本發(fā)明屬于豆?jié){生熟度檢測(cè)工藝，具體為一種快速檢測(cè)豆?jié){生熟度的工藝。

背景技術(shù)：

近年來，豆?jié){作為與牛奶一樣的蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)飲品，憑借其“優(yōu)質(zhì)植物蛋白來源”，越來越受到老百姓的喜愛。豆?jié){其營(yíng)養(yǎng)豐富，含有豐富的優(yōu)質(zhì)大豆蛋白。大豆蛋白質(zhì)氨基酸組成比例是植物性食物中最合理、最接近于人體所需比例的，屬于優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)。世界衛(wèi)生組織(WHO)1985年正式認(rèn)可大豆蛋白質(zhì)和優(yōu)質(zhì)動(dòng)物蛋白相當(dāng)。1999年，美國(guó)食品藥物管理局(FDA)發(fā)布公告宣稱，“每日攝取大豆蛋白25g可降低血液中的膽固醇含量，有效預(yù)防心血管病”。大豆蛋白質(zhì)作為天然、健康食品的理念得到廣泛認(rèn)同。大豆蛋白相對(duì)于肉、魚、牛奶等來源的蛋白質(zhì)，價(jià)格較低，可解決貧困地區(qū)蛋白質(zhì)缺乏的問題，同時(shí)也減少了動(dòng)物蛋白帶來的諸多弊病。豆?jié){不僅富含優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)，還含有不飽和脂肪酸、維生素和礦物質(zhì)等多種營(yíng)養(yǎng)成分，而且含有異黃酮、大豆皂甙、大豆低聚糖和卵磷脂等具有顯著保健功能的特殊保健因子。

根據(jù)中國(guó)豆制品專業(yè)委員會(huì)的統(tǒng)計(jì)顯示，我國(guó)每年豆?jié){的消費(fèi)量約占傳統(tǒng)豆制品消費(fèi)總量的10％，2012年全國(guó)用于豆制品的大豆消費(fèi)量約600萬噸，豆?jié){的消費(fèi)量為60萬噸左右(該數(shù)據(jù)不包括消費(fèi)者自制豆?jié){及散裝豆?jié){)。并且現(xiàn)在世界上越來越多的國(guó)家已經(jīng)注意到豆?jié){對(duì)健康的重要性，歐美等地區(qū)也在陸續(xù)開拓豆?jié){的市場(chǎng)。美國(guó)這樣一個(gè)在過去很長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)僅僅把大豆作為榨油原料的國(guó)家也已完全改變了看法，提倡多食用豆?jié){，以減少食用動(dòng)物食品蛋白質(zhì)帶來的諸多弊病。

在豆?jié){日益受歡迎的同時(shí)，豆?jié){的安全問題備受消費(fèi)者和社會(huì)各界的極大關(guān)注。豆?jié){中毒癥狀主要表現(xiàn)為腹痛、惡心，少數(shù)有低燒、嘔吐和腹瀉，有的伴有頭暈等癥狀?，F(xiàn)有不少關(guān)于學(xué)校集體食物中毒案件的報(bào)道，其中由于飲食豆?jié){而引起的中毒事件不在少數(shù)。2002年廣東梅州嘉應(yīng)大學(xué)的100多名學(xué)生因喝了食堂供應(yīng)的豆?jié){而中毒，學(xué)生先后出現(xiàn)嘔吐、頭昏頭痛、呼吸困難、胸悶等；前不久河北省舒城縣千人橋鎮(zhèn)30名學(xué)生因在校外喝過豆?jié){，先后發(fā)生嘔吐反應(yīng)等等。當(dāng)?shù)匦l(wèi)生局、衛(wèi)生防疫站和醫(yī)院進(jìn)行調(diào)查發(fā)現(xiàn)中毒原因是豆?jié){未煮熟所致。

