相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用

本申請(qǐng)要求于2014年12月12日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)序列號(hào)62/091,421的優(yōu)先權(quán)，所述申請(qǐng)的公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用結(jié)合在此。

引言

流式細(xì)胞術(shù)是用于表征和/或分選生物材料(比如，血液樣本的細(xì)胞或者任何其他類型的生物樣本或化學(xué)樣本中的感興趣的顆粒)的技術(shù)。所述技術(shù)可以用于記錄分布和/或分選生物材料。流式細(xì)胞儀通常包括用于接收如血液樣本等流體樣本的樣本儲(chǔ)存器以及包含鞘液的鞘液儲(chǔ)存器。流式細(xì)胞儀將流體樣本中的顆粒(包括細(xì)胞)作為細(xì)胞流輸送至流動(dòng)池，同時(shí)還將鞘液引導(dǎo)至流動(dòng)池。在流動(dòng)池內(nèi)，在細(xì)胞流周圍形成鞘液以便將基本上均勻的速度施加到細(xì)胞流上。流動(dòng)池水動(dòng)力學(xué)地集中所述流內(nèi)的細(xì)胞以便穿過(guò)流動(dòng)池中的激光束的中心。

在流式細(xì)胞術(shù)中，使用光源來(lái)照射流動(dòng)流(flowstream)流動(dòng)流的組成部分與光相交的點(diǎn)通常被稱為探詢點(diǎn)(interrogationpoint)。當(dāng)流動(dòng)流的組成部分穿過(guò)探詢點(diǎn)時(shí)，它使光發(fā)生散射。材料的變化(比如，形態(tài)或熒光標(biāo)簽)可以引起所觀察到的光的變化，并且這些變化允許進(jìn)行表征和分離。為了量化這些變化，必須聚集光。期望盡可能多地探詢流動(dòng)流并且盡可能多地聚集來(lái)自流動(dòng)流的光，以便將程序的速度和靈敏度最大化。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本公開(kāi)的各方面包括用于評(píng)估光源(例如，激光器)與比如流式細(xì)胞儀中的流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)的方法。根據(jù)某些實(shí)施例的方法包括：沿著照射流動(dòng)流的豎直軸檢測(cè)第一光信號(hào)和第二光信號(hào)，其中，所述第一光信號(hào)和所述第二光信號(hào)是在不同時(shí)間獲得的；以及計(jì)算所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的差分信號(hào)幅值以便評(píng)估所述光源與所述流動(dòng)流的所述對(duì)準(zhǔn)。

在實(shí)施例中，方法包括：照射流動(dòng)流中的擾動(dòng)以及檢測(cè)第一光信號(hào)和第二光信號(hào)。例如，流動(dòng)流中的擾動(dòng)可由流動(dòng)流中的細(xì)胞、非細(xì)胞顆粒或珠粒產(chǎn)生。第一光信號(hào)和第二光信號(hào)可以是前向傳播(例如，散射)光或者作為通過(guò)全內(nèi)反射檢測(cè)到的散射光。在實(shí)踐根據(jù)一些實(shí)施例的方法時(shí)，評(píng)估光源(例如，激光器)與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)包括確定第一信號(hào)與第二信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值。在一些實(shí)施例中，方法進(jìn)一步包括：在x-y平面中將激光器的位置調(diào)整為產(chǎn)生最大差分信號(hào)幅值的位置，或者將激光器的位置維持在產(chǎn)生最大差分信號(hào)幅值的位置處。在某些實(shí)例中，在x-y平面中確定所述流動(dòng)流上的產(chǎn)生所述最大差分信號(hào)幅值的激光照射位置。

在實(shí)施例中，沿著所述流動(dòng)流的豎直軸檢測(cè)所述第一光信號(hào)和所述第二光信號(hào)。在一些實(shí)例中，以周期性間隔檢測(cè)所述第一光信號(hào)和所述第二光信號(hào)。在其他實(shí)例中，方法包括：連續(xù)地收集所述第一光信號(hào)和所述第二光信號(hào)。在一些實(shí)例中，使用如象限光電二極管或具有兩個(gè)或更多個(gè)光電二極管(比如，三個(gè)或更多個(gè)光電二極管)的光電二極管陣列等位置感測(cè)檢測(cè)器來(lái)檢測(cè)所述光信號(hào)。

本公開(kāi)的方面還包括用于實(shí)踐主題方法的系統(tǒng)。根據(jù)某些實(shí)施例的系統(tǒng)包括：光源，如激光器(例如，氦氖激光器)；傳感器，所述傳感器被配置成用于沿著所述流動(dòng)流的豎直軸檢測(cè)第一光信號(hào)和第二光信號(hào)；以及處理器，所述處理器具有可操作地耦合至所述處理器的存儲(chǔ)器，所述存儲(chǔ)器包括用于計(jì)算所述第一光信號(hào)與所述第二光信號(hào)之間的差分信號(hào)幅值以便評(píng)估所述激光器與所述流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)的指令。

在某些實(shí)施例中，主題系統(tǒng)被配置成用于在使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行的樣本分析期間或之間減小用戶輸入或?qū)庠?、流?dòng)流或檢測(cè)器的手動(dòng)對(duì)準(zhǔn)的需要。在一些實(shí)施例中，可以將感興趣的系統(tǒng)部分自動(dòng)化或完全自動(dòng)化，從而使得對(duì)光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)的調(diào)整是處理器控制的。在某些實(shí)施例中，主題系統(tǒng)被配置成用于在沒(méi)有任何人類輸入的情況下將光源與流動(dòng)流對(duì)準(zhǔn)。

在一些實(shí)施例中，處理器包括存儲(chǔ)器，所述存儲(chǔ)器具有用于確定第一信號(hào)與第二信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值的指令。在這些實(shí)施例中，耦合至處理器的存儲(chǔ)器可以進(jìn)一步包括用于將用于照射流動(dòng)流的光源的位置調(diào)整到產(chǎn)生第一信號(hào)與第二信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值的位置的指令。在某些實(shí)例中，處理器存儲(chǔ)器包括用于在x-y平面中確定流動(dòng)流上的產(chǎn)生最大差分信號(hào)幅值的照射位置的指令。

在一些實(shí)施例中，光源是激光器。在一些實(shí)例中，激光器是連續(xù)波激光器。在某些實(shí)例中，激光器是氦氖激光器。在主題系統(tǒng)中可以采用一個(gè)或多個(gè)激光器，比如，2個(gè)或更多個(gè)激光器以及包括5個(gè)或更多個(gè)激光器。在某些實(shí)施例中，激光器耦合至支撐臺(tái)，所述支撐臺(tái)被配置成用于在x-y平面中調(diào)整激光器的位置。例如，支撐臺(tái)可以被配置成用于響應(yīng)于第一光信號(hào)與第二光信號(hào)之間的所計(jì)算的差分信號(hào)幅值而調(diào)整激光器的位置。

在一些實(shí)施例中，主題系統(tǒng)的傳感器被配置成用于從流動(dòng)流中檢測(cè)前向傳播(例如，散射)光。在其他實(shí)施例中，傳感器被定位成用于檢測(cè)通過(guò)全內(nèi)反射向上游傳播的光。在這些實(shí)施例中，主題系統(tǒng)可以進(jìn)一步包括流動(dòng)池噴嘴，所述流動(dòng)池噴嘴被配置成用于通過(guò)全內(nèi)反射將光向上游傳播穿過(guò)流動(dòng)流。例如，流動(dòng)池噴嘴可以包括：噴嘴室，所述噴嘴室具有近端和遠(yuǎn)端；噴嘴孔口，所述噴嘴孔口被定位在噴嘴室的遠(yuǎn)端處，從而使得噴嘴室被配置成用于將所傳播的光從流動(dòng)流引導(dǎo)至噴嘴室的近端。感興趣的傳感器可以包括位置感測(cè)檢測(cè)器，比如，象限光電二極管或光電二極管陣列。

提供了一種根據(jù)某些實(shí)施例的系統(tǒng)，所述系統(tǒng)用于通過(guò)以下方式將激光器(例如，在可移動(dòng)支撐臺(tái)上)與流動(dòng)流自動(dòng)對(duì)準(zhǔn)：沿著流動(dòng)流的豎直軸確定產(chǎn)生第一光信號(hào)與第二光信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值的照射位置；以及調(diào)整光源的位置，從而使得光照射位置與流動(dòng)流上產(chǎn)生第一信號(hào)與第二信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值的照射位置相匹配。

本公開(kāi)的各方面還包括用于實(shí)踐主題方法的計(jì)算機(jī)控制系統(tǒng)，其中，所述系統(tǒng)進(jìn)一步包括一個(gè)或多個(gè)具有處理器的計(jì)算機(jī)，所述處理器被配置成用于使本文中所描述的方法的一個(gè)或多個(gè)步驟自動(dòng)化。在一些實(shí)施例中，系統(tǒng)包括具有計(jì)算機(jī)可讀存儲(chǔ)介質(zhì)的計(jì)算機(jī)，所述計(jì)算機(jī)可讀存儲(chǔ)介質(zhì)具有存儲(chǔ)于其上的計(jì)算機(jī)程序，其中，所述計(jì)算機(jī)程序當(dāng)被加載到所述計(jì)算機(jī)上時(shí)包括：用于沿著激光照射的流動(dòng)流的豎直軸檢測(cè)第一光信號(hào)和第二光信號(hào)的算法，其中，所述第一光信號(hào)和所述第二光信號(hào)是在不同時(shí)間獲得的；用于計(jì)算所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的差分信號(hào)幅值的算法；以及用于基于所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的所述所計(jì)算的差分信號(hào)幅值來(lái)評(píng)估所述激光器與所述流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)的算法。

在某些實(shí)施例中，主題計(jì)算機(jī)控制系統(tǒng)包括一個(gè)或多個(gè)處理器，所述一個(gè)或多個(gè)處理器被配置成用于調(diào)整流動(dòng)流上的光照射位置，其中，所述處理器包括具有存儲(chǔ)于其上的指令的存儲(chǔ)器，所述指令包括：用于確定所述流動(dòng)流上產(chǎn)生所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的所述最大差分信號(hào)幅值的照射位置的算法；用于在x-y平面中確定所述流動(dòng)流上的當(dāng)前光照射位置的算法；以及用于調(diào)整所述光照射位置以便與所述流動(dòng)流上的產(chǎn)生所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的所述最大差分信號(hào)幅值的所述照射位置相匹配的算法。

附圖說(shuō)明

當(dāng)結(jié)合附圖閱讀以下詳細(xì)說(shuō)明時(shí)，可以最好地理解本發(fā)明。附圖中包括以下圖：

圖1描繪了根據(jù)某些實(shí)施例的評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)的側(cè)視圖圖解。

圖2展示了根據(jù)某些實(shí)施例的適合于實(shí)踐主題方法的系統(tǒng)的頂視圖圖解。

具體實(shí)施方式

在更詳細(xì)地描述本發(fā)明之前，應(yīng)當(dāng)理解的是，因?yàn)樗枋龅木唧w實(shí)施例可能變化，所以本發(fā)明不限于所述具體實(shí)施例。還應(yīng)當(dāng)理解的是，因?yàn)楸景l(fā)明的范圍將僅由所附權(quán)利要求書(shū)限制，所以本文中所使用的術(shù)語(yǔ)僅是出于描述具體實(shí)施例的目的，而不旨在是限制性的。

在提供了值范圍的情況下，應(yīng)當(dāng)理解的是，除非上下文清楚地另外指明，每個(gè)中間值(到下限的第十個(gè)單位，在所述范圍的上限與下限之間)以及在所陳述的范圍內(nèi)的任何其他所陳述的值或中間值均涵蓋在本發(fā)明之內(nèi)。所述更小范圍的上限和下限可以獨(dú)立地包括在更小范圍之內(nèi)，并且也涵蓋在本發(fā)明之內(nèi)，受制于在所陳述范圍內(nèi)任何確切排除的限制。在所陳述的范圍包括限制中的一者或兩者的情況下，排除了那些包括的限制中的任一者或兩者的范圍也包括在本發(fā)明之內(nèi)。

除非另外限定，本文中所使用的所有技術(shù)性術(shù)語(yǔ)和科學(xué)性術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員通常理解的含義相同的含義。盡管類似于或等同于本文中所描述的方法和材料的任何方法和材料也可以用于對(duì)本發(fā)明的實(shí)踐或測(cè)試，但是現(xiàn)在將對(duì)代表性說(shuō)明方法和材料進(jìn)行描述。

本說(shuō)明書(shū)中所引用的所有出版物和專利通過(guò)引用結(jié)合在此，就像每個(gè)單獨(dú)的出版物或?qū)＠痪唧w且單獨(dú)地指示為通過(guò)引用結(jié)合并且通過(guò)引用結(jié)合在此，以便結(jié)合所引用的所述出版物來(lái)公開(kāi)和描述所述方法和/或材料。對(duì)任何出版物的引用內(nèi)容是針對(duì)其在申請(qǐng)日期之前的公開(kāi)，并且不應(yīng)當(dāng)被解釋為承認(rèn)本發(fā)明因?yàn)橄惹鞍l(fā)明而不能獲得比這種出版物更早的申請(qǐng)日期。另外，所提供的出版物的日期可以不同于實(shí)際公開(kāi)日期，所述實(shí)際公開(kāi)日期可能需要被獨(dú)立確認(rèn)。

應(yīng)當(dāng)指出的是，除非上下文另外清楚地指明，如本文中所使用的以及在所附權(quán)利要求書(shū)中，單數(shù)形式““一個(gè)””、““一種””以及““所述””包括復(fù)數(shù)指代物。應(yīng)當(dāng)進(jìn)一步指出的是，可以將權(quán)利要求書(shū)撰寫(xiě)成排除任何可選要素。如此，這種陳述旨在充當(dāng)結(jié)合對(duì)權(quán)利要求要素的敘述使用如““僅僅””、““僅””等排他性術(shù)語(yǔ)或使用“負(fù)”限制的前提基礎(chǔ)。

如將對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員清楚的是，在閱讀本公開(kāi)時(shí)，本文中所描述和說(shuō)明的單獨(dú)實(shí)施例中的每個(gè)實(shí)施例具有不連續(xù)的組成部分和特征，所述組成部分和特征可以在不偏離本發(fā)明的范圍或精神的情況下易于與任何其他若干實(shí)施例的特征分離或組合?？梢园此鶖⑹龅氖录捻樞蚧虬催壿嬌峡赡艿娜魏纹渌樞騺?lái)執(zhí)行所敘述的任何方法。

如以上所概述的，本公開(kāi)提供了用于評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)的方法。在進(jìn)一步描述本公開(kāi)的實(shí)施例時(shí)，首先更詳細(xì)地描述了用于評(píng)估光源(例如，激光器)與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)的方法。接下來(lái)，描述了適合于實(shí)踐用于評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)的主題方法的系統(tǒng)。還提供了計(jì)算機(jī)控制系統(tǒng)和試劑盒。

用于評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)的方法

如以上所概述的，本公開(kāi)的各方面包括用于評(píng)估光源(例如，激光器)與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)的方法。在一些實(shí)施例中，主題方法包括：評(píng)估激光器與流式細(xì)胞儀中的流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)。根據(jù)某些實(shí)施例的方法包括：沿著照射流動(dòng)流的豎直軸檢測(cè)第一光信號(hào)和第二光信號(hào)，其中，所述第一光信號(hào)和所述第二光信號(hào)是在不同時(shí)間獲得的；以及計(jì)算所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的差分信號(hào)幅值以便評(píng)估所述光源與所述流動(dòng)流的所述對(duì)準(zhǔn)。短語(yǔ)“評(píng)估對(duì)準(zhǔn)”在其常規(guī)意義上在本文中用于指確定光源在流動(dòng)流上的相對(duì)照射位置。在一些實(shí)施例中，評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)包括沿著流動(dòng)流的橫軸確定光源的照射位置。如本文中所描述的，流動(dòng)流的橫軸指與流動(dòng)流的流體流的方向(即，縱軸)正交的軸。在其他實(shí)施例中，評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)包括判定光源的照射位置是否從流動(dòng)流的中心移位(即，偏離中心)。例如，方法可以包括：確定光源的照射位置沿著流動(dòng)流的橫軸從流動(dòng)流的中心移位1μm或更多，比如2μm或更多，比如3μm或更多，比如5μm或更多，比如10μm或更多，比如25μm或更多，比如50μm或更多，比如75μm或更多并且包括沿著橫軸從流動(dòng)流的中心移位100μm或更多。根據(jù)光源的照射空間寬度(例如，激光束寬度)，方法可以包括：確定光源的照射位置從流動(dòng)流的中心移位光源的照射寬度的0.01％或更多，比如0.05％或更多，比如0.1％或更多，比如0.5％或更多，比如1％或更多，比如2％或更多，比如3％或更多，比如5％或更多，比如10％或更多，比如25％或更多并且包括光源的照射寬度的50％或更多。在某些實(shí)施例中，評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)包括判定光源的照射位置是否處于流動(dòng)流的中心處。

