本發(fā)明屬于腸球菌質(zhì)譜檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種腸球菌質(zhì)譜庫(kù)、建立方法及用途。

背景技術(shù)：

腸球菌是人和動(dòng)物胃腸道的正常菌群，異位寄生易導(dǎo)致呼吸道和泌尿生殖道等部位的感染，是醫(yī)院感染的重要致病菌之一，同時(shí)作為廢水中的優(yōu)勢(shì)菌群，也是食品和飲用水中糞便污染的指示菌。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)腸球菌感染動(dòng)物的報(bào)道主要以感染糞腸球菌、屎腸球菌居多，腸球菌感染豬仔能引起一種高熱、皮下及實(shí)質(zhì)臟器腫大、出血為特征的傳染病，給養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

在藥物防治腸球菌的同時(shí)，腸球菌對(duì)現(xiàn)有抗生素能產(chǎn)生不同程度的抗藥性，其抗性基因通過(guò)食物鏈由動(dòng)物傳播給人或在其他細(xì)菌之間傳遞，這使得腸球菌快速準(zhǔn)確的鑒定顯得尤為重要，傳統(tǒng)的腸球菌鑒定方法主要有革蘭染色、細(xì)菌分離培養(yǎng)和生化試驗(yàn)等，但是這些鑒定方法的耗時(shí)長(zhǎng)、鑒定范圍有限，大大影響腸球菌的鑒定速度和準(zhǔn)確性，對(duì)腸球菌的控制有一定程度的阻礙。

基于輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDI-TOF MS）是近年來(lái)發(fā)展的用于病原微生物快速鑒定的一種方法。不同的細(xì)菌經(jīng)過(guò)MALDI-TOF MS檢測(cè)可以形成特異性的指紋圖譜，將待測(cè)細(xì)菌的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)圖譜庫(kù)進(jìn)行比較，即可鑒定細(xì)菌種屬。目前由于現(xiàn)有數(shù)據(jù)庫(kù)的信息不足，容易漏檢或造成假陽(yáng)性，對(duì)于腸球菌的全面準(zhǔn)確檢測(cè)造成嚴(yán)重的制約。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)上述問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種腸球菌質(zhì)譜庫(kù)及建庫(kù)方法，該質(zhì)譜庫(kù)具有較為全面的MALDI-TOF MS檢測(cè)數(shù)據(jù)庫(kù)中的腸球菌的質(zhì)譜圖，能夠?qū)Χ喾N腸球菌進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)，更加有利于腸球菌的早期防治；

本發(fā)明還提供了上述腸球菌質(zhì)譜庫(kù)在腸球菌檢測(cè)中的用途。

本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的

一種腸球菌質(zhì)譜庫(kù)，所述的腸球菌為HN1，HN4，HN5，HN6，HN8，HN9，HN10，HN11，HN12，HN13，HN16，HN17，HN18，HN19，HN22，HN26，及各個(gè)腸球菌對(duì)應(yīng)的MALDI-TOF MS質(zhì)譜圖。

所述的腸球菌質(zhì)譜庫(kù)，所述的腸球菌HN1，HN4，HN5，HN6，HN8，HN9，HN10，HN11，HN12，HN13，HN16，HN17，HN18，HN19，HN22，HN26均是從病死豬的內(nèi)臟中分離得到。

所述腸球菌質(zhì)譜庫(kù)的建立方法包括以下步驟：

（1） 使用常規(guī)的分離鑒定方法獲得腸球菌菌落樣品；

（2） 向EP離心管A中加入去離子水；然后取分離的單個(gè)菌落至離心管中，混合均勻后，加入無(wú)水乙醇，混合均勻；

（3） 將步驟（2）混合均勻的混合液放入離心機(jī)中以10000~13000rpm的轉(zhuǎn)速離心2~5分鐘，靜置，倒去上清；剩余的物質(zhì)再次進(jìn)行離心，在10000~13000rpm的轉(zhuǎn)速下離心2~5分鐘，移去殘余的上清液，將得到的沉淀在室溫下干燥2~4分鐘；