大豆?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)很高，但也含有一些對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有破壞作用或引起胃腸反應(yīng)的化學(xué)物質(zhì)，我們把它統(tǒng)稱為抗?fàn)I養(yǎng)因子(anti-nutritionalfactors，ANF)。這些物質(zhì)在食用前必須經(jīng)過處理后，大豆才能發(fā)揮有效的營(yíng)養(yǎng)作用，也才能防止可能造成的危害。大豆中重要的抗?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)有以下幾種：植酸、蛋白酶抑制劑、皂角素、植物血球凝集素、棉子糖合成酶等。植酸廣泛地存在于植物種子中，能與金屬離子形成不溶性的植酸鹽，從而影響了人們對(duì)礦物質(zhì)的吸收。蛋白質(zhì)酶抑制劑，可以抑制體內(nèi)胰蛋白酶等十幾種消化酶的流活性，其代表為脲酶、胰蛋白酶抑制劑等，它能抑制蛋白酶對(duì)蛋白質(zhì)的消化吸收。皂角素，對(duì)消化道粘膜有強(qiáng)烈的刺激性，人吃了沒有煮熟的大豆或豆?jié){，常會(huì)產(chǎn)生惡心、嘔吐、腹瀉等癥狀，就是由于皂角素沒有完全破壞所引起。植物血球凝集素，可使人體細(xì)胞凝集，但加熱即可被破壞，或在體內(nèi)經(jīng)蛋白酶作用也可使其失去活性，不致被腸道吸收后引起凝血。棉子糖合成酶，它進(jìn)入人體后，可以合成大量低聚糖，如棉子糖、水蘇糖等。這些糖不能被子人體吸收，大部分在腸中被細(xì)菌分解利用，同時(shí)產(chǎn)生大量二氧化碳、氫和甲烷。所以，多吃大豆后肚子容易脹氣。以上這些大豆中的抗?fàn)I養(yǎng)因子都是熱敏型的抗?fàn)I養(yǎng)因素，因此若采用恰當(dāng)?shù)募訜岱绞娇梢詫⑦@些抗?fàn)I養(yǎng)因子的危害大大降低。

豆?jié){中毒原因之一是由于不良商販的黑心行為所造成，更重要的是由于豆?jié){存在“假沸”現(xiàn)象，即原料豆在豆?jié){機(jī)研磨下，產(chǎn)生大量的泡沫，一方面影響了豆?jié){間的熱交換和熱傳導(dǎo)，使得豆?jié){并未在高溫下持續(xù)均勻受熱而使得其中的有毒物質(zhì)未完全失活；另一方面由于“假沸”現(xiàn)象的誤導(dǎo)，在豆?jié){還沒達(dá)到煮沸溫度就產(chǎn)生泡沫而提前結(jié)束加熱。這些中毒事件都與抗?fàn)I養(yǎng)因子(如脲酶、胰蛋白酶抑制劑等)未徹底滅活具有一定關(guān)系。

因?yàn)榭範(fàn)I養(yǎng)因子未完全破壞時(shí)會(huì)影響人體的正常生理代謝過程，使得豆?jié){及其它豆制品的市場(chǎng)利用率受到嚴(yán)重限制，甚至影響到其安全性和食品品質(zhì)。同時(shí)這造成消費(fèi)者的不信任心理，大大影響了其市場(chǎng)銷量，因此如何準(zhǔn)確判斷出豆?jié){的生熟度尤為重要。不少的研究報(bào)告已證實(shí),豆?jié){中脲酶的失活溫度高于抗?fàn)I養(yǎng)因子的失活溫度，同時(shí)要分別檢測(cè)這些抗?fàn)I養(yǎng)因子的難度很高，有些抗?fàn)I養(yǎng)因子甚至沒有可行的檢測(cè)方法，因此我們通過檢測(cè)脲酶的活性可判斷這些抗?fàn)I養(yǎng)因子的失活情況，亦可作為判斷豆?jié){生熟度的標(biāo)準(zhǔn)。