如以下更詳細(xì)地描述的，在某些實(shí)施例中，照射到流動(dòng)流上的光由流動(dòng)流中的擾動(dòng)折射。(圖1)流動(dòng)流中的擾動(dòng)可以包括流動(dòng)流的中的樣本的組成部分，比如，細(xì)胞、珠粒、非細(xì)胞顆粒、生物大分子等。在一些實(shí)例中，流動(dòng)流104a中的擾動(dòng)102a在第一時(shí)間段在向上方向上將來(lái)自光源101a的光折射到檢測(cè)器103a(圖1，頂部)。在第二時(shí)間段，來(lái)自光源101b由流動(dòng)流104b中的擾動(dòng)102b在向下方向上折射到檢測(cè)器103b(圖1，底部)。因此，在第一時(shí)間段內(nèi)收集的光信號(hào)是來(lái)自由擾動(dòng)在向上方向上折射的光的信號(hào)，并且在第二時(shí)間段內(nèi)收集的光信號(hào)是來(lái)自由擾動(dòng)在向下方向上折射的光的信號(hào)。在一些實(shí)施例中，隨著在流動(dòng)流中流動(dòng)的擾動(dòng)橫跨進(jìn)入照射光束，擾動(dòng)在向上方向上折射光(相對(duì)于光源照射的線)。在穿過(guò)照射光束之后，隨著在流動(dòng)流中流動(dòng)的擾動(dòng)橫跨離開(kāi)照射光束，擾動(dòng)在向下方向上折射光。在這些實(shí)施例中，可以計(jì)算來(lái)自向上反射光的光信號(hào)的幅值與向下反射光的幅值之差，得出差分信號(hào)幅值。在一些實(shí)例中，在照射空間寬度以流動(dòng)流的中心為中心的情況下獲得最大差分信號(hào)幅值(即，向上反射光與向下反射光之間的最大信號(hào)幅值差)。(圖2)換言之，在這些實(shí)施例中，在照射空間寬度的中心與沿著橫軸的流動(dòng)流的中心對(duì)準(zhǔn)的情況下獲得最大差分信號(hào)幅值。在其他實(shí)例中，在照射空間寬度偏離流動(dòng)流的中心的情況下(比如，在光源的照射空間寬度以流動(dòng)流的邊緣為中心的情況下)獲得低差分信號(hào)幅值。在本公開(kāi)的一些實(shí)施例中，差分信號(hào)幅值隨著照射空間寬度的中心從流動(dòng)流的邊緣移位到流動(dòng)流的中心而增大。

在實(shí)踐根據(jù)某些實(shí)施例的方法時(shí)，沿著豎直軸而從照射流動(dòng)流(例如，激光照射的流動(dòng)流)中檢測(cè)一個(gè)或多個(gè)信號(hào)。在實(shí)施例中，使用如激光器等光源來(lái)照射流動(dòng)流，并且聚集并檢測(cè)由流動(dòng)流散射的光。只要充分地檢測(cè)到由流動(dòng)流散射的光的光信號(hào)就可以在沿著流動(dòng)流的任何適當(dāng)豎直位置處照射流動(dòng)流。在某些實(shí)施例中，流動(dòng)流是流式細(xì)胞儀流動(dòng)流，并且光源是被配置成用于在緊挨著流動(dòng)池噴嘴孔口的位置處照射流動(dòng)流的激光器。在其他實(shí)施例中，在流動(dòng)池噴嘴孔口下游的位置處照射流動(dòng)流，比如在距離流動(dòng)池噴嘴孔口0.001mm的位置處，比如0.005mm或更多，比如0.01mm或更多，比如0.05mm或更多，比如0.1mm或更多，比如0.5mm或更多，比如1mm或更多，比如2mm或更多，比如5mm或更多并且包括流動(dòng)池噴嘴孔口下游10mm或更多?？梢栽谝粋€(gè)或多個(gè)豎直位置處照射流動(dòng)流，比如2個(gè)或更多個(gè)，比如3個(gè)或更多個(gè)，比如4個(gè)或更多個(gè)，比如5個(gè)或更多個(gè)并且包括在10個(gè)或更多個(gè)豎直位置處照射流動(dòng)流。

在實(shí)施例中，可以使用任何適當(dāng)?shù)膶拵Щ蛘瓗Ч庠磥?lái)照射流動(dòng)流。根據(jù)流動(dòng)流中的組成部分(例如，細(xì)胞、珠粒、非細(xì)胞顆粒等)，用于評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)的光波長(zhǎng)可以在從200nm到1500nm的范圍內(nèi)變化，比如從250nm到1250nm，比如從300nm到1000nm，比如從350nm到900nm并且包括從400nm到800nm。例如，光源可以包括發(fā)射具有從200nm到900nm的波長(zhǎng)的光的寬帶光源。在其他實(shí)例中，光源包括發(fā)射范圍為從200nm到900nm的波長(zhǎng)的窄帶光源。例如，光源可以是發(fā)射具有范圍在200nm到900nm之間的波長(zhǎng)的光的窄帶led(1nm到25nm)。在一些實(shí)施例中，光源是激光器(比如，連續(xù)波激光器)。例如，激光器可以是二極管激光器，比如，紫外線二極管激光器、可見(jiàn)光二極管激光器和近紅外二極管激光器。在一些實(shí)例中，二極管激光器輸出波長(zhǎng)范圍為從375nm到1000nm的光，比如從405nm到875nm，比如從450nm到800nm，比如從500nm到650nm并且包括從525nm到625nm。在某些實(shí)施例中，感興趣的激光器包括405nm二極管激光器。在其他實(shí)施例中，感興趣的激光器包括488nm二極管激光器。在又其他實(shí)施例中，激光器可以是氦氖(hene)激光器。在某些實(shí)施例中，光源是流式細(xì)胞儀中的激光器，并且方法包括：評(píng)估激光器與流式細(xì)胞儀中的流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)。

在其他實(shí)施例中，光源是如電燈等非激光光源，包括但不限于鹵素?zé)?、氘弧燈、氙弧燈、發(fā)光二極管(比如，具有連續(xù)光譜的寬帶led)、超輻射發(fā)光二極管、半導(dǎo)體發(fā)光二極管、寬光譜led白光源、集成的多l(xiāng)ed。在一些實(shí)例中，除了其他光源以外，非激光光源是穩(wěn)定的光纖耦合寬帶光源、白光源或其任何組合。

根據(jù)期望光源在流動(dòng)流上的照射空間寬度，可以通過(guò)一個(gè)或多個(gè)光學(xué)調(diào)整方案使用所述光源來(lái)照射流動(dòng)流。通過(guò)“光學(xué)調(diào)整”意指可以根據(jù)期望改變光源的照射參數(shù)，比如，以便增大或減小流動(dòng)流上的照射寬度、流動(dòng)流上的照射位置、照射方向、從光源輸出的光的波長(zhǎng)、射束輪廓、射束寬度、射束強(qiáng)度、光源的焦點(diǎn)、脈沖寬度和其他某個(gè)參數(shù)。在一些實(shí)例中，光學(xué)調(diào)整是放大方案，所述放大方案被配置成用于增大光源在流動(dòng)流上的照射寬度，比如1％或更大，比如5％或更大，比如10％或更大，比如25％或更大，比如50％或更大并且包括將流動(dòng)流上的照射寬度增大75％或更大。在一些實(shí)例中，光學(xué)調(diào)整是縮小方案，所述放大方案被配置成用于減小光源在流動(dòng)流上的照射寬度，比如1％或更大，比如5％或更大，比如10％或更大，比如25％或更大，比如50％或更大并且包括將光源在流動(dòng)流上的照射寬度減小75％或更大。在仍其他實(shí)例中，光學(xué)調(diào)整方案是準(zhǔn)直方案。

可以使用任何合宜的光學(xué)調(diào)整方案來(lái)調(diào)整光源照射的空間橫截面，包括但不限于透鏡、反射鏡、濾光片、光纖、波長(zhǎng)分離器、針孔、狹縫、準(zhǔn)直方案及其組合。在某些實(shí)施例中，使用聚焦透鏡來(lái)光學(xué)地調(diào)整光源在流動(dòng)流上的照射空間寬度。在一個(gè)示例中，聚焦透鏡可以是縮小透鏡。在另一個(gè)示例中，聚焦透鏡是放大透鏡。在其他實(shí)施例中，使用一個(gè)或多個(gè)反射鏡來(lái)調(diào)整光源在流動(dòng)流上的照射空間寬度。在仍其他實(shí)施例中，使用光纖來(lái)調(diào)整光源的照射空間寬度。

可由光源在離流動(dòng)流任何適當(dāng)距離處照射流動(dòng)流，比如在離流動(dòng)流0.001mm或更多的距離處，比如0.005mm或更多，比如0.01mm或更多，比如0.05mm或更多，比如0.1mm或更多，比如0.5mm或更多，比如1mm或更多，比如5mm或更多，比如10mm或更多，比如25mm或更多并且在離流動(dòng)流100mm或更多的距離處。同樣地，可由光源以相對(duì)于流動(dòng)流的豎直軸的任何適當(dāng)角度(即，照射光束與流動(dòng)流的豎直軸所呈的角度)照射流動(dòng)流，比如以從10°到90°的范圍內(nèi)的角度，比如從15°到85°，比如從20°到80°，比如從25°到75°并且包括從30°到60°。在某些實(shí)施例中，由光源以相對(duì)于流動(dòng)流的豎直軸的90°角照射流動(dòng)流(即，光源照射與流動(dòng)流的豎直軸正交)。

在評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)時(shí)，可以連續(xù)地或者以不連續(xù)間隔照射流動(dòng)流。在一些實(shí)例中，方法包括：使用光源來(lái)連續(xù)地照射流動(dòng)流，比如，在通過(guò)收集實(shí)時(shí)數(shù)據(jù)而監(jiān)測(cè)光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)的情況下。在其他實(shí)例中，方法包括：使用光源以不連續(xù)的間隔照射流動(dòng)流，比如每0.001毫秒、每0.01毫秒、每0.1毫秒、每1毫秒、每10毫秒、每100毫秒并且包括每1000毫秒或其他某個(gè)間隔照射流動(dòng)流。在以不連續(xù)間隔照射流動(dòng)流的情況下，照射頻率可以比如取決于流動(dòng)流中的組成部分(例如，細(xì)胞、珠粒、非細(xì)胞顆粒)的濃度以及流動(dòng)流的流速。

在實(shí)踐主題方法的實(shí)施例時(shí)，沿著照射流動(dòng)流的豎直軸檢測(cè)第一光信號(hào)和第二光信號(hào)。只要檢測(cè)到可用光信號(hào)就可以在離流動(dòng)流任何適當(dāng)距離處檢測(cè)光信號(hào)。例如，可以在離流動(dòng)流0.01mm或更多處檢測(cè)光信號(hào)，比如0.05mm或更多，比如0.1mm或更多，比如0.5mm或更多，比如1mm或更多，比如2.5mm或更多，比如5mm或更多，比如10mm或更多，比如15mm或更多，比如25mm或更多并且包括離流動(dòng)流50mm或更多。還可以以離流動(dòng)流任何角度檢測(cè)光信號(hào)。例如，可以以相對(duì)于流動(dòng)流的豎直軸某個(gè)角度檢測(cè)光信號(hào)，所述角度的范圍為從10°到90°，比如從15°到85°，比如從20°到80°，比如從25°到75°并且包括從30°至60°。在一些實(shí)例中，以相對(duì)于流動(dòng)流的豎直軸30°到60°而定位檢測(cè)器(如以下更詳細(xì)地描述的)。

如以上所描述的，可以在光源照射的沿著流動(dòng)流的每個(gè)位置處檢測(cè)一個(gè)或多個(gè)光信號(hào)。例如，可以在光源照射的沿著流動(dòng)流的每個(gè)位置處檢測(cè)兩個(gè)或更多個(gè)光信號(hào)，比如三個(gè)或更多個(gè)光信號(hào)，比如四個(gè)或更多個(gè)光信號(hào)，比如五個(gè)或更多個(gè)光信號(hào)并且包括10個(gè)或更多個(gè)光信號(hào)。在照射是連續(xù)的情況下，可以在照射流動(dòng)流的同時(shí)在不同時(shí)間檢測(cè)一個(gè)或多個(gè)光信號(hào)，比如兩個(gè)或更多個(gè)光信號(hào)，比如三個(gè)或更多個(gè)光信號(hào)，比如四個(gè)或更多個(gè)光信號(hào)，比如五個(gè)或更多個(gè)光信號(hào)并且包括10個(gè)或更多個(gè)光信號(hào)。

在某些實(shí)施例中，來(lái)自照射流動(dòng)流的光信號(hào)來(lái)自由被定位在流動(dòng)流附近的一個(gè)或多個(gè)檢測(cè)器從光源中檢測(cè)的采用前向配置的光。例如，來(lái)自照射流動(dòng)流的光信號(hào)可由被配置成前向散射檢測(cè)器的一個(gè)或多個(gè)檢測(cè)器檢測(cè)。在其他實(shí)施例中，來(lái)自照射流動(dòng)流的光信號(hào)是通過(guò)全內(nèi)反射向上游傳播的光。術(shù)語(yǔ)“傳播”在其常規(guī)意義在本文中用于指光行進(jìn)穿過(guò)流動(dòng)流的流體介質(zhì)，其中，所傳播的光的路徑是通過(guò)流體介質(zhì)進(jìn)行的折射、反射、衍射和干涉的函數(shù)。在其他實(shí)施例中，由流動(dòng)流折射的光通過(guò)全內(nèi)反射向上游傳播。通過(guò)“上游”意指在與通過(guò)流動(dòng)流進(jìn)行的流體流動(dòng)的方向相反的方向上傳播并且聚集發(fā)射光。換言之，在流動(dòng)流沿著x-y平面中的y軸的正y方向具有流體流的情況下，來(lái)自通過(guò)全內(nèi)反射向上游傳播的光的光信號(hào)在負(fù)y方向上穿過(guò)。短語(yǔ)“全內(nèi)反射”在其常規(guī)意義上在本文中用于指在流體介質(zhì)(例如，流動(dòng)流)的邊界內(nèi)傳播電磁波，從而使得當(dāng)所傳播的波以相對(duì)于表面法線大于臨界角的角度撞擊所述介質(zhì)邊界時(shí)，電磁波被內(nèi)部反射。具體地，在流體介質(zhì)邊界的另一側(cè)面上折射率較低并且入射角大于臨界角的情況下，傳播的光波不會(huì)穿過(guò)邊界并且會(huì)被內(nèi)部反射。

在一些實(shí)施例中，主題方法包括：在來(lái)自照射流動(dòng)流的光信號(hào)通過(guò)全內(nèi)反射向上游傳播的情況下評(píng)估光源與流式細(xì)胞儀中的流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)。在某些實(shí)例中，用于檢測(cè)來(lái)自通過(guò)全內(nèi)反射向上游傳播的光的光信號(hào)的方法包括但不限于于2014年4月23日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?4/260,177中所描述的方法，所述專利申請(qǐng)的公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用結(jié)合在此。

