本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及褪黑素在預(yù)測卵巢儲備和體外受精-胚胎移植(IVF-ET)結(jié)局中的研究方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)：

女性的卵巢儲備包括卵巢中卵母細胞的數(shù)量和質(zhì)量，可以用于評估女性的生殖潛力。雖然每位不孕不育患者接受體外受精-胚胎移植(IVF-ET)治療的結(jié)局差異很大，極難預(yù)測，但是對她們常規(guī)進行卵巢儲備的評估有益于制定個體化的治療方案，以期增加體外受精-胚胎移植(IVF-ET)的成功率。目前常用的能反映卵巢儲備的血清標志物是血清抗苗勒氏管激素(AMH)和基礎(chǔ)卵泡刺激素(bFSH)的濃度。但是血清抗苗勒氏管激素(AMH)和胚胎質(zhì)量不相關(guān)，導(dǎo)致它的臨床應(yīng)用價值有限。同樣，血清基礎(chǔ)卵泡刺激素(bFSH)升高僅僅反應(yīng)卵巢中卵母細胞的數(shù)量下降而并非是質(zhì)量下降。因此這兩個常用指標都不能預(yù)測卵母細胞的質(zhì)量，因而不是最佳的卵巢儲備的標記物，更不能用于預(yù)測體外受精-胚胎移植(IVF-ET)的結(jié)局。

在哺乳動物中，褪黑素是在松果體中合成。褪黑素作為內(nèi)分泌激素在調(diào)節(jié)生理周期方面發(fā)揮關(guān)鍵作用。

在人類血清與唾液中的褪黑素水平表現(xiàn)出顯著的生理節(jié)律，即白天的水平低，晚上的水平高。已經(jīng)有報道表明，這種分泌的褪黑素水平變化模式與睡眠失調(diào)、時差、沮喪、壓力、精神分裂癥、下丘腦閉鎖、妊娠、神經(jīng)性厭食癥、一些類型的癌癥、免疫學(xué)紊亂以及青春期性成熟調(diào)控是一致的。褪黑素的許多生理作用是通過激活褪黑素受體產(chǎn)生的，而其它的生理作用在于其強有力地清除人體中的自由基。

卵巢反應(yīng)性分組標準：

A、卵巢低反應(yīng)poor ovarian response(POR)，至少滿足以下3條中的2條：

(1)高齡(≥40歲)或存在卵巢反應(yīng)不良的其它危險因素；

(2)前次體外受精(IVF)周期POR，常規(guī)方案獲卵數(shù)≤3個；

(3)卵巢儲備下降(竇卵泡數(shù)(AFC)＜5-7個或抗苗勒氏管激素(AMH)＜0.5-1.1mg/L)。

如果年齡或卵巢儲備功能檢測正常，患者連續(xù)2個周期應(yīng)用最大化的卵巢刺激方案仍出現(xiàn)POR也可診斷；若年齡≥40歲患者，有一項卵巢儲備功能檢查異常也可診斷為POR。常見人群為：1)高齡；2)前次超促排卵周期POR者；3)具有影響卵巢儲備和卵巢刺激反應(yīng)性的獲得性或遺傳性疾病者，如卵巢手術(shù)、盆腔感染、化療及盆腔放療、遺傳免疫性疾病和環(huán)境因素等；4)高BMI者。其預(yù)測指標包括基礎(chǔ)卵泡刺激素(bFSH)、AFC、抑制素B、抗苗勒氏管激素(AMH)、卵巢體積、卵巢刺激實驗，其中基礎(chǔ)卵泡刺激素(bFSH)、竇卵泡數(shù)(AFC)和抗苗勒氏管激素(AMH)是評價卵巢儲備功能最常用的指標，是敏感性和特異性均較高的POR預(yù)測指標。

B、卵巢正常反應(yīng)

卵巢正常反應(yīng)的定義或者診斷，目前尚無統(tǒng)一的共識和指南。目前主要根據(jù)年齡、卵巢儲備功能以及既往促排卵周期中是否存在卵巢低反應(yīng)或高反應(yīng)史，綜合評價卵巢是否屬于正常反應(yīng)。單純輸卵管性因素或/和男性因素不孕女性為卵巢正常反應(yīng)人群。