現(xiàn)有的脲酶活性檢測(cè)方法只適用于在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)檢驗(yàn)，生豆?jié){中脲酶活性含量很高,但因存放溫度高低、時(shí)間長(zhǎng)短容易導(dǎo)致其發(fā)生變化，更可因豆?jié){變質(zhì)使脲酶破壞，從而難以判斷原始豆?jié){樣品的脲酶活性強(qiáng)弱。有研究表明，將脲酶陽性的85℃豆?jié){用保暖瓶存放半小時(shí)后漿溫降至82℃，脲酶已經(jīng)轉(zhuǎn)陰；而將脲酶強(qiáng)陽性的80℃豆?jié){用保暖瓶保溫150分鐘后漿溫降至75℃而脲酶也已轉(zhuǎn)陰。因此豆?jié){采樣、送驗(yàn)要求高，一般以低溫快速為佳。市售豆?jié){現(xiàn)場(chǎng)采樣的豆?jié){常為熱的樣品，故應(yīng)在現(xiàn)場(chǎng)設(shè)法使?jié){樣冷卻，保溫送驗(yàn)可致檢驗(yàn)結(jié)果失真。實(shí)驗(yàn)室收到樣品后也應(yīng)低溫放置并盡快及時(shí)檢驗(yàn)，久置則可造成結(jié)果不準(zhǔn)確。

因此脲酶現(xiàn)場(chǎng)快檢技術(shù)的研發(fā)具有重要的意義，首先應(yīng)用在食品監(jiān)管上可以確保在采樣源頭對(duì)豆?jié){樣品的脲酶活性進(jìn)行定性分析，減少因運(yùn)輸和儲(chǔ)藏過程不當(dāng)導(dǎo)致結(jié)果的失真；其次對(duì)生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品質(zhì)控可以快速檢測(cè)、實(shí)時(shí)監(jiān)控；同時(shí)可以家庭自制豆?jié){具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。因而若開發(fā)出脲酶現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)試劑盒、試紙來應(yīng)用到市場(chǎng)流通領(lǐng)域的抽檢、超市、餐廳或校園周邊、市街散賣以及家庭自制豆?jié){有毒性的檢測(cè)，對(duì)于食品安全的監(jiān)管、廣大群眾的食品安全保障具有重大意義。

目前脲酶的測(cè)定方法主要有國(guó)標(biāo)納氏試劑法、光電比色法、pH增值法、氨氣敏電極法等。

國(guó)標(biāo)法：是利用脲酶水解尿素產(chǎn)生的氨，在適當(dāng)條件下能與納氏試劑中的碘化鉀汞復(fù)鹽作用生成棕色的碘化雙汞銨。國(guó)標(biāo)法靈敏度較高，但過程復(fù)雜、耗時(shí)也較長(zhǎng)且所用的試劑具有劇毒，只適宜于在專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行操作，因此不適合于用來快檢。

光電比色法：原理同國(guó)標(biāo)法，脲酶在一定條件下，可水解尿素生成銨，在堿性條件下，銨鹽轉(zhuǎn)化成為氨，其與納氏試劑反應(yīng)生成黃棕色絡(luò)合物，其色度與脲酶活性成正比。采用光電比色法可定量測(cè)定脲酶活性的高低，其測(cè)定方法穩(wěn)定性好，結(jié)果可靠，但整個(gè)操作耗時(shí)長(zhǎng)，在2h左右，不便應(yīng)用于現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)。且由于酶活性受溫度、時(shí)間影響較大，從定量考慮，操作過程從往樣品中加入尿素、水浴保溫至使脲酶滅活，水浴溫度、時(shí)間一定要準(zhǔn)確，否則容易失真。并且測(cè)定體系容易受到鈣、鎂、鐵等因素的干擾。所以也不適合快檢。

pH增值法：尿素被樣品中的脲酶催化分解產(chǎn)生氨，導(dǎo)致溶液pH增加，增加的程度與脲酶活性大小呈正相關(guān)，因此可以用其與空白溶液的差值表示脲酶活性高低。陶順興等人利用pH計(jì)根據(jù)豆?jié){中脲酶催化尿素分解的原理測(cè)定豆?jié){pH值的變化的大小來判斷生熟豆?jié){，雖然該法的操作較為簡(jiǎn)單，所用的試劑也少，但是該法的檢出限較低，需要精密的pH計(jì)，不適合市面的廣泛推廣。