（4） 在步驟（3）干燥之后的沉淀中加入甲酸的水溶液，混合均勻；然后加入純乙腈，混合均勻后在10000~13000rpm的轉(zhuǎn)速下離心2~5分鐘，吸取上清液置于另一新的離心管B中；

（5）移取步驟（4）所述離心管B中的上清液1μl置于MALDI的靶板上，每個(gè)樣品做三個(gè)平行孔，在室溫下晾干，然后加上1μl HCCA基質(zhì)液覆蓋樣品，室溫晾干后上機(jī)，進(jìn)行數(shù)據(jù)圖譜的采集；

（6）分別取等體積的標(biāo)準(zhǔn)肽溶液與HCCA基質(zhì)液進(jìn)行混合，然后取1 μl混合液置于MALDI靶板上作為標(biāo)準(zhǔn)品，室溫晾干，待完全干燥后進(jìn)行檢測(cè)，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品各做三個(gè)平行孔，作為儀器的校準(zhǔn)品；

（7）在檢測(cè)器中放入已點(diǎn)好樣品和校準(zhǔn)品的靶板，打開(kāi)FlexControl，校準(zhǔn)儀器，首先用校準(zhǔn)品進(jìn)行系統(tǒng)誤差的校正，然后再進(jìn)行待測(cè)樣本的質(zhì)譜分析，通過(guò)Biotyper軟件進(jìn)行分析鑒定，得到每個(gè)樣品的指紋圖譜；

（8）建立數(shù)據(jù)庫(kù)：將步驟（7）得到的指紋圖譜進(jìn)行保存，然后用MALDI Biotyper打開(kāi)對(duì)圖譜的質(zhì)量進(jìn)行評(píng)估，除去低質(zhì)量的圖譜（即重復(fù)性的圖譜），完成建庫(kù)過(guò)程，得到自建庫(kù)。

步驟（8）所述自建庫(kù)的建立流程如下：

打開(kāi)MALDI Biotyper軟件，選中全部用于建庫(kù)的文件，點(diǎn)擊鼠標(biāo)右鍵，選擇Creat MSP

輸入正確的菌名，生成MSP之后，軟件右邊數(shù)據(jù)庫(kù)界面中的Unassigned MSPs由（0/0）變成（1/1），這說(shuō)明已經(jīng)將建好的MSP放進(jìn)了臨時(shí)數(shù)據(jù)庫(kù)內(nèi)；然后需要將自建的MSP加入到Projects自建庫(kù)里，選中軟件右邊界面Projects，點(diǎn)擊編輯按鈕，開(kāi)啟編輯菜單，在選中的Projects節(jié)點(diǎn)上點(diǎn)擊鼠標(biāo)右鍵，出現(xiàn)New Node，在此節(jié)點(diǎn)的下一級(jí)建立新的節(jié)點(diǎn)，將自建的數(shù)據(jù)庫(kù)名輸入，選取未分配的臨時(shí)數(shù)據(jù)庫(kù)添加到自建庫(kù)中，完成數(shù)據(jù)庫(kù)的自建。

所述腸球菌質(zhì)譜庫(kù)的建立方法，其中步驟（2）所述的EP離心管為1.5ml，所述EP離心管與去離子水的體積比為5：1；所述去離子水、無(wú)水乙醇與所取菌落的用量比為0.3ml：0.9ml：（5~10）mg。

所述腸球菌質(zhì)譜庫(kù)的建立方法，步驟（4）所述加入的70%的甲酸水溶液與步驟（1）所述加入的去離子水的體積比為1：6，所述加入的70%的甲酸水溶液與純乙腈的體積比為1：1。

