本發(fā)明涉及一種裝填高效色譜柱的方法，具體涉及一種裝填反相高效色譜柱的方法。

背景技術(shù)：

制備柱填充方法是柱技術(shù)中最關(guān)鍵的部分,也是決定柱效高低的主要因素之一。在利用制備色譜的生產(chǎn)實(shí)踐中,一般對(duì)投入的設(shè)備更換較少,而是根據(jù)柱及分離產(chǎn)物選擇固定相,因此好的裝柱方法至關(guān)重要,以保證所得到的柱效率高、重現(xiàn)性好、滲透性好,使分離純化過(guò)程成本達(dá)到最低。通常根據(jù)所選用填料的種類、粒度大小及柱尺寸,采用不同的裝柱方法。一般所用裝柱方法采用干裝法，但是干裝法用顆粒粒徑小于20～25μm 的填料,用干裝法不能得到高效柱。因?yàn)殡S著填料粒徑的縮小,顆粒間的靜電作用和表面能增大,彼此傾向于聚集和“成團(tuán)”, 粘附在連接管及柱壁上,有時(shí)也會(huì)因強(qiáng)烈的靜電作用彼此排斥,難以填裝出均勻而緊密的柱床。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種裝填反相高效色譜柱的方法， 主要解決現(xiàn)有色譜柱存在的拖尾峰和前沿峰的技術(shù)問(wèn)題。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：一種裝填反相高效色譜柱的方法，包括以下步驟：

1）使用氣動(dòng)增壓泵提供動(dòng)力源；

2）填料勻漿液的配制：將反相填料加入到四氫呋喃和氯仿勻漿液中，充分潤(rùn)濕之后超聲0.5～2小時(shí)使填料分布均勻，得到半透明狀勻漿液；

3）連接已清洗干凈的勻漿灌和空柱管，在柱管中注入乙醇溶液，啟動(dòng)空壓機(jī)，測(cè)試密封性；

4）將上述勻漿液加入到勻漿罐中，開啟增壓泵壓入頂替液甲醇或者乙腈，待壓力穩(wěn)定后維持30～120min；

5）用質(zhì)量百分含量1～5%水和質(zhì)量百分含量99～95%乙腈混合溶液沖洗色譜柱2～5倍體積，得到反相高效色譜柱。

更為優(yōu)選的方案是：所述步驟2）中四氫呋喃和氯仿體積配比1:1～1:5 ；優(yōu)選1:1～1:3。

更為優(yōu)選的方案是：所述步驟4）中頂替液冷藏保存4-8個(gè)小時(shí)；增壓泵設(shè)定壓力為35-45Mpa。

本發(fā)明的有益效果：通過(guò)本方法裝填的反相高效色譜柱可以有效的解決拖尾峰及前沿峰，因此顯著的提高了柱效和分離度，同時(shí)色譜柱裝填成功率及效率也由80%提高到了90%以上。

附圖說(shuō)明

圖1為FUJI填料色譜柱柱效圖。

圖2為DASIO填料色譜柱柱效圖。

圖3為YMC填料色譜柱柱效圖。

圖4為FUJI填料色譜柱柱效圖。

其中：FUJI為富士120A、10um填料，DASIO為大曹120A、10um填料，YMC為120A、10um填料。

具體實(shí)施方式

現(xiàn)在市面上反相高效液相色譜填料種類很多，為了更好的證明該方法適用性。選取了幾種不同品牌不同型號(hào)的填料裝填色譜柱。

實(shí)施例1

稱取FUJI填料150g放置于1L的燒杯中，加入四氫呋喃和氯仿混合溶液800mL，其體積比例為1:2, 攪拌超聲至填料均勻分布，為半透明狀液體。

連接柱管和勻漿罐，其中色譜柱柱管規(guī)格為30mm*250mm。啟動(dòng)增壓泵在柱管中加入100mL無(wú)水乙醇， 測(cè)試連接處的氣密性。