預(yù)測卵巢正常反應(yīng)的指標：

(1)年齡＜35歲；

(2)卵巢儲備功能正常[1.0～1.4mg/L＜抗苗勒管激素(AMH)＜3.5～4.0mg/L，竇卵泡數(shù)(AFC)為7～14個，基礎(chǔ)卵泡刺激素(bFSH)＜10IU/L]；

(3)既往無卵巢低反應(yīng)或高反應(yīng)的體外受精(IVF)周期取消史。

C、卵巢高反應(yīng)

常見的診斷標準為：

(1)超促排卵周期取卵數(shù)目＞15個或由于卵泡發(fā)育過多取消周期；

(2)超促排卵后發(fā)生中/重度OHSS；

(3)超促排卵過程中檢測到直徑＞12～14mm的卵泡數(shù)＞20個；

(4)超促排卵過程中發(fā)生E2＞5000ng/L。

卵巢高反應(yīng)的常見人群為PCOS患者、年輕且低BMI患者。預(yù)測卵巢高反應(yīng)的指標：1)年齡：年輕女性高反應(yīng)者多，一般＜35歲；2)卵巢的竇卵泡數(shù)(AFC)(數(shù)目、大小、均一度)：一般竇卵泡數(shù)(AFC)＞20為高反應(yīng)人群：3)激素水平(基礎(chǔ)卵泡刺激素(bFSH)、抗苗勒氏管激素(AMH)、抑制素B)：抗苗勒氏管激素(AMH)＞4.5mg/L預(yù)測高反應(yīng)的假陽性和假陰性率均較低；4)月經(jīng)周期(menstrual cycle length)：月經(jīng)周期長的稀發(fā)者發(fā)生高反應(yīng)的幾率大。曾有研究者設(shè)計預(yù)測高反應(yīng)的模型，結(jié)果顯示用竇卵泡數(shù)(AFC)聯(lián)合月經(jīng)周期一起預(yù)測高反應(yīng)準確率較高；5)對促排卵藥物的反應(yīng)：在既往的促排卵周期中有多卵泡(直徑12～14mm卵泡＞15個)發(fā)育，或采卵數(shù)目＞18個，或既往有OHSS發(fā)生。

¹²⁵I放射免疫測定法是一種直接定量檢測人體血清與血漿中褪黑素含量的方法。該方法依據(jù)放射免疫測定法的基本原則，即包括放射性抗原與非放射性抗原競爭大量的抗體結(jié)合位點。當(dāng)體系均衡時，具有結(jié)合放射性活性物質(zhì)的抗體與二抗在聚乙烯乙二醇的條件下發(fā)生沉淀反應(yīng)。將上清液離心分離后，沉淀以微克計量。¹²⁵I標記的連接抗體的抗原量與樣本中被測物濃度呈正比。對于未知樣本的定量，可以根據(jù)其活性對比已知標準的參考曲線即可。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明公開了一種褪黑素在預(yù)測卵巢儲備、體外受精-胚胎移植(IVF-ET)結(jié)局中作用的研究方法及其應(yīng)用，通過研究卵泡液內(nèi)的褪黑素濃度和相關(guān)臨床數(shù)據(jù)的相關(guān)性，可以預(yù)測女性卵巢儲備和體外受精-胚胎移植(IVF-ET)治療的結(jié)局。

本發(fā)明公開了一種褪黑素在預(yù)測卵巢儲備、體外受精-胚胎移植(IVF-ET)結(jié)局中作用的研究方法，至少通過以下步驟實現(xiàn)：

步驟1，收集61位女性的基本臨床數(shù)據(jù)，根據(jù)其卵巢對刺激反應(yīng)，主要通過年齡、獲卵數(shù)、抗苗勒氏管激素(AMH)值將其分成卵巢低反應(yīng)組、正常組、高反應(yīng)組3組。

步驟2，收集61位女性的卵泡液，并分離卵母細胞，將卵泡液在0℃用1000g離心20min，去除細胞碎片，收集上清液并于-20℃下避光儲存；

步驟3，采用褪黑素放射免疫分析法測定61位女性卵泡液中的褪黑素濃度，統(tǒng)計分析褪黑素濃度及其它臨床數(shù)據(jù)在卵巢低反應(yīng)組、正常組、高反應(yīng)組中的水平；