同時(shí)目前市面上也有在售的脲酶快檢試劑盒，但是通過試驗(yàn)不難發(fā)現(xiàn)市售的脲酶快速檢測(cè)試劑盒存在以下幾個(gè)方面的問題：①有些試劑盒保質(zhì)期較短；②有些在樣品中加入試劑后的顯色時(shí)間較長(zhǎng)，有的甚至需要15-30分鐘，不能達(dá)到快檢的目的；③有些顯色不明顯，難以觀察判定；④所用試劑有較強(qiáng)的腐蝕性，安全性不高。同時(shí)最重要的是目前市面上還沒出現(xiàn)脲酶快檢試紙，試紙不光在操作上還是安全性方面均比試劑加入法有明顯的優(yōu)勢(shì)，這也是本發(fā)明專利的一大亮點(diǎn)。

現(xiàn)國(guó)內(nèi)外關(guān)于脲酶快速檢測(cè)技術(shù)的研究甚少，基本上也是在實(shí)驗(yàn)室中通過國(guó)標(biāo)法對(duì)脲酶活性的測(cè)定，而市面上的快檢試劑盒或多或少存在保質(zhì)期時(shí)間短或者反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)或者試劑具有腐蝕性等缺點(diǎn)，并且脲酶快檢試紙還尚未成熟。因而若開發(fā)出一種顯色快速、明顯，保質(zhì)期長(zhǎng)且低毒的脲酶快檢試劑盒以及豆?jié){生疏度的快檢試紙來應(yīng)用到市場(chǎng)流通領(lǐng)域的抽檢、超市、餐廳或校園周邊、市街散賣以及家庭自制豆?jié){有毒性的檢測(cè)，對(duì)于食品安全的監(jiān)管、廣大群眾的食品安全保障具有重大意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種快速檢測(cè)豆?jié){生熟度的工藝，解決背景技術(shù)中的問題。

本發(fā)明采用以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

本發(fā)明擬在現(xiàn)有脲酶活性的國(guó)標(biāo)測(cè)定方法基礎(chǔ)上，根據(jù)尿素在脲酶的催化作用下生成碳酸銨，碳酸銨不穩(wěn)定在常溫下分解生成氨氣使體系由中性變成堿性而使酸堿指示劑變色的原理，來建立一種新型快速、適用于豆?jié){中脲酶現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)的新技術(shù)，其中包括脲酶活性現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)試紙、試劑盒。反應(yīng)過程如下：

(NH₄)₂CO₃+2NaOH→NaCO₃+NH₄OH

NH₄OH→NH₃+H₂O→酸堿指示劑變色

利用脲酶對(duì)尿素的催化分解成氨導(dǎo)致體系的pH升高，且在底物含量一定的條件下pH升高的快慢與脲酶的含量呈正比的原理，對(duì)豆?jié){中脲酶活性檢測(cè)進(jìn)行研究，通過選擇合適的酸堿指示劑，優(yōu)化試劑的配比，以及反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度等參數(shù)制定對(duì)脲酶活性強(qiáng)弱的判定依據(jù)，開發(fā)一種操作簡(jiǎn)便快捷、靈敏度低、能實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)快速篩查毒豆?jié){的檢測(cè)方法，同時(shí)創(chuàng)造性得制備了豆?jié){脲酶快速檢測(cè)試紙，應(yīng)用更為便捷。

一種快速檢測(cè)豆?jié){生熟度的工藝，包括以下步驟：

S1：制備試劑1：稱取0.1g苯酚紅粉末，加入1-2mL摩爾濃度為0.1mol/L的氫氧化鈉溶液使苯酚紅粉末溶解，再用蒸餾水定容至250mL，搖勻即可，苯酚紅溶液的pKHIn值為6.8-8.4；

