本發(fā)明屬于分析化學領域，具體涉及一種泊沙康唑中間體z及其相關基因毒性雜質的分離與測定方法。
背景技術：
：泊沙康唑是一種廣譜三唑類抗真菌藥，可用于預防侵襲性曲霉菌和念珠菌感染，同時可用于治療口咽念珠菌病，包括伊曲康唑和/或氟康唑難治性口咽念珠菌病。泊沙康唑中間體z(泊沙康唑粗品)化學名為4-[4-[4-[4-[[(3r,5r)-5-(2,4-difluorophenyl)tetrahydro-5-(1h-1,2,4-triazol-1-ylmethyl)-3-furanyl]methoxy]phenyl]-1-piperazinyl]phenyl]-2-[(1s,2s)-1-ethyl-2-hydroxypropyl]-2,4-dihydro-3h-1,2,4-triazol-3-one，分子式c37h42f2n8o4，分子量700.78，其結構式如下所示：基因毒性雜質是指化合物本身直接或者間接損傷細胞dna，導致生物體產生基因突變或者發(fā)生體內誘變，具有致癌性或者潛在傾向。具有基因毒性作用的基團一般具有親電試劑的性質，這些基團在生理條件下同體內核酸、蛋白質或其他重要成分中的親核中心發(fā)生取代反應，使這些成分發(fā)生不可逆的損傷，表現(xiàn)為毒性、致突變或致癌等作用。表現(xiàn)為毒性、致突變或致癌等作用的基團舉例如下：在生產過程中，可能產生基因毒性雜質的環(huán)節(jié)包括新藥合成、原料純化、儲存運輸(與包裝物接觸)等，故在新藥合成階段應該指明涉及到的所有具有基因毒性或有致癌性的化學物質，如所用試劑、中間體、副產品等。更進一步，在藥物活性物質中沒有出現(xiàn)的基因毒性反應物和有基因毒性結構的物質，都應該被考慮。在泊沙康唑的合成過程中，其中間體z中可能存在由關鍵起始原料帶入的基因毒性雜質：對甲苯磺酸甲酯和對甲苯磺酸乙酯。泊沙康唑中間體z中的基因毒性雜質來源于關鍵起始原料sm1，合成sm1過程中用到的對甲苯磺酰氯會水解產生對甲苯磺酸甲酯和對甲苯磺酸乙酯，sm1合成路線如下所示：根據(jù)ema《基因毒性雜質限度指南》(2006年)規(guī)定，應對基因毒性雜質在泊沙康唑中的含量進行嚴格控制，按泊沙康唑最大日計量和最長用藥時間計算該類雜質的限度應控制不超過0.015％。因此，對于泊沙康唑來 說，應控制其關鍵中間體z中基因毒性雜質的含量，從而有效地保障泊沙康唑原料和制劑的質量安全可控。技術實現(xiàn)要素：有鑒于此，本發(fā)明的目的之一在于提供一種分離泊沙康唑中間體z及其相關基因毒性雜質的方法，該方法能夠實現(xiàn)泊沙康唑中間體z及相關基因毒性雜質的有效分離，從而有效控制關鍵中間體z中基因毒性雜質的含量；本發(fā)明的目的之二在于提供一種高效液相色譜法分離測定泊沙康唑中間體z及相關基因毒性雜質的方法，利用高效液相色譜法，能夠高效、精確的實現(xiàn)中間體z及相關基因毒性雜質的分離與測定，對泊沙康唑原料及其制劑的質量安全可控具有重要意義。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術方案為：分離泊沙康唑中間體z及相關基因毒性雜質的方法，所述的方法采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，以溶劑a與溶劑b的混合物為流動相進行分離，所述溶劑a為水，所述溶劑b為甲醇、乙腈、異丙醇中的一種或多種。本發(fā)明所述的方法適用于上述的泊沙康唑中間體z及相關基因毒性雜質的分離，可用于單獨分離某一種物質，也可同時分離泊沙康唑中間體z及相關基因毒性雜質。本發(fā)明所述的分離泊沙康唑中間體z及相關基因毒性雜質的方法，優(yōu)選的，所述方法特別適合基因毒性雜質為對甲苯磺酸甲酯和/或對甲苯磺酸乙酯的分離。作為優(yōu)選的方案，所述溶劑b為甲醇或乙腈。本發(fā)明還提供了一種高效液相色譜法分離測定泊沙康唑中間體z及相關基因毒性雜質的方法，具體步驟如下：取供試品加稀釋劑溶解制備成供試品溶液，取供試品溶液進樣，流動相洗脫，進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，按照面積歸一化法計算供試品中所含泊沙康唑中間體z及相關基 因毒性雜質的含量；所述高效液相色譜分析采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，所述流動相為溶劑a與溶劑b的混合物，所述溶劑a為水，所述溶劑b為甲醇、乙腈、異丙醇中的一種或多種。作為優(yōu)選的方案，所述的一種高效液相色譜法分離測定泊沙康唑中間體z及相關基因毒性雜質的方法，所述溶劑b為甲醇或乙腈。