上述腸球菌質(zhì)譜庫(kù)在細(xì)菌種屬鑒定中的應(yīng)用。

上述腸球菌質(zhì)譜庫(kù)的建立方法在細(xì)菌種屬鑒定中的應(yīng)用。

附圖說(shuō)明

圖1 為本發(fā)明所得自建庫(kù)中腸球菌HN1，HN4，HN5，HN8，HN9，HN10，HN12，HN18的指紋圖譜；

圖2 為本發(fā)明所得自建庫(kù)中腸球菌HN6，HN11，HN13，HN16，HN17，HN19，HN22，HN26的指紋圖譜；

圖3 為腸球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC33186的離子峰圖譜；

圖4 為標(biāo)準(zhǔn)腸球菌ATCC33186的可信度分值；

圖5 為疑似腸球菌YC1、YC2的MALDI-TOF MS檢測(cè)結(jié)果圖，圖中：上圖為疑似腸球菌YC1的圖譜，下圖為疑似腸球菌YC2的圖譜；

圖6 為疑似腸球菌YC1、YC2與自建庫(kù)和布魯克圖庫(kù)的可信度分值，圖中：左圖為疑似腸球菌YC1的結(jié)果，右圖為疑似腸球菌YC2的結(jié)果。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下積極有益效果

（1）本發(fā)明所述的由腸球菌指紋圖譜建立的數(shù)據(jù)庫(kù)用于腸球菌種屬的鑒定，能夠快速、準(zhǔn)確的確定腸球菌所屬種類，省時(shí)、省力；

（2）本發(fā)明通過(guò)對(duì)HN1，HN4，HN5，HN6，HN8，HN9，HN10，HN11，HN12，HN13，HN16，HN17，HN18，HN19，HN22，HN26腸球菌菌種的測(cè)定及數(shù)據(jù)庫(kù)的建立，對(duì)MALDI-TOF-MS建立的腸球菌數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行了補(bǔ)充和完善；盡管MALDI-TOF-MS用于微生物分類與鑒定的研究已有很多，但是針對(duì)腸球菌研究的報(bào)道卻不多見(jiàn)，尤其是腸球菌標(biāo)準(zhǔn)菌庫(kù)的建立更是空白，目前由于腸球菌現(xiàn)有數(shù)據(jù)庫(kù)信息不足，容易漏檢或者造成假陽(yáng)性，本發(fā)明通過(guò)對(duì)MALDI-TOF-MS建立的腸球菌數(shù)據(jù)庫(kù)的補(bǔ)充和完善避免了漏檢或假陽(yáng)性結(jié)果的產(chǎn)生，彌補(bǔ)了目前腸球菌現(xiàn)有數(shù)據(jù)庫(kù)信息的不足。

具體實(shí)施例

下面通過(guò)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更加詳細(xì)的說(shuō)明，但是并不用于限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。如無(wú)特殊說(shuō)明，實(shí)施例中所用試劑均為市售試劑。

實(shí)施例1

腸球菌的分離鑒定方法，包括以下步驟：

1）細(xì)菌的分離培養(yǎng)

在無(wú)菌條件下取病死豬的血液、肝、脾、腎、淋巴結(jié)組織的典型病料直接接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板和腦心萃取液瓊脂平板（BHIA）上，在37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24小時(shí)；

在BHIA瓊脂平板上生長(zhǎng)良好，37℃條件下培養(yǎng)24小時(shí)即能長(zhǎng)出灰白色、不透明、圓形、微凸、濕潤(rùn)、表面光滑、邊緣齊整的露珠狀小菌落，菌落的大小在1.5~2.0mm以上；

2）染色鏡檢

將采集的病死豬血液、肝、脾、腎、淋巴結(jié)組織和瓊脂平板上培養(yǎng)的細(xì)菌菌落直接涂片，革蘭染色后進(jìn)行鏡檢；

所有分離菌株均為G+球菌，細(xì)菌形態(tài)呈球形或卵圓形，呈單個(gè)、成對(duì)或鏈狀排列，鏈的長(zhǎng)短不一，短的4~6個(gè)，長(zhǎng)的十幾個(gè)；

3）細(xì)菌純化培養(yǎng)

挑取BHIA平板上的典型菌落，無(wú)菌接種到腦心萃取液態(tài)培養(yǎng)基（BHI）中進(jìn)行純化，將純的疑似腸球菌保存?zhèn)溆茫?/p>

4）16S rRNA鑒定方法

提取步驟3）純化培養(yǎng)的細(xì)菌DNA，進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