在一些實(shí)施例中，從照射流動(dòng)流中檢測(cè)第一光信號(hào)和第二光信號(hào)包括移動(dòng)流動(dòng)流的路徑旁邊的光源和一個(gè)或多個(gè)檢測(cè)器。例如，可以向上游或向下游移動(dòng)流動(dòng)流旁邊的光源和檢測(cè)器，在沿著流動(dòng)流的豎直軸的多個(gè)位置處檢測(cè)第一光信號(hào)和第二光信號(hào)。在實(shí)施例中，可以在沿著流動(dòng)流的一個(gè)或多個(gè)豎直位置處檢測(cè)第一光和第二光，比如在2個(gè)或更多個(gè)位置處，比如在3個(gè)或更多個(gè)位置處，比在如5個(gè)或更多個(gè)位置處并且包括在沿著流動(dòng)流的10個(gè)或更多個(gè)豎直位置處。在沿著流動(dòng)流的多于一個(gè)豎直位置處收集光信號(hào)的情況下，沿著流動(dòng)流的每個(gè)位置之間的距離可以變化，比如被分離0.001mm或更多，比如0.005mm或更多，比如0.01mm或更多，比如0.05mm或更多，比如0.1mm或更多，比如0.5mm或更多，比如1mm或更多，比如5mm或更多，比如10mm或更多，比如25mm或更多并且包括在被分離100mm或更多的兩個(gè)或更多個(gè)豎直位置處檢測(cè)光信號(hào)。

除了其他光電檢測(cè)器以外，可以通過(guò)任何合宜的位置感測(cè)檢測(cè)協(xié)議來(lái)檢測(cè)光信號(hào)，包括但不限于光學(xué)傳感器或光電檢測(cè)器，比如，有源像素傳感器(aps)、象限光電二極管、圖像傳感器、電荷耦合設(shè)備(ccd)、增強(qiáng)型電荷耦合設(shè)備(iccd)、發(fā)光二極管、光子計(jì)數(shù)器、輻射熱測(cè)量計(jì)、熱電檢測(cè)器、光敏電阻、光伏電池、光電二極管、光電倍增管、光電晶體管、量子點(diǎn)光電導(dǎo)體或光電二極管以及其組合。在某些實(shí)施例中，使用象限光電二極管來(lái)檢測(cè)光信號(hào)。在使用象限光電二極管來(lái)檢測(cè)光信號(hào)的情況下，象限光電二極管的每個(gè)區(qū)域的有源檢測(cè)表面積可以比如從0.01cm²到10cm²變化，比如從0.05cm²到9cm²，比如從，比如從0.1cm²到8cm²，比如從0.5cm²到7cm²并且包括從1cm²到5cm²。在一些實(shí)例中，光電檢測(cè)器是具有多于一個(gè)光電二極管的光電二極管，比如兩個(gè)或更多個(gè)光電二極管，比如三個(gè)或更多個(gè)，比如五個(gè)或更多個(gè)并且包括10個(gè)或更多個(gè)光電二極管。

如以上所概述的，對(duì)第一光信號(hào)與第二光信號(hào)之間的幅值差進(jìn)行計(jì)算以便確定差分信號(hào)幅值。可以結(jié)合檢測(cè)第一光信號(hào)和第二光信號(hào)而計(jì)算第一光信號(hào)與第二光信號(hào)之間的差分信號(hào)幅值，或者可以在檢測(cè)光信號(hào)之后的預(yù)定持續(xù)時(shí)間后進(jìn)行。在一些實(shí)施例中，結(jié)合對(duì)光信號(hào)的檢測(cè)而連續(xù)地計(jì)算第一光信號(hào)與第二光信號(hào)之間的差分信號(hào)幅值。

在其他實(shí)施例中，在對(duì)光信號(hào)的檢測(cè)之后的預(yù)定持續(xù)時(shí)間內(nèi)計(jì)算第一光信號(hào)與第二光信號(hào)之間的差分信號(hào)幅值，比如在對(duì)第一光信號(hào)和第二光信號(hào)的檢測(cè)之后的0.001秒或更長(zhǎng)，比如0.01秒或更長(zhǎng)，比如0.1秒或更長(zhǎng)，比如0.5秒或更長(zhǎng)，比如1秒或更長(zhǎng)并且包括在對(duì)第一光信號(hào)和第二光信號(hào)的檢測(cè)之后的5秒或更長(zhǎng)。

在實(shí)踐主題方法時(shí)，基于所計(jì)算的在第一光信號(hào)與第二光信號(hào)之間的差分信號(hào)幅值來(lái)評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)。在一些實(shí)施例中，當(dāng)差分信號(hào)幅值處于或超過(guò)預(yù)定閾值時(shí)，確定光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)。在其他實(shí)施例中，當(dāng)差分信號(hào)幅值低于預(yù)定閾值時(shí)，確定光源與流動(dòng)流不對(duì)準(zhǔn)。

在其他實(shí)施例中，將所計(jì)算的差分信號(hào)幅值與最大差分信號(hào)幅值進(jìn)行比較以便評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)。最大差分信號(hào)幅值可以是預(yù)定最大差分信號(hào)幅值或者可以具體地針對(duì)特定流動(dòng)流和光源而確定。在一些實(shí)例中，基于流動(dòng)流和光源的參數(shù)而預(yù)定最大差分信號(hào)幅值，比如流動(dòng)流的直徑(例如，如通過(guò)流式細(xì)胞儀中的流動(dòng)池噴嘴估計(jì)的)、光源的照射空間寬度和所采用的光電檢測(cè)器的類型(例如，象限光電二極管)。

在其他實(shí)例中，主題方法包括：針對(duì)特定光源和流動(dòng)流而確定最大差分信號(hào)幅值。在一些實(shí)施例中，確定最大差分信號(hào)幅值包括：檢測(cè)多組第一光信號(hào)和第二光信號(hào)；針對(duì)每組第一光信號(hào)和第二光信號(hào)而計(jì)算差分信號(hào)幅值；以及從所述多個(gè)所計(jì)算的差分信號(hào)幅值中確定最大差分信號(hào)幅值。在一些實(shí)例中，通過(guò)按不連續(xù)增量來(lái)調(diào)整光源在流動(dòng)流上的照射位置以及在每個(gè)增量處測(cè)量第一光信號(hào)和第二光信號(hào)，從而檢測(cè)所述多個(gè)第一光信號(hào)和第二光信號(hào)。例如，光源可以以不連續(xù)增量而沿著流動(dòng)流的橫軸移位，比如以0.001mm或更多的增量，比如0.005mm或更多，比如0.01mm或更多，比如0.05mm或更多，比如0.1mm或更多，比如0.5mm或更多，比如1mm或更多，比如2mm或更多并且包括沿著流動(dòng)流的橫軸以5mm或更多的增量對(duì)光源進(jìn)行移位。

在其他實(shí)施例中，確定最大差分信號(hào)幅值包括：以連續(xù)的方式沿著橫軸橫跨流動(dòng)流而對(duì)光源進(jìn)行移位；以預(yù)定時(shí)間間隔收集第一光信號(hào)和第二光信號(hào)；從所收集的第一光信號(hào)和第二光信號(hào)中的每個(gè)光信號(hào)中計(jì)算差分信號(hào)幅值；以及從所計(jì)算的差分信號(hào)幅值中確定最大差分信號(hào)幅值。在這些實(shí)施例中，以預(yù)定時(shí)間間隔收集第一光信號(hào)和第二光信號(hào)，比如每0.001毫秒或更多，比如每0.005毫秒或更多，比如每0.01毫秒或更多，比如每0.05毫秒或更多，比如每0.1毫秒或更多，比如每0.5毫秒或更多，比如每1毫秒或更多，比如每5毫秒或更多，比如每10毫秒或更多，比如每25毫秒或更多并且包括每100毫秒或更多。

在一些實(shí)例中，在通過(guò)將所計(jì)算的差分信號(hào)幅值與最大差分信號(hào)幅值進(jìn)行比較來(lái)評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)時(shí)，當(dāng)所計(jì)算的差分信號(hào)幅值小于最大差分信號(hào)幅值時(shí)，確定光源與流動(dòng)流不對(duì)準(zhǔn)。在其他實(shí)例中，當(dāng)所計(jì)算的差分信號(hào)幅值與最大差分信號(hào)幅值之差超過(guò)預(yù)定閾值時(shí)，確定光源與流動(dòng)流不對(duì)準(zhǔn)。例如，當(dāng)所計(jì)算的差分信號(hào)幅值比最大差分信號(hào)幅值小1％或更多、2％或更多、5％或更多、10％或更多、15％或更多、20％或更多、25％或更多并且包括50％或更多時(shí)，確定光源與流動(dòng)流不對(duì)準(zhǔn)。

在一些實(shí)施例中，方法包括：沿著與流動(dòng)流的縱軸正交的橫軸確定光源的產(chǎn)生第一光信號(hào)與第二光信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值的照射位置。例如，方法可以包括：捕獲照射流動(dòng)流的圖像以及對(duì)沿著橫軸的流動(dòng)流上的照射的空間位置進(jìn)行映射。例如，可以捕獲照射流動(dòng)流的一個(gè)或多個(gè)圖像，比如2個(gè)或更多個(gè)圖像，比如3個(gè)或更多個(gè)圖像，比如5個(gè)或更多個(gè)圖像并且包括可以捕獲照射流動(dòng)流的10個(gè)或更多個(gè)圖像?；诠庠丛诹鲃?dòng)流上的確定照射空間位置，方法可以包括：生成數(shù)據(jù)信號(hào)，所述數(shù)據(jù)信號(hào)與光源在流動(dòng)流上的產(chǎn)生第一信號(hào)與第二信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值的照射空間位置相對(duì)應(yīng)。在一些實(shí)施例中，光源在流動(dòng)流上的產(chǎn)生第一信號(hào)與第二信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值的照射位置是照射的空間寬度以流動(dòng)流的中心為中心的情況。在其他實(shí)施例中，光源在流動(dòng)流上的產(chǎn)生第一信號(hào)與第二信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值的照射位置是照射的空間寬度沿著流動(dòng)流的橫軸從流動(dòng)流的中心移位0.001μm或更多，比如0.005μm或更多，比如0.01μm或更多，比如0.05μm或更多，比如0.1μm或更多，比如0.5μm或更多，比如1μm或更多，比如2μm或更多，比如3μm或更多，比如5μm或更多，比如10μm或更多，比如25μm或更多，比如50μm或更多，比如75μm或更多并且包括沿著橫軸從流動(dòng)流的中心移位100μm或更多。

在某些實(shí)施例中，響應(yīng)于光源與流動(dòng)流的評(píng)估對(duì)準(zhǔn)而對(duì)光源進(jìn)行調(diào)整。例如，在一些實(shí)例中，在確定光源在流動(dòng)流上的照射位置產(chǎn)生第一信號(hào)與第二信號(hào)之間的差分信號(hào)幅值(其小于最大差分信號(hào)幅值)的情況下，可以沿著橫軸而將光源移位到產(chǎn)生第一光信號(hào)與第二光信號(hào)支架的最大差分信號(hào)幅值的位置。在這些實(shí)例中，方法可以包括：對(duì)沿著橫軸對(duì)光源的產(chǎn)生第一光信號(hào)與第二光信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值的位置進(jìn)行映射，以及沿著橫軸將光源的位置與產(chǎn)生第一光信號(hào)與第二光信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值的位置進(jìn)行匹配。

在某些實(shí)施例中，方法包括：在x-y平面中確定光源的產(chǎn)生第一光信號(hào)與第二光信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值的照射位置。例如，方法可以包括：捕獲照射流動(dòng)流的圖像以及在x-y平面中對(duì)照射在流動(dòng)流上的空間位置進(jìn)行映射。例如，可以捕獲照射流動(dòng)流的一個(gè)或多個(gè)圖像，比如2個(gè)或更多個(gè)圖像，比如3個(gè)或更多個(gè)圖像，比如5個(gè)或更多個(gè)圖像并且包括可以捕獲照射流動(dòng)流的10個(gè)或更多個(gè)圖像?；诠庠丛诹鲃?dòng)流上的確定照射空間位置，方法可以包括：生成數(shù)據(jù)信號(hào)，所述數(shù)據(jù)信號(hào)與光源在流動(dòng)流上的產(chǎn)生第一信號(hào)與第二信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值的照射空間位置相對(duì)應(yīng)。在一些實(shí)施例中，光源在流動(dòng)流上的產(chǎn)生第一信號(hào)與第二信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值的照射位置是照射空間寬度以流動(dòng)流的中心為中心的情況。在其他實(shí)施例中，光源在流動(dòng)流上的產(chǎn)生第一信號(hào)與第二信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值的照射位置是照射空間寬度沿著流動(dòng)流的橫軸從流動(dòng)流的中心移位0.001μm或更多的情況，比如0.005μm或更多，比如0.01μm或更多，比如0.05μm或更多，比如0.1μm或更多，比如0.5μm或更多，比如1μm或更多，比如2μm或更多，比如3μm或更多，比如5μm或更多，比如10μm或更多，比如25μm或更多，比如50μm或更多，比如75μm或更多并且包括沿著橫軸從流動(dòng)流的中心移位100μm或更多。

在實(shí)施例中，可以響應(yīng)于光源與流動(dòng)流的評(píng)估對(duì)準(zhǔn)而對(duì)光源進(jìn)行調(diào)整。例如，在一些實(shí)例中，在確定光源在流動(dòng)流上的照射位置產(chǎn)生第一信號(hào)與第二信號(hào)之間的差分信號(hào)幅值(其小于最大差分信號(hào)幅值)的情況下，可以在x-y平面中將光源移位到產(chǎn)生第一光信號(hào)與第二光信號(hào)支架的最大差分信號(hào)幅值的位置。在這些實(shí)例中，方法可以包括：在x-y平面中對(duì)光源的產(chǎn)生第一光信號(hào)與第二光信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值的位置進(jìn)行映射，以及在x-y平面中將光源的位置與產(chǎn)生第一光信號(hào)與第二光信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值的位置進(jìn)行匹配。

可以通過(guò)任何合宜的方案調(diào)整光源在流動(dòng)流上的照射位置，比如通過(guò)直接移動(dòng)光源，移動(dòng)耦合至光源的支撐臺(tái)以及改變一個(gè)或多個(gè)調(diào)整方案(如以上所描述的)的位置、配置或取向。在一些實(shí)施例中，通過(guò)改變光源與流動(dòng)流之間的透鏡或反射鏡的取向(例如，傾斜)來(lái)調(diào)整光源在流動(dòng)流上的照射位置。例如，可以改變光學(xué)調(diào)整方案(例如，反射鏡)的取向以便將光束定位在流動(dòng)流的不同部分上，比如，通過(guò)將光學(xué)調(diào)整方案的角度增大5°或更多，比如10°或更多，比如15°或更多，比如20°或更多，比如30°或更多，比如45°或更多，比如60°或更多并且包括75°或更多。在某些實(shí)施例中，方法包括：通過(guò)將反射鏡相對(duì)于流動(dòng)流的角度改變5°或更多來(lái)將光的照射位置調(diào)整到流動(dòng)流的不同部分上，比如10°或更多，比如15°或更多，比如20°或更多，比如30°或更多，比如45°或更多，比如60°或更多并且包括75°或更多。