S2：制備試劑2：用蒸餾水和尿素顆粒配制成質(zhì)量濃度為5％-10％的尿素溶液；

S3：制備試紙：將試劑1和試劑2按照1:1的比例混合均勻，將裁剪成條狀的濾紙條完全浸沒于該混合溶液中，浸泡吸收5-10分鐘后，用鑷子夾取出，于通風(fēng)處自然干燥，制成試紙，并避光密封于試紙罐中；

S4：試紙法豆?jié){脲酶活性的測(cè)定：用1mL的一次性塑料吸管吸取待測(cè)樣品滴2～3滴樣品于試紙上，若該樣品為未煮熟的生豆?jié){，則其中的脲酶會(huì)催化試紙上附著的尿素產(chǎn)生氨氣，而氨氣溶于樣品溶液中致使溶液pH增高，而使試紙上的苯酚紅變色，同時(shí)變化后的顏色隨著豆?jié){的生熟度而不同，越生的豆?jié){脲酶活性越強(qiáng)，試紙變色得越快顏色也越紅；而脲酶活性為弱陽性的豆?jié){，試紙變色得越慢，顏色也越淺；其中反應(yīng)過程如下：

(NH₄)₂CO₃+2NaOH→NaCO₃+NH₄OH

NH₄OH→NH₃+H₂O→酸堿指示劑變色。

本發(fā)明中，試紙法豆?jié){脲酶活性的測(cè)定過程中，對(duì)試紙的讀取應(yīng)該在20min內(nèi)完成。

一種快速檢測(cè)豆?jié){生熟度的工藝，包括以下步驟：

S1：制備試劑1：稱取0.1g苯酚紅粉末，加入1-2mL摩爾濃度為0.1mol/L的氫氧化鈉溶液使苯酚紅粉末溶解，再用蒸餾水定容至250mL，搖勻即可，苯酚紅溶液的pKHIn值為6.8-8.4；

S2：制備試劑2：用蒸餾水和尿素顆粒配制成質(zhì)量濃度為5％-10％的尿素溶液；

S3：試劑法豆?jié){脲酶活性的測(cè)定：用1mL的一次性塑料吸管吸取1mL豆?jié){試樣于2mL的一次性塑料離心管中，先滴加1滴試劑1，振搖均勻，觀察豆?jié){顏色；再滴加1滴試劑2；振搖均勻，觀察豆?jié){顏色變化，記錄滴加試劑2后豆?jié){的顏色由黃變?yōu)槊导t色的時(shí)間；對(duì)照環(huán)境的溫度以及豆?jié){變色所需要的時(shí)間，可以直接讀取該豆?jié){的脲酶活性強(qiáng)弱；脲酶活性越強(qiáng)，顏色變化越迅速，活性越弱，顏色變化越慢，且脲酶陰性的樣品不變色，其中反應(yīng)過程如下：