步驟4，統(tǒng)計卵巢低反應(yīng)組、正常組、高反應(yīng)組的體外受精(IVF)結(jié)局的相關(guān)數(shù)據(jù)，統(tǒng)計分析體外受精結(jié)局的相關(guān)數(shù)據(jù)在卵巢低反應(yīng)組、正常組、高反應(yīng)組中的水平，驗證褪黑素濃度和體外受精-胚胎移植(IVF-ET)結(jié)局的相關(guān)性；

步驟5，驗證卵泡液內(nèi)的褪黑素水平和和卵巢儲備的相關(guān)性。

上述的褪黑素在預(yù)測卵巢儲備、體外受精-胚胎移植(IVF-ET)結(jié)局中作用的研究方法，其中，所述步驟1中，需要收集的基本臨床數(shù)據(jù)包括：年齡、基礎(chǔ)卵泡刺激素(bFSH)、基礎(chǔ)雌二醇(bE2)、抗苗勒氏管激素(AMH)、體重指數(shù)、基礎(chǔ)促黃體生成素(bLH)、不孕年限、原發(fā)不孕、不孕原因，所述不孕原因包括輸卵管因素、男性因素、混合因素。

上述的褪黑素在預(yù)測卵巢儲備、體外受精-胚胎移植(IVF-ET)結(jié)局中作用的研究方法，其中，所述步驟2中，所述卵泡液沒有稀釋和血液污染，所有卵泡液都在上午8:00到11:00抽取。

上述的褪黑素在預(yù)測卵巢儲備、體外受精-胚胎移植(IVF-ET)結(jié)局中作用的研究方法，其中，所述步驟4中，體外受精(IVF)結(jié)局的相關(guān)數(shù)據(jù)包括獲卵數(shù)、受精卵數(shù)、卵裂的合子數(shù)、第3天優(yōu)胚數(shù)、囊胚數(shù)、適合移植的胚胎數(shù)、囊胚率(％)、第3天優(yōu)胚率(％)。

上述的褪黑素在預(yù)測卵巢儲備、體外受精-胚胎移植(IVF-ET)結(jié)局中作用的研究方法，其中，所述步驟4中，驗證褪黑素濃度和體外受精-胚胎移植(IVF-ET)結(jié)局的相關(guān)性的步驟包括：

A，統(tǒng)計獲卵數(shù)、受精卵數(shù)、卵裂的合子數(shù)、第3天優(yōu)胚數(shù)、囊胚數(shù)、適合移植的胚胎數(shù)、囊胚率(％)、第3天優(yōu)胚率(％)分別與褪黑素濃度的Spearman等級相關(guān)系數(shù)；

B、分析獲卵數(shù)、受精卵數(shù)、卵裂的合子數(shù)、第3天優(yōu)胚數(shù)、囊胚數(shù)、適合移植的胚胎數(shù)、囊胚率(％)、第3天優(yōu)胚率(％)分別與褪黑素濃度的相關(guān)性。

上述的褪黑素在預(yù)測卵巢儲備、體外受精-胚胎移植(IVF-ET)結(jié)局中作用的研究方法，其中，所述步驟5的具體步驟包括：

步驟5.1，以卵泡液褪黑素濃度為X軸，分別以抗苗勒氏管激素(AMH)、年齡、基礎(chǔ)卵泡刺激素(bFSH)為Y軸，將61位患者的相關(guān)數(shù)據(jù)繪制到坐標系中；

步驟5.2，統(tǒng)計抗苗勒氏管激素(AMH)、年齡、基礎(chǔ)卵泡刺激素(bFSH)分別與褪黑素濃度的Spearman等級相關(guān)系數(shù)；

步驟5.3，分析抗苗勒氏管激素(AMH)、年齡、基礎(chǔ)卵泡刺激素(bFSH)分別與褪黑素濃度的相關(guān)性。

本發(fā)明還提供了褪黑素在預(yù)測卵巢儲備、體外受精-胚胎移植(IVF-ET)結(jié)局中的應(yīng)用，其中，通過檢測卵泡液中的褪黑素濃度，并通過研究卵泡液中的褪黑素濃度和相關(guān)臨床數(shù)據(jù)的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)卵泡液里的褪黑素水平和卵細胞的質(zhì)量、數(shù)量密切相關(guān)，通過檢測卵泡液中的褪黑素濃度，可以預(yù)測卵巢儲備以及體外受精-胚胎移植(IVF-ET)結(jié)局。卵泡液里的褪黑素水平還可以作為卵巢儲備的生化標記分子。

