn)確性；對(duì)污染物進(jìn)行萃取，除去具有紅外吸收的固定相，減少了固定相紅外吸收對(duì)污染物紅外吸收的背景干擾，提高了測(cè)定的準(zhǔn)確性；在高分辨率的紅外光譜儀，可以進(jìn)一步提高測(cè)定污染物的靈敏度。

本發(fā)明的薄層色譜耦合紅外技術(shù)分析煙草污染物的方法，對(duì)煙末樣品萃取，薄層層析分離以及紅外色譜篩查，操作過(guò)程簡(jiǎn)單，使用儀器簡(jiǎn)單。

附圖說(shuō)明

圖1為薄層色譜耦合紅外技術(shù)分析煙葉污染物操作流程示意圖；

圖2為污染樣品中污染物煙草樣品的紅外吸收光譜。

具體實(shí)施方式

為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將對(duì)本發(fā)明實(shí)施方式作進(jìn)一步地詳細(xì)描述。

實(shí)施例

本實(shí)施例中具體方案如下：

污染樣品檢測(cè)步驟如下：1)煙草樣品溶液的制備：稱取受污染煙末樣品1.000g到50mL三角瓶中，用20mL丙酮萃取煙末樣品，振蕩器150rpm條件下振蕩30min，過(guò)濾得含有污染物的煙草樣品溶液1；2)薄層層析：取含有污染物的煙草樣品溶液1在活化的熒光薄層板上點(diǎn)樣，點(diǎn)樣直徑不超過(guò)0.5cm，樣點(diǎn)間距離不低于1.5cm，點(diǎn)樣起點(diǎn)距底部邊緣至少1.5cm，把薄層板放入盛有丙酮展開(kāi)劑的展缸中展開(kāi)，薄層板浸入展開(kāi)劑深度不超過(guò)0.5cm，薄層板和展缸底部二面角大約在30°，展開(kāi)50min，展開(kāi)高度為13.2cm，用熱吹風(fēng)機(jī)干燥，然后用波長(zhǎng)為254nm紫外光檢測(cè)到在距離點(diǎn)樣點(diǎn)3cm處有亮斑，即污染物，把污染物的位置做好標(biāo)記，刮下污染物用丙酮萃取得含有污染物的樣品溶液2，樣品溶液2用于紅外光譜分析。3)紅外光譜檢測(cè)：將步驟2)中的樣品溶液2用紅外光譜分析，設(shè)置紅外光譜掃描波長(zhǎng)范圍4000～400㎝^-1，先進(jìn)行背景掃描，然后將樣品涂敷在測(cè)試部位，重復(fù)進(jìn)行樣品掃描3～5次，得到其紅外光譜圖；把不含污染物的煙草樣品經(jīng)過(guò)與含有污染物樣品同樣的處理，即樣品溶液制備，薄層層析處理后然后進(jìn)行紅外光譜分析。4)紅外光譜數(shù)據(jù)分析：比較正常煙草樣品與含有污染物煙草樣品紅外光圖譜，除去不含污染物的煙草樣品紅外光譜背景，從而確定污染物的紅外特征吸收峰如附圖2所示，確定本實(shí)施例中污染煙葉樣品中污染物具有三個(gè)特征峰：1710㎝^-1、1360㎝^-1、1225㎝^-1。5)污染物篩查：查找工具書(shū)找到如表1所示的特征波長(zhǎng)對(duì)應(yīng)結(jié)構(gòu)，根據(jù)污染物的特征峰查表確定污染物為帶苯環(huán)和羧基的化合物。

表1特征波長(zhǎng)對(duì)應(yīng)結(jié)構(gòu)