在某些實(shí)施例中，方法包括：評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)，以及自動(dòng)地調(diào)整光源，從而使得光源在流動(dòng)流上的照射被對(duì)準(zhǔn)。通過(guò)“自動(dòng)的”意指響應(yīng)于所計(jì)算的差分信號(hào)幅值或響應(yīng)于所計(jì)算的差分信號(hào)幅值與最大差分信號(hào)幅值之間的比較而進(jìn)行的對(duì)光源位置的調(diào)整幾乎不需要人類干預(yù)或手動(dòng)輸入。在某些實(shí)施例中，在沒(méi)有任何人類干預(yù)的情況下，根據(jù)主題方法對(duì)光源在流動(dòng)流上的照射位置進(jìn)行調(diào)整。例如，在某些實(shí)施例中，方法包括：通過(guò)以下方式來(lái)自動(dòng)地并且在沒(méi)有流式細(xì)胞儀的用戶的任何輸入的情況下將激光器與流式細(xì)胞儀中的流動(dòng)流對(duì)準(zhǔn)：從激光照射的流動(dòng)流中檢測(cè)第一光信號(hào)和第二光信號(hào)；計(jì)算第一光信號(hào)與第二光信號(hào)之間的差分信號(hào)幅值；將所計(jì)算的差分信號(hào)幅值與最大差分信號(hào)幅值進(jìn)行比較；以及將流動(dòng)流上的激光照射位置與在流動(dòng)流上的產(chǎn)生來(lái)自激光照射的流動(dòng)流的第一光信號(hào)與第二光信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值的激光照射位置進(jìn)行匹配。

在一些實(shí)施例中，在將光源與產(chǎn)生最大差分信號(hào)幅值的位置進(jìn)行匹配之后，可以在重新評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)之前的預(yù)定持續(xù)時(shí)間內(nèi)將光源保持在此位置中，比如1分鐘或更長(zhǎng)，比如5分鐘或更長(zhǎng)，比如15分鐘或更長(zhǎng)，比如30分鐘或更長(zhǎng)，比如60分鐘或更長(zhǎng)，比如6小時(shí)或更多，比如12小時(shí)或更多，比如24小時(shí)或更多，比如48小時(shí)或更多，比如72小時(shí)或更多并且包括在重新評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)前的168小時(shí)或更多內(nèi)維持光源的位置，或者其他某個(gè)間隔。

在一些實(shí)施例中，本公開(kāi)的方法包括：重新評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)?？梢愿鶕?jù)期望在任何時(shí)間重新評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)，比如在預(yù)定持續(xù)時(shí)間之后或者響應(yīng)于期望評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)的事件。例如，可以每5分鐘、每10分鐘、每30分鐘、每60分鐘、每6小時(shí)、每12小時(shí)、每24小時(shí)、每48小時(shí)、每72小時(shí)、每168小時(shí)或其他某個(gè)間隔地重新評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)。在其他實(shí)施例中，可以在可能改變光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)的事件之后重新評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)。例如，可以在改變或調(diào)整光源(比如，將新的激光器安裝在流式細(xì)胞儀中)之后或者在改變流動(dòng)流(比如，改變流式細(xì)胞儀中的流動(dòng)池噴嘴)的情況下重新評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)。

在其他實(shí)施例中，可以連續(xù)地評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)。例如，可以通過(guò)收集實(shí)時(shí)數(shù)據(jù)來(lái)連續(xù)地監(jiān)測(cè)激光器與流式細(xì)胞儀中的流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)。

用于評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)的系統(tǒng)

本公開(kāi)的各方面還包括用于評(píng)估光源(例如，激光器)與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)的方法。在一些實(shí)施例中，主題系統(tǒng)包括激光器以及流式細(xì)胞儀的流動(dòng)流。根據(jù)某些實(shí)施例的系統(tǒng)包括：光源；傳感器，所述傳感器被配置成用于沿著所述流動(dòng)流的豎直軸檢測(cè)第一光信號(hào)和第二光信號(hào)；以及處理器，所述處理器具有可操作地耦合至所述處理器的存儲(chǔ)器，所述存儲(chǔ)器包括用于計(jì)算所述第一光信號(hào)與所述第二光信號(hào)之間的差分信號(hào)幅值以便評(píng)估所述光源與所述流動(dòng)流的所述對(duì)準(zhǔn)的指令。如以上所描述的，術(shù)語(yǔ)“評(píng)估對(duì)準(zhǔn)”在其常規(guī)意義上在本文中用于指確定光源在流動(dòng)流上的相對(duì)照射位置。在一些實(shí)施例中，主題系統(tǒng)被配置成用于通過(guò)沿著流動(dòng)流的橫軸確定光源的照射位置來(lái)評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)。在其他實(shí)施例中，主題系統(tǒng)被配置成用于通過(guò)判定光源的照射位置是否從流動(dòng)流的中心移位(即，偏離中心)來(lái)評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)。例如，主題系統(tǒng)可以向用戶提供光源的照射位置沿著流動(dòng)流的橫軸從流動(dòng)流的中心移位1μm或更多，比如2μm或更多，比如3μm或更多，比如5μm或更多，比如10μm或更多，比如25μm或更多，比如50μm或更多，比如75μm或更多并且包括沿著橫軸從流動(dòng)流的中心移位100μm或更多。在其他實(shí)施例中，感興趣的系統(tǒng)可以確定光源的照射位置從流動(dòng)流的中心移位光源的照射寬度的0.01％或更多，比如0.05％或更多，比如0.1％或更多，比如0.5％或更多，比如1％或更多，比如2％或更多，比如3％或更多，比如5％或更多，比如10％或更多，比如25％或更多并且包括光源的照射寬度的50％或更多。在某些實(shí)施例中，主題系統(tǒng)被配置成用于評(píng)估光源的照射位置是否處于流動(dòng)流的中心處。

在某些實(shí)施例中，可以將感興趣的系統(tǒng)完全自動(dòng)化，從而使得評(píng)估光源與流動(dòng)流之間的對(duì)準(zhǔn)是處理器控制的。通過(guò)“完全自動(dòng)化”意指評(píng)估光源與流動(dòng)流之間的對(duì)準(zhǔn)幾乎不需要人類干預(yù)或者到主題系統(tǒng)中的手動(dòng)輸入。在某些實(shí)施例中，主題系統(tǒng)被配置成用于在沒(méi)有任何人類干預(yù)的情況下評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)。

如以上所概述的，感興趣的系統(tǒng)包括光源。在實(shí)施例中，光源可以是任何適當(dāng)?shù)膶拵Щ蛘瓗Ч庠?。根?jù)從流動(dòng)流的組成部分(例如，細(xì)胞、珠粒、非細(xì)胞顆粒等)，光源可以被配置成用于發(fā)射在從200nm到1500nm的范圍內(nèi)變化的光波長(zhǎng)，比如從250nm到1250nm，比如從300nm到1000nm，比如從350nm到900nm并且包括從400nm到800nm。例如，光源可以包括發(fā)射具有從200nm到900nm的波長(zhǎng)的光的寬帶光源。在其他實(shí)例中，光源包括發(fā)射范圍為從200nm到900nm的波長(zhǎng)的窄帶光源。例如，光源可以是發(fā)射具有范圍在200nm到900nm之間的波長(zhǎng)的光的窄帶led(1nm到25nm)。在一些實(shí)施例中，光源是激光器(比如，連續(xù)波激光器)。例如，激光器可以是二極管激光器，比如，紫外線二極管激光器、可見(jiàn)光二極管激光器和近紅外二極管激光器。在一些實(shí)例中，二極管激光器輸出波長(zhǎng)范圍為從375nm到1000nm的光，比如從405nm到875nm，比如從450nm到800nm，比如從500nm到650nm并且包括從525nm到625nm。在某些實(shí)施例中，感興趣的激光器包括405nm二極管激光器。在其他實(shí)施例中，激光器可以是氦氖(hene)激光器。在某些實(shí)施例中，光源是流式細(xì)胞儀中的激光器。

在其他實(shí)施例中，光源是如電燈等非激光光源，包括但不限于鹵素?zé)?、氘弧燈、氙弧燈、發(fā)光二極管(比如，具有連續(xù)光譜的寬帶led)、超輻射發(fā)光二極管、半導(dǎo)體發(fā)光二極管、寬光譜led白光源、集成的多l(xiāng)ed。在一些實(shí)例中，除了其他光源以外，非激光光源是穩(wěn)定的光纖耦合寬帶光源、白光源、或其任何組合。

根據(jù)所期望的光源進(jìn)行的照射在流動(dòng)流上的空間寬度，感興趣的系統(tǒng)還可以包括與光源耦合的一個(gè)或多個(gè)光學(xué)調(diào)整方案。如以上所討論的，術(shù)語(yǔ)“光學(xué)調(diào)整”指能夠改變照射空間寬度或者來(lái)自光源的其他某個(gè)照射特性(如例如，流動(dòng)流上的照射位置、照射方向、波長(zhǎng)、射束輪廓、射束寬度、射束強(qiáng)度、焦點(diǎn)和脈沖寬度)的任何設(shè)備。例如，系統(tǒng)可以包括增大或減小光源的照射空間寬度的光學(xué)調(diào)整方案。在一些實(shí)例中，光學(xué)調(diào)整是放大方案，所述放大方案被配置成用于增大光源的照射寬度，比如1％或更大，比如5％或更大，比如10％或更大，比如25％或更大，比如50％或更大并且包括將光源的照射寬度增大75％或更大的放大方案。在其他實(shí)例中，光學(xué)調(diào)整是縮小方案，所述縮小方案被配置成用于減小光源的照射寬度，比如1％或更大，比如5％或更大，比如10％或更大，比如25％或更大，比如50％或更大并且包括將光源的照射寬度減小75％或更大的縮小方案。在仍其他實(shí)例中，光學(xué)調(diào)整方案是準(zhǔn)直方案。

在實(shí)施例中，光學(xué)調(diào)整方案可以是調(diào)整光源的一個(gè)或多個(gè)特性的任何合宜設(shè)備，包括但不限于透鏡、反射鏡、濾光片、光纖、波長(zhǎng)分離器、針孔、狹縫、準(zhǔn)直方案及其組合。在某些實(shí)施例中，感興趣的系統(tǒng)包括一個(gè)或多個(gè)聚焦透鏡。在一個(gè)示例中，聚焦透鏡可以是縮小透鏡。在另一個(gè)示例中，聚焦透鏡是放大透鏡。在其他實(shí)施例中，感興趣的系統(tǒng)包括一個(gè)或多個(gè)反射鏡。在仍其他實(shí)施例中，感興趣的系統(tǒng)包括光纖。

在一些實(shí)施例中，光學(xué)調(diào)整部件是可移動(dòng)的。例如，在一個(gè)示例中，可以移動(dòng)反射鏡以便調(diào)整與流動(dòng)流的激光器對(duì)準(zhǔn)。在一些實(shí)例中，在兩個(gè)維度上移動(dòng)光學(xué)調(diào)整部件，比如，在與流動(dòng)流的軸正交的x-y平面中。在其他示例中，光學(xué)調(diào)整部件可以在三個(gè)維度上移動(dòng)。在某些實(shí)施例中，光學(xué)調(diào)整部件是反射鏡，所述反射鏡被配置成被移動(dòng)以便調(diào)整光源在流動(dòng)流上的照射位置。在一些實(shí)施例中，反射鏡可以被配置在x-y平面中(比如，沿著流動(dòng)流的軸線)被移動(dòng)。在其他實(shí)施例中，反射鏡被配置成用于改變角度，比如，相對(duì)于光流或流動(dòng)流被傾斜。例如，系統(tǒng)可以被配置成用于通過(guò)將反射鏡相對(duì)于流動(dòng)流的角度改變5°或更多來(lái)將光的照射位置改變到流動(dòng)流的不同部分上，比如10°或更多，比如15°或更多，比如20°或更多，比如30°或更多，比如45°或更多，比如60°或更多并且包括75°或更多。

在光學(xué)調(diào)整部件(例如，反射鏡)被配置成移動(dòng)的情況下，光學(xué)調(diào)整部件可以被配置成連續(xù)地或者以不連續(xù)間隔移動(dòng)。在一些實(shí)施例中，光學(xué)調(diào)整部件的移動(dòng)是連續(xù)的。在其他實(shí)施例中，光學(xué)調(diào)整部件可以以不連續(xù)的間隔移動(dòng)，如例如，以0.01微米或更大增量，如0.05微米或更大，如0.1微米或更大，如0.5微米或更大，如1微米或更大，如10微米或更大，如100微米或更大，如500微米或更大，如1mm或更大，如5mm或更大，如10mm或更大并且包括25mm或更大增量。

可以采用任何移位方案來(lái)移動(dòng)光學(xué)調(diào)整部件結(jié)構(gòu)，比如，耦合至可移動(dòng)支撐臺(tái)或直接使用電動(dòng)機(jī)致動(dòng)的平移臺(tái)、導(dǎo)桿平移組件、齒輪傳動(dòng)的平移設(shè)備(比如，采用除了其他類型的電動(dòng)機(jī)以外的步進(jìn)電動(dòng)機(jī)、伺服電動(dòng)機(jī)、無(wú)刷電動(dòng)機(jī)、有刷dc電動(dòng)機(jī)、微型步進(jìn)驅(qū)動(dòng)電動(dòng)機(jī)、高分辨率步進(jìn)電動(dòng)機(jī)的那些)。

光源可以被定位在離流動(dòng)流任何適當(dāng)距離處，比如在離流動(dòng)流0.001mm或更多的距離處，比如0.005mm或更多，比如0.01mm或更多，比如0.05mm或更多，比如0.1mm或更多，比如0.5mm或更多，比如1mm或更多，比如5mm或更多，比如10mm或更多，比如25mm或更多并且在離流動(dòng)流100mm或更多的距離處。此外，可以以與流動(dòng)流的豎直軸的任何適當(dāng)角度(即，照射的光束與流動(dòng)流的豎直軸所呈的角度)來(lái)定位光源，比如以從10°到90°的范圍內(nèi)的角度，比如從15°到85°，比如從20°到80°，比如從25°到75°并且包括從30°到60°。在某些實(shí)施例中，以相對(duì)于流動(dòng)流的豎直軸90°角(即，光源與流動(dòng)流的豎直軸正交)定位光源。

光源可以被配置成用于連續(xù)地或者以不連續(xù)間隔照射流動(dòng)流。在一些實(shí)例中，系統(tǒng)包括被配置成用于(比如，使用在流式細(xì)胞儀中的探詢點(diǎn)處連續(xù)地照射流動(dòng)流的連續(xù)波激光器)連續(xù)地照射流動(dòng)流的光源。在其他實(shí)例中，感興趣的系統(tǒng)包括被配置成用于以不連續(xù)的間隔(比如每0.001毫秒、每0.01毫秒、每0.1毫秒、每1毫秒、每10毫秒、每100毫秒并且包括每1000毫秒，或者其他某個(gè)間隔)照射流動(dòng)流的光源。在光源被配置成用于以不連續(xù)的間隔照射流動(dòng)流的情況下，系統(tǒng)可以包括一個(gè)或多個(gè)附加部件以便使用光源來(lái)提供對(duì)流動(dòng)流的間歇性照射。例如，在這些實(shí)施例中，主題系統(tǒng)可以包括一個(gè)或多個(gè)激光束斬光器(用于阻擋并將流動(dòng)流暴露于光源中的手動(dòng)控制或計(jì)算機(jī)控制的束闌)。

在某些實(shí)施例中，系統(tǒng)包括耦合至光源以便調(diào)整光源的位置的一個(gè)或多個(gè)支撐臺(tái)，如例如，以便將光源與流動(dòng)流對(duì)準(zhǔn)。除了其他類型的支撐結(jié)構(gòu)以外，適當(dāng)?shù)闹闻_(tái)可以是被配置用于使光源處于適當(dāng)位置的任何合宜安裝設(shè)備并且可以包括平面襯底、波狀外形的安裝設(shè)備、圓柱形或管狀支撐結(jié)構(gòu)、激光器或led保持器。在一些實(shí)例中，支撐臺(tái)是針對(duì)激光器的底座。如所期望的，根據(jù)主題系統(tǒng)中的光源的數(shù)量，支撐臺(tái)的數(shù)量可以變化，比如，兩個(gè)或更多個(gè)、三個(gè)或更多個(gè)，比如四個(gè)或更多臺(tái)并且包括五個(gè)或更多個(gè)支撐臺(tái)。在某些實(shí)施例中，感興趣的系統(tǒng)包括一個(gè)支撐臺(tái)，比如，具有安裝的激光器的支撐臺(tái)。