本發(fā)明所述的高效液相色譜法分離測定泊沙康唑中間體z及相關基因毒性雜質的方法適用于泊沙康唑中間體z及相關基因毒性雜質的分離和測定，可用于單獨檢測某一種物質，也可同時分離和檢測泊沙康唑中間體z及相關基因毒性雜質。作為優(yōu)選的方案，所述的一種高效液相色譜法分離測定泊沙康唑中間體z及相關基因毒性雜質的方法，還包括如下步驟：分別取泊沙康唑中間體z及相關基因毒性雜質對照品，溶解制備成對照品溶液，分別取泊沙康唑中間體z及相關基因毒性雜質對照品溶液進樣，流動相洗脫，進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，確定泊沙康唑中間體z及相關基因毒性雜質的保留時間。本發(fā)明所述的高效液相色譜法分離測定泊沙康唑中間體z及相關基因毒性雜質的方法，優(yōu)選的，所述方法特別適合相關基因毒性雜質為對甲苯磺酸甲酯和/或對甲苯磺酸乙酯的分離。作為優(yōu)選的方案，所述的一種高效液相色譜法分離測定泊沙康唑中間體z及相關基因毒性雜質的方法，所述稀釋劑為溶劑a與溶劑b的混合物，所述溶劑a為水，所述溶劑b為甲醇、乙腈、異丙醇中的一種或多種；優(yōu)選的，溶劑a與溶劑b的體積比為25-75：75-25。作為優(yōu)選的方案，所述的一種高效液相色譜法分離測定泊沙康唑中間體z及相關基因毒性雜質的方法，所述流動相洗脫采用梯度洗脫，所述梯度洗脫條件為：0.01min時，溶劑a與溶劑b的體積比為58：42；20min時，溶劑a與溶劑b的體積比為58：42；35min時，溶劑a與溶劑b的體積比為5：95；40min時，溶劑a與溶劑b的體積比為5：95；40.01min時，溶劑a與溶 劑b的體積比為58：42；48min時，溶劑a與溶劑b的體積比為58：42。作為優(yōu)選的方案，所述流動相流速為0.5-2.0ml/min。作為優(yōu)選的方案，所述的一種高效液相色譜法分離測定泊沙康唑中間體z及相關基因毒性雜質的方法，所述色譜柱柱溫為25-40℃，優(yōu)選所述色譜柱的規(guī)格為4.6×250mm，5μm。作為優(yōu)選的方案，所述的一種高效液相色譜法分離測定泊沙康唑中間體z及相關基因毒性雜質的方法，所述高效液相色譜分析采用紫外檢測器進行檢測，檢測波長為205-280nm。作為優(yōu)選的方案，所述的一種高效液相色譜法分離測定泊沙康唑中間體z及相關基因毒性雜質的方法，所述供試品溶液中，泊沙康唑中間體z的濃度優(yōu)選在0.5mg/ml-3.0mg/ml范圍內。本發(fā)明的高效液相色譜法分離測定泊沙康唑中間體z及相關基因毒性雜質的方法，樣品檢測過程中，溶劑峰不能干擾泊沙康唑中間體z及其基因毒性雜質的測定，且基因毒性雜質峰與泊沙康唑中間體z主峰間、基因毒性雜質峰之間的分離度均要求大于1.5。在本發(fā)明的一個具體實施例中，還公開了一種用高效液相色譜法測定泊沙康唑中間體z及其基因毒性雜質的方法，具體包括以下步驟：(1)配制空白溶液：取溶劑a與溶劑b，以溶劑a與溶劑b體積比為40-60％配制，得空白溶液；(2)配制供試品溶液：取泊沙康唑中間體z樣品，加稀釋劑溶解并稀釋，得供試品溶液；(3)配制基因毒性雜質溶液：取各泊沙康唑中間體z基因毒性雜質對照品，用有機溶劑溶解，再加稀釋劑稀釋，得基因毒性雜質溶液；所述有機溶劑為甲醇、乙腈、異丙醇中的一種或多種。(4)分別取步驟(1)的空白溶液、步驟(2)的供試品溶液和步驟(3)的基因毒性雜質溶液進樣，進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，確定泊沙康唑中間體z及其基因毒性雜質的保留時間，按照面積歸一化法計算泊沙 康唑中間體z中各相關基因毒性雜質的含量。本發(fā)明的有益效果在于：(1)本發(fā)明的一種分離泊沙康唑中間體z及相關基因毒性雜質的方法，該方法能夠實現(xiàn)泊沙康唑中間體z及相關基因毒性雜質的有效分離，實現(xiàn)了雜質有效控制，從根本上確定了產品質量，具有簡便，快速，準確度高等優(yōu)點；(2)本發(fā)明的一種高效液相色譜法分離測定泊沙康唑中間體z及相關基因毒性雜質的方法，采用普通的c18色譜柱，能夠有效地分離并檢測泊沙康唑中間體z及其基因毒性雜質，操作簡單，準確度高；檢測過程中溶劑峰不干擾泊沙康唑中間體z及其基因毒性雜質的測定，基因毒性雜質峰與泊沙康唑中間體z主峰間、基因毒性雜質峰之間的分離度均大于1.5；(3)本發(fā)明所述的方法簡單可行，專屬性強，靈敏度高，解決了泊沙康唑中間體z與其基因毒性雜質的分離測定問題，從而確保了泊沙康唑原料及其制劑的質量安全可控，與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的方法更快捷，提高了效率，具有顯著的進步性。