本發(fā)明屬于精細(xì)化工技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種明日葉中查爾酮組分的分析檢測方法。
背景技術(shù)：
明日葉是一種芹科草本植物，查爾酮是其主要生物活性物質(zhì)，具有良好的抗氧化、抗腫瘤、抗糖尿病等多種重要的醫(yī)用價值，在明日葉的根、莖、葉中含量都很豐富。查爾酮是一類含有二苯基丙烯酮結(jié)構(gòu)及其衍生物的化合物。國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)明日葉查爾酮中含有黃色當(dāng)歸醇、4-羥基德里辛、異補(bǔ)骨脂查爾酮等多種組分，分離并確定明日葉中查爾酮各組分及其含量對明日葉的品種鑒定、功效評價及提取制備具都有重要的意義。
目前國內(nèi)檢測明日葉中查爾酮含量的方法,一般是采用乙醇反復(fù)浸提獲得查爾酮粗提取物，然后采用紫外分光光度計(jì)在308nm波長下測定吸光度，計(jì)算確定明日葉中的查爾酮含量。這種方法只能粗略測定明日葉中的總查爾酮的含量，無法準(zhǔn)確分析明日葉中各查爾酮組分含量。也有方法報道，采用乙醇浸提，減壓回收獲得浸提膏，加水后用乙酸乙酯萃取獲得明日葉查爾酮樣品，再采用高效液相色譜法，以0.1％甲酸溶液和甲醇溶液為流動相，采用梯度洗脫的方法，可以分離測定出4-羥基德里辛和黃色當(dāng)歸醇兩種組分及其含量。但這種方法只能分離測定明日葉查爾酮的兩種組分，且在提取過程中，需在乙醇提取后再采用乙酸乙酯再次進(jìn)行處理，而且在采用高效液相色譜測定過程中，采用極性偏強(qiáng)的甲醇溶液進(jìn)行洗脫，容易發(fā)生洗脫不完全，造成查爾酮組分丟失等不足。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)缺陷，提供一種明日葉中查爾酮組分的分析檢測方法。
本發(fā)明的具體技術(shù)方案如下：
一種明日葉中查爾酮組分的分析檢測方法，包括如下步驟：
(1)將新鮮明日葉冷凍干燥至含水量小于2％；
(2)將凍干后的明日葉與8～35倍體積的55～65％的乙醇水溶液混合，7000～9000rpm勻漿1.5～3min，使明日葉與乙醇水溶液充分混合；
(3)將步驟(2)所得的物料于38～42℃浸提90～120min后震蕩混勻，再冷卻至室溫，于2～5℃，2000～4000rpm離心3～7min，得上清液和殘?jiān)?/p>
(4)以殘?jiān)鼮樵现貜?fù)步驟(2)和(3)2～3次，合并上清液并定容至適當(dāng)體積，得提取液；
(5)將適量上述提取液用氮?dú)庥?5～27℃吹干后，加入適量乙醇，震蕩混勻，再用氮?dú)庥?5～27℃吹干后，加入適量乙醇，震蕩混勻，并進(jìn)行超聲處理，使其中的查爾酮組分充分溶解，得待檢測液；
(6)將適量上述待檢測液用高效液相色譜進(jìn)行分析檢測，采用梯度洗脫法對待檢測液中的查爾酮組分進(jìn)行分離，高效液相色譜采用XDB C18色譜柱，流動相包括流動相A和流動相B，其中流動相A由乙酸和水按0.1:99.9的體積比組成，流動相B由乙酸和乙醇按0.1:99.9的體積比組成，高效液相色譜的梯度洗脫程序如下：
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，所述步驟(1)為：將新鮮明日葉切成0.4～0.6cm2后冷凍干燥2～10h至含水量小于2％。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，所述步驟(2)為：將凍干后的明日葉與10～30倍體積的60％的乙醇水溶液混合，8000rpm勻漿2min，使明日葉與乙醇水溶液充分混合。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，所述步驟(3)為：將步驟(2)所得的物料于40℃浸提100min后震蕩混勻，再冷卻至室溫，于4℃，3000rpm離心5min，得上清液和殘?jiān)?/p>
進(jìn)一步優(yōu)選的，所述步驟(3)中的震蕩為：用旋渦混合器1500～3000rpm，震蕩30s。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，所述步驟(4)為：將適量上述提取液用氮?dú)庥?6℃吹干后，加入適量乙醇，震蕩混勻，再用氮?dú)庥?6℃吹干后，加入適量乙醇，震蕩混勻，并進(jìn)行超聲處理，使其中的查爾酮組分充分溶解，得待檢測液。
進(jìn)一步優(yōu)選的，所述步驟(4)中的震蕩為：用旋渦混合器1500～3000rpm，震蕩30s。
本發(fā)明的有益效果是：
1、本發(fā)明提供的一種明日葉查爾酮各組分檢測分析的方法，其工藝過程主要包括樣品冷凍干燥，乙醇提取，復(fù)溶純化，高效液相色譜分離測定等步驟，本發(fā)明將新鮮明日葉冷凍干燥去除水分，再將冷凍干燥的明日葉樣品與一定濃度的乙醇溶液高速勻漿后，進(jìn)行水浴加熱浸提。將浸提液用氮?dú)獯蹈珊蠹尤胍掖际共闋柾獜?fù)溶純化，用高效液相色譜進(jìn)行分離測定；本發(fā)明的提取過程中不需要用乙酸乙酯進(jìn)行萃取，克服了乙酸乙酯萃取過程導(dǎo)致查爾酮組分提取不完全，致使其組分丟失或者測定含量偏低的不足，而且避免了應(yīng)用毒性大、易揮發(fā)的乙酸乙酯為提取溶劑的危險性，操作過程更為簡單、安全。