在一些實(shí)施例中，支撐臺(tái)是可移動(dòng)的。例如，在一個(gè)示例中，可以移動(dòng)支撐臺(tái)以便調(diào)整與流動(dòng)流的激光器對(duì)準(zhǔn)。在一些實(shí)例中，支撐臺(tái)可以在兩個(gè)維度上移動(dòng)，比如，在與流動(dòng)流的軸正交的x-y平面中。在其他實(shí)例中，支撐結(jié)構(gòu)可以在三個(gè)維度上移動(dòng)。在支撐臺(tái)被配置成移動(dòng)的情況下，支撐臺(tái)可以被配置成連續(xù)地或者以不連續(xù)間隔移動(dòng)。在一些實(shí)施例中，支撐臺(tái)可以以連續(xù)運(yùn)動(dòng)而移動(dòng)。在其他實(shí)施例中，支撐臺(tái)可以以不連續(xù)間隔移動(dòng)，如例如，以0.01微米或更大增量，如0.05微米或更大，如0.1微米或更大，如0.5微米或更大，如1微米或更大，如10微米或更大，如100微米或更大，如500微米或更大，如1mm或更大，如5mm或更大，如10mm或更大并且包括25mm或更大增量。

可以采用任何移位方案來(lái)移動(dòng)支撐結(jié)構(gòu)，比如，使用電動(dòng)機(jī)致動(dòng)的平移臺(tái)、導(dǎo)桿平移組件、齒輪傳動(dòng)的平移設(shè)備(比如，采用除了其他類型的電動(dòng)機(jī)以外的步進(jìn)電動(dòng)機(jī)、伺服電動(dòng)機(jī)、無(wú)刷電動(dòng)機(jī)、有刷dc電動(dòng)機(jī)、微型步進(jìn)驅(qū)動(dòng)電動(dòng)機(jī)、高分辨率步進(jìn)電動(dòng)機(jī)的部件)來(lái)移動(dòng)支撐臺(tái)。

如以上所討論的，在評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)時(shí)，沿著照射流動(dòng)流的豎直軸檢測(cè)第一光信號(hào)和第二光信號(hào)。在實(shí)施例中，主題系統(tǒng)包括用于檢測(cè)來(lái)自流動(dòng)流的光信號(hào)的一個(gè)或多個(gè)光電檢測(cè)器。除了其他光電檢測(cè)器以外，主題系統(tǒng)中的光電檢測(cè)器可以是任何合宜的位置感測(cè)檢測(cè)方案，包括但不限于光學(xué)傳感器或光電檢測(cè)器，比如，有源像素傳感器(aps)、象限光電二極管、圖像傳感器、電荷耦合設(shè)備(ccd)、增強(qiáng)型電荷耦合設(shè)備(iccd)、發(fā)光二極管、光子計(jì)數(shù)器、輻射熱測(cè)量計(jì)、熱電檢測(cè)器、光敏電阻、光伏電池、光電二極管、光電倍增管、光電晶體管、量子點(diǎn)光電導(dǎo)體或光電二極管以及其組合。在某些實(shí)施例中，感興趣的系統(tǒng)包括象限光電二極管。例如，光電檢測(cè)器可以是具有每個(gè)區(qū)域的范圍為從0.01cm²到10cm²的有源檢測(cè)表面積的象限光二極管，比如從0.05cm²到9cm²，比如從，比如從0.1cm²到8cm²，比如從0.5cm²到7cm²并且包括從1cm²到5cm²。在一些實(shí)例中，光電檢測(cè)器是具有多于一個(gè)光電二極管的光電二極管，比如兩個(gè)或更多個(gè)光電二極管，比如三個(gè)或更多個(gè)，比如五個(gè)或更多個(gè)并且包括10個(gè)或更多個(gè)光電二極管。

只要可用光信號(hào)是可檢測(cè)的就可以將光電檢測(cè)器定位在離流動(dòng)流任何適當(dāng)距離處。例如，可以將主題系統(tǒng)中的檢測(cè)器定位成離流動(dòng)流1mm或更多，比如5mm或更多，比如10mm或更多，比如15mm或更多，比如25mm或更多，比如50mm或更多，比如100mm或更多，比如150mm或更多，比如250mm或更多并且包括500mm或更多。還可以以離流動(dòng)流任何角度定位檢測(cè)器。例如，可以以相對(duì)于流動(dòng)流的豎直10°到90°而使檢測(cè)器成角度，比如從15°到85°，比如從20°到80°，比如從25°到75°并且包括從30°至60°。在一些實(shí)例中，以相對(duì)于流動(dòng)流的豎直軸30°到60°而定位所述一個(gè)或多個(gè)檢測(cè)器。

在某些實(shí)施例中，主題系統(tǒng)被配置成用于通過(guò)來(lái)自照射流動(dòng)流的前向傳播(例如，散射)光來(lái)評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)并且包括一個(gè)或多個(gè)檢測(cè)器，所述一個(gè)或多個(gè)檢測(cè)器以從光源起的前向配置被定位在流動(dòng)流附近。例如，來(lái)自照射流動(dòng)流的光信號(hào)可由被配置成前向散射檢測(cè)器的一個(gè)或多個(gè)檢測(cè)器檢測(cè)。在這些實(shí)施例中，前向散射檢測(cè)器被定位在流動(dòng)流與光源的相反側(cè)上并且被定位成用于收集和檢測(cè)前向傳播(例如，散射)光。在其他實(shí)施例中，主題系統(tǒng)被配置成用于通過(guò)檢測(cè)來(lái)自通過(guò)全內(nèi)反射而向上游傳播的光的光信號(hào)來(lái)評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)。如以上所討論的，由流動(dòng)流折射的光通過(guò)全內(nèi)反射向上游傳播。在這些實(shí)施例中，在與通過(guò)流動(dòng)流進(jìn)行的流體流動(dòng)的方向相反的方向上傳播并且聚集光。換言之，在流動(dòng)流沿著x-y平面中的y軸的正y方向具有流體流的情況下，來(lái)自通過(guò)全內(nèi)反射向上游傳播的光的光信號(hào)在負(fù)y方向上穿過(guò)。在某些實(shí)施例中，用于檢測(cè)來(lái)自通過(guò)全內(nèi)反射在流式細(xì)胞儀中向上游傳播的光的光信號(hào)的感興趣的流動(dòng)池噴嘴和系統(tǒng)包括但不限于于2014年4月23日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?4/260,177中所描述的流動(dòng)池噴嘴和系統(tǒng)，所述專利申請(qǐng)的公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用結(jié)合在此。

如以上所概述的，系統(tǒng)包括一個(gè)或多個(gè)處理器，所述一個(gè)或多個(gè)處理器具有可操作地耦合至處理器的存儲(chǔ)器，其中，存儲(chǔ)器包括用于計(jì)算第一光信號(hào)與第二光信號(hào)之間的差分信號(hào)幅值以便評(píng)估光源(例如，激光器)與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)的指令。在實(shí)施例中，處理器被配置成用于執(zhí)行來(lái)自存儲(chǔ)器的用于評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)的指令，并且在一些實(shí)例中被配置成用于調(diào)整光源的位置以便與產(chǎn)生來(lái)自所照射的流動(dòng)流的第一光信號(hào)與第二光信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值的位置相匹配。處理器包括存儲(chǔ)器，所述存儲(chǔ)器具有用于執(zhí)行主體方法(如以上所描述的)的步驟的多條指令，比如，在不同時(shí)間沿著所照射的流動(dòng)流的縱軸檢測(cè)第一光信號(hào)和第二光信號(hào)；計(jì)算第一信號(hào)與第二信號(hào)之間的差分信號(hào)幅值；以及基于所計(jì)算的在第一光信號(hào)與第二光信號(hào)之間的差分信號(hào)幅值來(lái)評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)。本發(fā)明的系統(tǒng)可以包括硬件部件和軟件部件兩者，其中所述硬件部件可以采取一個(gè)或多個(gè)平臺(tái)的形式例如呈服務(wù)器的形式，以使得功能元件即進(jìn)行系統(tǒng)的特定任務(wù)(如管理信息的輸入和輸出，處理信息等)的那些系統(tǒng)元件可以通過(guò)在代表系統(tǒng)的一個(gè)或多個(gè)計(jì)算機(jī)平臺(tái)上并且跨越一個(gè)或多個(gè)計(jì)算機(jī)平臺(tái)執(zhí)行軟件應(yīng)用而得以進(jìn)行。

在實(shí)施例中，處理器被配置成用于對(duì)第一光信號(hào)與第二光信號(hào)之間的幅值差進(jìn)行計(jì)算以便確定差分信號(hào)幅值。在一些實(shí)施例中，處理器結(jié)合檢測(cè)第一光信號(hào)和第二光信號(hào)而計(jì)算第一光信號(hào)與第二光信號(hào)之間的差分信號(hào)幅值。在其他實(shí)施例中，處理器在對(duì)光信號(hào)的檢測(cè)之后的預(yù)定持續(xù)時(shí)間內(nèi)計(jì)算差分信號(hào)幅值，比如在對(duì)第一光信號(hào)和第二光信號(hào)的檢測(cè)之后的0.001秒或更長(zhǎng)，比如0.01秒或更長(zhǎng)，比如0.1秒或更長(zhǎng)，比如0.5秒或更長(zhǎng)，比如1秒或更長(zhǎng)并且包括在對(duì)第一光信號(hào)和第二光信號(hào)的檢測(cè)之后的5秒或更長(zhǎng)。

在一些實(shí)施例中，處理器包括存儲(chǔ)器，所述存儲(chǔ)器具有用于基于所計(jì)算的在第一光信號(hào)與第二光信號(hào)之間的差分信號(hào)幅值來(lái)評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)的指令。在一些實(shí)施例中，處理器存儲(chǔ)器包括用于在所計(jì)算的差分信號(hào)幅值處于或高于預(yù)定閾值時(shí)確定光源與流動(dòng)流對(duì)準(zhǔn)的算法。在其他實(shí)施例中，處理器存儲(chǔ)器包括用于在所計(jì)算的差分信號(hào)幅值低于預(yù)定閾值時(shí)確定光源與流動(dòng)流不對(duì)準(zhǔn)的算法。

在某些實(shí)施例中，處理器存儲(chǔ)器包括用于通過(guò)將所計(jì)算的差分信號(hào)幅值與最大差分信號(hào)幅值進(jìn)行比較來(lái)評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)的算法。在一些實(shí)例中，在通過(guò)將所計(jì)算的差分信號(hào)幅值與最大差分信號(hào)幅值進(jìn)行比較來(lái)評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)時(shí)，感興趣的系統(tǒng)可以被配置成用于當(dāng)所計(jì)算的差分信號(hào)幅值小于最大差分信號(hào)幅值時(shí)，向用戶輸出光源與流動(dòng)流不對(duì)準(zhǔn)。在其他實(shí)例中，系統(tǒng)可以被配置成用于當(dāng)所計(jì)算的差分信號(hào)幅值與最大差分信號(hào)幅值之差超過(guò)預(yù)定閾值時(shí)，向用戶輸出光源與流動(dòng)流不對(duì)準(zhǔn)。例如，當(dāng)所計(jì)算的差分信號(hào)幅值比最大差分信號(hào)幅值小1％或更多、2％或更多、5％或更多、10％或更多、15％或更多、20％或更多、25％或更多并且包括50％或更多時(shí)，系統(tǒng)可以警告用戶光源與流動(dòng)流不對(duì)準(zhǔn)?？梢詫?lái)自處理器的輸出可以通過(guò)任何合宜的方案?jìng)鬟_(dá)給用戶，如例如，通過(guò)顯示在監(jiān)測(cè)器上或通過(guò)打印報(bào)告。

如以上所討論的，在一些實(shí)例中，最大差分信號(hào)幅值時(shí)預(yù)先加載到主題系統(tǒng)的處理器存儲(chǔ)器中的預(yù)定最大差分信號(hào)幅值并且基于流動(dòng)流和光源的參數(shù)。例如，預(yù)加載的最大差分信號(hào)幅值可以基于如流動(dòng)流的直徑(例如，如通過(guò)流式細(xì)胞儀中的流動(dòng)池噴嘴估計(jì)的)、光源的照射的空間寬度以及光電檢測(cè)器的類型等參數(shù)。

在一些實(shí)例中，處理器存儲(chǔ)器包括用于確定最大差分信號(hào)幅值的算法。在一個(gè)示例中，處理器存儲(chǔ)器包括用于進(jìn)行以下各項(xiàng)的算法：檢測(cè)多組第一光信號(hào)和第二光信號(hào)；針對(duì)每組第一光信號(hào)和第二光信號(hào)而計(jì)算差分信號(hào)幅值；以及從所述多個(gè)所計(jì)算的差分信號(hào)幅值中確定最大差分信號(hào)幅值。主題系統(tǒng)還可以被配置成用于確定光源在流動(dòng)流上的產(chǎn)生第一光信號(hào)與第二光信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值的照射位置。例如，感興趣的系統(tǒng)可以包括一個(gè)或多個(gè)圖像捕獲傳感器以便在x-y平面中對(duì)流動(dòng)流上的照射空間位置進(jìn)行映射。

在某些實(shí)例中，系統(tǒng)被配置成用于響應(yīng)于光源與流動(dòng)流的經(jīng)評(píng)估的對(duì)準(zhǔn)而調(diào)整光源的位置。例如，處理器存儲(chǔ)器可以包括用于所確定的第一信號(hào)與第二信號(hào)之間的差分信號(hào)幅值(確定其小于最大值)的情況下在x-y平面中將光源調(diào)整到產(chǎn)生第一光信號(hào)與第二光信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值的位置的指令。在一些實(shí)例中，處理器可以包括用于在x-y平面中對(duì)光源的產(chǎn)生第一光信號(hào)與第二光信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值的位置進(jìn)行映射的算法，以及在x-y平面中將光源的位置與產(chǎn)生第一光信號(hào)與第二光信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值的位置進(jìn)行匹配的算法。為了將光源調(diào)整到產(chǎn)生第一光信號(hào)與第二光信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值的位置，主題系統(tǒng)可以被配置成用于或者通過(guò)改變一個(gè)或多個(gè)光學(xué)調(diào)整部件的位置、配置或取向(例如，改變透鏡或反射鏡的傾斜)來(lái)移動(dòng)光源(比如，在支撐臺(tái)上)。

在某些實(shí)施例中，主題系統(tǒng)被配置成用于自動(dòng)地將光源與流動(dòng)流對(duì)準(zhǔn)。在這些實(shí)施例中，系統(tǒng)包括處理器，所述處理器具有存儲(chǔ)器，所述存儲(chǔ)器具有用于確定在流動(dòng)流上的產(chǎn)生第一信號(hào)與第二信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值的照射位置的指令；用于在x-y平面中確定在流動(dòng)流上的當(dāng)前光照射位置的指令；以及用于調(diào)整光照射的位置以便與在流動(dòng)流上產(chǎn)生第一信號(hào)與第二信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值的照射位置相匹配的指令。

圖2展示了根據(jù)某些實(shí)施例的適合于實(shí)踐主題方法的系統(tǒng)的頂視圖圖解。光源201通過(guò)光學(xué)調(diào)整方案(反射鏡)204照射流動(dòng)流202，并且通過(guò)光電檢測(cè)器(例如，象限光電二極管)203檢測(cè)前向傳播(例如，散射)光信號(hào)。如本文中所描述的，差分信號(hào)幅值取決于由光源201進(jìn)行的照射在流動(dòng)流202上的位置。相比于在由光源201進(jìn)行的照射處于流動(dòng)流的邊緣(205b)處的情況下的差分信號(hào)幅值，在沿著橫軸的流動(dòng)流的中心(205a)處的照射提供最大差分信號(hào)幅值。在光源的照射位置落在流動(dòng)流之外(205c)的情況下，檢測(cè)不到任何光信號(hào)。