PCR反應(yīng)體系的總體積為50 μl，其中2× PCR TaqMix 10 μl （組成為 0.2 U Taq DNA Polymerase/μl；400 μM dNTP each；20 mM Tris-HCl，pH 8.7；100 mM KCl；3 mM MgCl2 )；兩種引物各 1μl；模板DNA 5 μl。最后補(bǔ)充雙蒸去離子水至50 μl 總?cè)萘浚?/p>

擴(kuò)增程序如下：95 ℃預(yù)變性5 min； 94 ℃、30 s，54 ℃、30 s，72 ℃、2 min，再行35個(gè)循環(huán)；最后于72 ℃延伸10 min；用蒸餾水作為陰性對(duì)照。擴(kuò)增的引物序列為：

正向引物F 5'-CCGAATTCGTCGACA ACAGAGTTTGATCATGGCTCAG-3'，

反向引物R 5'-CCCGGGATCCAAGCTTACGGTTACCTTGTTACGACTT-3'；

克隆并鑒定16S rRNA基因，核苷酸序列測(cè)定后通過(guò)NCBI網(wǎng)站的BLAST工具進(jìn)行DNA序列對(duì)比分析，得到菌株的所述類別，結(jié)果如表1所示：

上述16S rRNA檢測(cè)結(jié)果表明：HN1，HN4，HN5，HN6，HN8，HN9，HN10，HN11，HN12，HN13，HN16，HN17，HN18，HN19，HN22，HN26為腸球菌菌株，能夠用于MALDI-TOF MS數(shù)據(jù)庫(kù)的建立。

實(shí)施例2

該實(shí)施例為MALDI-TOF MS數(shù)據(jù)庫(kù)建立，包括以下步驟：

（1）取采用實(shí)施例1分離鑒定得到的腸球菌菌落樣品；

（2）向1.5ml EP離心管中加入300 μl去離子水，取步驟（1）準(zhǔn)備的待測(cè)菌落樣品的單個(gè)菌落5~10mg至離心管中，充分混勻；然后加入900 μl無(wú)水乙醇，充分混勻；

（3）將步驟（2）得到的混合溶液在13000 rpm條件下離心2min，倒去上清，得到沉淀物；將沉淀物再次進(jìn)行離心，13000rpm離心2min，用移液槍完全吸取殘余的上清液且不觸碰最終的沉淀，室溫下干燥最終得到的沉淀2~3min；

（4）在步驟（3）得到的最終沉淀中加入70%的甲醛水溶液50 μl，充分混勻 ，然后加入50 μl純乙腈，充分混勻；在13000rpm條件下離心2min，吸取上清液置于另一新的離心管中，備用；

（5）取步驟（4）備用的上清液1μl置于MALDI靶板上，室溫晾干，然后加上1μl HCCA基質(zhì)液覆蓋MALDI靶板上的樣品，室溫下晾干后上機(jī)進(jìn)行數(shù)據(jù)圖譜的采集；

所有樣品用同樣的方法進(jìn)行數(shù)據(jù)圖譜的采集，每個(gè)樣品在MALDI靶板上做三個(gè)平行孔；

（6）分別取等體積的標(biāo)準(zhǔn)肽溶液與HCCA基質(zhì)液進(jìn)行混合，然后取1μl 混合液置于MALDI靶板上作為標(biāo)準(zhǔn)品，室溫晾干，待完全干燥后上機(jī)進(jìn)行數(shù)據(jù)圖譜采集，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品各做三個(gè)平行孔；作為校準(zhǔn)品；

（7）在檢測(cè)器中放入已點(diǎn)好樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的靶板，打開(kāi)FlexControl，校準(zhǔn)儀器，首先用校準(zhǔn)品進(jìn)行系統(tǒng)誤差的校正，然后再進(jìn)行待測(cè)樣本及標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)譜分析，通過(guò)Biotyper軟件進(jìn)行分析鑒定，得到每個(gè)樣品的指紋圖譜；如圖1、圖2所示；

