本發(fā)明涉及溶液中樣品檢測領域，具體涉及一種檢測尿糖和尿酸的方法。

背景技術：

葡萄糖是生命活動中不可缺少的物質，其水平高低直接影響著人們身體狀況。血液流經腎臟時，其中的葡萄糖通過腎小球濾過到腎小管內，在腎小管內的葡萄糖絕大多數又被重吸收人血，尿里僅有微量的葡萄糖，用普通方法檢查不出來，可以說是無糖的。在正常人，只有當血糖超過160～180mg/dl時，糖才能較多地從尿中排出，形成尿糖。尿糖檢查是早期診斷糖尿病最簡單的方法。

尿酸是由核酸氧化生成嘌呤，而后嘌呤會在肝臟中再次氧化生成。成人尿液中尿酸正常含量為90～420umol/L。尿酸含量偏高，容易在體內形成結晶，在關節(jié)部位析出晶體則表現為痛風癥狀。此外，腎功能衰竭、白血病等疾病的出現都與體內高尿酸有關。因此，對人體內尿酸含量進行測定有助于診斷、預測相關疾病。

傳統(tǒng)檢測尿糖的方法主要是斑氏(Benedict)尿糖定性檢查法，干化學法、光度法、電化學法等方法，常用尿酸檢測方法有雙酶法、磷鎢酸還原法、高效液相色譜法以及尿液分析儀等。無論是尿糖還是尿酸，這些現有的分析方法都需要專業(yè)人士操作，儀器貴重、運輸麻煩，因此需要一種快速、簡單地測定尿酸含量的分析方法以彌補現有技術的空缺。

技術實現要素：

本發(fā)明要解決的技術問題是，提供一種快速、簡單地測定尿糖和尿酸含量的分析方法。

本發(fā)明的技術方案是，一種快速檢測溶液中尿糖和尿酸的方法，

(1)以濾紙為紙芯片，采用打印機先常規(guī)打印輪廓，在打印機墨盒中加入防水劑烷基烯酮二聚體，再打印疏水材料形成檢測區(qū)；

(2)將樣品溶液與含有辣根過氧化物酶的試劑混合，檢測區(qū)上分別負載不同的試劑對溶液中的尿糖或尿酸進行檢測；

(3)待檢測區(qū)干燥后，拍照并用圖像處理軟件對照片進行處理，獲得各顯色斑點的顏色強度值，建立標準溶液的顏色強度值和尿糖或尿酸濃度之間的標準曲線；在檢測實際樣品時，按上述同樣方法將未知樣品溶液的顏色強度值代入相應的標準曲線，即可計算出溶液中尿糖或尿酸濃度。

步驟(3)的同樣的方法，是指取未知樣品溶液在滴在紙芯片檢測區(qū)，待檢測區(qū)完全干燥后，拍照并用圖像處理軟件對照片進行處理，獲得各顯色斑點的顏色強度值嗎？

紙芯片用紙是whatman濾紙，更優(yōu)選為whatman4號濾紙。根據我們的檢測對象，紙芯片輪廓直徑選擇7mm長度，0.1磅線條；打印疏水區(qū)域時再將線條改為4磅粗細，其余不變，重復3-5次疏水材料即可完成制作過程。

檢測區(qū)是半徑略小于圖中黑色圓圈且處于其內部的圓形部分(因為加粗打印了疏水材料)；疏水區(qū)域是一個同心圓形狀的區(qū)域，處于黑色圓圈與檢測區(qū)之間(被加粗打印的部分)；輪廓指的是圖中黑色圓圈。

優(yōu)選的是，烷基烯酮二聚體(AKD)與正庚烷配置成溶液后再加入墨盒。AKD：正庚烷＝1-4g：20-28ml。

根據本發(fā)明的快速檢測溶液中尿糖和尿酸的方法，其中，

尿糖檢測具體步驟：

(1)檢測尿糖時，以葡萄糖氧化酶、辣根過氧化物酶作催化試劑，以碘化鉀作顯色試劑；

(2)依次將葡萄糖氧化酶、辣根過氧化物酶、碘化鉀溶液、尿糖標準溶液以2:2-3:2-3:2-3體積比混合，在試管管中充分反應，取混合液體于紙芯片檢測區(qū)上；

(3)待檢測區(qū)完全干燥后，拍照并用圖像處理軟件對照片進行處理，獲得各顯色斑點的顏色強度值，建立標準溶液的顏色強度值和尿糖濃度之間的標準曲線；在檢測實際樣品時，按上述同樣方法將未知溶液的顏色強度值代入標準曲線，即可計算出溶液中尿糖濃度。

根據本發(fā)明的快速檢測溶液中尿糖和尿酸的方法，其中，尿酸檢測具體步驟：

(1)在紙芯片上依次加入4-氨基安替比林(AAP)、3,5-二氯-2-羥基-苯磺酸鈉(DHBS)、尿酸氧化酶(UOD)、辣根過氧化物酶(HRP)，4-氨基安替比林：DHBS：尿酸氧化酶：辣根過氧化物酶的體積比＝1-2:1-2:1-2:1-2，待負載試劑的區(qū)域干燥直至看不見水跡；

(2)將不同濃度尿酸標準溶液和樣品溶液分別加在已有四種試劑的紙芯片檢測區(qū)上，充分反應，等待顏色出現；

(3)拍照并用圖像處理軟件對照片進行處理，測定顯色區(qū)域的RGB顏色強度，代回標準曲線即可計算出溶液中尿酸的濃度。

根據本發(fā)明的快速檢測溶液中尿糖和尿酸的方法，優(yōu)選的是，所述圖像處理軟件為imageJ軟件。

根據本發(fā)明的快速檢測溶液中尿糖和尿酸的方法，優(yōu)選的是，所述的樣品溶液含尿糖及其它水溶性雜質樣品的水溶液，或者生物樣品。生物樣品指經處理除去蛋白的血清、尿樣等。