本發(fā)明的方面進(jìn)一步涉及被配置成用于執(zhí)行上述方法的流式細(xì)胞術(shù)系統(tǒng)。用于分析樣本的適當(dāng)流式細(xì)胞術(shù)系統(tǒng)和方法包括但不限于以下文獻(xiàn)中所描述的系統(tǒng)和方法：flowcytometry:apracticalapproach(《流式細(xì)胞術(shù)：實(shí)用方法》)(編者：ormerod(奧默羅德)，牛津大學(xué)出版社(1997))；flowcytometryprotocols(《流式細(xì)胞術(shù)方案》)(編者：雅羅什斯基(jaroszeski)等人，methodsinmolecularbiologyno.91(《分子生物學(xué)方法第91期》)，胡瑪納出版社(1997))；practicalflowcytometry,3rded.(《實(shí)用流式細(xì)胞術(shù)：第三版》)(wiley-liss(1995))；annclinbiochem(《臨床生化紀(jì)事》)(virgo(弗戈)等人(2012)，1月，49(第1部分)：17-28)；seminthromhemost(《血栓與止血研討》)(linden(林登)等人，2004年10月，30(5)：502-11)；jpathol(《病理學(xué)雜志》)(alison(艾莉森)等人，2010年12月，222(4)：335-344)；以及critrevtherdrugcarriersyst(《治療性藥物載體系統(tǒng)的關(guān)鍵評(píng)論》)(herbig(赫比格)等人(2007)，24(3)：203-255)，所述文獻(xiàn)的公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用結(jié)合在此。在某些實(shí)例中，感興趣的流式細(xì)胞術(shù)系統(tǒng)包括bd生物科學(xué)facscanto^tm流式細(xì)胞儀、bd生物科學(xué)facsvantage^tm系統(tǒng)、bd生物科學(xué)facsort^tm系統(tǒng)、bd生物科學(xué)facscount^tm系統(tǒng)、bd生物科學(xué)facscan^tm系統(tǒng)、以及bd生物科學(xué)facscalibur^tm系統(tǒng)、bd生物科學(xué)influx^tm細(xì)胞分選器、bd生物科學(xué)jazz^tm細(xì)胞分選器以及bd生物科學(xué)aria^tm細(xì)胞分選器等。

在某些實(shí)施例中，主題系統(tǒng)是結(jié)合了以下美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)栔忻枋龅牧魇郊?xì)胞儀的一個(gè)或多個(gè)部件的流式細(xì)胞儀系統(tǒng)：3,960,449；4,347,935；4,667,830；4,704,891；4,770,992；5,030,002；5,040,890；5,047,321；5,245,318；5,317,162；5,464,581；5,483,469；5,602,039；5,620,842；5,627,040；5,643,796；5,700,692；6,372,506；6,809,804；6,813,017；6,821,740；7,129,505；7,201,875；7,544,326；8,140,300；8,233,146；8,753,573；8,975,595；9,092,034；9,095,494和9,097,640，所述專利的公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用結(jié)合在此。

在某些實(shí)施例中，感興趣的流式細(xì)胞儀被配置成包括流動(dòng)池噴嘴，所述流動(dòng)池噴嘴被配置成用于通過(guò)全內(nèi)反射將由流動(dòng)流中的樣本發(fā)射的光向上游傳播穿過(guò)噴嘴孔口。術(shù)語(yǔ)“傳播”在其常規(guī)意義在本文中用于指光行進(jìn)穿過(guò)流動(dòng)流的流體介質(zhì)，其中，所傳播的光的路徑是通過(guò)流體介質(zhì)進(jìn)行的折射、反射、衍射和干涉的函數(shù)。在這些實(shí)施例中，流式細(xì)胞儀包括流動(dòng)池噴嘴，所述流動(dòng)池噴嘴在與通過(guò)流動(dòng)流進(jìn)行的流體流動(dòng)的方向相反的方向上傳播和聚集光。換言之，在流動(dòng)流沿著x-y平面中的y軸的正y方向具有流體流的情況下，來(lái)自通過(guò)全內(nèi)反射向上游傳播的光的光信號(hào)在負(fù)y方向上穿過(guò)。短語(yǔ)“全內(nèi)反射”在其常規(guī)意義上在本文中用于指在流體介質(zhì)(例如，流動(dòng)流)的邊界內(nèi)傳播電磁波，從而使得當(dāng)所傳播的波以相對(duì)于表面法線大于臨界角的角度撞擊所述介質(zhì)邊界時(shí)，電磁波被內(nèi)部反射。

根據(jù)這些實(shí)施例的流動(dòng)池噴嘴包括噴嘴室，所述噴嘴室具有近端，在所述近端處，向上游傳播的光被聚集；以及遠(yuǎn)端，所述遠(yuǎn)端具有與所述流動(dòng)流流體連通的噴嘴孔口。在一些實(shí)例中，所述流動(dòng)池噴嘴包括近端圓柱形部分，所述近端圓柱形部分限定了縱軸；以及遠(yuǎn)端截頭圓錐形部分，所述遠(yuǎn)端截頭圓錐形部分終止于橫向于所述縱軸的具有所述噴嘴孔口的平坦表面中。在某些實(shí)施例中，流動(dòng)池噴嘴的截頭圓錐形壁相對(duì)于流動(dòng)流的縱軸的角度可以在從120°到160°的范圍內(nèi)變化。在某些實(shí)施例中，噴嘴室的壁是反射性的。感興趣的流式細(xì)胞儀中的流動(dòng)池噴嘴的近端可以包括樣本注入口以便向流動(dòng)池提供樣本(例如，生物樣本)以及鞘液注入口，所述鞘液注入口向流動(dòng)池噴嘴提供鞘液。

在一些實(shí)例中，流動(dòng)池噴嘴包括一個(gè)或多個(gè)光學(xué)調(diào)整部件。通過(guò)“光學(xué)調(diào)整”意指在從流動(dòng)流向上游傳播穿過(guò)噴嘴孔口的發(fā)射光輸送到檢測(cè)器(如以下更詳細(xì)地討論的)以供測(cè)量之前被如所期望地改變。例如，光學(xué)調(diào)整可以用于增大所聚集的光束的尺寸，以便將所聚集的光束聚焦到檢測(cè)器的表面上或以便對(duì)光束進(jìn)行準(zhǔn)直。在一些實(shí)例中，光學(xué)調(diào)整是放大方案，以便增大由在流動(dòng)流內(nèi)通過(guò)全內(nèi)反射傳播穿過(guò)噴嘴孔口的光束產(chǎn)生的束斑。在其他實(shí)例中，光學(xué)調(diào)整是用于減小束斑的尺寸的聚焦方案。

在一些實(shí)施例中，被配置成用于通過(guò)全內(nèi)反射將由樣本發(fā)射的光向上游傳播穿過(guò)流動(dòng)流的感興趣的流動(dòng)池噴嘴和流式細(xì)胞儀包括但不限于于2014年4月23日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?4/260,177中所描述的流動(dòng)池噴嘴和流式細(xì)胞儀，所述專利申請(qǐng)的公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用結(jié)合在此。在一些實(shí)施例中，感興趣的系統(tǒng)是被配置成用于根據(jù)于2015年10月28日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?4/925,616中所描述的方法和設(shè)備來(lái)對(duì)準(zhǔn)流式細(xì)胞儀的集光系統(tǒng)的系統(tǒng)，所述專利申請(qǐng)的公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用結(jié)合在此。

計(jì)算機(jī)控制的系統(tǒng)

本公開(kāi)的各方面進(jìn)一步包括用于實(shí)踐主題方法的計(jì)算機(jī)控制的系統(tǒng)，其中，所述系統(tǒng)進(jìn)一步包括用于對(duì)用于實(shí)踐本文中所描述的方法的系統(tǒng)進(jìn)行完全自動(dòng)化或部分自動(dòng)化的一個(gè)或多個(gè)計(jì)算機(jī)。在一些實(shí)施例中，系統(tǒng)包括具有計(jì)算機(jī)可讀存儲(chǔ)介質(zhì)的計(jì)算機(jī)，所述計(jì)算機(jī)可讀存儲(chǔ)介質(zhì)具有存儲(chǔ)于其上的計(jì)算機(jī)程序，其中，所述計(jì)算機(jī)程序當(dāng)被加載到所述計(jì)算機(jī)上時(shí)包括用于在不同時(shí)間沿著激光照射的流動(dòng)流的豎直軸檢測(cè)第一光信號(hào)和第二光信號(hào)的指令；用于確定檢測(cè)場(chǎng)中的流動(dòng)流的空間位置的算法；用于計(jì)算第一信號(hào)與第二信號(hào)之間的差分信號(hào)幅值的算法；以及用于基于所計(jì)算的在第一信號(hào)與第二信號(hào)之間的差分信號(hào)幅值來(lái)評(píng)估光源(例如，激光器)與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)的算法。在某些實(shí)例中，系統(tǒng)包括具有計(jì)算機(jī)可讀存儲(chǔ)介質(zhì)的計(jì)算機(jī)，所述計(jì)算機(jī)可讀存儲(chǔ)介質(zhì)具有存儲(chǔ)于其上的計(jì)算機(jī)程序，其中，所述計(jì)算機(jī)程序當(dāng)被加載到計(jì)算機(jī)上時(shí)進(jìn)一步包括具有以下各項(xiàng)中的一項(xiàng)或多項(xiàng)的指令：用于確定第一信號(hào)與第二信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值的算法；用于在x-y平面中將光源在流動(dòng)流上的照射調(diào)整到產(chǎn)生第一光信號(hào)與第二光信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值的位置的算法；以及用于在x-y平面確定光源在流動(dòng)流上的產(chǎn)生第一信號(hào)與第二信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值的照射位置的算法。在某些實(shí)施例中，計(jì)算機(jī)程序當(dāng)被加載到計(jì)算機(jī)上時(shí)進(jìn)一步包括具有以下各項(xiàng)的指令：用于確定在流動(dòng)流上的產(chǎn)生第一信號(hào)與第二信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值的照射位置的算法；用于在x-y平面中確定在流動(dòng)流上的當(dāng)前光照射位置的算法；以及用于調(diào)整光照射位置以便與在流動(dòng)流上產(chǎn)生第一信號(hào)與第二信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值的照射位置相匹配的算法。

在實(shí)施例中，系統(tǒng)包括輸入模塊、處理模塊和輸出模塊。感興趣的處理模塊可以包括一個(gè)或多個(gè)處理器，所述一個(gè)或多個(gè)處理器被配置成或者被自動(dòng)化成用于評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)并響應(yīng)于如以上所描述的評(píng)估對(duì)準(zhǔn)而調(diào)整光源的位置。例如，處理模塊可以包括兩個(gè)或更多個(gè)處理器(比如三個(gè)或更多個(gè)處理器，比如四個(gè)或更多個(gè)處理器并且包括五個(gè)或更多個(gè)處理器)，所述兩個(gè)或更多個(gè)處理器被配置成或者被自動(dòng)化成用于評(píng)估光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)并響應(yīng)于評(píng)估對(duì)準(zhǔn)而調(diào)整光源的位置。在一些實(shí)施例中，主題系統(tǒng)可以包括輸入模塊，從而使得可以在實(shí)踐主題方法之前輸入關(guān)于光源、流動(dòng)流、光電檢測(cè)器等的參數(shù)或信息。

如以上所描述的，每個(gè)處理器包括處理器，所述處理器具有用于執(zhí)行主題方法(如以上所描述的)的一個(gè)或多個(gè)步驟的多條指令，比如，在不同時(shí)間沿著照射流動(dòng)流的豎直軸檢測(cè)第一光信號(hào)和第二光信號(hào)；計(jì)算第一光信號(hào)與第二光信號(hào)之間的差分信號(hào)幅值以便評(píng)估激光器與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)；確定第一光信號(hào)與第二光信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值；將所計(jì)算的差分信號(hào)幅值與最大信號(hào)幅值進(jìn)行比較；以及將光源的位置調(diào)整到產(chǎn)生最大信號(hào)幅值的位置。

本發(fā)明的系統(tǒng)可以包括硬件部件和軟件部件兩者，其中，硬件部件可以采取一個(gè)或多個(gè)平臺(tái)的形式(例如，以服務(wù)器的形式)，從而使得功能元件(即，執(zhí)行系統(tǒng)的特定任務(wù)(比如，管理信息的輸入和輸出，處理信息等的那些系統(tǒng)元件)可以通過(guò)在表示系統(tǒng)的一個(gè)或多個(gè)計(jì)算機(jī)平臺(tái)上并且跨越所述一個(gè)或多個(gè)計(jì)算機(jī)平臺(tái)執(zhí)行軟件應(yīng)用而得以執(zhí)行。

系統(tǒng)可以包括顯示器和操作者輸入設(shè)備。操作者輸入設(shè)備可以例如是鍵盤(pán)、鼠標(biāo)或類似設(shè)備。處理模塊包括可訪問(wèn)存儲(chǔ)器的處理器，存儲(chǔ)器具有存儲(chǔ)于其上的用于進(jìn)行本發(fā)明方法的步驟的指令。處理模塊可以包括操作系統(tǒng)、圖形用戶界面(gui)控制器、系統(tǒng)存儲(chǔ)器、存儲(chǔ)器存儲(chǔ)設(shè)備和輸入-輸出控制器、高速緩沖存儲(chǔ)器、數(shù)據(jù)備份單元以及許多其他設(shè)備。處理器可以是商業(yè)上可獲得的處理器或處理器可以是可獲得或?qū)⒆優(yōu)榭色@得的其他處理器之一。處理器執(zhí)行操作系統(tǒng)并且操作系統(tǒng)以眾所周知的方式與固件和硬件對(duì)接，并且有助于處理器協(xié)調(diào)和執(zhí)行可以用各種編程語(yǔ)言來(lái)編寫(xiě)的不同計(jì)算機(jī)程序的功能，如本領(lǐng)域中所已知，所述編程語(yǔ)言如java、perl、c++、其他高水平或低水平語(yǔ)言以及其組合。操作系統(tǒng)通常與處理器配合來(lái)協(xié)調(diào)和執(zhí)行計(jì)算機(jī)的其他部件的功能。操作系統(tǒng)還提供調(diào)度、輸入-輸出控制、文檔和數(shù)據(jù)管理、存儲(chǔ)器管理以及通信控制和相關(guān)的服務(wù)，所有所述服務(wù)都是根據(jù)已知的技術(shù)。所述處理器可以是任何適當(dāng)?shù)哪M或數(shù)字系統(tǒng)。在一些實(shí)施例中，處理器包括允許用戶基于第一光信號(hào)和第二光信號(hào)來(lái)手動(dòng)地將光源與流動(dòng)流對(duì)準(zhǔn)的模擬電子設(shè)備。在一些實(shí)施例中，處理器包括提供反饋控制(如例如，負(fù)反饋控制)的模擬電子設(shè)備。

系統(tǒng)存儲(chǔ)器可以是任何各種已知的或未來(lái)的存儲(chǔ)器存儲(chǔ)設(shè)備。實(shí)例包括任何通常可獲得的隨機(jī)存取存儲(chǔ)器(ram)、磁介質(zhì)如固定硬盤(pán)或磁帶、讀寫(xiě)致密盤(pán)等光學(xué)介質(zhì)、閃存存儲(chǔ)器設(shè)備或其他存儲(chǔ)器存儲(chǔ)設(shè)備。存儲(chǔ)器存儲(chǔ)設(shè)備可以是任何各種已知的或未來(lái)的設(shè)備，包括致密盤(pán)驅(qū)動(dòng)器、磁帶驅(qū)動(dòng)器、可移動(dòng)硬盤(pán)驅(qū)動(dòng)器或軟盤(pán)驅(qū)動(dòng)器。這種類型的存儲(chǔ)器存儲(chǔ)設(shè)備通常從程序存儲(chǔ)介質(zhì)(未示出)中讀取和/或?qū)懭氤绦虼鎯?chǔ)介質(zhì)，如對(duì)應(yīng)地致密盤(pán)、磁帶、可移動(dòng)硬盤(pán)或軟盤(pán)。任何這些程序存儲(chǔ)介質(zhì)或現(xiàn)在使用的或以后可能開(kāi)發(fā)出的其他程序存儲(chǔ)介質(zhì)可以被認(rèn)為是計(jì)算機(jī)程序產(chǎn)品。如將了解的是，這些程序存儲(chǔ)介質(zhì)通常存儲(chǔ)計(jì)算機(jī)軟件程序和/或數(shù)據(jù)。計(jì)算機(jī)軟件程序(又稱為計(jì)算機(jī)控制邏輯)通常被存儲(chǔ)在系統(tǒng)存儲(chǔ)器和/或結(jié)合存儲(chǔ)器存儲(chǔ)設(shè)備使用的程序存儲(chǔ)設(shè)備中。