附圖說明圖1空白溶劑的高效液相色譜圖。圖2泊沙康唑中間體z的高效液相色譜圖。圖3對甲苯磺酸甲酯的高效液相色譜圖。圖4對甲苯磺酸乙酯的高效液相色譜圖。圖5泊沙康唑中間體z及其基因毒性雜質混合溶液高效液相色譜圖。圖6實施例3泊沙康唑中間體z及其基因毒性雜質混合溶液高效液相色譜圖。圖7實施例4泊沙康唑中間體z及其基因毒性雜質混合溶液高效液相色譜圖。圖8泊沙康唑中間體z中基因毒性雜質檢測限溶液的高效液相色譜圖。圖9泊沙康唑中間體z中基因毒性雜質加入溶液的高效液相色譜圖。圖10150101批次泊沙康唑中間體z的高效液相色譜圖。圖11150102批次泊沙康唑中間體z的高效液相色譜圖。圖12150103批次泊沙康唑中間體z的高效液相色譜圖。圖13150501批次泊沙康唑中間體z的高效液相色譜圖。圖14150502批次泊沙康唑中間體z的高效液相色譜圖。圖15150601批次泊沙康唑中間體z的高效液相色譜圖。圖16150602批次泊沙康唑中間體z的高效液相色譜圖。具體實施方式以下將參照附圖對本發(fā)明的優(yōu)選實施條例進行詳細描述。優(yōu)選實施條例中未注明具體條件的試驗方法，參照常規(guī)條件，所舉實施例是為了更好地對本發(fā)明的內容進行說明，但并不是本發(fā)明的內容僅限于所舉實施例。所以熟悉本領域的技術人員根據(jù)上述
發(fā)明內容對實施方案進行非本質的改進和調整，仍屬于本發(fā)明的保護范圍。以下實施例中，本發(fā)明的方法中，采用的儀器及色譜條件如下：高效液相色譜儀：島津：lc-20atvp，spd-m20avp；色譜條件以以下優(yōu)選的為例：流速：1.0ml/min；檢測波長：210nm；柱溫：30℃；進樣體積：20μl。實施例1高效液相色譜法分離測定泊沙康唑中間體z中基因毒性雜質的方法色譜柱：c18(vp-ods或agilentzorbaxsb，250mm×4.6mm，5μm)；流動相：溶劑a：水；溶劑b：乙腈或甲醇，按以下梯度進行洗脫：時間(min)0.0120354040.0148a(％)5858555858b(％)424295954242稀釋劑：乙腈水溶液(水與乙腈的體積比為40：60)。試驗步驟：(1)配制空白溶液：取水40ml，置100ml量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得；(2)配制供試品溶液：取泊沙康唑中間體z約50mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；(3)配制基因毒性雜質溶液：對甲苯磺酸甲酯溶液(1.0mg/ml)：取對甲苯磺酸甲酯約25mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加乙腈溶解并用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，即得；對甲苯磺酸乙酯溶液(0.5mg/ml)：取對甲苯磺酸乙酯約12.5mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加乙腈溶解并用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，即得；(4)分別取步驟(1)的空白溶液、步驟(2)的供試品溶液和步驟(3)的對甲苯磺酸甲酯溶液和對甲苯磺酸乙酯溶液進樣，進行高效液相色譜分析并記錄色譜圖，確定泊沙康唑中間體z及對甲苯磺酸甲酯和對甲苯磺酸乙酯的保留時間，按照面積歸一化法計算泊沙康唑中間體z中基因毒性雜質對甲苯磺酸甲酯和對甲苯磺酸乙酯的含量。實施例2本發(fā)明色譜系統(tǒng)對泊沙康唑中間體z、對甲苯磺酸甲酯和對甲苯磺酸乙酯的分離度試驗1色譜柱：c18(vp-ods，250mm×4.6mm，5μm)；流動相：溶劑a：水；溶劑b：乙腈，按以下梯度進行洗脫：時間(min)0.0120354040.0148a(％)5858555858b(％)424295954242稀釋劑：乙腈水溶液(水與乙腈的體積比為40：60)。試驗步驟：(1)配制空白溶液：取水40ml，置100ml量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得；(2)配制供試品溶液：精密稱取中間體z50.55mg，置25ml量瓶中，加稀釋劑使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得，經計算供試品溶液濃度為2.022mg/ml。