2、本發(fā)明用高效液相色譜法分離測定時，采用乙酸/水和乙酸/乙醇作為流動相對明日葉提取物進(jìn)行分離洗脫，其中乙酸/乙醇作為流動相B主要洗脫明日葉中的查爾酮組分，該流動相呈現(xiàn)弱酸性，而查爾酮組分也呈弱酸性，根據(jù)相似相溶的原理，該流動相能更好地將提取物中的查爾酮組分依次洗脫出來，可以分離測定出至少異補(bǔ)骨脂查爾酮、黃色當(dāng)歸醇B、4-羥基德里辛和黃色當(dāng)歸醇等4種組分。也就是說，本發(fā)明克服了只能測定明日葉中總查爾酮含量和只能分離測定1-2種組分的不足，而且還具有測定結(jié)果準(zhǔn)確、操作簡單安全、分離效果好等特點(diǎn)。
附圖說明
圖1為本發(fā)明實(shí)施例1的HPLC結(jié)果圖。其中：1、異補(bǔ)骨脂查爾酮(Isobavachaclone)，2、黃色當(dāng)歸醇B(Xanthonagelol B)，3、4-羥基德里辛(4-Hydroxyderricin)4、黃色當(dāng)歸醇(Xanthonagelol)
具體實(shí)施方式
以下通過具體實(shí)施方式結(jié)合附圖對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行進(jìn)一步的說明和描述。
實(shí)施例1
(1)將自來水清洗晾干的新鮮明日葉(切成0.5cm2左右的小片)10g置于燒杯中，冷凍干燥5h，至含水量小于2％；
(2)將凍干后的明日葉置于15mL試管中，與10mL 60％的乙醇水溶液混合，高速勻漿機(jī)8000rpm勻漿2min，將明日葉完全打碎使并與乙醇水溶液充分混合；
(3)將步驟(2)所得的物料于40℃水浴浸提100min后，用漩渦混合器2800rpm震蕩30s混勻，再冷卻至室溫，于4℃，3000rpm離心5min，得上清液和殘?jiān)?/p>
(4)以殘?jiān)鼮樵?，加?mL 60％的乙醇水溶液重復(fù)步驟(2)和(3)2次，合并上清液并定容至25mL，得提取液；
(5)將5mL上述提取液用氮?dú)庥?6℃吹干后，加入1.5mL乙醇，用漩渦混合器1500rpm震蕩30s混勻，再用氮?dú)庥?6℃吹干后，加入500μL乙醇，同樣用漩渦混合器1500rpm震蕩30s混勻，并進(jìn)行超聲處理30s，使其中的查爾酮組分充分溶解，得待檢測液；
(6)將20μL上述待檢測液用高效液相色譜進(jìn)行分析檢測，采用梯度洗脫法對待檢測液中的查爾酮組分進(jìn)行分離，高效液相色譜采用XDB C18色譜柱，流動相包括流動相A和流動相B，其中流動相A由乙酸和水按0.1:99.9的體積比組成，流動相B由乙酸和乙醇按0.1:99.9的體積比組成，高效液相色譜的梯度洗脫程序如下：
按照本發(fā)明的方法對明日葉中的查爾酮進(jìn)行檢測分析，可將明日葉中的異補(bǔ)骨脂查爾酮(Isobavachaclone)、黃色當(dāng)歸醇B(Xanthonagelol B)、4-羥基德里辛(4-Hydroxyderricin)和黃色當(dāng)歸醇(Xanthonagelol)四種查爾酮組分進(jìn)行分離。高效液相色譜儀分離圖譜見圖1。將四種查爾酮的峰面積進(jìn)行積分，計(jì)算可得到明日葉中四種查爾酮組分的含量，結(jié)果見表1.
表1明日葉中四種查爾酮組分含量
本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可知，本發(fā)明的技術(shù)方案在下述范圍內(nèi)變化時，仍然能夠得到與上述實(shí)施例相同或相近的技術(shù)效果：
一種明日葉中查爾酮組分的分析檢測方法，包括如下步驟：
(1)將新鮮明日葉冷凍干燥至含水量小于2％；
(2)將凍干后的明日葉與8～35倍體積的55～65％的乙醇水溶液混合，7000～9000rpm勻漿1.5～3min，使明日葉與乙醇水溶液充分混合；
(3)將步驟(2)所得的物料于38～42℃浸提90～120min后震蕩混勻，再冷卻至室溫，于2～5℃，2000～4000rpm離心3～7min，得上清液和殘?jiān)?/p>
(4)以殘?jiān)鼮樵现貜?fù)步驟(2)和(3)2～3次，合并上清液并定容至適當(dāng)體積，得提取液；
(5)將適量上述提取液用氮?dú)庥?5～27℃吹干后，加入適量乙醇，震蕩混勻，再用氮?dú)庥?5～27℃吹干后，加入適量乙醇，震蕩混勻，并進(jìn)行超聲處理，使其中的查爾酮組分充分溶解，得待檢測液；
(6)將適量上述待檢測液用高效液相色譜進(jìn)行分析檢測，采用梯度洗脫法對待檢測液中的查爾酮組分進(jìn)行分離，高效液相色譜采用XDB C18色譜柱，流動相包括流動相A和流動相B，其中流動相A由乙酸和水按0.1:99.9的體積比組成，流動相B由乙酸和乙醇按0.1:99.9的體積比組成，高效液相色譜的梯度洗脫程序如下：
以上所述，僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，故不能依此限定本發(fā)明實(shí)施的范圍，即依本發(fā)明專利范圍及說明書內(nèi)容所作的等效變化與修飾，皆應(yīng)仍屬本發(fā)明涵蓋的范圍內(nèi)。