在一些實(shí)施例中，計(jì)算機(jī)程序產(chǎn)品被描述包括計(jì)算機(jī)可使用介質(zhì)，計(jì)算機(jī)可使用介質(zhì)在其中存儲(chǔ)有控制邏輯(計(jì)算機(jī)軟件程序，包括程序代碼)。當(dāng)通過(guò)計(jì)算機(jī)的處理器執(zhí)行時(shí)，控制邏輯引起處理器執(zhí)行在此描述的功能。在其他實(shí)施例中，使用例如硬件狀態(tài)機(jī)來(lái)主要在硬件中實(shí)施一些功能。實(shí)施硬件狀態(tài)機(jī)以便執(zhí)行在此描述的功能將對(duì)于相關(guān)領(lǐng)域中的技術(shù)人員而言清楚的。

存儲(chǔ)器可以是其中的處理器可以存儲(chǔ)和檢索數(shù)據(jù)的任何適當(dāng)設(shè)備，比如，磁性設(shè)備、光學(xué)設(shè)備或固態(tài)存儲(chǔ)設(shè)備(包括磁盤(pán)或光盤(pán)或磁帶或ram，或任何其他適當(dāng)設(shè)備，或者固定式或者便攜式)。處理器可以包括從攜帶必要程序代碼的計(jì)算機(jī)可讀介質(zhì)中適當(dāng)編程的通用數(shù)字微處理器?？梢酝ㄟ^(guò)通信信道來(lái)向處理器遠(yuǎn)程提供編程，或?qū)⒕幊填A(yù)先保存到計(jì)算機(jī)程序產(chǎn)品(比如，存儲(chǔ)器或使用與存儲(chǔ)器相關(guān)的那些設(shè)備中的任何設(shè)備的其他一些便攜式或固定式計(jì)算機(jī)可讀存儲(chǔ)介質(zhì))中。例如，磁盤(pán)或光盤(pán)可以攜帶編程，并且可以通過(guò)盤(pán)寫(xiě)入器/讀取器來(lái)讀取。本發(fā)明的系統(tǒng)還包括例如呈計(jì)算機(jī)程序產(chǎn)品、用于實(shí)踐如上所述的方法的算法的形式的編程。根據(jù)本發(fā)明的編程可以被記錄在計(jì)算機(jī)可讀介質(zhì)上，例如可以直接通過(guò)計(jì)算機(jī)讀取和訪問(wèn)的任何介質(zhì)。這種介質(zhì)包括但不限于如軟盤(pán)、硬盤(pán)存儲(chǔ)介質(zhì)和磁帶等磁存儲(chǔ)介質(zhì)；如cd-rom等光存儲(chǔ)介質(zhì)；如ram和rom等電存儲(chǔ)介質(zhì)；便攜式閃存驅(qū)動(dòng)器；如磁存儲(chǔ)介質(zhì)/光存儲(chǔ)介質(zhì)等這些類別的混合。

處理器也可以訪問(wèn)通信通道以便與遠(yuǎn)程位置處的用戶通信。遠(yuǎn)程位置意指用戶不直接與系統(tǒng)接觸并且從外部設(shè)備將輸入信息轉(zhuǎn)播至輸入管理器，外部設(shè)備如連接到廣域網(wǎng)(“wan”)、電話網(wǎng)絡(luò)、衛(wèi)星網(wǎng)絡(luò)或任何其他適合的通信通道上的計(jì)算機(jī)，包括移動(dòng)電話(即，智能手機(jī))。

在一些實(shí)施例中，根據(jù)本公開(kāi)的系統(tǒng)可以被配置成包括通信接口。在一些實(shí)施例中，通信接口包括用于與網(wǎng)絡(luò)和/或另一種設(shè)備通信的接收器和/或發(fā)送器。通信接口可以被配置用于有線或無(wú)線通信，包括但不限于射頻(rf)通信(例如，射頻識(shí)別(rfid)、zigbee通信協(xié)議、wifi、紅外、無(wú)線通用串行總線(usb)、超寬帶(uwb)、藍(lán)牙通信協(xié)議以及蜂窩通信，如碼分多址(cdma)或用于移動(dòng)通信的全球系統(tǒng)(gsm)。

在一個(gè)實(shí)施例中，通信接口被配置成包括一個(gè)或多個(gè)通信端口，例如物理端口或接口如usb端口、rs232端口或任何其他適合的電連接端口以便允許本發(fā)明的系統(tǒng)與其他外部設(shè)備之間的數(shù)據(jù)通信，所述外部設(shè)備如被配置用于類似互補(bǔ)數(shù)據(jù)通信的計(jì)算機(jī)終端(例如，在醫(yī)師辦公室或在醫(yī)院環(huán)境中)。

在一個(gè)實(shí)施例中，通信接口被配置用于紅外通信、藍(lán)牙通信或任何其他適合的無(wú)線通信協(xié)議，以便使本發(fā)明的系統(tǒng)能夠與其他設(shè)備通信，所述其他設(shè)備如計(jì)算機(jī)終端和/或網(wǎng)絡(luò)、能通信的移動(dòng)電話、個(gè)人數(shù)字助理或任何其他用戶可以結(jié)合使用的通信設(shè)備。

在一個(gè)實(shí)施例中，通信接口被配置成使用互聯(lián)網(wǎng)協(xié)議(ip)，通過(guò)手機(jī)網(wǎng)絡(luò)、短信服務(wù)(sms)、在連接至互聯(lián)網(wǎng)的局域網(wǎng)(lan)上無(wú)線連接至個(gè)人計(jì)算機(jī)(pc)或在wifi熱點(diǎn)上wifi連接至互聯(lián)網(wǎng)來(lái)為數(shù)據(jù)傳輸提供連接。

在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明的系統(tǒng)被配置成通過(guò)通信接口，例如使用常見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)如802.11或藍(lán)牙rf協(xié)議或irda紅外協(xié)議與服務(wù)器設(shè)備無(wú)線通信。服務(wù)器設(shè)備可以是另一種便攜式設(shè)備，如智能手機(jī)、個(gè)人數(shù)字助理(pda)或筆記本計(jì)算機(jī)；或更大的設(shè)備如臺(tái)式計(jì)算機(jī)、電器等。在一些實(shí)施例中，服務(wù)器設(shè)備具有顯示器如液晶顯示器(lcd)，以及輸入設(shè)備，如按鈕、鍵盤(pán)、鼠標(biāo)或觸屏。

在一些實(shí)施例中，通信接口被配置成使用以上描述的通信協(xié)議和/或機(jī)制中的一種或多種來(lái)與網(wǎng)絡(luò)或服務(wù)器設(shè)備自動(dòng)或半自動(dòng)通信數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)存儲(chǔ)在本發(fā)明的系統(tǒng)中，例如存儲(chǔ)在任選數(shù)據(jù)存儲(chǔ)單元中。

輸出控制器可以包括用于任何各種已知的用于向用戶呈現(xiàn)信息的顯示器設(shè)備的控制器，無(wú)論是人或機(jī)器，無(wú)論本地或遠(yuǎn)程。如果所述顯示器設(shè)備中之一提供可視信息，這種信息通常可以被邏輯地和/或物理地組織為圖片元素的陣列。圖形用戶界面(gui)控制器可以包括用于在系統(tǒng)與用戶之間提供圖形輸入界面和輸出界面并且用于處理用戶輸入的任何各種已知的或未來(lái)的軟件程序。計(jì)算機(jī)的功能元件可以經(jīng)由系統(tǒng)總線彼此通信。在替代性實(shí)施例中，可以使用網(wǎng)絡(luò)或其他類型的遠(yuǎn)程通信來(lái)完成所述通信匯總的一些通信。根據(jù)已知的技術(shù)，輸出管理器還可以在遠(yuǎn)程位置上例如經(jīng)過(guò)互聯(lián)網(wǎng)、電話或衛(wèi)星網(wǎng)絡(luò)向用戶提供由處理模塊產(chǎn)生的信息。可以根據(jù)各種已知的技術(shù)實(shí)施由輸出管理器對(duì)數(shù)據(jù)的呈現(xiàn)。在一些實(shí)例中，數(shù)據(jù)可以包括sql、html或xml文件、電子郵件或其他文檔，或以其他形式的數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)可以包括互聯(lián)網(wǎng)url地址，這樣使得用戶可以從遠(yuǎn)程來(lái)源中檢索另外的sql、html、xml或其他文件或數(shù)據(jù)。存在于本發(fā)明的系統(tǒng)中的一個(gè)或多個(gè)平臺(tái)可以是任何類型的已知的計(jì)算機(jī)平臺(tái)或未來(lái)有待開(kāi)發(fā)出的一種類型計(jì)算機(jī)平臺(tái)，雖然它們通常將屬于通常稱為服務(wù)器的一類計(jì)算機(jī)。然而，所述平臺(tái)還可以是大型計(jì)算機(jī)、工作站或其他計(jì)算機(jī)類型。所述平臺(tái)可以通過(guò)任何已知的或未來(lái)的類型的電纜敷設(shè)或包括無(wú)線系統(tǒng)的其他通信系統(tǒng)來(lái)連接，或者經(jīng)互聯(lián)網(wǎng)或者以另外的方式。所述平臺(tái)可以是共處同一位置或所述平臺(tái)可以是物理上分離的。可能取決于所選擇的計(jì)算機(jī)平臺(tái)的類型和/或構(gòu)造，可以在任何計(jì)算機(jī)平臺(tái)上采用不同操作系統(tǒng)。適當(dāng)?shù)牟僮飨到y(tǒng)包括windowswindowsxp、windows7、windows8、ios、sunsolaris、linux、os/400、compaqtru64unix、sgiirix、siemensreliantunix以及其他操作系統(tǒng)。

實(shí)用性

主題系統(tǒng)、方法和計(jì)算機(jī)系統(tǒng)可用于期望將光源與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)自動(dòng)化的各種不同應(yīng)用，比如，將激光器與流式細(xì)胞儀中的流動(dòng)流對(duì)準(zhǔn)。本公開(kāi)的實(shí)施例可用于希望使對(duì)人類輸入和調(diào)整系統(tǒng)的依賴量最小化的情況中，如可用于研究和高通量實(shí)驗(yàn)室測(cè)試中。本公開(kāi)還可用于期望為流式細(xì)胞儀提供改進(jìn)的細(xì)胞分選準(zhǔn)確度、增強(qiáng)的顆粒收集、減少的能量消耗、顆粒充電效率、更準(zhǔn)確的顆粒充電以及在細(xì)胞分選過(guò)程中增強(qiáng)的顆粒偏轉(zhuǎn)的流式細(xì)胞術(shù)中。在實(shí)施例中，本公開(kāi)減少了在使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行樣品分析過(guò)程中對(duì)用戶輸入或手動(dòng)調(diào)整的需要。在某些實(shí)施例中，本發(fā)明的系統(tǒng)提供完全自動(dòng)化的方案，這樣使得在使用過(guò)程中調(diào)整流式細(xì)胞儀要求很少(如果有的話)人為輸入。

本公開(kāi)還用于期望將從生物樣本中制備的細(xì)胞可以用于研究、實(shí)驗(yàn)室測(cè)試或用治療的應(yīng)用中。在一些實(shí)施例中，主題方法和設(shè)備可以促進(jìn)獲得從目標(biāo)流體或組織生物樣本中制備的個(gè)別細(xì)胞。例如，主題方法和系統(tǒng)促進(jìn)從流體樣本或組織樣本中獲得細(xì)胞以用作疾病如癌癥的研究或診斷樣本。同樣地，主題方法和系統(tǒng)促進(jìn)從流體樣本或組織樣本中獲得細(xì)胞以用于治療。與傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀系統(tǒng)相比，本公開(kāi)的方法和設(shè)備允許在提高的效率和低成本情況下從生物樣本(例如，器官、組織、組織碎片、流體)中分離并且收集細(xì)胞。

雖然有附加條款，但是還通過(guò)以下條款限定了本文中闡述的公開(kāi)內(nèi)容：

1.一種評(píng)估激光器與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)的方法，所述方法包括：

沿著激光照射的流動(dòng)流的豎直軸檢測(cè)第一光信號(hào)和第二光信號(hào)，其中，所述第一光信號(hào)和所述第二光信號(hào)是在不同時(shí)間獲得的；以及

計(jì)算所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的差分信號(hào)幅值以便評(píng)估所述激光器與所述流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)。

2.根據(jù)條款1所述的方法，其中，所述方法包括：從所述流動(dòng)流中的激光照射的擾動(dòng)中檢測(cè)第一光信號(hào)和第二光信號(hào)。

3.根據(jù)條款2所述的方法，其中，所述流動(dòng)流包括所述流動(dòng)流中的細(xì)胞和珠粒中的一者或多者。

4.根據(jù)條款3所述的方法，其中，所述細(xì)胞和/或所述珠粒產(chǎn)生所述流動(dòng)流中的所述擾動(dòng)。

5.根據(jù)條款1所述的方法，其中，所述第一光信號(hào)和所述第二光信號(hào)包括由鄰近所述流動(dòng)流的檢測(cè)器從激光照射中檢測(cè)到的采用前向配置的散射光。

6.根據(jù)條款1所述的方法，其中，所述第一光信號(hào)包括從所述流動(dòng)流向上折射的光。

7.根據(jù)條款1所述的方法，其中，所述第二光信號(hào)包括從所述流動(dòng)流向下折射的光。

8.根據(jù)條款1所述的方法，進(jìn)一步包括：確定所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值。

9.根據(jù)條款8所述的方法，進(jìn)一步包括：沿著與所述流動(dòng)流的所述縱軸正交的橫軸確定所述流動(dòng)流上的產(chǎn)生所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的所述最大差分信號(hào)幅值的激光照射位置。

10.根據(jù)條款9所述的方法，進(jìn)一步包括：沿著所述橫軸將所述流動(dòng)流上的所述激光照射調(diào)整到產(chǎn)生所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的所述最大差分信號(hào)幅值的所述位置。

11.根據(jù)條款10所述的方法，進(jìn)一步包括：使用檢測(cè)器沿著所述橫軸確定所述經(jīng)調(diào)整的激光照射位置。

12.根據(jù)條款11所述的方法，進(jìn)一步包括：在延長(zhǎng)的時(shí)間段內(nèi)沿著所述橫軸將所述流動(dòng)流上的激光照射維持在產(chǎn)生所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的所述最大差分信號(hào)幅值的所述經(jīng)調(diào)整的位置處。

13.根據(jù)條款8所述的方法，進(jìn)一步包括：在x-y平面中確定所述流動(dòng)流上的產(chǎn)生所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的所述最大差分信號(hào)幅值的激光照射位置。

14.根據(jù)條款13所述的方法，進(jìn)一步包括：在所述x-y平面中將所述流動(dòng)流上的所述激光照射調(diào)整到產(chǎn)生所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的所述最大差分信號(hào)幅值的所述位置。

15.根據(jù)條款13所述的方法，進(jìn)一步包括：在延長(zhǎng)的時(shí)間段內(nèi)在所述x-y平面中將所述流動(dòng)流上的激光照射維持在產(chǎn)生所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的所述最大差分信號(hào)幅值的所述位置處。

16.根據(jù)條款1所述的方法，其中，以周期性間隔沿著所述流動(dòng)流的豎直軸檢測(cè)所述第一光信號(hào)和所述第二光信號(hào)。

17.根據(jù)條款1所述的方法，其中，沿著所述流動(dòng)流的豎直軸連續(xù)地檢測(cè)所述第一光信號(hào)和所述第二光信號(hào)。

18.根據(jù)條款1所述的方法，其中，所述方法包括：使用連續(xù)波激光器來(lái)照射所述流動(dòng)流。

19.根據(jù)條款18所述的方法，其中，所述連續(xù)波激光器是氦氖(hene)激光器。

20.根據(jù)條款1所述的方法，其中，所述方法包括：使用二極管激光器來(lái)照射所述流動(dòng)流。

21.根據(jù)條款20所述的方法，其中，所述二極管激光器選自由以下各項(xiàng)組成的組：紫外線二極管激光器、可見(jiàn)光二極管激光器和近紅外二極管激光器。