(NH₄)₂CO₃+2NaOH→NaCO₃+NH₄OH

NH₄OH→NH₃+H₂O→酸堿指示劑變色。

有益效果：本發(fā)明通過研究發(fā)現(xiàn)，豆?jié){中的脲酶能催化尿素形成氫氧化銨，從而使苯酚紅指示劑由黃色變?yōu)榧t色，顏色與脲酶的活性成正相關(guān)。本發(fā)明基于上述研究，做出了一種用快速檢測(cè)豆?jié){中脲酶活性的試劑盒和試紙，該試劑盒和試紙可適用于檢測(cè)豆?jié){生熟度的重要指標(biāo)為脲酶活性，為脲酶活性的快速檢測(cè)提供了一種新方法。本發(fā)明的試劑盒和試紙可現(xiàn)場(chǎng)操作，無需其他特殊試劑和儀器，通過對(duì)比顯色卡，能在一分鐘左右得出檢測(cè)結(jié)果，相比于國(guó)標(biāo)方法所用儀器試劑多、步驟繁雜，本發(fā)明具有方便、直觀、快速等優(yōu)點(diǎn)，能夠幫助使用者迅速判斷出豆?jié){中的脲酶活性。本發(fā)明的試劑盒和試紙?jiān)诔叵戮涂梢允褂茫跍囟葹?0℃-40℃的條件下使用效果最好，而相比于國(guó)標(biāo)方法需要在40℃水浴中保溫20min，以及其他快檢方法需要用手捂熱15min以上，本發(fā)明的使用更加簡(jiǎn)便。本發(fā)明通過研究發(fā)現(xiàn)，試劑盒對(duì)脲酶活性檢測(cè)的靈敏度高，相比于其他快速檢測(cè)方法，苯酚紅顯色更加明顯，檢測(cè)脲酶活性為：強(qiáng)陽性、次強(qiáng)陽性、陽性、弱陽性、陰性的不同樣品時(shí)，顏色有明顯差別，即使將生豆?jié){稀釋至0.1％時(shí)，用國(guó)標(biāo)法驗(yàn)證為脲酶弱陽性，仍能清楚地辨別出顏色的不同，說明該試劑盒具有較高的準(zhǔn)確性和靈敏性。本發(fā)明的試劑盒和試紙制備方法簡(jiǎn)單，易于操作，適合大批量的生產(chǎn)，而且無需通過特殊的方法進(jìn)行保存，在常溫干燥條件保存即可。試紙的保質(zhì)期較長(zhǎng)，能達(dá)到一年以上。

具體實(shí)施方式

為了使本發(fā)明實(shí)現(xiàn)的技術(shù)手段、創(chuàng)作特征、達(dá)成目的與功效易于明白了解，下面結(jié)合實(shí)例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。

實(shí)施例1

制備試劑1：通過對(duì)比不同的酸堿指示劑，根據(jù)豆?jié){pH范圍一般為6.5-7.5，因此選擇pKHIn值為6.8～8.4的苯酚紅溶液來作為指示劑。當(dāng)樣品溶液的pH由酸性變成堿性時(shí)，溶液的顏色為黃色變?yōu)榧t色，且顏色的轉(zhuǎn)變很明顯。該指示劑溶液的配制為：稱取0.1g左右苯酚紅粉末，加入1～2mL 0.1mol/L氫氧化鈉溶液使苯酚紅粉末溶解，再用蒸餾水定容至250mL，搖勻即可；制備試劑2：5％～10％尿素溶液。用蒸餾水配制即可；制備試紙：將適量尿素粉末溶解于苯酚紅溶液中，完全溶解后搖勻，或者分別將配制好的尿素溶液和苯酚紅溶液按一定比例混合，將裁剪成條狀的濾紙條完全浸沒于該混合溶液中。浸泡吸收5～10分鐘后，用鑷子夾取出，于通風(fēng)處自然干燥，制成試紙，并避光密封于該試劑盒中的試紙罐中；試紙法豆?jié){脲酶活性的測(cè)定：試紙上附著有苯酚紅和尿素的混合試劑，在使用試紙時(shí)，用提供的1mL一次性塑料吸管吸取待測(cè)樣品滴2～3滴樣品于試紙上。若該樣品為未煮熟的生豆?jié){，則其中的脲酶會(huì)催化試紙附著的尿素產(chǎn)生氨氣，而氨氣溶于樣品溶液中致使溶液pH增高，而使試紙上的苯酚紅變色。同時(shí)變化后的顏色隨著豆?jié){的生疏度而不同，越生的豆?jié){脲酶活性越強(qiáng)，試紙變色得越快顏色也越紅；而脲酶活性為弱陽性的豆?jié){，試紙變色得越慢，顏色也越淺。根據(jù)試紙的顏色對(duì)照試劑盒中提供的比色卡，讀取豆?jié){的脲酶活性強(qiáng)弱。脲酶活性越強(qiáng)，則豆?jié){越生，毒性越大。例如實(shí)驗(yàn)中分別取不同脲酶活性的豆?jié){試樣滴在試劑盒中提供的快檢試紙上，觀察試紙的顏色變化，根據(jù)試紙變化后的顏色對(duì)照比色卡的顏色，可以直觀地讀取出不同豆?jié){樣品的脲酶活性強(qiáng)弱，但是值得注意的是，生成的氨氣有揮發(fā)性，當(dāng)試紙上的水分揮干后，變紅色的部分會(huì)褪色重新呈黃色，而使實(shí)驗(yàn)失真，因此，在使用試紙法對(duì)豆?jié){脲酶活性進(jìn)行測(cè)試時(shí)，應(yīng)在20min 內(nèi)完成對(duì)試紙顏色的讀取，時(shí)間延長(zhǎng)或者試紙干燥后顏色會(huì)褪去，從而影響結(jié)果的判斷。