（8）將步驟（7）得到的待測(cè)樣品的指紋圖譜進(jìn)行保存，然后用MALDI Biotyper軟件打開(kāi)，輸入保存的數(shù)據(jù)圖譜文件，選中全部用于建庫(kù)的文件，點(diǎn)擊鼠標(biāo)右鍵，選擇Show Normalized Spectra in Gelview，查看用于自建庫(kù)的質(zhì)譜圖的重復(fù)性，對(duì)圖譜的質(zhì)量進(jìn)行評(píng)估，除去低質(zhì)量的圖譜（實(shí)際就是重復(fù)性的圖譜），即完成建庫(kù)過(guò)程，得到自建庫(kù)。

步驟（8）所述自建庫(kù)的完成過(guò)程如下：

打開(kāi)MALDI Biotyper軟件，選中全部用于建庫(kù)的文件，點(diǎn)擊鼠標(biāo)右鍵，選擇Creat MSP

輸入正確的菌名，生成MSP之后，軟件右邊數(shù)據(jù)庫(kù)界面中的Unassigned MSPs由（0/0）變成（1/1），這說(shuō)明已經(jīng)將建好的MSP放到了臨時(shí)數(shù)據(jù)庫(kù)內(nèi)；然后需要將自建的MSP加入到Projects自建庫(kù)里，選中軟件右邊界面Projects，點(diǎn)擊編輯按鈕，開(kāi)啟編輯菜單，在選中的Projects節(jié)點(diǎn)上點(diǎn)擊鼠標(biāo)右鍵，出現(xiàn)New Node，在此節(jié)點(diǎn)的下一級(jí)建立新的節(jié)點(diǎn)，將自建的數(shù)據(jù)庫(kù)名輸入，選取未分配的臨時(shí)數(shù)據(jù)庫(kù)添加到自建庫(kù)中，完成數(shù)據(jù)庫(kù)的自建。

將腸球菌與自建庫(kù)中腸球菌指紋圖譜比較，可信度大于2.3。實(shí)施例1利用16S rRNA檢測(cè)HN1，HN4，HN5，HN6，HN8，HN9，HN10，HN11，HN12，HN13，HN16，HN17，HN18，HN19，HN22，HN26得到的檢測(cè)表1結(jié)果與該實(shí)施例2得到的自建庫(kù)中腸球菌HN1，HN4，HN5，HN6，HN8，HN9，HN10，HN11，HN12，HN13，HN16，HN17，HN18，HN19，HN22，HN26的指紋圖譜檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，結(jié)果一致。

實(shí)施例3

布魯克圖庫(kù)（即全自動(dòng)快速質(zhì)譜微生物鑒定系統(tǒng)，型號(hào)為BD Biotyper 軟件中自帶的腸球菌標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌圖庫(kù)）與實(shí)施例2所述的自建庫(kù)對(duì)腸球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC33186的驗(yàn)證，包括以下步驟：

（1）腸球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC33186的培養(yǎng)

將腸球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC33186在BHI肉湯中活化，在劃線接種到腦心萃取液瓊脂平板（BHIA）上，37℃條件下培養(yǎng)24小時(shí)，然后選取單個(gè)菌落備用；

（2）MALDI-TOF MS鑒定

①.向1.5ml EP離心管中加入300 μl去離子水，然后加入步驟（1）得到的腸球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC33186的單個(gè)菌落5~10mg，充分混勻，再加入900 μl無(wú)水乙醇，充分混勻，在13000rpm條件下離心2min，倒去上清液，剩余沉淀；然后再次對(duì)沉淀在13000rpm條件下離心2min，用移液槍完全吸取殘余的上清液，最終剩余的沉淀在室溫下干燥2~3min；

②.在步驟①最終得到的沉淀中加入70%的甲醛水溶液50 μl，充分混勻，然后加入50 μl的純乙腈，充分混勻，在13000rpm條件下離心2min，離心之后吸取上清液置于另一新的離心管中，備用；

③.取步驟②備用的上清液1 μl置于MALDI靶板上，室溫下晾干，然后點(diǎn)1μl HCCA基質(zhì)液覆蓋上清液樣品，室溫下晾干之后上機(jī)進(jìn)行數(shù)據(jù)圖譜采集，每個(gè)樣品點(diǎn)三個(gè)平行孔進(jìn)行數(shù)據(jù)圖譜采集；如圖3所示；