測(cè)試完成后，設(shè)定增壓泵壓力參數(shù)為40MPa。開啟增壓泵，在色譜柱柱管中注入勻漿液，壓力慢慢開始上升。溶劑從柱管下端流出，壓力上升至40MPa。待壓力穩(wěn)定后注入頂替液維持120min，頂替液為乙腈，使用前冷藏保存4小時(shí)。頂替結(jié)束后再用乙腈和水混合溶液沖洗3個(gè)柱體積，其乙腈和水質(zhì)量比例為95:5，即可得到反相高效色譜柱。

用三種物質(zhì)測(cè)試柱效，測(cè)定結(jié)果請(qǐng)見圖1。測(cè)試條件見表1，測(cè)試結(jié)果見表2。

表1

表2

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實(shí)施例2

稱取DASIO填料150g放置于1L的燒杯中，加入四氫呋喃和氯仿混合溶液700mL，其體積比例為1:3, 攪拌超聲至填料均勻分布，為半透明狀液體。

連接柱管和勻漿罐，其中色譜柱柱管規(guī)格為30mm*250mm。啟動(dòng)增壓泵在柱管中加入100mL無(wú)水乙醇， 測(cè)試連接處的氣密性。

測(cè)試完成后，設(shè)定增壓泵壓力參數(shù)為40MPa。開啟增壓泵，在色譜柱柱管中注入勻漿液，壓力慢慢開始上升。溶劑從柱管下端流出，壓力上升至40MPa。待壓力穩(wěn)定后注入頂替液維持80min，頂替液為甲醇，使用前冷藏保存6小時(shí)。頂替結(jié)束后再用乙腈和水混合溶液沖洗4個(gè)柱體積，其乙腈和水質(zhì)量比例為97:3，即可得到反相高效色譜柱。

用三種物質(zhì)測(cè)試柱效，測(cè)定結(jié)果請(qǐng)見圖2。測(cè)試條件見表3，測(cè)試結(jié)果見表4。

表3

表4

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實(shí)施例3

稱取YMC填料100g放置于1L的燒杯中，加入四氫呋喃和氯仿混合溶液400mL，其體積比例為1:1, 攪拌超聲至填料均勻分布，為半透明狀液體。

連接柱管和勻漿罐，其中色譜柱柱管規(guī)格為20mm*250mm。啟動(dòng)增壓泵在柱管中加入100mL無(wú)水乙醇， 測(cè)試連接處的氣密性。

測(cè)試完成后，設(shè)定增壓泵壓力參數(shù)為45MPa。開啟增壓泵，在色譜柱柱管中注入勻漿液，壓力慢慢開始上升。溶劑從柱管下端流出，壓力上升至45MPa。待壓力穩(wěn)定后注入頂替液維持100min，頂替液為乙腈，使用前冷藏保存8小時(shí)。頂替結(jié)束后再用乙腈和水混合溶液沖洗5個(gè)柱體積，其乙腈和水質(zhì)量比例為98:2，即可得到反相高效色譜柱。

用三種物質(zhì)測(cè)試柱效，測(cè)定結(jié)果請(qǐng)見附件圖3。測(cè)試條件見表5，測(cè)試結(jié)果見表6。

表5

表6

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實(shí)施例4

稱取FUJI填料150g放置于1L的燒杯中，加入四氫呋喃和氯仿混合溶液700mL，其體積比例為1:3, 攪拌超聲至填料均勻分布，為半透明狀液體。

連接柱管和勻漿罐，其中色譜柱柱管規(guī)格為30mm*250mm。啟動(dòng)增壓泵在柱管中加入100mL無(wú)水乙醇， 測(cè)試連接處的氣密性。

測(cè)試完成后，設(shè)定增壓泵壓力參數(shù)為35MPa。開啟增壓泵，在色譜柱柱管中注入勻漿液，壓力慢慢開始上升。溶劑從柱管下端流出，壓力上升至35MPa。待壓力穩(wěn)定后注入頂替液維持60min，頂替液為甲醇，使用前冷藏保存5小時(shí)。頂替結(jié)束后再用乙腈和水混合溶液沖洗5個(gè)柱體積，其乙腈和水質(zhì)量比例為98:2，即可得到反相高效色譜柱。

用三種物質(zhì)測(cè)試柱效，測(cè)定結(jié)果請(qǐng)見附件圖4。測(cè)試條件見表7，測(cè)試結(jié)果見表8。

表7

表8

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