22.根據(jù)條款21所述的方法，其中，所述二極管激光器是405nm二極管激光器或488nm二極管激光器。

23.根據(jù)條款1所述的方法，其中，使用位置感測(cè)檢測(cè)器來(lái)檢測(cè)所述第一光信號(hào)和所述第二光信號(hào)。

24.根據(jù)條款23所述的方法，其中，所述位置感測(cè)檢測(cè)器是象限光電二極管。

25.根據(jù)條款23所述的方法，其中，所述位置感測(cè)檢測(cè)器是光電二極管陣列。

26.根據(jù)條款25所述的方法，其中，所述光電二極管陣列包括兩個(gè)或更多個(gè)光電二極管檢測(cè)器。

27.一種用于評(píng)估激光器與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)的系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包括：

光源；

傳感器，所述傳感器被配置成用于沿著所述流動(dòng)流的豎直軸檢測(cè)第一光信號(hào)和第二光信號(hào)；以及

處理器，所述處理器包括可操作地耦合至所述處理器的存儲(chǔ)器，其中，所述存儲(chǔ)器包括存儲(chǔ)于其上的指令，所述指令用于計(jì)算所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的差分信號(hào)幅值以便評(píng)估所述激光器與所述流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)。

28.根據(jù)條款27所述的系統(tǒng)，其中，所述傳感器被定位成用于從所述流動(dòng)流中檢測(cè)前向散射光。

29.根據(jù)條款27所述的系統(tǒng)，其中，所述處理器包括可操作地耦合至所述處理器的存儲(chǔ)器，其中，所述存儲(chǔ)器包括存儲(chǔ)于其上的指令，所述指令用于確定所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值。

30.根據(jù)條款27所述的系統(tǒng)，其中，所述處理器是被配置成用于輸出負(fù)反饋信號(hào)的模擬系統(tǒng)。

31.根據(jù)條款27所述的系統(tǒng)，其中，所述存儲(chǔ)器包括存儲(chǔ)于其上的算法，所述算法用于自動(dòng)地計(jì)算所述第一光信號(hào)與所述第二光信號(hào)之間的所述差分信號(hào)幅值。

32.根據(jù)條款27所述的系統(tǒng)，其中，所述光源包括光學(xué)調(diào)整部件，所述光學(xué)調(diào)整部件被配置成用于調(diào)整所述光源的照射參數(shù)。

33.根據(jù)條款32所述的系統(tǒng)，其中，來(lái)自所述光源的所述照射參數(shù)選自由以下各項(xiàng)組成的組：照射位置、照射方向、波長(zhǎng)、射束輪廓、射束寬度、射束強(qiáng)度、焦點(diǎn)和脈沖寬度。

34.根據(jù)條款33所述的系統(tǒng)，其中，所述光學(xué)調(diào)整部件選自由以下各項(xiàng)組成的組：透鏡、反射鏡、濾光片、波長(zhǎng)分離器、針孔和狹縫。

35.根據(jù)條款34所述的系統(tǒng)，其中，所述光學(xué)調(diào)整部件是反射鏡。

36.根據(jù)條款35所述的系統(tǒng)，其中，所述反射鏡被配置成用于將所述光源在所述流動(dòng)流上的所述照射位置從產(chǎn)生第一差分信號(hào)幅值的位置調(diào)整到產(chǎn)生第二差分信號(hào)幅值的位置。

37.根據(jù)條款27所述的系統(tǒng)，其中，所述處理器包括可操作地耦合至所述處理器的存儲(chǔ)器，其中，所述存儲(chǔ)器包括存儲(chǔ)于其上的指令，所述指令用于在x-y平面中確定所述流動(dòng)流上的產(chǎn)生所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的所述最大差分信號(hào)幅值的照射位置。

38.根據(jù)條款37所述的系統(tǒng)，其中，所述系統(tǒng)被配置成用于將用于照射所述流動(dòng)流的所述光源調(diào)整在產(chǎn)生所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的所述最大差分信號(hào)幅值的所述位置處。

39.根據(jù)條款38所述的系統(tǒng)，其中，所述光源包括光學(xué)調(diào)整部件，所述光學(xué)調(diào)整部件被配置成用于調(diào)整來(lái)自所述光源的照射參數(shù)。

40.根據(jù)條款39所述的系統(tǒng)，其中，來(lái)自所述光源的所述照射參數(shù)選自由以下各項(xiàng)組成的組：照射位置、照射方向、波長(zhǎng)、射束輪廓、射束寬度、射束強(qiáng)度、焦點(diǎn)和脈沖寬度。

41.根據(jù)條款40所述的系統(tǒng)，其中，所述光學(xué)調(diào)整部件選自由以下各項(xiàng)組成的組：透鏡、反射鏡、濾光片、波長(zhǎng)分離器、針孔和狹縫。

42.根據(jù)條款41所述的系統(tǒng)，其中，所述光學(xué)調(diào)整部件是反射鏡。

43.根據(jù)條款42所述的系統(tǒng)，其中，所述反射鏡被配置成用于將所述光源對(duì)所述流動(dòng)流的照射調(diào)整到所述流動(dòng)流上產(chǎn)生所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的所述最大差分信號(hào)幅值的所述位置。

44.根據(jù)條款27所述的系統(tǒng)，其中，所述系統(tǒng)進(jìn)一步包括可操作地耦合至所述光源的支撐臺(tái)并且被配置成用于響應(yīng)于所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的所述所計(jì)算的差分信號(hào)幅值而調(diào)整所述支撐臺(tái)的位置。

45.根據(jù)條款44所述的系統(tǒng)，其中，所述系統(tǒng)被配置成用于沿著與所述流動(dòng)流的所述縱軸正交的橫軸調(diào)整所述支撐臺(tái)的位置。

46.根據(jù)條款44所述的系統(tǒng)，其中，所述系統(tǒng)被配置成用于在兩個(gè)維度上調(diào)整所述支撐臺(tái)的位置。

47.根據(jù)條款46所述的系統(tǒng)，其中，所述系統(tǒng)被配置成用于在x-y平面中調(diào)整所述支撐臺(tái)的位置。

48.根據(jù)條款27所述的系統(tǒng)，其中，所述系統(tǒng)被配置成用于響應(yīng)于所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的所述所計(jì)算的差分信號(hào)幅值而自動(dòng)地調(diào)整所述支撐臺(tái)的位置。

49.根據(jù)條款46所述的系統(tǒng)，其中，自動(dòng)地調(diào)整所述支撐臺(tái)的位置包括：

確定所述流動(dòng)流上的產(chǎn)生所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的所述最大差分信號(hào)幅值的照射位置；

在x-y平面中確定所述流動(dòng)流上的當(dāng)前光照射位置；

調(diào)整所述光照射位置以便與所述流動(dòng)流上的產(chǎn)生所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的所述最大差分信號(hào)幅值的所述照射位置相匹配。

50.根據(jù)條款27所述的系統(tǒng)，其中，所述光源包括激光器。

51.根據(jù)條款50所述的系統(tǒng)，其中，所述光源是連續(xù)波激光器。

52.根據(jù)條款50所述的系統(tǒng)，其中，所述激光器是氦氖(hene)激光器。

53.根據(jù)條款50所述的系統(tǒng)，其中，所述激光器是二極管激光器。

54.根據(jù)條款53所述的系統(tǒng)，其中，所述二極管激光器選自由以下各項(xiàng)組成的組：紫外線二極管激光器、可見(jiàn)光二極管激光器和近紅外二極管激光器。

55.根據(jù)條款54所述的系統(tǒng)，其中，所述二極管激光器是405nm二極管激光器或488nm二極管激光器。

56.根據(jù)條款27所述的系統(tǒng)，其中，所述傳感器包括位置感測(cè)檢測(cè)器。

57.根據(jù)條款56所述的系統(tǒng)，其中，所述傳感器包括象限光電二極管。

58.根據(jù)條款56所述的系統(tǒng)，其中，所述傳感器包括光電二極管陣列。

59.根據(jù)條款56所述的系統(tǒng)，其中，所述光電二極管陣列包括兩個(gè)或更多個(gè)光電二極管檢測(cè)器。

60.根據(jù)條款27所述的系統(tǒng)，進(jìn)一步包括流動(dòng)池噴嘴，所述流動(dòng)池噴嘴被配置成用于通過(guò)全內(nèi)反射向上游傳播來(lái)自所述流動(dòng)流的光。

61.根據(jù)條款60所述的系統(tǒng)，其中，所述流動(dòng)流包括細(xì)胞和珠粒中的一者或多者。

62.根據(jù)條款60所述的系統(tǒng)，其中，所述細(xì)胞和所述珠粒產(chǎn)生所述流動(dòng)流中的擾動(dòng)。

63.根據(jù)條款60所述的系統(tǒng)，其中，所述流動(dòng)池噴嘴包括：

噴嘴室，所述噴嘴室具有近端和遠(yuǎn)端；

噴嘴孔口，所述噴嘴孔口被定位在所述噴嘴室的所述遠(yuǎn)端處，

其中，所述噴嘴室被配置成用于將來(lái)自所述流中的擾動(dòng)的所述傳播的光引導(dǎo)至所述噴嘴室的所述近端。

64.一種用于評(píng)估激光器與流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)的系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包括處理器，所述處理器包括可操作地耦合至所述處理器的存儲(chǔ)器，其中，所述存儲(chǔ)器包括存儲(chǔ)于其上的指令，所述指令包括：

用于沿著激光照射的流動(dòng)流的豎直軸檢測(cè)第一光信號(hào)和第二光信號(hào)的算法，其中，所述第一光信號(hào)和所述第二光信號(hào)是在不同時(shí)間獲得的；以及

用于計(jì)算所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的差分信號(hào)幅值的算法；以及

用于基于所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的所述所計(jì)算的差分信號(hào)幅值來(lái)評(píng)估所述激光器與所述流動(dòng)流的對(duì)準(zhǔn)的算法。

65.根據(jù)條款64所述的系統(tǒng)，其中，所述存儲(chǔ)器進(jìn)一步包括用于確定所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的最大差分信號(hào)幅值的指令。

66.根據(jù)條款65所述的系統(tǒng)，其中，所述指令進(jìn)一步包括：用于在x-y平面中確定所述流動(dòng)流上的產(chǎn)生所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的所述最大差分信號(hào)幅值的激光照射位置的算法。

67.根據(jù)條款66所述的系統(tǒng)，其中，所述指令包括：用于在所述x-y平面中將所述流動(dòng)流上的所述激光照射調(diào)整到產(chǎn)生所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的所述最大差分信號(hào)幅值的所述位置的算法。

68.根據(jù)條款64所述的系統(tǒng)，其中，所述存儲(chǔ)器包括用于以周期性間隔檢測(cè)所述第一光信號(hào)和所述第二光信號(hào)的指令。

69.根據(jù)條款64所述的系統(tǒng)，其中，所述存儲(chǔ)器包括用于連續(xù)地檢測(cè)所述第一光信號(hào)和所述第二光信號(hào)的指令。

70.根據(jù)條款64所述的系統(tǒng)，其中，所述系統(tǒng)進(jìn)一步包括可操作地耦合至激光器的支撐臺(tái)并且被配置成用于響應(yīng)于所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的所述所計(jì)算的差分信號(hào)幅值而調(diào)整位置。

71.根據(jù)條款64所述的系統(tǒng)，其中，所述存儲(chǔ)器包括用于自動(dòng)地調(diào)整所述激光照射位置的指令，所述指令包括：

用于確定所述流動(dòng)流上產(chǎn)生所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的所述最大差分信號(hào)幅值的照射位置的算法；

用于在x-y平面中確定所述流動(dòng)流上的當(dāng)前光照射位置的算法；

用于調(diào)整所述光照射位置以便與所述流動(dòng)流上的產(chǎn)生所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的所述最大差分信號(hào)幅值的所述照射位置相匹配的算法。

72.根據(jù)條款65所述的系統(tǒng)，其中，所述指令進(jìn)一步包括：用于沿著與所述流動(dòng)流的所述縱軸正交的橫軸確定流動(dòng)流上的產(chǎn)生所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的所述最大差分信號(hào)幅值的激光照射位置的算法。

73.根據(jù)條款72所述的系統(tǒng)，其中，所述指令包括：用于沿著所述橫軸將所述流動(dòng)流上的所述激光照射位置調(diào)整到產(chǎn)生所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的所述最大差分信號(hào)幅值的所述位置的算法。

74.根據(jù)條款73所述的系統(tǒng)，其中，所述指令包括：用于沿著所述橫軸確定所述流動(dòng)流上的所述當(dāng)前光照射位置的算法。

75.根據(jù)條款74所述的系統(tǒng)，其中，所述指令進(jìn)一步包括：用于在延長(zhǎng)的時(shí)間段內(nèi)沿著所述橫軸維持所述流動(dòng)流上的所述光照射位置的算法。

76.根據(jù)條款75所述的系統(tǒng)，其中，所述流動(dòng)流上的光照射在1小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)被維持在所述所確定的位置處。

77.根據(jù)條款72所述的系統(tǒng)，其中，所述指令進(jìn)一步包括：用于評(píng)估所述流動(dòng)流的移位的算法。

78.根據(jù)條款77所述的系統(tǒng)，其中，所述指令進(jìn)一步包括：用于當(dāng)所述流動(dòng)流在x-y平面中移位時(shí)沿著所述橫軸將所述流動(dòng)流上的所述激光照射位置調(diào)整到沿著所述橫軸產(chǎn)生所述第一信號(hào)與所述第二信號(hào)之間的所述最大差分信號(hào)幅值的所述位置的算法。

79.根據(jù)條款78所述的系統(tǒng)，其中，所述指令進(jìn)一步包括：用于在調(diào)整之后沿著所述橫軸確定所述流動(dòng)流上的所述光照射位置的算法。

80.根據(jù)條款79所述的系統(tǒng)，其中，所述指令進(jìn)一步包括：用于在延長(zhǎng)的時(shí)間段內(nèi)沿著所述橫軸維持所述流動(dòng)流上的所述光照射位置的算法。

盡管已經(jīng)出于清楚理解的目的通過(guò)說(shuō)明和示例的方式較為詳細(xì)地描述了前述發(fā)明，但是本領(lǐng)域的技術(shù)人員根據(jù)本公開(kāi)的教導(dǎo)很容易明白的是，在不偏離所附權(quán)利要求書(shū)的精神或范圍的情況下，可以對(duì)其進(jìn)行某些改變和修改。

因此，前述內(nèi)容僅說(shuō)明了本發(fā)明的原理。將理解的是，本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠設(shè)計(jì)不同的安排，所述不同的安排雖然沒(méi)有在此明確地描述或顯示，但體現(xiàn)本發(fā)明的原理并且包括在其精神和范圍之內(nèi)。此外，本文中所敘述的所有示例和有條件的語(yǔ)言原則上旨在幫助讀者理解本發(fā)明的原理而不受這種確切敘述的實(shí)例和條件的限制。此外，本文中敘述本發(fā)明的原理、方面和實(shí)施例的所有陳述及其特定示例旨在涵蓋其結(jié)構(gòu)等效物和功能等效物兩者。另外，這種等效物旨在包括當(dāng)前已知的等效物以及將來(lái)開(kāi)發(fā)的等效物兩者，即，所開(kāi)發(fā)的執(zhí)行相同功能的任何要素，而不考慮結(jié)構(gòu)。因此，本發(fā)明的范圍不旨在受限于本文中所示出和描述的示例性實(shí)施例。相反，本發(fā)明的范圍和精神通過(guò)所附權(quán)利要求書(shū)來(lái)具體化。