④.分別取等體積的標(biāo)準(zhǔn)肽溶液和HCCA基質(zhì)溶液均勻混合，然后取1μl混合液置于MALDI靶板上，室溫下晾干，完全干燥后上機(jī)進(jìn)行數(shù)據(jù)圖譜采集，每個(gè)樣品做三個(gè)平行孔，作為校準(zhǔn)品；

⑤.將已經(jīng)點(diǎn)好腸球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC33186和點(diǎn)好校準(zhǔn)品的靶板，放入質(zhì)譜儀中，開(kāi)始操作，用FlexControl軟件做質(zhì)譜分析，先用校準(zhǔn)品進(jìn)行系統(tǒng)誤差校正，然后再進(jìn)行腸球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC33186樣品的質(zhì)譜分析；

將采集到的腸球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC33186的圖譜與布魯克圖庫(kù)和自建庫(kù)中得到的圖譜進(jìn)行對(duì)比，標(biāo)準(zhǔn)腸球菌ATCC33186的可信度分值如圖4所示，結(jié)果如下：標(biāo)準(zhǔn)菌株與自建庫(kù)中糞腸球菌河南株N5的分值為2.434，N9的分值為2.403，N4的分值為2.384，N8的分值為2.372，N1的分值為2.370，N12的分值為2.364，以上6株河南株的可信度分值均大于2.3，表明鑒定結(jié)果的可信度很高，說(shuō)明本發(fā)明的自建庫(kù)對(duì)于腸球菌的鑒定準(zhǔn)確、高效，具有較好的應(yīng)用前景。

實(shí)施例4

疑似腸球菌YC1、YC2的分離與鑒定

（1）疑似腸球菌YC1、YC2的分離及純化

①.疑似腸球菌的YC1的分離培養(yǎng)：在無(wú)菌條件下取病死豬的肝、脾組織的典型病料用接種環(huán)直接接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板和腦心萃取液瓊脂平板（BHIA）上，在37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24小時(shí)，

在BHIA瓊脂平板上生長(zhǎng)良好，37℃條件下培養(yǎng)24小時(shí)即能長(zhǎng)出灰白色、不透明、圓形、微凸、濕潤(rùn)、表面光滑、邊緣齊整的露珠狀小菌落，菌落的大小在1.5~2.0mm以上；

②.染色鏡檢：將采集的病死豬的肝、脾組織和營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上培養(yǎng)的細(xì)菌菌落直接涂片，革蘭染色后進(jìn)行鏡檢；

所有分離菌株均為G+球菌，細(xì)菌形態(tài)呈球形或卵圓形，呈單個(gè)、成對(duì)或鏈狀排列，鏈的長(zhǎng)短不一，短的4~6個(gè)，長(zhǎng)的十幾個(gè)；

③.分離純化：挑取BHIA平板上的典型菌落，接種到腦心萃取液態(tài)培養(yǎng)基（BHI）中進(jìn)行純化，將純化的疑似腸球菌用MALDI-TOF MS方法進(jìn)行檢測(cè)；

疑似腸球菌YC2采用與疑似腸球菌YC1相同的方法進(jìn)行分離純化，并采用MALDI-TOF MS方法進(jìn)行檢測(cè)；

（2）所述MALDI-TOF MS檢測(cè)方法，步驟如下：首先采用與實(shí)施例2相同的方法采集得到疑似腸球菌YC1、疑似腸球菌YC2的指紋圖譜，如圖5所示；

然后將疑似腸球菌YC1與布魯克圖譜和自建庫(kù)可信度進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果如圖6所示：疑似腸球菌YC1與自建庫(kù)中河南株N4的可信度分值最高為2.474，與布魯克庫(kù)中的標(biāo)準(zhǔn)株匹配度分值為2.299，疑似腸球菌YC2與自建庫(kù)中河南株N11的可信度分值最高為2.454，與布魯克圖庫(kù)中的標(biāo)準(zhǔn)株匹配度分值為2.332，表明鑒定結(jié)果的可信度很高，說(shuō)明該自建庫(kù)能夠?qū)σ伤颇c球菌進(jìn)行準(zhǔn)確、高效的鑒定。