(3)配制基因毒性雜質定位溶液：對甲苯磺酸甲酯貯備液：精密稱取對甲苯磺酸甲酯23.79mg，置25ml量瓶中，加乙腈使溶解并用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，即得，經計算濃度為951.6μg/ml。對甲苯磺酸乙酯貯備液：精密稱取對甲苯磺酸乙酯12.88mg，置25ml量瓶中，加乙腈使溶解并用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，即得，經計算濃度為515.2μg/ml。對甲苯磺酸甲酯定位溶液：精密移取對甲苯磺酸甲酯貯備液0.5ml，置25ml量瓶中，加稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，即得，經計算濃度為19.032μg/ml。對甲苯磺酸乙酯定位溶液：精密移取對甲苯磺酸乙酯貯備液1.0ml，置25ml量瓶中，加稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得，經計算濃度為20.608μg/ml。(4)配制混合溶液：精密稱取中間體z51.26mg，置25ml量瓶中，精密移取對甲苯磺酸甲酯貯備液0.5ml、對甲苯磺酸乙酯貯備液1.0ml至該量瓶中，加稀釋劑使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得；(5)分別取上述空白溶液、供試品溶液、對甲苯磺酸甲酯定位溶液、對甲苯磺酸乙酯定位溶液進樣、混合溶液進樣，記錄色譜圖，結果如圖1-5所示，分離度試驗數(shù)據(jù)見表1。表1分離度試驗數(shù)據(jù)由圖1-圖5及表1數(shù)據(jù)說明，本發(fā)明可以有效地將泊沙康唑中間體z與其基因毒性雜質(對甲苯磺酸甲酯和對甲苯磺酸乙酯)分離，分離度均大于1.5，專屬性強。實施例3本發(fā)明色譜系統(tǒng)對泊沙康唑中間體z、對甲苯磺酸甲酯和對甲苯磺酸乙酯的分離度試驗2色譜柱：c18(vp-ods，250mm×4.6mm，5μm)；流動相：溶劑a：水；溶劑b：甲醇，按以下梯度進行洗脫：時間(min)0.0120354040.0148a(％)5858555858b(％)424295954242稀釋劑：乙腈水溶液(水與乙腈的體積比為40：60)。試驗步驟：(1)配制空白溶液：取水40ml，置100ml量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得；(2)配制供試品溶液：取泊沙康唑中間體z50.20mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；經計算供試品溶液濃度為2.008mg/ml。(3)配制基因毒性雜質溶液：對甲苯磺酸甲酯溶液：取對甲苯磺酸甲酯26.56mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加乙腈溶解并用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，即得；經計算供試品溶液濃度為1062.4μg/ml。對甲苯磺酸乙酯溶液：取對甲苯磺酸乙酯12.51mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加乙腈溶解并用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，即得；經計算供試品溶液濃度為500.4μg/ml。(4)配制混合溶液：精密稱取中間體z50.26mg，置25ml量瓶中，精 密移取對甲苯磺酸甲酯貯備液0.5ml、對甲苯磺酸乙酯貯備液1.0ml至該量瓶中，加稀釋劑使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得；(5)取混合溶液進樣，記錄色譜圖，結果如圖6所示。由圖6可知，保留時間為20.669min、28.723min、37.208min色譜峰分別為對甲苯磺酸甲酯、對甲苯磺酸乙酯和泊沙康唑中間體z色譜峰，分離度依次為14.320、27.619；分離度均大于1.5，專屬性強。實施例4本發(fā)明色譜系統(tǒng)對泊沙康唑中間體z、對甲苯磺酸甲酯和對甲苯磺酸乙酯的分離度試驗3色譜柱：c18(agilentzorbaxsb，250mm×4.6mm，5μm)；流動相：溶劑a：水；溶劑b：乙腈，按以下梯度進行洗脫：時間(min)0.0120354040.0148a(％)5858555858b(％)424295954242稀釋劑：乙腈水溶液(水與乙腈的體積比為40：60)。