根據本發(fā)明的快速檢測溶液中尿糖和尿酸的方法，優(yōu)選的是，在所述步驟(1)中，紙芯片的負載量是4μL。尿酸和尿糖檢測中的最大負載量都是4μL。

更優(yōu)選的是，尿酸檢測中，紙芯片的負載量分別是1.0μL4-AAP，1.0μLDHBS，1.0μLUOD，1.0μLHRP。

根據本發(fā)明的快速檢測溶液中尿糖和尿酸的方法，優(yōu)選的是，在所述步驟(3)中，所述的尿糖標準溶液的濃度范圍為2.0～10.0g/L；所述的尿酸標準溶液的濃度范圍為0～100mg/L.

根據本發(fā)明的快速檢測溶液中尿糖和尿酸的方法，優(yōu)選的是，在尿糖檢測中，在所述的步驟(1)中，所述的檢測試劑，所述葡萄糖氧化酶活力值為100～200U/mL；所述辣根過氧化物酶酶活力值為50～100U/mL；所述碘化鉀溶液的適宜濃度為0.5～1.0mol/L。

根據本發(fā)明的快速檢測溶液中尿糖和尿酸的方法，優(yōu)選的是，在尿酸檢測中，在所述步驟(1)中，4-AAP溶液的濃度為3-5mol/L，DHBS溶液的濃度為7-9mol/L；所述尿酸氧化酶UOD和辣根過氧化物酶HRP分別配制成酶活力單位為70-90U/mL、300-360U/mL的溶液。

根據本發(fā)明的快速檢測溶液中尿糖和尿酸的方法，優(yōu)選的是，在尿糖檢測中，在所述的步驟(2)中，所述的充分反應，其反應時間至少為5min。

計算溶液中尿酸含量的具體步驟為：取顯色區(qū)域的RGB強度值為縱坐標，以尿酸濃度為橫坐標建立標準曲線，最后將樣品溶液的RGB強度值帶入標準曲線，計算得未知尿酸的含量。

計算溶液中尿糖含量的具體步驟為：取顯色區(qū)域的RGB強度值為縱坐標，以尿糖濃度為橫坐標建立標準曲線，最后將樣品溶液的RGB強度值帶入標準曲線，計算得未知尿糖的含量。

本發(fā)明的有益效果是：

與現有技術相比，本發(fā)明的創(chuàng)新點是：

本發(fā)明創(chuàng)造性地建立了一種以紙基芯片為平臺，檢測尿糖和尿酸的方法，與常規(guī)分析手段比較，整個檢測過程具有成本低、快速且易操作等優(yōu)勢。使得該方法對于相關疾病的及早診斷和預后具有重要意義。

附圖說明

圖1是空白紙芯片。

圖2是尿糖檢測中顯色后的紙芯片圖。

圖3是尿酸檢測中顯色后的紙芯片圖。

具體實施方式

實施例1

首先對桌面打印機進行改造，將疏水材料烷基烯酮二聚體(AKD)配成溶液(AKD：正庚烷＝2g：25ml)，滴加至墨盒中，待打印。同時，利用Word設計紙芯片檢測區(qū)域。首先打印紙芯片的輪廓，而后打印疏水區(qū)域。最后將打印好的濾紙置于98℃烘箱5分鐘左右，使得AKD更緊密結合在濾紙表面，形成疏水通道(圖1)。采用此方法得到的紙芯片可以負載3-5μL的試劑，有效保證供檢測用量的試劑不滲漏出檢測區(qū)。

實施例2

(1)在紙芯片上依次加入如下試劑和樣品溶液：葡萄糖氧化酶酶活力為120U/mL，用量0.6μL；辣根過氧化物酶酶活力為80U/mL，用量0.6μL；碘化鉀溶液的濃度為0.6mol/L，用量1.0μL；尿糖標準溶液濃度梯度為2.0,4.0,6.0,8.0,10.0g/L，以及濃度為3.0g/L葡萄糖樣品溶液用于驗證標準曲線測定實際樣品的誤差，用量均為1.0μL。

(2)依照上述順序負載各試劑和尿糖溶液，反應約10min后充分顯色(圖2)，對紙芯片拍照，用imageJ軟件測定不同濃度尿糖溶液對應的RGB顏色強度值，做出強度值與標準溶液濃度之間的線性曲線，得出相關系數(R²＝0.9895)和線性方程(y＝-1.0169x+166.59)。將3.0g/L尿糖樣品對應的RGB強度值帶入線性方程，計算出該顏色強度值所對應的濃度為2.95g/L，誤差為1.81％。

實施例3

(1)在紙芯片上依次加入4mol/L 4-氨基安替比林(4-AAP)1.0μL、8mol/L 3,5-二氯-2-羥基-苯磺酸鈉(DHBS)1.0μL、酶活力單位80U/mL尿酸氧化酶(UOD)1.0μL、酶活力單位339U/mL辣根過氧化物酶(HRP)1.0μL，待負載試劑的區(qū)域干燥直至看不見水跡；

(2)將不同濃度尿酸標準溶液和樣品溶液分別加在已有四種試劑的紙芯片檢測區(qū)上，充分反應，等待顏色出現(圖3)；

(3)用手機拍照并用imageJ軟件測定顯色區(qū)域的RGB顏色強度，帶回標準曲線即可計算出溶液中尿酸的濃度。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應當指出，對于本技術領域的普通技術人員，在不脫離本發(fā)明構思的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發(fā)明的保護范圍內。