綜上所述，本發(fā)明通過研究卵泡液內(nèi)的褪黑素濃度和相關(guān)臨床數(shù)據(jù)的相關(guān)性，可以預(yù)測女性卵巢儲備和體外受精-胚胎移植(IVF-ET)治療的結(jié)局，操作簡單易行，有利于對患者制定個性化的治療方案，提高體外受精-胚胎移植(IVF-ET)治療的成功率。

附圖說明

圖1是本發(fā)明褪黑素在預(yù)測卵巢儲備、體外受精-胚胎移植(IVF-ET)結(jié)局中作用的研究方法的流程圖；

圖2是本發(fā)明的取卵日卵泡液里褪黑素水平和抗苗勒氏管激素(AMH)的相關(guān)性圖；

圖3是本發(fā)明的取卵日卵泡液里褪黑素水平和年齡的相關(guān)性圖；

圖4是本發(fā)明的取卵日卵泡液里褪黑素水平和基礎(chǔ)卵泡刺激素(bFSH)的相關(guān)性圖。

具體實施方式

下面根據(jù)具體的實施例對本發(fā)明的具體實施方式作進一步詳細介紹。

本發(fā)明收集了61名接受體外受精(IVF)或者卵胞漿內(nèi)單精子顯微注射技術(shù)-胚胎移植治療的女性患者的數(shù)據(jù)進行研究。根據(jù)她們對卵巢刺激的反應(yīng)，主要通過年齡，獲卵數(shù)，抗苗勒氏管激素(AMH)值分成卵巢低反應(yīng)組，正常組，高反應(yīng)組3組。

收集61位女性的卵泡液，方法為：在陰道超聲波的引導(dǎo)下，從每個患者的優(yōu)勢卵泡(直徑19-24mm)通過卵泡穿刺抽取第一管卵泡液，卵泡液要求沒有被稀釋和血液污染，所有卵泡液都是在上午8:00到11:00抽取。將卵母細胞分離出去后，將卵泡液在0℃用1000g離心20min以去除細胞碎片。之后收集上清液并于-20℃儲存，但要在試劑盒有效期內(nèi)盡快測定，整個操作過程都要避光。

采用褪黑素放射免疫分析法測定女性卵泡液中褪黑素的濃度：

在檢測前，使所有的試劑(可以有沉淀的試劑)達到室溫后徹底而輕柔的來回顛倒。按照順序?qū)㈦x心管編號，做2次檢測實驗。

褪黑素放射免疫分析法包括以下步驟：

A、試劑準備

酶溶液：

在檢測之前用3ml的酶緩沖液重懸瓶中的組分。通過渦旋進行混合并放在渦旋儀上渦旋30分鐘，確保充分溶解。

平衡試劑：

平衡試劑必須用10ml水(去離子水、蒸餾水或超純水)重懸。重懸好的平衡水如果不立即使用的話，必須在-20℃下冷凍最多一個月，只能解凍一次。

B、褪黑素檢測：

(1)取15ul的標準品與對照品至各自的離心管中。

(2)取150ul的平衡試劑至含有非特異性結(jié)合(NSB)、標準品與對照品的離心管中。

(3)取150ul的樣品至各自的離心管中。

(4)取50ul的酶溶液至所有離心管中(不計總量)后渦旋。

(5)在室溫(2025℃)下孵育一個小時。

(6)取100ul的檢測緩沖液至所有的離心管中(不計總量)之后快速混勻。

(7)取25ul的¹²⁵I Melatonin至所有離心管中。

(8)取50ul的抗血清褪黑素至所有離心管中(不計總量與NSB)，徹底混合均勻。

(9)蓋上離心管蓋，在室溫(20-25℃)下孵育20-24小時。

(10)徹底混合冷凍了的(2-8℃)沉淀試劑，向所有的離心管中吸入1000ul(不計總量)，在渦旋儀上混勻。

(11)在2-8℃下孵育20分鐘。

(12)在3000g下離心20分鐘。

(13)倒出或吸出上清液(不計量)，將離心管吸干，朝上放置2分鐘。

(14)將所有離心管在Y計數(shù)器上計數(shù)1分鐘。

C、結(jié)果計算：

褪黑素檢測范圍：2.3-1000pg/ml，批內(nèi)、批間平均變異系數(shù)分別為9.7-13.4％和8.0-13.3％，褪黑素值計算方法為：從標準品、對照品、樣品的平均cpm值中減去NSB的平均cpm值。