實(shí)施例2

制備試劑1：通過對(duì)比不同的酸堿指示劑，根據(jù)豆?jié){pH范圍一般為6.5-7.5，因此選擇pKHIn值為6.8～8.4的苯酚紅溶液來作為指示劑。當(dāng)樣品溶液的pH由酸性變成堿性時(shí)，溶液的顏色為黃色變?yōu)榧t色，且顏色的轉(zhuǎn)變很明顯。該指示劑溶液的配制為：稱取0.1g左右苯酚紅粉末，加入1～2mL 0.1mol/L氫氧化鈉溶液使苯酚紅粉末溶解，再用蒸餾水定容至250mL，搖勻即可；制備試劑2：5％～10％尿素溶液。用蒸餾水配制即可；試劑法豆?jié){脲酶活性的測(cè)定：用試劑盒中1mL的一次性塑料吸管吸取1mL豆?jié){試樣于提供的2mL一次性塑料離心管中，先滴加1滴試劑1，振搖均勻，觀察豆?jié){顏色。再滴加1滴試劑2，振搖均勻，觀察豆?jié){顏色變化，記錄滴加試劑2后豆?jié){的顏色由黃變?yōu)槊导t色的時(shí)間。參見表1，不同溫度下不同脲酶活性豆?jié){的顯色時(shí)間卡，根據(jù)試劑盒中提供的顯色時(shí)間卡，對(duì)照環(huán)境的溫度以及豆?jié){變色所需要的時(shí)間，可以直接讀取該豆?jié){的脲酶活性強(qiáng)弱?；钚栽綇?qiáng)，顏色變化越迅速，活性越弱，顏色變化越慢，且脲酶陰性的樣品不變色。

表1：不同溫度下不同脲酶活性豆?jié){的顯色時(shí)間卡

例如，要測(cè)試一份豆?jié){樣品的生熟度，可在20℃左右的室溫條件下，加入試劑1搖勻后再加入試劑2后開始記錄豆?jié){的顏色變化。若豆?jié){顏色變?yōu)槊导t色需要的時(shí)間約1min，則根據(jù)表1可以讀取該豆?jié){的脲酶活性為陽性，是一份未煮熟的豆?jié){，不得食用。根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，豆?jié){的脲酶活性只有為陰性時(shí)才是符合標(biāo)準(zhǔn)的，因此，若往豆?jié){樣品中加入試劑1和試劑2后經(jīng)過一段時(shí)間顏色變?yōu)槊导t色，那則可以認(rèn)為該豆?jié){的脲酶活性不符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，不得食用。

以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理和主要特征及本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)，本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實(shí)施例的限制，上述實(shí)施例和說明書中描述的只是說明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下，本發(fā)明還會(huì)有各種變化和改進(jìn)，這些變化和改進(jìn)都落入要求保護(hù)的本發(fā)明范圍內(nèi)，本發(fā)明要求保護(hù)范圍由所附的權(quán)利要求書及其等效物界定。