試驗步驟：(1)配制空白溶液：取水40ml，置100ml量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得；(2)配制供試品溶液：取泊沙康唑中間體z50.20mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；經計算供試品溶液濃度為2.008mg/ml。(3)配制基因毒性雜質溶液：對甲苯磺酸甲酯溶液：取對甲苯磺酸甲酯26.56mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加乙腈溶解并用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，即得；經計算供試品溶液濃度為1062.4μg/ml。對甲苯磺酸乙酯溶液：取對甲苯磺酸乙酯12.51mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加乙腈溶解并用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，即得；經計算供試品溶液濃度為500.4μg/ml。(4)配制混合溶液：精密稱取中間體z50.26mg，置25ml量瓶中，精密移取對甲苯磺酸甲酯貯備液0.5ml、對甲苯磺酸乙酯貯備液1.0ml至該量瓶中，加稀釋劑使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得；(5)取混合溶液進樣，記錄色譜圖，結果如圖7所示。由圖7可知，保留時間為11.696min、16.694min、28.904min色譜峰分別為對甲苯磺酸甲酯、對甲苯磺酸乙酯和泊沙康唑中間體z色譜峰，分離度依次為8.211、16.647；分離度均大于1.5，專屬性強。上述的方法中，色譜柱采用c18柱，溶劑b可采用甲醇、乙腈、異丙醇中的一種或多種，均能達到相同的效果，以下實施例均以溶劑b為乙腈，色譜柱為c18(vp-ods，250mm×4.6mm，5μm)，進行說明。其中，流動相：溶劑a：水；溶劑b：乙腈，按以下梯度進行洗脫：時間(min)0.0120354040.0148a(％)5858555858b(％)424295954242稀釋劑：乙腈水溶液(水與乙腈的體積比為40：60)。實施例5對甲苯磺酸甲酯和對甲苯磺酸乙酯的檢出水平試驗試驗步驟：(1)配制空白溶液：取水40ml，，置100ml量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得。(2)配制供試品溶液：精密稱取中間體z約50mg，置25ml量瓶中，加稀釋劑使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得，經計算濃度為2.0mg/ml。(3)配制檢測限溶液：對甲苯磺酸甲酯貯備液：精密稱取對甲苯磺酸甲酯23.79mg，置25ml量瓶中，加乙腈使溶解并用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，即得，經計算濃度為951.6μg/ml。對甲苯磺酸乙酯貯備液：精密稱取對甲苯磺酸乙酯12.88mg，置25ml量瓶中，加乙腈使溶解并用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，即得，經計算濃度 為515.2μg/ml。對甲苯磺酸甲酯定位溶液：精密移取對甲苯磺酸甲酯貯備液0.5ml，置25ml量瓶中，加稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，即得，經計算濃度為19.032μg/ml。對甲苯磺酸乙酯定位溶液：精密移取對甲苯磺酸乙酯貯備液1.0ml，置25ml量瓶中，加稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得，經計算濃度為20.608μg/ml。定量限溶液：分別精密移取對甲苯磺酸甲酯溶液定位溶液1.0ml、對甲苯磺酸乙酯定位溶液1.0ml，置同一100ml量瓶中，加稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，即得。檢測限溶液：精密移取上述定量限溶液3ml，置10ml量瓶中，加稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，即得，經計算對甲苯磺酸甲酯濃度為0.05710μg/ml、對甲苯磺酸乙酯濃度為0.06182μg/ml。