從讀出來的樣本濃度得到的標準曲線，可以通過繪制(B-NSB)/(B0-NSB)比例圖獲得。標準檢測為Y軸，對應(yīng)的標準濃度為X軸。繪制非線性回歸曲線，樣本與對照組濃度可以直接從校準曲線中讀取。在樣本中若發(fā)現(xiàn)濃度高于最大標準值(G標準)，應(yīng)該用平衡試劑(BA R-0028)稀釋后再次檢測。

總褪黑素的濃度等于卵泡液樣品的單個卵細胞的褪黑素值乘以每個人的卵母細胞數(shù)。61位患者的基本情況及卵泡液中褪黑素濃度如表1所示。

表1

P：秩和檢驗，*P：組間比較，^a：卵巢低反應(yīng)/卵巢高反應(yīng)，^b：卵巢低反應(yīng)/卵巢正常反應(yīng)，^c：卵巢高反應(yīng)/卵巢正常反應(yīng)，NS：無統(tǒng)計學(xué)差異，^#：卡方檢驗。

從表1可知，和卵巢儲備負相關(guān)的指標如年齡、基礎(chǔ)卵泡刺激素(bFSH)、bE2，在卵巢低反應(yīng)組是最高的，并且差異非常顯著。而卵巢儲備的另一個關(guān)鍵分子抗苗勒氏管激素(AMH)趨勢正好相反，在高反應(yīng)組最高，而低反應(yīng)組值最低(p＜0.01)。同時，取卵日卵泡液內(nèi)褪黑素水平在不同組間顯著不同(p＜0.01)，低反應(yīng)組是23.26±19.06(pg/ml)，正常反應(yīng)組是113.7±102.4(pg/ml)，而高反應(yīng)組是237.4±197.1(pg/ml)。其它的基礎(chǔ)指標，如BMI、bLH、不孕的時間、不孕的原因包括輸卵管因素、男性及混合性因素在3個組間沒有差別。

本發(fā)明通過分析褪黑素水平和卵巢刺激方案的相關(guān)性來研究治療方案對卵泡液里褪黑素水平的影響。

卵泡液里褪黑素水平和卵泡刺激參數(shù)的相關(guān)性如表2所示(n＝41)：

表2

E₂-dhCG：hCG注射日血清中雌激素(E₂)水平。P-dhCG：hCG注射日血清中孕酮(P)的水平。LH-dhCG：hCG注射日血清中LH水平。FSH-dhCG：hCG注射日血清中FSH水平。NS：無統(tǒng)計學(xué)差異。

由表2可知，褪黑素水平和hCG日血清E2(rs＝0.636，p＝0.000)及孕酮(P)(rs＝0.473，p＝0.000)水平正相關(guān)，和LH(rs＝-0.382，p＝0.002)負相關(guān)，和FSH(FSH-dhCG)，使用方案(長方案，短方案及拮抗劑方案)帶來的促性腺激素注射時長、起始劑量、總劑量及子宮內(nèi)膜的厚度(mm)沒有相關(guān)性。

本發(fā)明卵巢低反應(yīng)組、正常組、高反應(yīng)組的體外受精結(jié)局情況如表3所示。

表3

囊胚率是囊胚數(shù)/卵裂的合子數(shù)；第3天優(yōu)胚率為第3天優(yōu)胚數(shù)/卵裂合子數(shù)。P：單因子方差分析，*P：組間比較，a：卵巢低反應(yīng)/卵巢高反應(yīng)，b：卵巢低反應(yīng)/卵巢正常反應(yīng)，c：卵巢高反應(yīng)/卵巢正常反應(yīng)，NS：無統(tǒng)計學(xué)差異。

由表3可知，卵泡液里褪黑素水平最低的低反應(yīng)組的體外受精(IVF)結(jié)局最差。如表3顯示，體外受精(IVF)結(jié)局的一些標準如獲卵數(shù)、受精卵數(shù)、卵裂數(shù)、第3天(D3)優(yōu)胚數(shù)、囊胚數(shù)、適合移植的胚胎數(shù)及囊胚率隨著褪黑素水平的升高而顯著升高。這些指標在正常組中比低反應(yīng)組中高，而高反應(yīng)組中數(shù)值最高。卵泡液中褪黑素濃度高的患者通過體外受精-胚胎移植(IVF-ET)治療能獲得更多的卵母細胞、受精卵、卵裂的受精卵、優(yōu)質(zhì)的卵裂期胚胎、囊胚和更多的可用于移植的胚胎。