(4)取檢測限溶液進樣，進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，見圖8，計算對甲苯磺酸甲酯和對甲苯磺酸乙酯的檢測限濃度(s/n＝3：1)，試驗數(shù)據(jù)見表2。表2檢測限試驗數(shù)據(jù)由圖8和表2所知，對甲苯磺酸甲酯檢測限濃度為0.05710μg/ml，以中間體z中存在濃度表示為0.0029％；對甲苯磺酸乙酯檢測限濃度為0.06182μg/ml，以中間體z中存在濃度表示為0.0031％；檢測限s/n＝3:1，符合要求。實施例6對甲苯磺酸甲酯和對甲苯磺酸乙酯的檢出能力試驗試驗步驟：(1)配制空白溶液：取水40ml，置100ml量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得。(2)配制供試品溶液：精密稱取泊沙康唑中間體z約50mg，置25ml量瓶中，加稀釋劑使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得，經計算濃度為2.0mg/ml。(3)配制加入溶液(平行配置兩份)：精密稱取泊沙康唑中間體z約50mg，置25ml量瓶中，精密移取定量限溶液7.5ml，置同一容量瓶中，加稀釋劑使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。(4)取加入溶液進樣，進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，見圖9，計算對甲苯磺酸甲酯和對甲苯磺酸乙酯的檢測限s/n，實驗數(shù)據(jù)見表3。表3加入試驗數(shù)據(jù)由圖9和表3數(shù)據(jù)可知，泊沙康唑中間體z中加入檢測限濃度的對甲苯磺酸甲酯、對甲苯磺酸乙酯均能被有效檢出。實施例7泊沙康唑中間體z樣品的檢測試驗步驟：(1)配制空白溶液：取水40ml，置100ml量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得。(2)配制供試品溶液：取泊沙康唑中間體z(共七批泊沙康唑中間體z，批號分別為：1510101、150102、150103、150501、150502、150601、150602)約50mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液。(3)配制基因毒性雜質溶液：對甲苯磺酸甲酯溶液：取對甲苯磺酸甲酯約25mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加乙腈溶解并用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，即得，經計算濃度為1.0mg/ml。對甲苯磺酸乙酯溶液：取對甲苯磺酸乙酯約12.5mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加乙腈溶解并用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，即得，經計算濃度為0.5mg/ml。(4)取供試品溶液，按上述條件進行液相色譜分析，記錄色譜圖，見圖10-圖16，檢測數(shù)據(jù)見表4。表4多批次中間體z中基因毒性雜質檢出數(shù)據(jù)批號稱樣量(mg)對甲苯磺酸甲酯對甲苯磺酸乙酯pos-z-15010150.58未檢出未檢出pos-z-15010250.21未檢出未檢出pos-z-15010351.26未檢出未檢出pos-z-15050150.13未檢出未檢出pos-z-15050250.05未檢出未檢出pos-z-15060150.25未檢出未檢出pos-z-15060250.19未檢出未檢出由圖1-圖16、表1-4說明，本發(fā)明的方法，可以有效地將泊沙康唑中間體z與其基因毒性雜質(對甲苯磺酸甲酯和對甲苯磺酸乙酯)分離，并可以準確進行測定，以控制泊沙康唑中間體z中所述基因毒性雜質的含量，從而保證最終泊沙康唑原料和制劑的質量安全可控。最后說明的是，以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術方案而非限制，盡管參照較佳實施例對本發(fā)明進行了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對本發(fā)明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術方案的宗旨和范圍，其均應涵蓋在本發(fā)明的權利要求范圍當中。當前第1頁12