為了驗證取卵日卵泡液里褪黑素水平預(yù)測妊娠結(jié)局的作用，本發(fā)明研究了褪黑素水平和體外受精(IVF)結(jié)局的相關(guān)性。取卵日卵泡液里褪黑素水平和體外受精(IVF)結(jié)局參數(shù)的相關(guān)性(n＝61)如表4所示：

表4

囊胚率是囊胚數(shù)/卵裂的合子數(shù)。第3天優(yōu)胚率為第3天優(yōu)胚數(shù)/卵裂合子數(shù)。

通過表4的結(jié)果顯示，褪黑素水平和體外受精(IVF)指標顯著正相關(guān)，包括獲卵數(shù)(rs＝0.67，p＝0.000)、受精卵數(shù)(rs＝0.653，p＝0.000)、卵裂數(shù)(rs＝0.646，p＝0.000)、第3天優(yōu)胚數(shù)(rs＝0.587，p＝0.000)、培養(yǎng)胚胎數(shù)(rs＝0.559，p＝0.000)、囊胚數(shù)(rs＝0.533，p＝0.000)、適合移植的胚胎數(shù)(rs＝0.607，p＝0.000)及囊胚率(rs＝0.36，p＝0.005)；而和D3優(yōu)胚率沒有顯著相關(guān)性。因此，卵泡液里褪黑素的水平和體外受精(IVF)結(jié)局具有顯著的相關(guān)性。

為了研究取卵日卵泡液內(nèi)的褪黑素水平和卵巢儲備的相關(guān)性，本發(fā)明以卵泡液褪黑素濃度為X軸，分別以抗苗勒氏管激素(AMH)、年齡、基礎(chǔ)卵泡刺激素(bFSH)為Y軸，將61位患者的相關(guān)數(shù)據(jù)繪制到坐標系中，并統(tǒng)計分析其Spearman相關(guān)系數(shù)，來分析其相關(guān)性。

如圖2、圖3、圖4所示，取卵日卵泡液里褪黑素水平和抗苗勒氏管激素(AMH)、年齡及基礎(chǔ)卵泡刺激素(bFSH)水平的相關(guān)性(n＝61)分別為：

(A)卵泡液里褪黑素和抗苗勒氏管激素(AMH)水平顯著正相關(guān)(Spearman-Rho rs＝0.593，p＝0.000)。

(B)褪黑素水平和女性年齡顯著負相關(guān)(Spearman-Rho rs＝-0.632，p＝0.000)。

(C)褪黑素水平和基礎(chǔ)卵泡刺激素(bFSH)水平顯著負相關(guān)(Spearman-Rho rs＝0.507，p＝0.000)。

因此，卵泡液中的褪黑素水平可以成為一個很好的預(yù)測卵巢儲備的標志。在與卵巢儲備的其它標志物對比，褪黑素是一種內(nèi)源性穩(wěn)定化合物。對卵巢儲備不良的患者，補充褪黑素對胚胎培養(yǎng)基或卵母細胞成熟培養(yǎng)基有一定的有益效果，可促進胚胎或卵母細胞成熟，可在臨床試驗中作為一種新的策略。

綜上所述，本發(fā)明通過檢測卵泡液中的褪黑素濃度，并通過研究卵泡液中的褪黑素濃度和相關(guān)臨床數(shù)據(jù)的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)卵泡液里的褪黑素水平和卵細胞的質(zhì)量、數(shù)量密切相關(guān)。通過檢測卵泡液中的褪黑素濃度，可以預(yù)測卵巢儲備以及體外受精-胚胎移植(IVF-ET)結(jié)局，卵泡液里的褪黑素水平還可以作為卵巢儲備的生化標記分子。本發(fā)明有利于對患者制定個性化的治療方案，提高體外受精-胚胎移植(IVF-ET)治療的成功率。

以上所述的實施例僅用于說明本發(fā)明的技術(shù)思想及特點，其目的在于使本領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人員能夠了解本發(fā)明的內(nèi)容并據(jù)以實施，不能僅以本實施例來限定本發(fā)明的專利范圍，即凡依本發(fā)明所揭示的精神所作的同等變化或修飾，仍落在本發(fā)明的專利范圍內(nèi)。